TNRC9基因多态性与乳腺癌的相关性研究

１． ． １引物设计 根 据人 Ｔ ＲＣ ３ Ｎ ９基 因序列 ， 计 聚合 酶链 反应 设
（Ｃ Ｐ Ｒ）扩 增 引 物 下 游 引 ５一 Ｇ Ｔ Ｃ Ｃ Ｔ Ｇ Ａ ＡＡ Ｇ Ｔ Ａ Ｔ Ｃ Ｔ Ａ ＡＡ Ｔ Ｇ Ａ． Ｇ Ｔ 一 上 游 弓 物 ５一 Ｃ Ｃ Ｇ￣ Ａ ＡＡ ＧＧ Ｇ 一 Ａ ＡＧ ３ ， ｌ Ｃ Ａ Ｔ ： ＡＧ Ａ Ｇ Ａ ＡＧ ３ 。
ｂ ｅ ｓ ａ ｃ ｒ Ｔ ｒ ａｔｃ ｎ ｅ ， ＮＲＣ ｓ ２ ４ ６ ｅ ｅ ｃｎ ｔｂ ｈ ｒ ｅｓｓｒ ｅ ｉｇｆｒｂ ｅ ｓ ａ ｃ ｒｓ ｐ ｒｔｌ． ９ ｒ １ ４ ３ ２１ｇ ｎ ａ ｅｔ ｅｍａｋ ｒ ｃｅ ｎｎ ｏ ｒａ ｔｃ ｎ ｅ ｅ ａａｅｙ
（ Ｒ） 现 将 结 果 总 结 报 道 如 下 ： Ｏ ，
１ 资 料 与 方 法
１１一 般 资 料 ．
１ ． 合酶链 反 应 聚合 酶链反 应产 物 长为 １ ９ｂ ， ５ ｇ ．２聚 ３ １ ｐ 将 ０ｎ 基 因组 Ｄ Ａ加入 到 ２ Ｌ聚合酶链 反应体 系中 ， Ｍｇ ｌ， Ｎ ０ ３ｍＭ Ｃ２
［ ｙｗｏ ｄ ］ ＮＲ ９ｇ ｎ ｓ Ｐ ｌｍ ｒｈｓ Ｂｅ ｓ ｃｎ ｅ； ｏ ｅａ ｏ Ｋｅ ｒ ｓ Ｔ Ｃ ｅｅ； ｏ ｏｐ ｉ ｙ ｍ； ｒａｔ ａ ｃｒ Ｃ ｒ ｌｔ ｎ ｉ
１３基 因 分 型 ．
乳 腺 癌 是 女 性 常 见 的 恶 性 肿 瘤 之 一 ． 相 关 统 计 显 示 占 具 全身 恶 性肿 瘤 的 ７ １ ％ｔ ％～ ０ Ｉ ，临床上 将 乳 腺癌 分 为不 同 的亚
有 患 者均 无乳 腺癌 家 族史 及 其他 肿瘤 病 史 ． 为 中 国籍 汉族 均
人群。
１ ． ２样 本 采 集
ห้องสมุดไป่ตู้
０５ ｐ 通 用 探 针 、． ｐ 各 个 分 型 探 针 、． Ｕ Ｔ ｑ Ｄ Ａ 连 ． Ｍ ０５ Ｍ ０１ ａ Ｎ 接酶 和 ４Ｕ连 接 酶配 置 成 １ Ｌ Ｌ Ｒ体 系 。 以 ９ 。 ｉ 、 ０ Ｄ ５ Ｃ ２ｍ ｎ ９ ｏ ０ｓ６ ￣ ａｉ ４Ｃ３ 、０Ｃ２ｒ ｎ为反 应顺序 ．共进 行 ３ ５个循 环。取 １ｔ Ｌ ｘ Ｌ Ｒ产 物 ， Ｌ测 序 胶 上样 缓 冲液 和 １Ｉ Ｘ进行 混 合 ， Ｄ １Ｉ ｘ ＬＲＯ ｘ 于 Ａ Ｉ７ Ｂ ７测序 仪上 样 进行 电泳 。 ３
ｓ ｌ ｃｅ ｓ ｃ ｎ ｒ ｌｇ ｏ ｐ ｅ ｔａ ｔ ｄ ｔ ｅ ｇ ｎ ｍｉ ｅ ｅ ｔ ｄ ａ ｏ ｔ ｕ ； ｘ ｒ ｃ ｅ ｈ ｅ ｏ ｃ ＤＮＡ ｏ ｗｏ ｇ ｏ ｐ ； ｅ ｅ ｔ ｄ ｔ ｅ Ｔ ｏ ｒ ｆｔ ｒ ｕ ｓ ｄ ｔ ｃ ｅ ｈ ＮＲＣ ｓ ２ ４ ６ １ ｒ ａ ｔ ｎ ｏ ｈ ｅ ｅ ９ ｒ １ ４ ３ ２ ｅ ｃ ｉ ｆｔ ｅ ｇ ｎ ｏ ｐ ｌ ｍｏ ｐ ｉ ｍ ｙ ｔ ｅ ｐ ｌ ｍｅ ａ ｅ ｃ ａ ｎ ｒ ａ ｔｏ ｌ ｋ ｎ ｙ ｅ ｅ ｔｏ ｔ ｏ ；ａ ａ ｙ ｅ ｈ ｏ ｅ ａｉ ｎ ｂ ｔ ｅ ｒ ａ ｔ ｏ ｙ ｒ ｈ ｓ ｂ ｈ ｏｙ ｒ ｓ ｈ ｉ ｅ ｃ ｉ ｎ— ｉ ｓ ｅ ｚ ｍｅ ｄ ｔ ｃ ｉ ｎ ｍｅ ｈ ｄ ｎ ｌ ｚ ｄ ｔ ｅ ｃ ｒ ｌ ｔ ｅｗｅ ｎ ｂ ｅ ｓ ｎ ｏ ｃ ｎ ｅ ｉｋ ｆ ｃ ｏ ｎ ｌ ｉ ａ ａ ｈ ｌ ｇ ｃ ａ ｃ ｒｒｓ ａ ｔ ｒ ａ ｄ ｃ ｉ ｃ ｌｐ ｔ ｏ ｏ ｉ ．Ｒｅ ｕ ｔ ＮＲＣ ｓ ２ ４ ６ １ ＡＡ，ＡＧ ｎ ｎ ｓｌ Ｔ ｓ ９ ｒ １ ４ ３ ２ ａ ｄ ＧＧ ｅ ｅ ｉ ｈ ｔ ｄ ｒ ｕ ｎ ｏ — ｇ ｎ ｎ ｔ ｅ ｓｕ ｙ ｇ ｏ ｐ ａ ｄ ｃ ｎ ｔｏ ｒ ｕ ｒ ８ １ ， ６ ５ ， ５ ４ ａ ｄ １ ．％ ， ８ ３ ， ３ ０ ． ｈ ｒ ｒ ｏ ｃ ｒｅ ａ ｉｎ ｂ ｔ ｅ ｒ ｇ ｓｅ ｏ ｅ ｅ ｔｏ ｅ ｒ ｌｇ ｏ ｐ ｗｅ ｅ １ ． ％ ４ － ％ ３ ．％ ｎ ８ ７ ４ ．％ ３ ． ％ Ｔ ｅ ｅ ｗｅ ｅ ｎ ｏ ｒ ｌ ｔｏ ｅ ｗｅ ｎ Ｐ ｏ ｅ ｔ ｒ ｎ ， ｓｒ ｇ ｎ
制备试 剂盒 ， 抽提基 因组 Ｄ Ａ， Ｎ 并将其置于－ ０Ｃ ２ ￣冰箱保存备用 。
‘ 讯 作 者 通
基 因型 与乳 腺 癌风 险及 临 床病 理 的关 系 ； 间计 数 资料 的 比 组
较 采 用 ｘ 检 验 ， Ｐ＜００ 以 ． ５为 差 异 有 统 计 学 意 义 。
Ｒｅ ｅ ｒ ｈ ｏ ｈ ｏ ｒ ｌ ｔｏ ｆＴＮＲ Ｃ９ｇ ｎ ｔｃｐ ｌ ｍ ｏ ｐ ｓ ｎｄ ｂ ｅ ｓ ａ ｅ ｓ ａ ｃ ｆｔ ｅｃ ｒ ｅａ ｉ ｎ ｏ ｅ ｅ ｉ ｏ ｙ ｒ ｈｉｍ ａ ｒ ａ ｔｃ ｎｃ ｒ
Ｌ Ｈａ ｕ Ｌ Ｘｉ Ｉ ｉｎ Ｉ ａ ｊ
００ ） Ｃ ｎ ｌｓｏ Ｎ Ｃ ｓ２ ４ ６ １ｇｎ ｓｏ ｈｎ ｓ ａ ａｉｎ ｌｙ ｐ ｏ ｌ ｍａ ｅｉ ｅｅａ ｔ ｉ ｈ ｉ ａ ｔ ｆ ． ． ｏ ｃｕ ｉｎＴ Ｒ ９ ｒ１ ４ ３ ２ ｅ ｅ ｆＣ ｉｅｅｈ ｎ ｎ ｔ ａｉ ｅｐｅ ｙｂ ｒ ｌｖｎ ｔ ｔｅｒ ｋ ｆ ｏ ｏ ５ ｏ ｔ ｒ ｗｈ ｓ ｃｒ
１ ． 基 因 序 列 检 测 采 用 １ Ｌ Ｐ Ｒ 产 物 、× 接 酶 Ｂ ｆ ｒ ．３ ３ Ｃ １连 ｕｆ 、 ｅ
所 选 研究 对 象 来 源于 ２ １ ０ ０年 １ ～ ０ ２年 １月 哈 尔 滨 月 ２１
医科 大 学 附属 第 一 医 院 标 本库 收集 的 ３ ５例 原 发性 乳 腺 癌 ２ 患 者 ， 为研 究组 ， 龄 ２ ～ ６岁 ， 均 （０１ １ ．） ； 中 ， 设 年 ２７ 平 ５ ． ０５ 岁 其 ￣ 小 叶 原 位 癌 ６例 ， 殊 型 ２例 ， 润 性 小 叶 癌 ３ 特 浸 ２例 ， 润 性 浸 导 管癌 ３ ０例 ； 有 家族乳 腺癌 病史 。另 取标 本库 中 ３ ５ １ ５例 ２ 例 健 康 女 性 为 对 照 组 ， 龄 ２ ～ ９岁 ， 均 （９９± １ ） ； 年 １７ 平 ４ ．． １ ． 岁 所 ２
查 的标 志 物 。 【 键词 】 关 ＴＮＲＣ９基 因 ； 态 性 ； 腺 癌 ； 关 性 多 乳 相
【 中图分 类 号】 ７ ７９ Ｒ ３ ．
【 文献 标识 码］ Ａ
【 文章 编 号】１ ７ — ２ ０ ２ １ ０ ａ） ０ ６ — ２ ６ ３ ７ １ （ ０ ２）５（ 一 ０ ０ ０
・
临床研究 ・
２２ ５ 第 卷 １ ０年 月 ９ 第３ １ 期
Ｔ ＮＲＣ 基 因多态性 与乳腺癌 的相关性研 究 ９
李 海 君 李 霞・
首 都 医科 大学 生物 医 学工程 学 院 。 北京
１０ ６ ００ ９
【 要】目的 探 讨 中 国籍汉 族 人 群 的 Ｔ Ｒ ９基 因多 态性 与 乳 腺癌 的相 关性 。 方 法 选 取 ３ ５例 乳腺 癌 患 者 为研 究 摘 Ｎ Ｃ ２ 组， 另外 选取 ３ ５例 健康 人 群 为对 照 组 ， ２ 提取 两 组 患者 的基 因组 Ｄ ＮＡ， 用 聚合 酶 链 反应 一 采 连接 酶 检测 反 应 法检 测 Ｔ ＲＣ ｓ２ ４ ６ １基 因 的多态 性 ． Ｎ ９ｒ１４ ３ ２ 分析 其 与乳 腺 癌 易感 因素 和 临床 病 理 的相 关性 。 结 果 Ｔ Ｒ ９ｒ１４ ３ ２ Ａ、 Ｎ Ｃ ｓ ２ ４ ６ １Ａ Ａ Ｇ和 Ｇ Ｇ基 因在 研 究 组与 对 照组 分 别 占 １ ． 、６５ ３ ．％和 １ ．％、 ８３ ３ ． 。孕 激素 、 激 素状 态 和 淋 巴 ８１ ４ ．％、５４ ％ ８７ ４ ． ％、 ３ ％ ０ 雌 结 转 移 情况 与 Ｔ Ｃ ｓ２ ４ ６ １基 因 型无 相 关 性 （。 分 别 为 ００ １ ０３ ５ ０３ １ 均 Ｐ＞００ ） 结 论 中国 汉族 ＮＲ ９ｒ１ ４ ３ ２ Ｘ值 ．８ 、．３ 、 ．３ ， ． 。 ５ 人 群 中 Ｔ ＲＣ ｓ２ ４ ６ １基 因 与乳 腺癌 的易 感 因 素 可 能无 关 ， Ｎ Ｃ ｓ２ ４ ６ １ 因不 能 单 独作 为 乳 腺 癌 的筛 Ｎ ９ｒ１４ ３ ２ Ｔ Ｒ ９ｒ１ ４ ３ ２ 基
１４统 计 学 方 法 ．
对 照组 和研 究 组所 有 患 者均 抽 取 静 脉血 ２ｍＬ＇ 凝 ， 抗 置 于一 ０ Ｃ冰箱 保 存备 用 。 用 Ａｘｇｎ ８。 采 ｙｅ ｅ全 血基 因组 Ｄ Ａ小 量 Ｎ
采用 Ｓ Ｓ ６０软件 进行 统计 学 处理 ，采用 非 条件 逻 辑 Ｐ Ｓ１ ． 回 归危 险 度 比值 比 （ Ｒ） ９ ％Ｃ Ｏ 和 ５ １分 析 Ｔ Ｒ ９ｒ１４ ３ ２ Ｎ Ｃ ｓ２ ４ ６ １
Ｃ ｌ ｇ ｆ ｄｃｌ ｎ ｉｅｒ ｇｏ ａ ｉ ｌ ｄｃｌ ｎｖｒ ｔ， ｅ ｉｇ １０ ６ ， ｈｎ ｏ ｅｅｏ Ｍｅ ｉａ Ｅ ｇｎ ｅｉ ｆ ｐｔ ｉａ Ｕ ｉｅｓ ｙ Ｂ ｉｎ ０ ０ ９ Ｃ ｉａ ｌ ｎ Ｃ ａ Ｍｅ ｉ ｊ ［ ｓｒｃ］ ｊｃｉｅＴ ｔｄ ｅｃｒ ｌｔ ｎｏ ｎｔ ｏｙ ｏｐ ｉ Ｔ ＲＣ ｎ ｒａｔ ａ ｃｒ ｎＣ ｉｅｅｈ ｎｎ ｔ ｎ ｌ Ａｂｔａ ｔ Ｏｂ ｅｔ ｏｓ ｙｔ ｏｒ ａｉ ｆ ｅ ｅｉ ｐ ｌｍ ｒｈｓ Ｎ ９ａ ｄｂｅｓ ｃ ｎ ｅ ｈｎ ｓ ａ ａ ｏ ａ— ｖ ｕ ｈ ｅ ｏ ｇ ｃ ｍ ｉ ｉ
４ｍＭ ｄ Ｔ ｓ １ Ｐ Ｒ Ｂ ｆ ｒ 引 物 各 为 ５ ｍｏ １Ｕ 热 启 动 Ｎ Ｐ ．ｘ Ｃ ｕｆ ， ｅ ０ｐ Ｌ，
Ｔ ｑ Ｄ Ａ 聚合 酶 ， Ｂ ６ ０聚 合 酶 链 反 应 仪 上 样 并 进 行 扩 ａ Ｎ Ａ Ｉ９ ０ 增， 扩增 参数 ：５Ｃ １ ｉ ，５Ｃ ３ ，６Ｃ ９ ，８Ｃ １ ｉ ； ９ 。 ５ｍ ｎ ９ 。 ０Ｓ５ 。 ０Ｓ６ 。 ｎ 进 ａ ｒ 行３ ５个循 环 后于 ６ 。 ８Ｃ延 伸 ７ｒｉ 。 ｎ ａ
ｌｖｌ ｙ ｐ ｏ ｅｍｅａｔ ｉ ａ ｄＴ Ｒ ９ ｍ１４ ３ ２ ｅ ｏｙ ｅ （ ｖｌｅｒｓ ｅｔ ｅｙｗ ｓ００ １ ０３ ５、． １ ａ ＞ ｅｅ，ｌｍ ｈ ｎ ｄ ｔｓ ｓｓ ｎ Ｎ Ｃ ２ ４ ６ １ｇ ｎｔｐ Ｘ ａ ｅｐ ｃｉ ｌ ａ ．８ 、 ．３ ０３ ，ｌ Ｐ ａ ｕ ｖ ３ ｌ
ｉ ｅ ｐ ｅ Ｍ ｅｈｏ ｅ ｐ ｔ ｎｓｏ ２ ａｅ ｔ ｒａ ｔｃ ｎ ｅ ｒ ｅｅ ｔｄ ａ ｈ ｔｄ ｒｕ ， ２ ｅ ｈｈ ａ ｅ ｒ ｔ ｐ ｏ ｌ． ｙ ｔ ｄｓＴｈ ａｉ ｔ ｆ３ ５ｃ ｓ ｓｗｉ ｂ ｅ ｓ ａ ｃ ｒｗｅｅ ｓｌｃｅ ｓｔｅ ｓｕ ｙｇ ｏ ｐ ３ ５ ｈ ａ ｙ ｃ ｓ ｓｗｅ ｅ ｅ ｈ
型。 随着科 技 的发 展 ， 目前对 于基 因的研 究越 来越 广泛 ， 本文 笔 者 主 要 通 过 聚 合 酶 链 反 应 一连 接 酶 检 测 反 应 法 检 测 Ｔ ＲＣ ｓ ２ ４ ６ １ 因 的多 态性 ，分 析 其 与乳 腺 癌 的 相关 Ｎ ９ｒ１４ ３ ２ 基 性 ，并 采 用 非 条 件 逻 辑 回归 表 示 ９ ％ｃ 和 危 险 度 比值 比 ５ ，