第二节病原微生物实验室生物安全要求

生物安全二级(BSL-2)
适合于对人和环境有中度潜在危险的病源， 与BSL—1的区别在于： (1)有门禁装臵，进行实验时，限制进入实验室；
(2)实验人员均接受过病原处理方面的特殊培训;
(3)配备高压灭菌锅，二级生物安全柜； (4)门外必须贴生物危险标识.
生物安全三级(BSL-3)
在该级别中开展有关内源性和外源性病源 的工作，若因暴露而吸入该病源。会引发严重 的、可能致死的疾病。 （1）实验室经过特殊设计和施工； （2）实验人员应在处理致病性的和可能使人致死 的病源方面受过专业训练，并由对该病源工作 有经验的、有资格的科学工作者监督； （3）所有与传染源操作有关的步骤，都在生物安 全柜中进行； （4）配备双扉高压灭菌锅并要求带有高效过滤 装臵；
WHO安全手册
（个体危险高， 群体危险低） 病原微生物通 常能引起人或 动物的严重疾 病，但一般不 会发生感染个 体向其他个体 的传播，并且 对感染有有效 的预防和治疗 措施。
国内外病原微生物危害程度分类比较
管理条例
一 能够引起人类 或动物严重疾 病的微生物， 以及我国尚未 发现或者已经 宣布消灭的微 生物。 Ⅳ 级
第二节 病原微生物实验室生物安全
重要意义
• • • • • • • 建立病原微生物研究安全平台的需要 生物防护（国际）的需要 传染病预防与控制的需要 动物防疫的需要 出入境检验检疫的需要 医院感染控制的需要 GOARN检测网络离不开生物安全实验室
病原微生物实验室标准和指南
《微生物和生物医学实验室生物安全通用准则》WS 2332002 《生物安全实验室建筑技术规范》GB50346-2004 《人间传染的病原微生物名录〉卫生部 《可感染人类的高致病性病原微生物（毒）种或样本运输管 理规定》卫生部第45号令 《实验室生物安全通用要求》GB19489-2008
《人间传染的病原微生物名录》介绍
• 病毒160类 • 细菌、放线菌、衣原体、支原体、立克 次体、螺旋体 155类 • 真菌59类 • 朊病毒6种
生物安全实验室主要设备
• 紫外灯 • 高压灭菌器 • 生物安全柜
生物安全柜
• 概念
超净工作台 生物安全柜
• 生物安全柜的分级
Ⅰ级生物安全柜 Ⅱ级生物安全柜 Ⅲ级生物安全柜
《病原微生物实验 室生物安全管理条 例》 《实验室生物安 全通用要求》 (GB19489-2004) WHO《生物安全手 册》 (第三版，2004)
四 在通常情况下 类 不会引起人类 或者动物疾病 的微生物。
Ⅰ （低个体危 Ⅰ 级 害，低群体 级 危害）不会 导致健康工 作者和动物 致病的细菌、 真菌、病毒 和寄生虫等 生物因子。
Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级 Ⅲ级 Ⅰ级、Ⅱ级 Ⅱ级、Ⅲ级 Ⅱ级A2型 、Ⅱ级B1型 Ⅰ级、Ⅱ级B2、Ⅲ级
生物安全柜
• 安装 • 使用 • 维护
• 定期监测并及时更护过滤器
生物安全实验室分级
生物安全一级(BSL-1) 生物安全二级(BSL-2) 生物安全三级(BSL-3) 生物安全四级(BSL-4)
国内外病原微生物危害程度分类比较
管理条例
二 类 能够引起人类 或者动物严重 疾病，比较容 易直接或者间 接在人与人、 动物与人、动 物与动物间传 播的微生物。 Ⅲ 级
通用要求
（高个体危害， Ⅲ 低群体危害） 级 能引起人类或 动物严重疾病， 或造成严重经 济损失，但通 常不能因偶然 接触而在个体 间传播，或能 使用抗生素、 抗寄生虫药治 疗的病原微生 物。
通用要求
(高个体危害， Ⅳ 高群体危害) 级 能引起人类或 动物非常严重 的疾病，一般 不能治愈，容 易直接或间接 或因偶然接触 在人与人，人 与动物，动物 与动物间传播 的病原微生物。
WHO安全手册
（个体和群体 的危险均高） 病原微生物通 常能引起人或 动物的严重疾 病，并且很容 易发生个体之 间的直接或间 接传播，对感 染一般没有有 效的预防和治 疗措施。
所有感染性材料 实验室内清除污染 高压灭菌或焚烧
组织体系
国家病原微生物实验室生物安全专家委员会 地区病原微生物实验室生物安全专家委员会 单位（上级主管部门）病原微生物实验室生物安 全专家委员会 实验室感染控制管理机构 实验室负责人
人员管理
• 人员培训 • 健康监测与就医程序
启示
• 事故是最大的浪费。 • 事故是可以预防的。 • 学习、分析各类事故发生的原因是有必 要的。
与微生物危险度等级相对应的 生物安全水平、操作和设备
不同生物安全水平对设施的要求
病原微生物实验室个人防护要求
• BSL-1 工作服 手套
• BSL-2
• BSL-3 • BSL-4
防护服 手套 帽子 口罩 护目镜
两层防护服 两层手套 专业口罩 正压工作服 面部防护器具
废弃物的处理
• 处理原则
通用要求
WHO安全手册
（ 个体危险中 等，群体危险 低）病原微生 物能够对人或 动物致病，但 对实验室工作 人员、社区、 牲畜或环境不 易导致严重危 害。实验室暴 露也许会引起 严重感染，但 对感染有有效 的预防和治疗 措施，并且疾 病传播的危险 有限。
(中等个体危 Ⅱ 害，有限群体 级 危害 ) 能引起人 或动物发病， 但一般情况下 对健康工作者、 群体、家畜或 环境不会引起 严重危害的病 原微生物。实 验室感染不导 致严重疾病， 具备有效治疗 和预防措施， 并且传播风ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 有限。
二级生物安全实验室
P2实验室，又称BSL-2，是生物实验室安 全等级的一个分类。在现在各类实验室当 中，P2实验室是使用最为广泛的生物安全 等级实验室。
BSL-2
实验室示意图
BSL－1 实验室设施和施设备（一）
• 无需特殊选址，普通建筑物即可，但应有防止节肢动物 和啮齿动物进入的设计。 • 每个实验室应设洗手池，宜设置在靠近出口处。 • 在实验室门口处应设挂衣装置，个人便装与实验室工作 服分开放置。 • 实验室的墙壁、天花板和地面应平整、易清洁、不渗水、
Ⅱ级A2型 Ⅱ级B2型 Ⅲ级
正面气流速 度（m/s） 0.38
0.51 0.51 NA
是否需要排 风管道
室内循环
排出室外量
100
70 0 0
0
30 100 100
否
否 需要 需要
不同保护类型及生物安全柜的选择
保护类型 生物安全柜的选择
个体防护，针对危害程度二、三、四类的病生物 个体防护，针对一类病原微生物，手套箱型实验 室 个体防护，针对一类病原微生物，防护服型实验 室 实验对象保护 少量挥发性放射性核素/有毒化学品的防护 挥发性放射性核素/有毒化学品的防护
Ⅰ级生物安全柜
• • • • • 可开启前窗在负压下操作 表面风速在75-100 fpm 排出的气体经HEPA 过滤 保护操作人员和环境 适用于要求生物安全等级1、2、3的 工作 • 适用于样品不需保护的实验工作
Ⅱ级生物安全柜
• 可开启前窗 • 从前开口向内的气流用于保护人员
• 经HEPA过滤后向下送的层流，以保护样品
耐化学品和消毒剂的腐蚀。地面应防滑，不得铺设地毯。
BSL－1 实验室设施和施设备（二）
• 实验台面应防水，耐腐蚀、耐热。 • 实验室中的厨柜和实验台应牢固。厨柜、实验台彼此之
间应保持一定距离，以便于清洁。
• 实验室如有可开启的窗户，应设置纱窗。
• 实验室内应保证工作照明，避免不必要的反光和强光。
• 应有适当的消毒设备。
BSL－2 实验室设施和施设备（二）
• 在实验室所在的建筑内应配备高压蒸汽灭菌器，并按 期检查和验证，以保证符合要求。 • 应在实验室内配备生物安全柜。 • 应设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。 • 应通风，如使用窗户自然通风，应有防虫纱窗。 • 有可靠的电力供应和应急照明。必要时，重要设备如 培养箱、生物安全柜、冰箱等应设备用电源。 • 实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。

《病原微生物实验室生物安全管理条例》 4类 第四类：危险程度最低 第三类： 第二类： 高致病性病原微生物 第一类：危险程度最高 《实验室生物安全通用要求》和WHO《生物安全手册》 4级 Ⅰ级：危险程度最低 Ⅱ级： Ⅲ级： Ⅳ级：危险程度最高

国内外病原微生物危害程度分类比较
病原微生物的危害等级划分和标准
Ⅱ级生物安全柜分类
Ⅲ级生物安全柜
• • • • • 箱体完全封闭，将微生物与人完全隔离； 通过手套箱操作。 保护工作人员、产品和环境。 一般无定型产品，需特殊定货。 可将若干III级生物安全柜连在一起使用 全部生物流程的操作均在柜内完成，以确保安全。
各级生物安全柜之间的差别
气流循环量(%)
生物安全柜 级别 Ⅰ级
（ 无或极低 的个体和群 体危险） 不太可能引 起人或动物 致病的微生 物。
国内外病原微生物危害程度分类比较
管理条例
三 类 能够引起人类或 Ⅱ 者动物疾病，但 级 一般情况下对人、 动物或者环境不 构成严重危害， 传播风险有限， 实验室感染后很 少引起严重疾病， 并且具备有效治 疗和预防措施的 微生物。
• 排出的气体采用HEPA过滤器过滤则用于保护环 境 • 表面风速在75-100 fpm 适用于要求生物安全等级为(Ⅰ-Ⅲ）的工作
Ⅱ级生物安全柜的分类
Class II Type A
Type B
B1 B2
A1 A2
• • • •
II级A1型生物安全柜 70%柜内循环，30%空气排出，工作窗 口流速75fpm II级A2型生物安全柜 70%柜内循环，30%空气排至室外，工 作窗口流速100fpm II级B1型生物安全柜 30%柜内循环，70%空气排出,工作窗口 流速100fpm II级B2型生物安全柜 100%空气排出,工作窗口流速100fpm
病原微生物危害评估
• 确定生物安全防护水平 • 依据危害评估制定微生物操作、仪器设备 操作程序与管理规程 • 评价微生物实验室安全状况的依据
病原微生物危害程度分类
• 病原微生物危害程度分类的主要依据
微生物的致病性 微生物的传播方式和宿主范围 当地所具备的有效预防措施 当地所具备的有效治疗措施
病原微生物危害程度分类
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