番鸭细小病毒病
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番鸭细小病毒病(Muscovy Duck Parvovirus Disease)
雏番鸭细小病毒病是由番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)引起的一种急性、败血性传染病,其特点是具有高度传染性和死亡率。该病主要发生于3周龄以内的雏番鸭,因此又称雏番鸭“三周病”;发病率和死亡率可达40%~50%以上,是目前番鸭饲养业中危害最严重的传染病之一,严重影响养鸭业的发展。本病的发生无季节性,一年四季均可发病。我国是发现和研究番鸭细小病毒最早的国家,1985年以来,在我国福建等南方多省均出现该病pJ,而后,法国、美国、日本等地也相继报道本病的流行。1988年,程由铨等首次分离并鉴定该病的病原为番鸭细小病毒。
(一)病原
番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)为细小病毒科(Parvoviridae)细小病毒属(Parvovirus)成员,含单股线状DNA,约5.2kb。在电镜下病毒呈晶格状排列,有实心和空心两种病毒粒子,直径24~25nm,无囊膜,正20面体对称,直径约3~4nm。病毒无血凝特性。MPV在氯化铯中沉淀时具有三条区带,其密度分别为1.28~1.30、1.32、1.42g/cm3,其中第3条具有感染性。病毒具有的4种结构多肽及其相对分子质量分别为:VP1(89000)、VP2(68000)、VP3(58000)和VP4(40000),其中VP3为主要结构多肽。病毒目前只有一个血清型。尿囊腔途径接种11~13日龄番鸭胚、11~12日龄麻鸭胚、12~13日龄鹅胚能够感染并一定程度致死胚体。不感染鸡胚。能适应番鸭胚成纤维细胞(MDEF)、番鸭胚肾细胞(MDEF)生长并形成细胞病变。对鸡、番鸭、麻鸭、鸽、猪等动物红细胞无凝集作用。能抵抗乙醚、胰蛋白酶、酸和热,但对紫外线辐射敏感。
(二)免疫
成年番鸭自然或人工感染MDPV均无临床症状,但可产生中和抗体,康复番鸭血清中也有中和抗体,成年番鸭免疫可产生中和抗体并可使后代获得保护,番雏鸭注射康复番鸭或免疫番鸭血请后可获得被动免疫。弱毒疫苗接种雏鸭后3d,部分番雏鸭产生免疫,7d全部产生免疫,21d抗体水平达到高峰。
(三)疫苗
[雏番鸭细小病毒病活疫苗]
(1)种毒番鸭细小病毒P1株。
(2)制造要点○1接毒:使用番鸭胚成纤维细胞培养,在接种时将培养液弃去,加入适量种毒,置37℃吸附1h后加入维
持液继续培养。○2培养和观察:接毒后观察细胞病变,待75%以上的细胞出现细胞病变时即可收获。○3收获:将细胞摇下,连同培养液收获于灭菌容器内。○4配苗:收获细胞培养液制备的液体苗或加适宜稳定剂,经冷冻真空干燥制成冻干苗。
(3)质量标准除按《成品检验的有关规定》检验外,进行如下检验:
○1安全检验:用一日龄健康易感雏鸭5只,各腿部肌肉注射疫苗0.2ml(病毒含量为2×103.5TCID50,即10个使用剂量),观察20d,应全部健活。
○2效力检验:下列方法任择其一。
用1日龄健康易感雏鸭5只,各腿部肌肉注射疫苗0.2ml(病毒含量为2×102.5TCID50),观察15d后,分别心脏采血,分离血清,测定血清中胶乳凝集抑制效价(LPAI)应≥4为合格,若其中有1份血清LAPI≤2,可重检一次。
用1日龄健康易感雏鸭5只,各腿部肌肉注射疫苗0.2ml(病毒含量为2×102.5TCID50),7d后,连同条件相同的对照雏番鸭5只,各胸部肌肉注射强毒F株含毒胚液0.5ml,观察15d。对照组鸭至少2只死亡,免疫组鸭全部保护为合格。否则重检一次。
(4)保存与使用冻干苗在-20℃保存,有效期为3a;在2~8℃为2a。液体苗在-20℃保存,有效期为18个月。可用于预
防雏番鸭细小病毒病,腿部肌肉注射,免疫后7d产生免疫力,免疫期为6个月。
(四)诊断制剂
应用活疫苗及强毒抗原免疫兔或鹅制备高免血清,用于中和试验及雏番鸭保护试验。也可应用单克隆抗体或纯化的MDPV抗原免疫等获得高免血清(多克隆抗体),建立荧光抗体试验(FA)或乳胶凝集试验(LA)MDPV抗原。用一定的方法获得纯化的抗原,可用于包被酶标板建立酶联免疫吸附试验(ELISA)或琼脂扩散沉淀试验(AGP),检测MDPD抗体。
(五)治疗制剂
用活疫苗反复免疫健康成年鸭,AGP效价为1:32以上时,收集鸭血清。用于5日龄雏番鸭,可大大地减少发病率,用量为每只雏鸭皮下注射1ml。对发病鸭进行治疗时,使用剂量为每只雏鸭皮下注射3ml,治愈率可达70%。