基因工程复习重点

第六章
1、名词解释： 重组率 转化率 感受态 原生质体 转化 转导（Transduction）
感受态细胞（Competent Cell）
2、简述基因工程的操作过程。 3、提高重组率的方法有那些？ 4、原生质体的转化主要包括那些过程？
5、影响转化率的因素有那些？
6、转化细胞的扩增操作的目的是什么？
7、转化子的筛选和鉴定方法有那些？
2、简述重组DNA操作一般步骤。
3、了解基因工程发展史上的重大事件。 4、了解基因工程研究内容。 5、简述基因工程的主要操作内容。 6、请举两个基因工程应用的具体例子并加以说明。
第二章 第三章 第四章
1、Fra Baidu bibliotek词解释：
载体（Vector）、质粒 （Plasmid）、穿梭载体（shuttle
vector）、质粒的不相容性、多克隆位点（multiple cloning sites，
2、载体的功能及其应具备的条件。
3、质粒的基本特征是什么？质粒的不相容性的分子机制是什么？
4、在构建质粒载体时，对天然质粒进行修饰改造？
5、正选择标记lacZ′ 的显色原理（ a-互补的原理）是什么，有何应 用？ 6、 λ 噬菌体的包装限制是什么？ 7、核酸限制性内切酶类型及主要特性是什么？ 8、限制性内切酶如何命名？命名原则是什么? 9、限制性内切酶基本特征是什么？ 10、简述影响限制性核酸内切酶酶切的反应条件的因素。
考 试 题 型
一、填空（共10题 10分）
二、单项选择题（共20题 20分） 三、英文名词解释（共8题 32分）
四、简答题（共6题 30分）
五、综合题（共1题 8分）
第一章
1、名词解释：
Gene Engineering
Gene Therapy
HGP（Human Genome Project）
基因诊断
8、简述包涵体（Inclusion Bodies）及其性质，包涵体形成机制。 9、简述以包涵体形式表达目的蛋白的优缺点。
10、如何对包涵体形式表达目的蛋白进行后处理？
11、简述以分泌形式表达目的蛋白的优缺点。 12、简述蛋白质的分泌机制。 13、如何构建分泌型目的蛋白表达系统？ 14、简述以融合形式表达目的蛋白的优缺点。 15、融合蛋白表达质粒的构建原则是什么？ 16、融合型异源蛋白如何回收？ 17、简述以寡聚形式表达目的蛋白的优缺点。 18、如何构建寡聚型目的蛋白表达系统？
11、引起星星活性的因素是什么？如何抑制？
12、 DNA连接酶的基本功能是什么？
13、大肠杆菌DNA聚合酶I的基本功能是什么？ 14、大肠杆菌DNA聚合酶I 大片段的基本功能是什么？ 15、S1核酸酶的基本功能是什么？ 16、碱性磷酸酶的的基本功能是什么？根据来源不同可分为几 种？它们之间有何区别？ 17、质粒提取原理、试剂、过程。
的元件有那些？
2、简述一个好的表达系统的标准是什么？
3、简述大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点。
3、简述作为基因工程宿主必须具备的主要条件
4、简述外源基因在大肠杆菌中进行高效表达应考虑的因素有那些？ 5、如何克隆启动子和终止子？ 6、核糖体结合位点对外源基因表达有何影响？ 7、密码子对外源基因表达有何影响？
2、简述琼脂糖凝胶电泳的原理（分离原理和检测原理）。
3、常用的缓冲液有那些？它们有何区别？
4、琼脂糖凝胶电泳参数有那些？影响DNA迁移率的因素有那些? 5、核酸分子杂交的 基本原理是什么？主要包括那些类型？有何 区别？ Northern杂交、Southern杂交和Western的异同？ 6、探针标记的方法有那些？其过程如何？切口平移法标记探针 的原理？随机引物法标记探针的原理？ 7、 PCR技术的原理和过程是什么？ 8、 PCR技术的基本成分有那些？各有何要求？ 9、引物设计要遵守的原则有那些？ 10、荧光定量PCR的优点是什么？
19、简述以整合形式表达目的蛋白的优缺点。 20、如何构建蛋白酶抗性或缺陷型表达系统的构建？
21、简述基因工程菌遗传不稳定性的表现与机制。
22、改善基因工程菌不稳定性的策略有那些？
23、简述利用重组大肠杆菌生产人胰岛素。
第九章
1、简述酵母菌表达外源基因的优缺点。 2、 外源基因到入酵母菌的方法有那些？ 3、转化质粒在酵母细胞中的命运如何？ 4、简述利用重组酵母菌生产乙肝疫苗。
第五章
1、名词解释：
凝胶电泳、探针（probe）、 探针标记、杂交、Northern杂交
（Northern Hybridization） 、Southern杂交（Southern Hybridization） PCR、荧光定量PCR、生物芯片、基因芯片 (Gene chip) 、蛋白芯片、基因库（gene pool）、 基因文库 （Gene library or Gene bank）、基因组文库、cDNA文库 （cDNA library） 、酵母双杂交系统（Tow-Hybrid System）、
8、如何区别：转化子与非转化子、重组子与非重组子、目的重组子
与非目的重组子。
9、什么叫抗药性筛选法、HAT选择法？
第七章
名词解释：T-Vector T-DNA 1、简述基因克隆的方法有那些？ 2、简述鸟枪法克隆目的基因的基本战略。 3、简述鸟枪法克隆目的基因的局限性。 4、简述cDNA法克隆目的基因的基本战略。 5、简述cDNA法克隆目的基因方法之一差异分离程序。 6、简述cDNA法克隆目的基因的局限性。 7、简述PCR克隆目的基因的基本程序。
11、评价基因文库的质量标准有那些？ 12、简述基因组文库的构建过程。 13、简述cDNA文库的构建过程。
14、简述酵母双杂交系统的基本原理及其应用。
15、简述Sanger双脱氧链终止测序法的基本原理及其过程。
16、简述Maxam-Gilbert化学修饰测序法的基本原理及其过程。
17、作为受体细胞应具备的条件有那些？ 18、实验室常用的基因工程受体细胞有那些？ 19、简述大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点。 20、简述酵母菌表达外源基因的优缺点。
MCS）、a-互补、 粘性末端、 cos位点、考斯质粒（Cosmid） 、
穿梭载体（Shuttle vector） 、pBR322、pSC101、噬菌粒 （phagemid or phasmid）、人造染色体载体、细菌人造染色体 （BAC）、酵母人造染色体（YAC）、工具酶、限制修饰系统 （R-M System）、同位酶、同尾 酶、同裂酶、星星活性(Star activity)、 Klenow酶、T-载体
8、如何设计探针序列？
9、简述DNA化学合成的用途。 10、简述基因文库的构建程序。
11、如何从基因文库中筛选目的基因？
12、在基因组文库的构建过程中，如何避免外源DNA片段之间
的连接？
13、基因组文库重组克隆如何排序？
第八章
名词解释：包涵体（Inclusion Bodies）
1、什么叫表达载体（Expression vector）？简述作为表达载体应具有