灵芝三萜成分分析

仪器
用甲醇定容， 分别吸取 K33 ! E8 量瓶中， 8 混合后定 容于 D E8 量瓶中， 制备成标准液， 依次吸取 D M 7 ! 8 进样， 作 N=80 分析 （图 D） 。以峰面积对进样量回归 处理， @ 种对照品的峰面积与进样量呈良好线性关 系， 线性范围 32K M D23 ! "。将 @ 种对照品进样量 ! 与所得峰面积 " 值进行线性回归， 回归方程分别为： 赤芝孢子酸 !：" O : P 76KK ! I 3 P :@KG # O 3 P 1111 赤芝酸 !：" O D P :3:D ! I 3 P 353G 灵芝酸 /：" O D P KG3K ! I 3 P DK:1 灵芝酸 0：" O D P 61K3 ! Q 3 P KD77 # O 3 P 1111 # O 3 P 1111 # O 3 P 1111
（ )*+,-.,/0/12 *213 (） 则对 ’’4C 和半乳糖胺及丙酸杆
［! D 9］ 菌造成的小鼠转氨酶升高有降低作用 。由于现
代栽培技术和发酵技术的发展使灵芝不再是稀有珍 品， 灵芝子实体、 孢子粉、 发酵菌丝体在临床上已有 广泛的应用， 保健品众多， 但含量分析方法的研究和 报道不多。关于三萜酸成分分析丁平等仅报道分析
灵芝三萜成分分析
马 林，吴 丰，陈若芸!
（中国医学科学院、 中国协和医科大学 药物研究所，北京 !"""#"） 摘要：目的 建立灵芝子实体、 孢子粉、 发酵菌丝体三萜成分的 $%&’ 含量测定方法。方法 以赤芝孢子酸 ( 进样量在 "=B D !
（ )*+,-.,/0/12 *213 (， ， 赤芝酸 ( （ 452130+12 *213 (， ， 灵芝酸 6 （ )*+,30/12 *213 6， 和灵芝酸 ’ （ )*+,30/12 *213 ’， 为对 !） "） #） $） 照品； 色谱柱： 反相 ’!7 ； 流动相： 乙腈8水 （9: ; <9） ； 流速： ・ 检测波长： !=" >& >1+ ? ! ； @A B#C +>。结果 （!） （ ，"） （ ，#） 和 （$） 的加样回收率分别为 !""=EF ， ) 有良好的线性关系， !"!=BF ， !"!=9F 和 !"!=:F 。结论 本法快 ! 速、 简便、 灵敏和分离度好， 适用于灵芝子实体、 孢子粉、 发酵菌丝体及相关制剂的三萜类物质检查和含量测定。 关键词：灵芝；子实体；孢子粉；发酵菌丝体；三萜；高效液相色谱法 中图分类号：GE!: 文献标识码：( 文章编号："#!9 ? C7:" （B""9） "! ? ""#" ? "9
结果与讨论
! 线性范围 精密称取上述 @ 种标准品各 D E"， 分别置于 D
（ U*#$"&.） ；0：S(.*R*$" T%,*)& （S.V*#$） ；>：;’%()& （ U*#$"&.） ；W：;’%()& !：;R#$,#(, &#E’-)；/：S(.*R*$" T%,*)& （N)T)*） ；S：;’%()& （S.V*#$） ；X：;’%()&（ S.V*#$ T()#Y Z#-- (#R) 674 ） ；N：[\+)-*.E（ ;]#$,%$"） P =)#Y D： （ $ ^ O K@235 E*$） ；=)#Y K：8.+*,)$*+ #+*, ! （ $ ^ O D72@6 E*$） ；=)#Y G：X#$%,)(*+ #+*, / X#$%&’%()(*+ #+*, ! （ $ ^ O 126@ E*$） ；=)#Y @：X#$%,)(*+ #+*, 0（ $ ^ O D62K: E*$）
灵 芝 酸 / 16234 、 灵芝酸 0 赤 芝 酸 ! 15234 、 福 16234 。福建产灵芝子实体由林东星教授赠送， 建产灵芝孢子粉由林树钱教授赠送， 其余均在产地 购买， 由本所岳德超研究员鉴定。乙腈为色谱纯 （江 苏淮阴塑料制品厂精细化工研究所） ， 三氯甲烷、 甲 醇、 （北 京 化 工 厂） ， 蒸馏水 （双 174 乙 醇 为wk.baidu.com分 析 纯 蒸） 。
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［C］ ［#］ 了灵芝酸 6 ， 马礼金等 用 $%&’ 和 N’& 法对灵 芝子实体和菌实体进行比较。灵芝酸 ’， 赤芝孢子
酸 ( 及赤芝酸 ( 的含量测定尚未见报道。本文建 立了用 $%&’ 对不同产地的灵芝子实体、 孢子粉、 发 酵菌丝体进行了 C 种三萜酸含量测定， 可作为评价 灵芝质量的方法。
%5*./’2.：%+4 N, 30O04,. * >0PQ,3 R,/ *+*4M-1- ,R P/1P0/.0+0 2,+-P1P50+P- 1+ ?+"(-’,2+ 4&.%-&2 SM （!） ，452130+12 *213 ( （"） ，)*+,30/12 *213 6 （#）*+3 )*+,30/12 *213 ’ $%&’ T 60.7,8* U*+,-.,/0/12 *213 ( （$ ） V0/0 5-03 *- 2,>.*/1-,+ -5S-P*+20- T ’Q/,>*P,)/*.Q12 2,45>+ V*- * G%8’!7 ； PQ0 >,S140 .Q*-0 V*；PQ0 R4,V /*P0 V*- !=" >& ・ >1+ ? ! *+3 PQ0 30P02P1+) V*O040+)PQ V*- B#C +>T *20P,+1P/1408V*P0/（ 9: ; <9 ） （!） ， 90*3(.* ( 41+0*/ /*+)0 V*- ,SP*1+03 R/,> "=B ! ) P, !=" ! ) V1PQ * ),,3 41+0*/ 2,//04*P1,+ T NQ0 /02,O0/M ,R （"） ， （#）*+3（$）V0/0 !""=EF ，!"!=BF ，!"!=9F *+3 !"!=:F ，/0-.02P1O04M T :,&2(3*+,& NQ1- >0PQ,3 V*- 30O04,.03 R,/ PQ0 *+*4M-1- ,R P/1P0/.0+0- SM $%&’ R,/ PQ0 R1/-P P1>0 T NQ0 >0PQ,3 1- /*.13，*225/*P0 *+3 -51P*S40 R,/ PQ0 *+*4M-1- ,R PQ0 P/1P0/.0+0 2,+-P1P50+P- 1+ R/51P S,310-， -.,/0-， >M20415> R/,> ?+"(-’,2+ 4&.%-&2 T ;0) <,/8*：?+"(-’,2+ 4&.%-&2 ；R/51P S,310-；-.,/0-；>M20415>；P/1P0/.0+,13；$%&’ 灵芝 ?+"(-’,2+ 4&.%-&2（ &0M-- ’@ J/ T ）W*/-P T 为 灵芝科灵芝属药用真菌， 始载于汉代 《神农本草经》 ， 列为 上 品。灵 芝 属 共 有 7" 多 种 灵 芝， 中国药典 （B""" 年版） 规定赤芝 ? A 4%.&%-&2 和紫芝 ? A ;+B("%.+ 为药用正品。灵芝含有多种化学成分， 其中苦味三 萜类化合物为灵芝主要有效成分， 具有多种生理活 性， 如灵芝酸 （)*/+,30/12 *213）(， 6， ’ 和 X 能抑制小 鼠肌肉细胞组胺的释放， 灵芝酸 J （ )*/+,30/12 *213 J） 有很强的抑制血管紧张素酶的活性， 赤芝孢子酸 (
（ *+, !9A< ） ； （ *+, A9#< ） ； 分别为 !BB9;< !B!9A< （*+, !9A< ） 和 !B!9R< （*+, #9!< ） （表 A） 。 !B!9?< #$%&’ 5 6’7/8’+9 $.: 6;) /0 0/<+ 7/,1$+-2/. （ 2$,1&’2 # = !）
材料与方法
药品及试剂 对照品赤芝孢子酸 ! （ "#$%&’%()(*+ ， 赤芝酸 ! （ -.+*,)$*+ #+*, !， ， 灵芝酸 / #+*, !， !） "） （"#$%,)(*+ #+*, /， 和灵芝酸 0 （ "#$%,)(*+ #+*, 0， #） $） 为本实验室从浙江产赤芝孢子粉中分离制备并经光 谱分析鉴定结构， 纯度分别为赤芝孢子酸 ! 11234 ，
流提取 ! "， 提取率最高， 且样品中杂质干扰较少， 故 选用三氯甲烷为提取溶剂。 ! 精密度和重复性 在上述色谱条件下将前述 # 种对照品溶液各连 续进 样 $ 次， 每次 % ! &， ’(&) 分 析 测 定 峰 面 积 的 *+, 分别为 -./012034356 .657 8 !9:;< ， =>6574/56 .657 8 ?9#%< ， -./074356 .657 @ ?9AB< 和 -./074356 .657 ) A9$!< 。精密称取江苏灵 芝 子 实 体 A%B C- 样 品 $ 份， 用三氯甲烷 !BB C& 回流提取 ! "， 按上述色谱条 件进 样 分 析， 得 *+, 分 别 为 -./012034356 .657 8 B9;;< ，=>6574/56 .657 8 !9;!< ，-./074356 .657 @ #9A!< 和 -./074356 .657 ) %9!#< 。 " 生药样品测定 精密称取生药样品粉末 （#B 目）A%B C-， 加入三 氯甲烷 !BB C& 回流提取 ! "， 冷却， 过滤减压回收至 干， 加少许甲醇溶解， 定容于 A C& 量瓶中， 按上述色 谱条件进样分析。结果见表 !。 #$%&’ ( )’*’+,-.$*-/. /0 *+-*’+1’.’2 （3） 0+/,
S*".() D " 提取方法比较
N=80 +](%E#R%"(#E %_ &#E’-)& %_ %&’()*#+& ,-./)-+ 回流 D， 分别冷浸 K， @， 6， D: 和 K@ ]， K 和 @ ] 或超声 提取 D7， G3 和 :3 E*$。结果表明生药以三氯甲烷回
用甲醇、 三氯甲烷等 G 种提取溶剂， 174 乙醇、 万方数据
高效液相色谱仪 高压泵： 岛津 809:!， 进样 器： 岛 津 ;<89:!， 检 测 器： 岛 津 ;=>9:!?， 处理 器： ;=@:33 积分仪。 色谱条件 色谱柱： （D73 A;B ")- C>; 63 A; 0D6 ， 流动相： 乙腈9水 （G5 H :G） ， 流速： 7! E） EE F @2: EE， ・ 检测波长 J?： 柱温： D23 E8 E*$ I D ； K7@ $E； @3 L 。
D./012034356 .657 8 B I B$ B I A! B I B! B I B# K3.64 B I B? P &>6574/56 D./074356 D./074356 .657 ) .657 8 .657 @ B I B: B I B? B I B! B I BA K3.64 B I B! P B I !$ B I !? B I B! B I B# K3.64 B I BA B I B! B I B; B I !! K3.64 B I B# K3.64 B I BA P
+.C2=4 D./012034356 .657 8 &>6574/56 .657 8 D./074356 .657 @ D./074356 .657 ) 87747 S /- E0>/7 S /- *460T43O S < *+, S < A; I $B A$ I $; A% I %$ AA I A# A; I :: AR I B! A% I :; AA I $! !BB I ; !B! I A !B! I ? !B! I R !IA AI# !IA #I!
收稿日期：B""B8"<8"9 T 基金项目： “ 7<9 ” 高通量药物筛选系统及多样性资助项目 （B""!((B9C"B!） T 万方数据 ! 通讯作者 N04：7< ? !" ? <9!<#9B#，J*Y：7< ? !" ? <9"!::#:， K8>*14：/5,M5+2Q0+Z Q,P0>*14 T 2,>