【CN109929890A】一种麦考酚酸的发酵工艺【专利】

(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910378324.1
(22)申请日 2019.05.08
(71)申请人 广东蓝宝制药有限公司
地址 511515 广东省清远市人民一路
(72)发明人 熊志　刘任民　黄秀芳　
(74)专利代理机构 广州胜沃园专利代理有限公
司 44416
代理人 张帅
(51)Int.Cl.
C12P 17/04(2006.01)
C12R 1/80(2006.01)
(54)发明名称
一种麦考酚酸的发酵工艺
(57)摘要
本发明属于微生物发酵技术领域，具体涉及
一种麦考酚酸的发酵工艺。

本发明提供的麦考酚
酸发酵工艺为：将短密青霉菌制成甘油孢子，然
后进行种子培养和发酵培养，在发酵培养时及时
对发酵液中的葡萄糖和甘氨酸进行补料处理，即
得。

本发明提供的麦考酚酸发酵工艺在发酵培养
基中加入葵花籽饼粉，不仅可以减少消沫剂的用
量，还可以促进菌丝生长，促进代谢产物的生成。

同时在发酵过程中采用程序补加法补入甘氨酸
溶液，可以使发酵液中甘氨酸浓度维持在合适的
范围内，可以持续促进代谢产物生成，避免初始
培养基中浓度过高对生产菌的影响，可以有效提
高短密青霉菌的发酵水平，提高麦考酚酸的产
量。

权利要求书2页 说明书6页CN 109929890 A 2019.06.25
C N 109929890
A
权　利　要　求　书1/2页CN 109929890 A
1.一种麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，包括以下步骤：
S1将接种短密青霉菌的菌株斜面于28℃培养9～10天，加入30％甘油10ml，洗下孢子，摇匀，取7ml置甘油油管中，得甘油孢子；
S2吸取步骤S1制得的甘油孢子放置种子培养基中，在30℃的条件下振荡培养48～72h，得种子菌；
S3将步骤S2得到的种子菌按10％的接种量接入发酵培养基中，在30℃的条件下培养38h，然后降到25℃继续培养160～240h，并及时对发酵液中的葡萄糖和甘氨酸进行补料处理，即得。

2.如权利要求1所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述步骤S2中的种子培养基由以下成分组成：
葡萄糖85～95g/L、酵母粉10～30g/L、蛋白胨15～20g/L、K2HPO4·3H2O 1～4g/L、MgSO4·7H2O 0.2～0.6g/L、GPE消沫剂1.4～2.0g/L，调节pH至4.0～5.0。

3.如权利要求2所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述步骤S2中的种子培养基由以下成分组成：
葡萄糖90g/L、酵母粉20g/L、蛋白胨17g/L、K2HPO4·3H2O 2g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、GPE消沫剂1.8g/L，调节pH至4.0～5.0。

4.如权利要求1所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述步骤S3中的发酵培养基由以下成分组成：
葡萄糖200～300g/L、甘氨酸4～6g/L、蛋氨酸1～3g/L、蛋白胨4～6g/L、啤酒酵母4～6g/L、葵花籽饼粉10～20g/L、K2HPO4·3H2O 1～3g/L、MgSO4·7H2O 0.2～0.6g/L、ZnSO4·7H2O 2～4g/L、CuSO4·7H2O 0.2～0.6g/L、GPE消沫剂0.4～0.6g/L，调节pH至4.0～5.0。

5.如权利要求4所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述步骤S3中的发酵培养基由以下成分组成：
葡萄糖250g/L、甘氨酸5g/L、蛋氨酸1g/L、蛋白胨5g/L、啤酒酵母5g/L、葵花籽饼粉15g/ L、K2HPO4·3H2O 2g/L、MgSO4·7H2O 0.5g/L、ZnSO4·7H2O 3g/L、CuSO4·7H2O 0.5g/L、GPE消沫剂0.5g/L，调节pH至4.0～5.0。

6.如权利要求1所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述步骤S3中葡萄糖的补料处理为：在培养过程，根据需要取样检测发酵液中的葡萄糖，并补入体积浓度为80％的无菌葡萄糖溶液使发酵液中葡萄糖浓度维持在28～32g/L。

7.如权利要求1所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述步骤S3中甘氨酸的补料处理为：培养至70～73h开始，补入200g/L-230g/L无菌甘氨酸溶液，具体补入程序为：培养至70～73h时，补入比例为1.6g/L；培养至90h时，补入比例为3g/L；培养至102～106h时，补入比例为5g/L；培养至122～126h时，补入比例为5g/L；培养至140～144h时，补入比例为3g/ L；培养至156h时，补入比例为1.6g/L。

8.如权利要求7所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述补料处理时：培养至150h时，检查最近一次生化参数测定中的pH结果，如果pH高于6.0或液面过高，则156h继续补入甘氨酸溶液，否则不再补甘氨酸溶液。

9.如权利要求7所述的麦考酚酸的发酵工艺，其特征在于，所述补料处理时：放罐前24小时不补入甘氨酸溶液。

2。