药敏试验方法简介
药敏试验方法
一、纸片扩散法该法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成浓度梯度。
同时，纸片周围抑菌浓度范围内的菌株不能生长，二抑菌范围外的菌株则可以生长，从而在纸片的周围形成透明的抑菌圈，不同的抑菌药物的抑菌圈直径因受药物在琼脂中扩散速度的影响而可能不同，抑菌圈的大小可以反映测试菌对药物的敏感程度，并与该药物对测试菌的MIC呈负相关。
二、稀释法稀释法药敏试验可用于定量测试抗菌药物对某一细菌的体外活性，分为琼脂稀释法和肉汤稀释法。
实验时，抗菌药物的浓度通常经过倍比（lg2）稀释，能抑制待测菌肉眼可见生长的最低药物浓度成为最小抑菌浓度（MIC），一个特定抗菌药物的测试浓度范围应该包含能够检测细菌的解释性折点（敏感、中介和耐药）的浓度，同时也应该包含质控参考菌株的MIC.2.1 琼脂稀释法首先制备含抗菌药物的琼脂稀释平板。
再接种待测菌株，然后是结果判读。
2.2 肉汤稀释法三、抗生素浓度梯度法四、自动化仪器法一、实验材料普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。
做沙门氏菌可选择血清培养基。
药敏试纸：购买或自制（详见实验准备）细菌：待做药敏试验的细菌仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头二、实验准备2.1 药敏片的准备：购买或自制2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。
取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。
经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。
同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法一般包括以下步骤：
1. 菌株选取：选择适当的病原菌株进行测试，一般使用已知药敏性的参比菌株作为对照。
2. 菌液的制备：将菌株接种到培养基上培养，培养至菌量合适后，采用生理盐水调制成适宜浓度的菌悬液。
3. 菌液的稀释：取一定数量的菌悬液，根据草浆法或直接法进行适当稀释，使菌量达到目标细菌的浓度，一般为0.5-2×10^8个CFU/mL。
4. 抗生素的制备：按照制备好的抗生素试纸或试剂盒的说明，将抗生素溶液或药片溶解成合适浓度的抗生素溶液。
5. 稀释菌液的扩散：将已制备好的菌液均匀涂布在含有良好的抗生素稀释浓度梯度的培养基上。
6. 培养基的培养：将涂布了菌液的培养基在合适的温度（通常为35-37）下培养约16-20小时。
7. 结果的解读：通过观察培养基上微生物的生长情况，判断细菌对抗生素的敏
感性。
一般，对抗生素敏感细菌培养后，会在培养基上形成清晰的抑菌圈，直径会随着对菌体敏感程度的增加而扩大。
8. 数据记录和分析：记录抗生素的名称、浓度、菌株信息、抗菌圈直径等数据，并进行统计和分析。
需要注意的是，药敏试验的具体操作方法可能会因实验目的、试验样本、试剂等因素而有所不同，因此在进行药敏试验前应详细阅读试剂盒或试纸的使用说明，并按照说明书操作。
药敏试验操作方法
药敏试验操作方法药敏试验是一种常用的实验方法，用于确定某种药物对细菌的敏感性或抗性。
下面是药敏试验的一般操作方法：1. 菌株的培养与准备：首先，选择要测试的细菌株。
常用的菌株包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等。
将菌株从冻存状态中转移到琼脂平板上进行培养，然后选取单个菌落进行继续培养。
2. 制备药物浓度梯度：为了测试细菌对不同浓度药物的敏感性，需要制备一系列药物浓度梯度。
可以选择常用的抗生素，如青霉素、利福平等。
根据药物的最小抑菌浓度（MIC）确定所需药物的最高浓度。
3. 制备洗涤液：制备1倍洗涤液，一般使用生理盐水或缓冲液。
如要进行中药药敏试验，可根据实验需求选择适当的提取液。
4. 制备菌悬液：从培养得到的菌落中选择单个菌落，接种到含有洗涤液的试管或培养皿中。
使用比例约为1:100（菌悬液：洗涤液），均匀混合。
5. 药物与细菌接触：将制备好的菌悬液均匀涂布在琼脂平板上，然后使用定量器将一定量的药物滴在琼脂平板上。
确定滴药量时应根据具体药物的MIC进行调整。
6. 培养与观察结果：将涂有菌悬液和药物的琼脂平板进行孵育，时间和温度可以根据具体的实验目的和菌株要求进行调整。
观察培养后的平板上是否出现菌落生长，以及菌落的数量和形态特征。
7. 结果解读与分析：根据观察到的结果，分析不同浓度药物对细菌的抑菌效果，评估细菌对药物的敏感性。
可以根据菌落的出现与否、数量的多少和生长的形态特征来判断细菌是否对药物敏感。
总结：药敏试验是一种重要的实验方法，可以评估细菌对药物的敏感性或抗性。
操作时需要注意菌株的选择和培养方法、药物浓度的制备、菌悬液的制备和药物与细菌的接触方法，以及培养和观察结果等。
通过药敏试验的结果，可以帮助医生选择适当的药物治疗感染病情。
药敏试验方法简介
02
耐药性监测
药敏试验可用于监测细菌的耐药性，帮助医生和研究人员了解和预防耐药性的发展。
02
药敏试验方法种类
利用抗菌药物在琼脂平板上扩散，从而测定细菌对药物的敏感程度。
纸片扩散法
原理
将细菌接种在平板上，贴上含不同浓度抗菌药物的纸片，静置一定时间后测量抑菌圈大小。
方法
广泛应用于临床细菌药敏试验，简单易行。
03
药敏试验操作流程
细菌培养
将临床标本接种到固体培养基上，培养出单一菌落，纯化后再进行鉴定。
接种方法
使用无菌棉签或针头将细菌接种到培养基表面，确保细菌均匀分布。
细菌培养与接种
药敏纸片放置
将含有不同抗菌药物的纸片贴在培养基上，纸片之间需留有间隔。
结果观察
将培养皿放入35°C恒温箱中培养24-48小时，观察每个药敏纸片抑菌圈的大小。
标准化阶段
随着生物技术的进步，自动化药敏试验和高通量药敏试验逐渐成为主流，可快速、准确地检测细菌对多种药物的敏感性。
自动化与高通量阶段
03
药物研发
在药物研发过程中，药敏试验可用于评估新药的抗菌效果和比较不同药物之间的效果。
药敏试验的应用场景
01
感染性疾病治疗
对于细菌感染的疾病，如肺炎、尿路感染等，药敏试验可以帮助医生选择合适的抗菌药物进行治疗。
应用
通过稀释抗菌药物，在不同浓度下观察细菌生长情况，以判断药物的抑菌或杀菌效果。
原理
将细菌接种在液体培养基中，加入不同浓度的抗菌药物，观察细菌生长情况。
方法
该方法更适用于定量测定抗菌药物的最低抑菌浓度（MIC）。
应用
稀释法
E-test法
原理
结合纸片扩散法和稀释法，利用琼脂平板上的梯度浓度来检测细菌对药物的敏感性。
药物敏感性实验
药物敏感性实验●学习内容●药物敏感实验¡ª¡ª纸片法●学习要求●掌握药物敏感实验的原理、方法及注意事项。
●抗菌药物敏感性试验（AST，简称药敏试验）：●用于测试抗菌药物在体外对病原微生物有无抑制作用。
常用最低抑菌浓度（MIC）表示，即体外能够抑制细菌生长的最低药物浓度。
通常根据MIC结合常用剂量时体内该药所能达到的血药浓度，划定细菌对各种抗生素敏感或耐药的界限，给出S（敏感）、I（中介）、R（耐药）等定性的结果，方便临床用药。
●检测病原菌对各种抗生素的敏感性，指导临床合理用药。
用于流行病学调查及院内感染的监控，控制和预防耐药菌株的流行。
为经验用药提供参考依据。
●方法：扩散法（纸片法）、稀释法（琼脂稀释法、宏量液体稀释法、微量液体稀释法）●药敏纸片的人工制作●定性滤纸用打孔器打成直径6mm的圆片，每100片放入一小瓶中，160℃干热灭菌1～2小时，或用高压灭菌（6.8kg 30min）后在60℃条件下烘干。
（此应提前做好）●抗菌药物的浓度（指有效药物浓度）青霉素200U/mL 其它抗菌药物1000ug/mL磺胺类药物10mg/mL 中草药制剂1g/mL庆大霉素4万单位/mL，稀释为1000单位/mL。
●（临床上可按照药品使用说明书，如上面标明5g本品可拌50kg饲料，其换算方法为lg本品可拌10kg饲料，也就是1g本品拌l0000g饲料，相当于药品浓度为lg本品加l0000mL蒸馏水。
）●用无菌操作法将欲测的抗菌药物溶液1mL，加入100片纸片中，泡5～10分钟。
●培养皿烘干法：用无菌镊子将浸有抗菌药液的纸片摊平在培养皿中，于37℃的温箱内保持2～3小时即可干燥，或放在无菌室内过夜干燥。
●将制好的各种药物纸片装入无菌小瓶中，置冰箱内保存备用。
●干燥的药敏纸片可保存6个月。
●纸片法●每组约5个平皿（每人1个），每个平皿约20毫升琼脂培养基，即约120mL。
每平皿约5张纸片。
药敏试验实验报告
药敏试验实验报告概述：药敏试验是一种用来测试细菌对不同抗生素的敏感性的实验方法。
本实验旨在通过观察不同药物对细菌的杀菌效果，评估药物的抗菌活性。
通过实验结果，可以为临床医生提供选择合适药物治疗感染的依据。
实验步骤：1. 细菌培养：从临床患者的感染部位采集样本，进行无菌处理后，接种于含有丰富营养物质的琼脂培养基上，利用恒温培养箱在37摄氏度下培养。
2. 药物制备：根据实验要求选用常见的抗生素药物，配制合适浓度的药物溶液。
3. 药敏纸片实验：将药敏纸片铺在含有培养菌的琼脂平板上，利用吸管滴取一定量的药物溶液滴在药敏纸片上。
将琼脂平板放置在恒温培养箱中培养。
4. 结果观察：观察培养基上的药物液滴周围是否出现抑菌圈，测量抑菌圈的直径。
根据抑菌圈的大小和药物浓度的对应关系，判断细菌对药物的敏感性。
实验结果：通过对不同抗生素药物的实验观察，我们得到了如下结果：1. 对照组：在没有添加药物的培养基上，细菌在一定时间内呈现正常生长。
2. 敏感性试验：观察到在添加了某些药物后，细菌周围出现了抑菌圈。
抑菌圈的直径越大，说明细菌对该药物的敏感性越高。
根据抑菌圈的直径，我们判断药物的敏感性分为不同级别。
3. 抗药性试验：观察到在添加了某些药物后，细菌周围未出现抑菌圈，或抑菌圈的直径很小。
这说明细菌对该药物的敏感性较低，甚至产生了抗药性。
讨论和分析：通过药敏试验的结果，我们可以根据细菌对不同药物的敏感性来选择合适的抗生素治疗感染。
药敏试验是临床医生进行抗生素选择的重要依据之一。
根据不同细菌的敏感性结果，医生可以根据药物的目标细菌的敏感性，选择合适的药物和剂量进行治疗。
同时，药敏试验也可以帮助医生监测和了解细菌对药物的抗药性情况。
随着抗生素的广泛使用，一些细菌逐渐产生了对药物的抗药性。
通过药敏试验，可以及早发现和监测细菌的抗药性情况，为防控细菌抗药性提供依据。
然而，药敏试验也存在一些限制。
首先，该试验只能测试抗生素对细菌的杀菌效果，不能完全模拟临床环境中抗生素的药效。
医学检验药敏实验报告
一、实验名称药敏试验二、实验目的1. 了解本次实验所选细菌对多种抗生素的敏感性。
2. 为临床合理用药提供依据。
三、实验原理药敏试验是指在体外条件下，测定抗生素对细菌的抑制作用，以判断细菌对某一种或几种抗生素的敏感性。
实验原理主要基于抗生素对细菌生长的抑制作用，通过观察细菌生长情况，确定抗生素的最小抑菌浓度（MIC）。
四、实验材料1. 细菌菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等。
2. 抗生素：氨苄西林、头孢噻肟、阿莫西林、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星等。
3. 琼脂平板、无菌棉签、移液器、酒精灯、培养箱等。
五、实验方法1. 将细菌菌种接种于琼脂平板上，培养至适宜生长。
2. 在琼脂平板上均匀涂布抗生素纸片，用无菌镊子轻轻压紧。
3. 将平板倒置放入培养箱，培养24小时。
4. 观察并记录细菌生长情况，确定抗生素的抑菌圈直径。
六、实验步骤1. 菌种培养：将细菌菌种接种于琼脂平板，培养24小时。
2. 药敏纸片制备：将抗生素纸片用无菌镊子取出，均匀涂布于琼脂平板上。
3. 观察与记录：将平板倒置放入培养箱，培养24小时后观察并记录抑菌圈直径。
七、实验结果1. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
2. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药。
3. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感。
八、讨论与分析1. 本次实验结果显示，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌对多种抗生素的敏感性存在差异。
2. 大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗大肠杆菌感染的首选药物。
3. 金黄色葡萄球菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为耐药，提示金黄色葡萄球菌感染需选用其他抗生素。
4. 肺炎克雷伯菌对氨苄西林、阿莫西林、头孢噻肟、头孢他啶、庆大霉素、环丙沙星均表现为敏感，提示这些抗生素可以作为治疗肺炎克雷伯菌感染的首选药物。
药敏试验简介(1)
药敏试验简介(1)药敏试验简介药敏试验是一种用于检测感染病原体对抗生素的敏感性和抗性的实验方法，用于指导临床医生选择最佳的治疗方案。
以下是有关药敏试验简介的几个方面：1. 药敏试验的原理药敏试验的基本原理是，将已知浓度和种类的抗生素加入含有目标病菌的培养基中，观察在一定条件下细胞生长和杀菌效果的变化。
根据药物与细菌之间抑制、杀灭等反应的不同情况，可以确定细菌对各种抗生素的敏感性。
简单地说，药敏试验就是将不同的抗生素添加进培养基中，观察细菌的生长状况，从而确定细菌对各类抗生素的反应情况。
2. 药敏试验的步骤药敏试验包含多个步骤。
首先，需要从患者样本中分离出单个的病原菌株，并将其保持在适当的培养基中。
接着，将不同浓度的抗生素加入进相应的培养基中，混合均匀，培养一段时间后观察菌落的生长情况，记录生长的数量和质量。
后面，需要根据生长情况，计算并且解释作用的抗生素的最小抑菌浓度(MIC)，以及抗菌的抑制环直径等等。
最后，根据各种抗生素的药敏试验结果，医生可以选择最佳的治疗方案。
3. 药敏试验的意义药敏试验的意义非常重大。
抗生素的应用不当会导致抗生素的耐药性扩散，病原菌能够抵御原来有效的抗生素，导致其治疗效果降低或失效。
药敏试验可以为医生指导合理使用抗生素，从而减少抗生素的滥用和耐药性扩散。
4. 药敏试验的分类药敏试验主要分为传统的筛选法和自动化的酶发联试验法两种。
前者需要繁琐的历程，其对微生物的散布、环境、培养条件等都会提出种种宽泛的要求；后者则大大减少耗时，更为方便。
现在在医学领域，自动化的酶发联试验法形象化了检测的过程、提高了药敏试验的原准确度和精准性。
药敏试验在临床医学的治疗中有着重要的地位，因此药敏试验也被医学从业人员广泛运用。
开展药敏试验，能突破医学的局限性和瓶颈，得以精准测试、指导合理用药和提高病人康复率。
药敏试验的原理以及方法
药敏试验的原理以及方法
药敏试验是一种常见的实验室检测方法，主要用于测试细菌对抗菌药物的敏感性。
药敏试验可以帮助医生选择合适的治疗方案，提高治疗成功率，避免药物滥用和耐药性产生。
药敏试验的原理是将已知浓度的不同抗菌药物加入含有病原菌的培养基中，观察不同抗菌药物对病原菌生长的抑制作用。
药敏试验的结果可以简单的分为三类：敏感、耐药、中介敏感。
敏感表示该菌株对该抗生素敏感，在治疗时可以选用该药物。
耐药表示该菌株对抗生素的敏感性极弱或根本不敏感，该药物不能用于治疗；中介敏感表示该菌株对该抗生素的敏感性相对较弱，但在高浓度时可能达到治疗效果，可以考虑使用该药物，但需慎重。
药敏试验的方法主要分为漏斗扩散法和肉眼法。
漏斗扩散法是将已培养好的细菌涂布在琼脂板表面，然后在板上分别滴入不同浓度的抗菌药物溶液，将板点置于孵化箱中进行孵化，观察菌落抑制圈的形成情况及直径大小，进而判定菌株的敏感性。
肉眼法又称为布氏法，是一种定性试验方法。
将标准菌液进行1:1000稀释，然后将药物加入
混合液中，观察混合液的浑浊度，如果混合液完全清晰，则表示该菌对该药敏感；如果混合液浑浊度高，则表示不敏感。
药敏试验需要注意以下几点：首先，样品的获取应当准确无误。
其次，病原菌的选择应符合临床实际，可根据标准流程进行；再次，药敏试验的器材应保证无菌并符合检测要求；最后，操作人员需要严格遵守操作规程，操作过程中出现异常情况需及时发现并进行相应处理。
总之，药敏试验可以帮助医生制定合理的治疗方案，避免药物滥用和耐药性的发生，是临床治疗中必不可少的实验室检测方法。
药敏试验常用方法及局限性介绍
药敏试验常用方法及局限性介绍药敏试验(AST),目的是了解病原微生物对各种抗生素的敏感程度，以指导临床合理选用抗生素药物的微生物学试验。
当猪场发生细菌性疾病时，在不知道病原菌对哪种抗菌药物敏感时，通过针对病原菌做药敏试验来选择药物是可靠有效的办法。
但有很多养殖朋友迷信药敏试验，认为只要通过药敏试验找到敏感药物，就能药到病除，实际上这也是对药敏试验的一种误解。
药敏试验由于本身的局限性，其结果常常与临床不符,有时临床有疗效但药敏报告是耐药，可有时临床无效但药敏报告是敏感。
本文介绍了常用的两种药敏试验方法及其局限性，望广大朋友对药敏试验有正确的认识。
一、药敏试验的方法目前，被普遍应用的临床药敏试验方法和“抗药”或“敏感”的分界点判定标准是美国临床标准实验室(CLSDl971年提出的。
通常以琼脂或肉汤稀释法和纸片扩散法测定最低抑菌浓度(MlC)和最低杀菌浓度(MBC),并根据药敏分界点(breakpoint)判定标准判断敏感与抗性。
纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。
不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关，即抑菌圈越大，MlC越小。
如图中所示，按抑菌圈的大小排列，药物A＞药物B＞药物C,即接种菌对药物的敏感程度是药物A＞药物B＞药物C。
稀释法是在肉汤或琼脂中将抗菌药物进行一系列(对倍)稀释后，定量接种待检菌，35度孵育24h后观察。
抑制待检菌肉眼可生长的最低药物浓度，即为该药物对待检菌的最低抑菌浓度。
如上图，A管中药物浓度最大，细菌菌落最少，G管中药物浓度最小，细菌菌落最多。
二、药敏试验的局限性1、细菌群体组成的异质性对药敏试验的影响未能得到表达。
药敏试验的操作方法
药敏试验的操作方法
药物敏感性试验是一种常用的药物敏感性检测方法，它可以评估不同药物对细菌的杀菌效果。
操作步骤如下：
1. 准备培养基：根据实验需要选择适宜的培养基，如Mueller-Hinton琼脂培养基等，并按照说明书的要求制备好培养基。
2. 细菌的孵育：将需要测试的细菌株均匀涂布在琼脂培养基的表面上，然后在37C下孵育24小时，使得菌落生长。
3. 制备药物试验片：将需要测试的药物稀释成不同浓度的溶液，通常是2倍稀释系列。
将药物溶液滴在试验片上。
4. 放置试验片：将制备好的试验片放置在含有菌落的琼脂培养板上，并轻轻压平，使得药物溶液能够与细菌接触。
5. 孵育试验片：将装有试验片的琼脂培养板置于37C下孵育24小时，使得细菌在药物的作用下生长或者抑制生长。
6. 结果的观察和解读：观察试验片上细菌的生长情况，根据细菌对药物的敏感性判断药物的杀菌效果。
常用的评估标准是观察试验片上出现最低抑菌浓度（MIC）。
7. 数据记录和分析：将观察到的结果记录下来，并根据试验片上出现的细菌生长情况分析药物的抗菌活性。
值得注意的是，药物敏感性试验只是一种体外实验，并不能完全代表细菌在体内的敏感性。
因此，对于真实应用中的治疗选择，还需要综合考虑其他因素，并结合临床实践进行判断。
药敏试验原理
药敏试验原理
药敏试验是一种用于测试微生物对抗生素或药物的敏感性的实验方法。
它可以帮助医生确定最有效的治疗方法，避免使用对微生物无效的药物，从而减少药物滥用和耐药性的产生。
药敏试验的原理是通过将不同的抗生素或药物加入培养基中，观察微生物在不同药物浓度下的生长情况，从而判断微生物对药物的敏感性。
在进行药敏试验时，首先需要培养待测微生物，使其达到一定的数量和生长状态。
然后将不同浓度的药物加入含有微生物的培养基中，通常会采用双倍稀释法或梯度法来确定不同浓度的药物。
接着将含有药物的培养基与微生物接种于琼脂平板上，培养一定时间后观察微生物的生长情况。
通过比较不同药物浓度下微生物的生长情况，可以确定微生物对药物的敏感性。
药敏试验的结果通常会以最小抑菌浓度（MIC）来表示，MIC是指能完全抑制微生物生长的最低药物浓度。
根据MIC的结果，可以将药物分为对微生物具有杀菌作用和仅具有抑菌作用两种类型。
对于临床治疗来说，通常会选择对微生物具有杀菌作用的药物，以达到最好的治疗效果。
除了MIC外，药敏试验还可以通过观察药物对微生物的杀菌曲线来评估药物的抗菌活性。
杀菌曲线可以反映出药物对微生物的杀菌速度和效果，对于选择治疗方案和判断药物的疗效都具有重要意义。
总的来说，药敏试验是一种非常重要的实验方法，可以帮助医生选择最有效的治疗药物，减少药物滥用和耐药性的产生。
通过了解药敏试验的原理和结果解读，可以更好地理解临床上药物选择的依据，为临床治疗提供更科学的依据。
同时，药敏试验也为药物研发和抗菌药物的选择提供了重要的参考依据，对于推动医学和药学领域的发展具有重要意义。
药敏试验方法简介ppt
2
3
包括试剂、器材的准备，样品的收集、处理等。
确保试验前准备工作充分
试验过程中应严格按照规定的方法和步骤进行，避免误差和偏差。
严格遵守操作规程
试验中的细节问题不容忽视，如试剂的保存和配制、样品的处理等。
注重细节
03
数据处理问题
数据处理需谨慎，避免误差和异常数据的干扰，同时要注意数据的可重复性和可再现性。
目的
定义与目的
1906年，美国医学家首次提出药敏试验方法，以解决抗菌药物治疗中的问题。
1940年代，药敏试验逐渐普及并成为抗菌药物治疗中的重要辅助手段。
1950年代，美国FDA开始对药敏试验标准进行规范和推广。
1980年代，自动化药敏试验设备开始广泛应用于临床。
目前，药敏试验已经成为临床抗菌药物治疗中不可或缺的环节。
归档要求
药敏试验结果报告应当及时归档保存，以便后续分析和应用。
结果报告与归档
通过对药敏试验结果的分析，可以了解细菌对不同药物的敏感性，为临床治疗提供参考。
分析目的
药敏试验结果可以应用于临床治疗、流行病学调查、药物疗效评估等多个领域。
应用范围
结果分析与应用
05
药敏试验注意事项及改进建议
1
注意事项
新药研发
综合治疗策略的研究是另一研究热点，通过研究不同药物之间的协同作用，可以制定更加科学合理的治疗方案。
综合治疗策略研究
03
加强基础研究
加强基础研究，深入研究药敏试验方法的原理和机制，推动药敏试验方法的创新和进步。
对未来研究的建议
01
加强国际合作
加强国际间的合作与交流，共同应对耐药性的挑战。
02
03
稀释注意事项：选择合适溶剂、准确计算浓度、保证无菌操作等。
药物敏感实验方法及步骤
药物敏感实验方法及步骤一、实验背景药物敏感实验是一种常见的药物筛选方法，通过测试不同剂量的药物对细胞或动物的生长和发育的影响，从而评估药物的疗效和毒性。
该实验可以为新药开发提供重要参考依据，也可以用于评估已上市药物的疗效和安全性。
二、实验材料1. 细胞培养基：如DMEM、RPMI-1640等；2. 药物：待测药物和对照药物；3. 细胞：如人类肺癌细胞A549等；4. 96孔板：用于培养细胞；5. 静脉注射器：用于给小鼠注射药物。
三、实验步骤1. 细胞培养将细胞按照常规方法培养至对数生长期，然后将细胞用PBS洗涤2次并离心收集，最后加入适量的培养基中制备单细胞悬液。
2. 药物处理将待测药物按照预定浓度稀释至不同浓度，并加入到96孔板中。
同时，在另一个96孔板中加入对照药物，如阿霉素、氟尿嘧啶等。
3. 细胞处理将细胞悬液加入到96孔板中，每孔约1万个细胞。
然后将板放入培养箱中，恒温恒湿培养24小时。
4. 细胞增殖检测使用MTT法或CCK-8法等方法检测细胞的增殖情况。
具体步骤如下：（1）MTT法：将MTT溶液加入到96孔板中，培养4小时后加入DMSO，并在洗板器上震荡混匀。
最后使用酶标仪检测吸光度值。
（2）CCK-8法：将CCK-8溶液加入到96孔板中，培养2小时后使用酶标仪检测吸光度值。
5. 数据处理根据实验结果，计算药物的IC50值和治疗指数（TI）。
其中，IC50值表示药物抑制细胞增殖50%所需的最小浓度；TI表示药物的治疗效果与毒性之比。
6. 动物实验如果需要评估药物在体内的疗效和毒性，可以进行小鼠模型实验。
具体步骤如下：（1）小鼠注射：将小鼠按照体重分组，然后使用静脉注射器将药物溶液注射到小鼠体内。
（2）观察动态：观察小鼠的生长发育情况、行为活动和食欲等指标，并记录相关数据。
（3）取样检测：在实验结束后，取样检测小鼠的血液、肝脏、肾脏等组织，评估药物的毒性和疗效。
四、实验注意事项1. 实验过程中要注意无菌操作，避免细胞污染或交叉感染。
药敏实验的方法有哪些
药敏实验的方法有哪些
药敏实验是研究不同细菌对抗生素的敏感性和耐药性的方法，常用的药敏实验方法包括：
1. 纸片扩散法：将含有不同抗生素的消毒纸片施加在含菌培养基表面，观察菌落周围的抑菌圈直径大小，判断细菌对抗生素的敏感程度。
2. 微量稀释法：在含有不同浓度抗生素的液体培养基中接种细菌，观察最小抑菌浓度，即该抗生素能够抑制该菌株的最低有效浓度。
3. 气溶胶化验法：将含有不同抗生素的气溶胶喷洒在含菌培养基中，观察菌落周围的抑菌圈直径大小，判断细菌对抗生素的敏感程度。
4. 坦能法：将不同抗生素与抑菌剂混合，制成坦能板后进行药敏实验，以检测革兰氏阴性细菌对抗生素的敏感性和耐药性。
5. 自动化微生物分析系统：采用自动化设备对不同细菌的抗生素敏感性进行测试，具有高效、精确、快速等优点。
药敏试验方法简介
药敏试验方法简介xx年xx月xx日CATALOGUE目录•药敏试验概述•药敏试验的基本原理•药敏试验的种类及方法•药敏试验读数及结果分析•药敏试验的注意事项及局限性01药敏试验概述药敏试验是一种检测微生物对抗生素等药物敏感性的试验方法，用于指导临床合理选择和使用抗生素。
定义主要是为了确定致病菌对某种抗生素的敏感性，为临床医生提供抗生素治疗方案的依据。
目的定义与目的历史与发展出现药敏试验的概念和方法。
1940年代1950年代1970年代1980年代至今美国国家标准化委员会（NCCLS）开始制定药敏试验标准。
NCCLS开始推广自动化药敏试验方法。
药敏试验技术不断发展，出现多种新技术，如分子生物学技术、基因芯片技术等。
应用范围主要用于诊断和治疗细菌感染，指导医生合理使用抗生素。
临床医学用于调查感染病的流行情况，评估抗生素治疗效果和耐药性情况。
流行病学调查用于检测动物病原菌对抗生素的敏感性，指导动物疾病的治疗。
动物医学用于检测水源、食品等环境中的耐药菌，预防耐药性传播。
公共卫生02药敏试验的基本原理微生物对药物的敏感性和耐药性微生物对药物的敏感性是指其能够被药物抑制或杀灭的能力，而耐药性则是指微生物对药物产生抵抗或耐受的能力。
通过药敏试验，可以了解微生物对不同药物的敏感性和耐药性，为临床治疗提供参考。
药物的作用机制不同药物的作用机制不同，药敏试验可以了解药物的作用机制及其对微生物的影响，从而指导临床用药。
药敏试验的微生物学原理抗生素的抗菌谱和抗菌活性抗生素的抗菌谱是指其能够抗菌的微生物种类范围，而抗菌活性是指其抑制或杀灭微生物的能力。
通过药敏试验，可以了解抗生素的抗菌谱和抗菌活性，为临床治疗提供参考。
抗生素的使用方式和剂量药敏试验可以了解抗生素的使用方式和剂量，从而指导临床用药。
药敏试验的抗生素原理将含有一定量抗生素的滤纸片贴在已接种微生物的培养基上，通过测量抑菌圈的大小来判断微生物对药物的敏感性。
药敏试验的实验方法纸片扩散法将不同浓度的抗生素加入微生物培养基中，通过比较不同浓度抗生素对微生物的生长抑制程度，来确定微生物对药物的敏感性。
药敏试验方法简介
在规定时间内观察细菌在药敏纸片周围的生长情 况。
结果记录
记录每个药敏纸片对应的抑菌圈直径或是否生长 。
结果解释
根据记录的结果，参照药敏试验标准解释敏感、 耐药等结果。
04
药敏试验结果解读
耐药性解读
耐药性
01
是指细菌、病毒等微生物对药物不敏感，即药物不能有效杀死
或抑制微生物的生长。
耐药性的分类
缺点
成本较高，需要使用特定的E型试纸和细胞培养液。
03
药敏试验操作流程
试验前的准备
确定试验菌种
根据感染类型、临床诊断等选 择合适的试验菌种。
准备培养基
选择适宜的培养基，以支持细 菌生长。
准备药敏纸片
根据需要选择适当的药敏纸片 。
菌液制备
收集菌株
从感染部位或血液等样本中收 集菌株。
纯化培养
将菌株在培养基上进行纯化培养 ，确保无杂菌污染。
01 02
定义
纸片扩散法是一种常用的药敏试验方法，通过在琼脂平板上放置含有 抗菌药物的纸片，让细菌与药物接触，观察细菌的生长情况来判断药 物的抗菌效果。
优点
操作简单、成本低、易于标准化。
03
缺点
由于不同菌种对药物的敏感性不同，可能需要调整纸片的放置位置和
时间。
稀释法
定义
稀释法是通过将细菌与不 同浓度的抗菌药物接触， 观察细菌的生长情况，以 判断药物的抗菌效果。
MRSA对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺和达托霉素较为敏感，但对β-内酰胺类 抗生素、大环内酯类抗生素和磺胺类抗生素等不敏感。
案例三：万古霉素敏感性的药敏试验结果解读
万古霉素是一种糖肽类抗生素，常用 于治疗MRSA感染和耐甲氧西林凝固 酶阴性葡萄球菌感染等严重细菌感染
药敏试验原理
药敏试验原理
药敏试验是一种常见的实验方法，用于测试细菌对不同抗生素药物的敏感性或耐药性。
其主要原理是通过观察细菌在不同药物浓度下的生长情况，来判断该药物对细菌的效果。
药敏试验通常使用盘扩散法（Kirby-Bauer法）或瓶内稀释法（Broth dilution法）进行。
下面将分别介绍这两种方法的原理。
盘扩散法是一种常用且简单的方法，它通过将不同抗生素药物浸润到纸盘或平板上，在培养基上进行细菌的培养。
当药物扩散到纸盘周围后，药物会与培养基中的细菌发生反应。
如果细菌对药物敏感，其周围形成抑制圈（即无菌圈），反之则不会。
通过测量抑制圈的直径，可以判断细菌对药物的敏感程度。
瓶内稀释法需要在含有不同药物浓度的试管中培养细菌。
首先将细菌悬浮液加入含有不同浓度药物的试管中，然后将试管放置在恒温培养箱中培养一段时间。
观察细菌的生长情况，可以根据试管中细菌的浑浊程度来判断细菌对药物的敏感程度。
如果细菌在低浓度药物中生长较少或不生长，说明细菌对该药物敏感；反之，如果细菌在高浓度药物中仍有较好的生长，说明细菌对该药物耐药。
总的来说，药敏试验通过观察细菌在不同药物浓度下的生长情况，来评估其对抗生素药物的敏感性或耐药性。
这一实验方法在临床治疗中具有重要的指导意义，有助于选择合适的抗生素来对抗细菌感染。
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药敏结果报告可用MIC（μg/ml）或对照 CLSI标准用S、R和I报告。
对于稀释法的批量试验，有时需要报告 MIC50、MIC90。
2020/11/20
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稀释法药敏影响因素
培养基
• 细菌纯度
pH值 7.2-7.4
• 气体环境
营养程度
– 所有需氧细菌均放普通
抗生素拮抗剂含量
大气环境。如果放CO2
理用药，避免产生或加重细菌的耐药； 监测细菌耐药性，分析耐药菌的变迁，掌
握耐药菌感染的流行病学，以控制和预防 耐药菌感染的发生和流行。
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（1）抗菌药物的选择 在我国主要遵循临床实验室标准化委员会
（Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI）制定的抗菌药物选择原则 Ø A组：对特定菌群常规测试并报告的药物 Ø B组：可常规测试、选择性报告的药物 Ø C组：替代性或补充性药物 Ø U组：仅用于泌尿道感染的抗菌药物
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稀释法（MIC法）
MIC法：分为常量法和微量法
Ø 常量法：肉汤稀释法、琼脂稀释法
Ø 微量法：微量肉汤稀释法
p 简化双浓度折点法 ATB药敏
p 简化常规浓度分布MIC法 BD、德 灵药敏
p 动力学计算MIC法 VITEK2药敏
VITEK32、
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肉汤稀释法
不生长 = 抗生素抑制细菌生长 生长 = 抗生素无法抑制细菌生长
三、药敏试验方法学
1.手工试验
• 纸片扩散法（K-B法） • 稀释法（MIC法）
– 肉汤稀释法
• 常量稀释法 • 微量稀释法
– 琼脂稀释法 • E-test法
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2.自动仪器药敏系统
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纸片扩散法（K-B法）
原理：抑菌圈的大小反映受试菌对测定药 物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈 负相关。
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葡萄球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组
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肠杆菌科抗菌药物敏感试验推荐分组
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假单胞菌属的抗菌药物药物敏感推荐分组
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不动杆菌属的抗菌药物药敏试验推荐分组
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肠球菌属抗菌药物药敏试验推荐分组
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肺炎链球菌抗菌药物药敏试验推荐分组
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药敏试验的折点亦遵照每年最新公布的 CLSI标准进行，分为敏感（S）、耐药（R） 和中介（I）。
4. 平板在室温下干燥3～5min，用无菌镊子或商品化 的纸片分配器将含药纸片紧贴于琼脂表面；
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5. 35℃孵育16～24小时，量 取抑菌圈直径；
6. 根据抑菌环的直径，按照 CLSI标准判读，报告敏感、 中介、耐药。
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CLSI对K-B法的标准化规定
纸片药物含量、细菌接种浓度、培养基、 平皿厚度、孵育时间、环境、判定标准、 质控方法等；常规测试、报告的抗生素。
药敏试验方法简介
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耐药菌问题日益严重
“目前药物失去作用的速度与科学家发 现新药物的速度差不多。”
摘自WHO报告
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抗微生物治疗面临的困境
•抗药性问题始终存在 •细菌不断获得新的耐药机制 •以往对付耐药性的策略收效不显
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一、 抗菌药物敏感试验（AST）
预测抗菌治疗的效果； 指导抗菌药物的临床应用； 发现或提示细菌耐药机制的存在，指导合
钙镁离子含量、锌离子含量 （用27853氨基糖苷类和亚胺
– 苛养菌放普通环境生长 不良，导致假敏感
配能结果监控）
• 培养时间
菌悬液
– 粘液性铜绿需48小时
浓度高抑菌环缩小（假耐药）• 测量方法
浓度低则扩大（假敏感） .
稀释法
以一定浓度的抗菌药物与含有受试菌的培养 基进行一系列不同倍数稀释（通常为双倍稀 释），培养16～24h后，通过观察细菌生长 现象来测得药物对受试菌的最低抑菌浓度 （MIC）。
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MIC与抑菌圈直径的线性关系
Log2. MIC
R
I
S
耐药
中介 敏感
d1 d2 抑菌圈直径（mm)
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1. 准备抗菌药物纸片和水解酪蛋白（M-H）培养基； 2. 挑取孵育16 ～ 24小时已分纯菌落，置于生理盐水
管中，振荡混匀后校正浓度至0.5麦氏标准；
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3. 用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余 菌液，然后在MH琼脂表面均匀涂布接种3次，每次 旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周；
钙镁离子含量（钙10-25； ，由于碳酸的影响，药
镁10-12.5μg/ml）
物活性受到影响，形成
菌悬液（5×104CFU/ml）
假敏感或假耐药
接种效应
• 培养时间
浓度高MIC抬高
– 真菌需48小时
浓度低MIC压低
– 奴卡菌需5天
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E-test法
将稀释法和扩散法的原理结合起来，直接 测定药物对受试菌的MIC 。
不同的药判定标准不同；不同的菌判定标 准也不同。
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扩散法药敏影响因素
培养基
• 细菌纯度
pH值7.2-7.4
• 气体环境
营养程度（肠球菌能生长）
– 普通细菌放CO2时由于
厚度
碳酸的影响，药物活性
抗生素拮抗剂含量（用29212 监控）
受到影响，形成假敏感 或假耐药
104 cfu/ml
mg/ml 4 2 1 0.5 0.25 0.12 0
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微量肉汤稀释法
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接种后应充分混匀，但不能有气泡产生 静置培养 培养温度；35℃ 气体环境：所有细菌（包括苛养菌）均置大 气环境；厌氧菌置厌氧环境；微需氧菌置微 需氧环境；淋菌琼脂稀释法置CO2 培养时间：18小时
Increasing Antibiotic Conc.
MIC = 8
.25
0.5
1
2
4
8
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
16
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MIC (最小抑菌浓度) = 抗生素可抑制细菌生长 的最小浓度。
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常量稀释法
药敏试验的参考方法： 将标准接种物加入含対倍稀释抗生素的MH肉汤 管中. 过夜培养. MIC 即是能抑制细菌生长的含最低抗生素的浓度的那一 管所标示的浓度值(琼脂稀释法是将対倍稀释后的抗生素加入融化后平衡 到50℃的MHA中再倾制平皿，接种物为一定大小的斑点，浓度也为 104CFU/ml). 解释标准(S or R) 是建立在体内可达到的抗生素浓度水平上
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敏感：分离菌株能被测试药物使用推荐剂 量时在感染部位通常可达到的抗菌药物浓 度所抑制
耐药：分离菌株不能被测试药物常规剂量 可达到的药物浓度所抑制；分离菌株可能 存在某些特定的耐药机制；治疗研究显示 药物对分离菌株的临床疗效不可靠
耐药＝治疗无效；敏感≠治疗有效
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二、抗菌药物的种类及作用机制
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