简便快速显色法在念珠菌鉴定及药敏试验中的应用

第30卷第6期实

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验

医

学

Vol.30No.62012年12月

EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINE

Dec.2012

关键词:念珠菌；鉴定；药敏；快速显色法

念珠菌是人体常见寄生真菌，也是医院真菌感染的重要病原菌之一，在住院患者血液标本的病原体分离株中占第4位[1，2]。近年来，由于激素、免疫抑制剂、广谱抗生素的广泛使用，器官移植术的普遍开展及原发、继发性免疫功能低下人群的扩大，真菌感染的发病率呈上升趋势。念珠菌感染的危害性大，病死率高，诊断困难，而且不同的念珠菌对抗真菌药物的敏感性各不相同，因此，快速、准确地鉴定念珠菌，进行药敏试验，对临床及时制定合理治疗方案非常重要。而传统的形态学鉴定方法存在敏感性低、耗时等缺点，商品化念珠菌生化鉴定系统成本又较高，且有的只能鉴定不能做药敏，或有的药敏种类不适合临床使用，不能满足临床需要。温州市康泰公司研制的念珠菌鉴定及药敏试验显色法，简便、快速，经初步使用效果比较满意，现报告如下。

１材料与方法

1.1标本来源及接种培养标本均来源于2010年10月至2011年12月我院临床各科室住院及门诊患者的痰液、尿液、粪便、血液、分泌物标本906份。所有标本均接种沙保罗琼脂培养基，置35℃环境培养24～48h ，经涂片镜检疑为念珠菌后，再进一

步进行菌种鉴定和药敏试验。

1.2念珠菌鉴定念珠菌先用法国生物梅里埃全

自动细菌鉴定及分析仪VITEK-TWO 进行鉴定，鉴定后菌株再使用温州市康泰生物科技有限公司生产的BIO-KONT 16C 酵母菌鉴定试剂盒进行鉴定

[质控菌株：白念珠菌CMCC(F)98001]。BIO-KONT 16C 试条由16个干燥培养基小孔组成，每一孔中

含有一种脱水的碳水化合物底物。菌悬液与一种化学纯的无机培养基混匀后接种到小孔中。念珠菌只生长在它们能利用为唯一碳源的底物中，培养22~24h 后肉眼观察孔中颜色变化，深紫色为阴性，黄色或淡紫红色为阳性。将反应结果输入计算

机BIO-KONT 16CF 软件系统中得到鉴定结果。

1.3念珠菌药敏试验经VITEK-TWO 鉴定后菌株先用英国生物梅里埃FUNGUS-3进行药敏分

析，再采用温州康泰生物科技有限公司生产的

BIO-KONT FUNGS-7酵母菌药敏试剂盒进行测试[质控菌株：白念珠菌CMCC(F)98001]。

(1)上述鉴定用的3.5McFarland 单位菌悬液，

取100μl 加入到药敏培养液中混匀后，在药敏板中每孔加入100μl ，350C 培养24h 后观察结果，先在阳性对照孔加显色剂1滴，如显淡蓝色或无色就将其他各孔也加入显色剂，如显红色，应再孵育8~

24h 再观察结果。(2)结果判读根据药敏板条上c 行(低浓度)和C 行(高浓度)各孔的显色情况判断对

应药物的敏感性，如高低两个浓度均为红色则判为敏感(S)；如低浓度为淡蓝色或无色，高浓度为红色则判为中介(I)；如高低两个浓度均为淡蓝色或无色则判为耐药(R)。

２结果

2.1144株念珠菌的种类分布2010年12月至2011年12月，从临床送检的906份真菌培养标本中共检出念珠菌144株，所有菌株分布构成见表1。

·经验交流·

简便快速显色法在念珠菌鉴定及药敏试验中的应用

陈东杰，吴泉明

(福建省立医院，福建福州350001)

中图分类号R446.5，Q939.92，R379.4文献标识码B 文章编号1674-1129(2012)06-0623-02

doi:10.3969/j.issn.1674-1129.2012.06.041表1临床分离的144株念珠菌的种类分布

菌名

菌株数

%

白念珠菌(C.albicans)清酒念珠菌(C.wine)热带念珠菌(C.tropicalis)光滑念珠菌(C.glabrata)皱褶念珠菌(C.ruffle)粗壮念珠菌(C.brawny)挪威念珠菌(C.norway)铁红念珠菌(C.iron oxide red)合计

80281874421144

55.619.412.54.92.82.81.40.7100

2.1144株念珠菌的药敏试验结果对临床分离的144株念珠菌进行药敏试验，药敏情况见表2。

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第30卷第6期实验与检验医学Vol.30No.6 2012年12月EXPERIMENTAL AND LABORATORY MEDICINE Dec.2012

３讨论

念珠菌是临床常见的条件致病性真菌，近年来感染率逐年增加，已成为白血病、肿瘤、粒细胞缺乏症、器官移植、烧伤及早产儿等特殊人群的严重感染性疾病,并成为免疫缺陷患者的重要并发症和致死病因。念珠菌是二重感染的主要病原菌[2，3]，而抗真菌药物的广泛应用导致了该菌耐药性升高。

本组数据表明感染的真菌仍以白念珠菌为主，占55.6%；其次分别为清酒念珠菌(19.4%)，热带念珠菌(12.5%)，光滑念珠菌(4.9%)。念珠菌感染比例中清酒念珠菌占所分离菌株的第二位，这与我们往年检测结果及其他文献报道有所不同[2，6]，应引起临床和检验工作者的高度重视。是否与鉴定方法、标本来源等因素有关有待进一步观察。

念珠菌药敏结果显示：该属菌对5-氟胞嘧啶的敏感率最高，为93.75%；其次为制霉菌素和两性霉素B，分别为81.94%和78.48%；念珠菌对伊曲康唑、氟康唑、咪康唑和谷康唑耐药率高达30%以上，需引起人们的重视。

快速、准确地鉴定念珠菌和药敏试验是制定合理的临床治疗方案的基础[4]。由于大多数真菌生长比较缓慢，常规鉴定和药敏方法检测时间较长(24~48h)，而比浊法检测终点结果的判读受干扰的因素较多，特别是唑类药物有拖尾现象，常常造成终点判读困难。目前，商品化念珠菌生化鉴定系统产品主要靠进口，其成本高、操作繁琐，有的只能做鉴定不能做药敏，或有的药敏的抗生素种类不适合于国内临床。康泰生物科技有限公司生产的BIO-KONT16C酵母菌鉴定试剂盒和BIO-KONT FUNGS-7酵母菌药敏试剂盒，经初步的使用结果认为：该方法对念珠菌的鉴定和药敏试验，具有操作简便、鉴定快捷，显色判读无需借助其他仪器，肉眼观测终点判读容易，将反应记录结果输入计算机BIO-KONT16C软件，就可以较快速(约24h)、准确地得到念珠菌的鉴定结果。

在使用过程中，我们对操作方法做了几点改进：说明书要求念珠菌生化鉴定和药敏试验要分别做1管3McFarland单位的菌液，我们仅采用生化鉴定剩余的菌液取100μl加入到药敏培养液，经试验比较对药敏结果没有影响；另外，说明书要求念珠菌生化鉴定和药敏试验均要求用3McFarland 单位的菌悬液，经试验发现在培养24h时有很多细菌反应时间不够，结果出不来，后来我们把菌悬液提高至3.5McFarland单位左右，鉴定和药敏结果基本在24h就可以判定了，从而进一步简化了操作程序和提高了鉴定效果。

参考文献

[1]Hajjeh RA,Sofair AN,Harrison LH,et al.Incidence of blood-stream infections due to Candida species and in vitro susceptibilities of isolates collected from1998to2000in a population-based active surveillance program[J].J Clin Microbiol,2004,42(4):1519.

[2]高锦,王中新.念珠菌鉴定方法的研究进展[J].国外医药抗生素分册,2008,29(3):109-113.

[3]段红,王鲜平,曹力,等.医院真菌感染调查分析[J].中华医院感染学杂志2002,12(6):439-440.

[4]单才华,贺超奇.医院内真菌感染的调查与分析[J].江西医学检验2001,19(6):406.

[5]高锦,王中新.念珠菌鉴定方法的研究进展[J].国外医药抗生素分册2008,29(3):109-113.

[6]王德春,陈炳材,张亚斌,等.临床427株念珠菌的检测与药敏分析[J].福州总医院学报，2007,3(2):189-190.

[7]邝昊宇,周剑辉,周文英.433株念珠菌的临床分布及耐药性分析[J].实用医技杂志2008,15(32):4576-4578.

表2144株念珠菌的总体药敏情况[n(%)]

敏感度5-氟胞嘧啶两性霉素B制霉菌素咪康唑益康唑伊曲康唑氟康唑

敏感(S)中介(I)耐药(R)135(93.75)

7(4.86)

2(1.39）

113(78.47)

21(21.53)

0(0.00)

118(81.94)

26(18.06)

0(0.00)

63(43.75)

15(10.42)

66(45.83）

59(40.97)

33(22.92)

52(36.11）

56(38.89)

25(17.36）

63(43.75）

64(44.44)

33(22.92）

47(32.64）

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