第十四章超敏反应性疾病免疫学检验

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FEV1:重复性好,结果稳定; 测定P指EF标:峰流速仪价格低廉、方便、不受场地限制,
与FEV1有较好的相关性,适合流行病学调查; sGaw:敏感性好,但重复性稍差。
二、支气管激发试验(bronchial provocative test,BPT)
结果判断:
定性判断 变应原的确定常以定性试验判断结果。 ①阳性:气道反应性增高
反应程度 + ++ +++ ++++
迟发型皮试结果判定标准 结果判定
无反应或小于阴性对照 仅有红肿 红肿伴硬结 红肿、硬结、小疱 大疱或/和溃疡
一、皮肤试验---点刺试验
将试验抗原与对照液分别滴于试验部位的 皮肤上
用针尖透过液滴轻挑一下 以刺破皮肤而不出血为度
比皮内试验敏感性稍低,但假阳性较少; 皮试液浓度要比皮内试验高10~100倍。
注意事项及禁忌症:
注意事项 受试者在检查前: 48小时:停!抗组胺药、色甘酸钠及皮质激素类药; 12小时:停!支气管扩张剂; 15分钟:实验室休息,病史、体检排除BPT的禁忌证。
二、支气管激发试验(bronchial provocative test,BPT) 应用与评价:
有一定的危险性,但较皮肤试验的特异性高 ①
遍采用IBT法。
洗涤
ELISA间接法检测特异性IgE 洗涤
EE E
(+)
结果
洗涤
EE
E
多种特异性变应原
-- -
IBT检测特异性IgE 特异性变应原加入待检血清
转印至NC膜
NC膜 -
分离特异性变应原条带
+ ++ + +
特异性抗原 条带显色
+
底物
NC膜—变应原—特异性IgE—抗-IgE·HRP
待检血清 特异性IgE
1min后拭(吸)去试验抗原液
分级 -
速发型皮肤试验的结果判定标准
皮内试验
点刺试验
无风团或小于阴性对照
无风团反应或小于阴性对照
+
风团3~5mm、红晕<20mm
++
风团6~9mm伴红晕
+++
风团10~15mm伴红晕
++++ 风团>15mm伴红晕和伪足
无风团,阴性对照<红晕≤20mm 无风团,红晕>20mm 风团伴红晕 风团伴红晕和伪足
非特异性激发:是用组胺等刺激物做雾化吸入, 以观察患者对Ⅰ型超敏反应的敏感性,进而分 析病因或判定疗效。
特异性激发:是用抗原如尘螨等做试验,对明确 超敏原有一定价值。
用于Ⅰ型和Ⅳ型超敏反应性疾病的检查。
一、皮肤试验---皮内试验 0.01~0.03ml/针
方法
4mm/针
相同超敏原不同 稀释度
抗-IgE·HRP
二、特异性IgE的检测
目前公认的检测I型超敏反应方法之一; 具有特异性强、敏感性高; 影响因素少、对患者绝对安全等优点; 过敏性哮喘诊断; 寻找变应原。 缺点:费用昂贵、花费时间长、不同试剂盒的参比血清不同不易相互比较。
第三节 免疫复合物检测
一、抗原非特异性CIC检测技术
一、抗原非特异性CIC检测技术 细胞法-Raji细胞法:
1.基本原理 Raji细胞是从Burkitt淋巴瘤分离建株似B细胞系,在体外繁殖传代,细胞表面有高密 度的 C1q、C3b、C3d等补体受体,而且不易脱落。
一、抗原非特异性CIC检测技术 细胞法-Raji细胞法:
2.技术要点 将一定量待检血清、HAHG和Raji细胞混合,使补体、CIC或HAHG与Raji细胞形成复合 物,加入抗人IgG·FIC,形成Raji细胞—补体—CIC(或 HAHG)—抗人IgG· FIC复合物,检测 荧光强度。
二、支气管激发试验(bronchial provocative test,BPT)
射流雾化器 雾化抗原颗粒≤5微米
测定肺功能指标: 用力肺活量(FVC) 1秒用力呼气容积(FEV1)最大呼气流速
(PEF) 比气道传导率(sGaw)
二、支气管激发试验(bronchial provocative test,BPT)
迟发型 48~72h内观察
速发型 15~30min内观察
结果
分级 -
速发型皮肤试验的结果判定标准
皮内试验
点刺试验
无风团或小于阴性对照
无风团反应或小于阴性对照
+
风团3~5mm、红晕<20mm
++
风团6~9mm伴红晕
+++
风团10~15mm伴红晕
++++ 风团>15mm伴红晕和伪足
无风团,阴性对照<红晕≤20mm 无风团,红晕>20mm 风团伴红晕 风团伴红晕和伪足
第十四章超敏反应性疾病免疫学检验
超敏反应:已经致敏的机体再次接受相同抗原刺激后,所引起的以生理功能紊乱或组织损伤为 主的异常的适应性免疫应答。
第一节 激发试验
激发试验(provocation test) 是模拟自然发病条件,用少量超敏原引起一次较轻的超敏 反应发作,达到确定超敏原的一种体内试验。
测基础肺功能
口吸入
阳性伴明显气促、喘息 吸入
激发物稀释液: 低浓度/小剂量→双倍浓度/剂量递增
1~1分半钟
测定肺功能
直至
支气管 舒张剂
激发物达到最高浓度 阴性反应
阳性标准/ 明显不适/ 临床症状
二、支气管激发试验(bronchial provocative test,BPT) 结果判断:
支气管反应有三种类型:速发、迟发和双重反应。 每次观察不能小于24小时。
无反应或小于阴性对照 仅有红肿 红肿伴硬结 红肿、硬结、小疱 大疱或/和溃疡
结果分析及注意事项
假阴性出现的常见原因: ①皮试液的浓度过低或失效; ②老年患者或过敏性休克或哮喘大发作之后; ③皮试前用过抗组胺药或免疫抑制剂; ④操作不当将皮试液注入皮下或注入量过少等。
结果分析及注意事项
假阳性出现的常见原因: ①皮试液含有非特异性刺激物; ②患者患有皮肤划痕征; ③操作手法较重; ④注入量较大或浓度过高; ⑤注入少量空气等。
与受试者的病史、症状和体征相关性较强 ②
确定支气管哮喘的过敏原,尤其皮试结果不肯定时 ③

排除皮试时的假阳性反应和假阴性反应

检测新制剂的抗原性、平喘药疗效及观察脱敏效果
缺点是每次仅能用一种抗原,要专门设备和技术,并需对病人进行训

练并与之配合
三、食物激发试验
基础 饮食
观察症状
症状好转 或减轻
1.基本原理 ELISA法测定的CIC,是能够结合C1q的 IgG类抗体与其特异性抗原形成的CIC。
2.技术要点 将聚苯乙烯包被上C1q,加入受检血清, CIC中IgG的Fc段与C1q结合,再加抗人IgG·HRP, 形成C1q-CIC-抗人IgG·HRP复合物,加底物显色。
一、抗原非特异性CIC检测技术 ELISA法: ① 灵敏度高于PEG比浊法,检测到0.1mg/L,重复性好等优点; ② C1q制品不易精制, 纯品不稳定,只能检出与补体结合的CIC。
一、抗原非特异性CIC检测技术 细胞法-Raji细胞法:
3.影响因素 ①培养条件能改变Raji细胞其表面受体的数量及亲和性,影响检测敏感性; ②待检血清中如有抗淋巴细胞的抗体,能和Raji细胞反应; ③SLE血清中的抗DNA也能和Raji细胞反应,使测定结果偏高。
一、抗原非特异性CIC检测技术 细胞法-Raji细胞法:
CIC:分子量600kDa以上,沉降系数>19S; 热聚合人IgG(heat agglutination human IgG, HAHG):作为参考标准品,绘制标准曲线进行 CIC定量或测定A值代表CIC相当于HAHG的含量。
一、抗原非特异性CIC检测技术
CIC的检测方法:按抗体分子在结合抗原后发生的 物理学和生物学特性的改变而设计。
皮内试验较点刺试验有更好的敏感性
一、皮肤试验---斑贴试验
第一次读:48小时打开斑试器,间隔30min待斑试器 压痕消失后判定结果。
第二次读:第3天或第4天。 如怀疑光过敏,在斑贴试验的基础上给予紫外线照
射,操作过程相似。
反应程度 + ++ +++ ++++
迟发型皮试结果判定标准 结果判定
一、抗原非特异性CIC检测技术
PEG比浊法: 3.注意事项: ①2%PEG沉淀大分子CIC; ②4%PEG沉淀较小分子CIC; ③超过5%PEG选择性沉淀CIC的特性消失; ④温度影响极大,需进行温差校正; ⑤低密度脂蛋白使浊度增加,空腹采血; ⑥高γ球蛋白血症和标本反复冻融浊度增加。
一、抗原非特异性CIC检测技术 ELISA法:
1周后 症状未减轻
排除 食物所致过敏
1周后
吃可疑的 过敏食物
导致 症状加重
过敏原,重复3次
疑似
确定 某食物为过敏原
四、其他方法
口腔激发试验
将超敏原直接与口腔黏膜接触,当口腔黏膜出现肿胀和充血时, 可判断为阳性反应。
结膜激发试验
将超敏原滴于一眼,阳性反应为结膜充血、水肿、分泌增加、 搔痒,甚至眼睑红肿。注意假阳性对结果的干扰。
注意事项及禁忌症:
禁忌证 受试者在心肺功能不全、高血压、甲亢、妊娠、严重咽喉炎、呼吸道感染或肺炎等情况下一般
不适宜作激发试验; 有过敏性休克,严重的血管性水肿及严重的喉头水肿病史者; 一周之内预防接种、职业性过敏因素的接触等。
二、支气管激发试验(bronchial provocative test,BPT)
4.方法评价 ①敏感性高(6mg/L HAHG),实用性强; ②缺点需培养Raji细胞和同位素标记抗人IgG,操作繁琐; ③Raii细胞培养较困难,不易长期稳定保持其特性,培养条件受限。
一、抗原非特异性CIC检测技术 抗球蛋白技术-mRF凝胶扩散试验:
1.方法评价 IgG或IgM类自身抗体与IC中IgG的Fc段结合而不与游离IgG结合 的特性,mRF与CIC亲和力较强。
鼻黏膜激发试验
将抗原吸入/滴入受试者鼻腔,出现鼻黏膜水肿、苍白、鼻痒、 流涕、喷嚏为阳性。
第二节 IgE的检测
一、血清总IgE的检测 √ ELISA双抗体夹心法:操作简便,敏感性很高,是测定血清IgE最常用的方法。
√ CLIA:敏感度更高,特异性高,定量。
来自百度文库
一、血清总IgE的检测
临床意义:正常人群血清IgE水平受地域环境、种 族、遗传、年龄、性别、寄生虫感染、测定法及取 样等影响,结果有一定差异。
如何避免假性结果的出现: 询问病史 必备抢救药品和设施
阳性对照
阴性对照
皮试液浓度
适应证
皮肤试验的应用
预防药物或疫苗等过敏 防治Ⅰ型超敏反应性疾病 结核菌素试验 评估机体细胞免疫功能 预防皮肤接触过敏
结核菌素试验
是用结核菌素进行皮肤试验,通过观察局部是否出 现迟发型超敏反应,判断机体有无结核分枝杆菌感 染和对该菌的免疫力。
结核菌素试验
阳性:机体已感染过结核杆菌或BCG接种成功; 强阳性:可能有活动性结核病; 阴性:机体未感染过结核分枝杆菌,
但应考虑: ①感染初期; ②老年人; ③重度结核病患者,机体处于免疫反应低下状态; ④患有其他疾病。
二、支气管激发试验(bronchial provocative test,BPT) 手捏式雾化器
一、抗原非特异性CIC检测技术 抗球蛋白技术-mRF凝胶扩散试验:
1.方法评价 IgG或IgM类自身抗体与IC中IgG的Fc段结合而不与游离IgG结合 的特性,mRF与CIC亲和力较强。
一、抗原非特异性CIC检测技术 抗球蛋白技术-mRF凝胶扩散试验:
2.技术要点 将mRF和待检血清中的CIC在琼脂凝胶中扩散,mRF—CIC结合形 成沉淀现象,进行CIC定性或定量。
① PEG比浊法; ② ELISA法; ③ 细胞法——Raji细胞法; ④ 抗球蛋白技术—mRF凝胶扩散试验。
一、抗原非特异性CIC检测技术 PEG比浊法:
1.基本原理 聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)为不带电荷、直链大分子结构的多糖,有 强脱水作用,利用2%~4%浓度的PEG可选择性沉淀大分子CIC。 2.技术要点 生物化学检验。
某些过敏体质者高于正常1000~10000倍
0.1~0.9mg/L
特应症、支气管肺曲菌病、 药物性间质性肺炎、麻风、 寄生虫病及IgE型骨髓瘤等
参考值
血清IgE高
二、特异性IgE的检测
√ 酶联免疫吸附试验(ELISA):常用间接法。 √ 免疫印迹技术(IBT):操作简单,能一次性测定多种变应原的特异性IgE,故临床已普
FEV1、PEF较基础下降≥20%或sGaw下降≥35%, 有时伴有明显自觉症状或肺部闻及哮鸣音。
②阴性:气道反应性正常 FEV1、PEF或sGaw<上述标准,正常值为阴性。 无论激发试验阳性或阴性,均应排除气道反应性的影响因素。可疑者,间隔2~3周后复检或2个月后再 测。
二、支气管激发试验(bronchial provocative test,BPT)
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