高效液相色谱检测技术

高效液相色谱法特点
高压：液体作为流动相流经色谱柱时，受到 的阻 力较大，施加高压能使液体迅速通过，一般高达 150-350 ×105Pa。
高速：载液在色谱柱内的流速较之经典液相色谱 法高得多，一般可达1-10mL/min。
高效：高效液相色谱法的柱效能可达3万塔板/米 ，而气相色谱法的柱效能仅为2000塔板/米。
高效液相色谱法自20世纪60年代问世以来，由于使用了高压输液泵、 全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器，实现了对样品的高速、高效和高 灵敏度的分离测定。高效液相色谱由于吸取了经典液相色谱的研制经验， 并引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和分析精度。现 在用微处理机控制的高效液相色谱仪，其自动化程度很高，既能控制仪 器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液 收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以 及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了高
液相色谱仪最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检 测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）。此外，还 可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进 样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等。
液相色谱仪的工作过程：输液泵2将流动相以稳定的流速（或 压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器3将样品导入, 流动相将样品带入色谱柱4,在色谱柱中各组分因在固定相中的分 配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测
高灵敏度：采用高灵敏度的检测器，进一步提高 了分析的灵敏度，荧光检测器可达10-11 g 。
HPLC主要知名品牌
• 沃特斯（Waters • 安捷伦（Agilent） • 岛津（Shimazu） • 其它：戴安、菲尼根、热电等。
HPLC的特点
GC与LC的比较 检测器不同
测定对象拓展
高效液相色谱仪
效率、功能齐全的分析工具。
高效液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分 析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、 离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了 气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约 占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来分析。HPLC因其具有分离效能高、 分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定 生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析，世界各 国己将该法收载于药典。
梯度洗脱2
低压梯度： 只需一个高压泵，与等度洗脱输液系统相比 ，就是在泵前安装了一个比例阀，混合就在比例阀中完成
因。为比例阀是在泵之前，所以 是在常压（低压）下混合，在常 压下混合往往容易形成气泡，所 以低压梯度通常配置在线脱气装 置。来自于四种溶液瓶的四根输 液管分别与真空脱气装置的四条 流路相接，经脱气后的四种溶液 进入比例阀，混合后从一根输出 管进入泵体。多元梯度泵的流路
• 串联式二元高压泵系统 • 并联式二元高压泵系统 • 四流路串联式单高压泵系统
串联式二元高压泵HPLC结构示意图
分离部分
• 分离部分由高压输液泵、色谱柱及相关组 件组成。
• 由高压输液泵吸取流动相，使之进入色谱 柱，由进样器注入样品后，由色谱柱进行 分离。
• 在高压输液泵之前常用脱气机。 • 在色谱柱部分要装柱温箱保持色谱柱的温
器5，检测到的信号送至数据系统6记录、处理或保存。
一、高效液相色谱仪流程
进样器
高压泵 储液器
流动相输 送系统
色谱柱
检测器 数据处 理系统
进 样 系 统
分辅 离助 系系 统统
检 测 系 统
高压输液系统 进样器 色谱柱 检测器 数据处理系统 梯度洗脱装置 馏分收集器
HPLC的基本结构
分离部分
分析部分
控制部分
见HPLC结构外观
岛津LC-20A
机 型
Waters
Waters 机型
Thermo fisher液相色谱－质谱联用
大连依利特 北京普源精电
北京北分
上海伍丰
江苏天瑞LC310
FL2200 浙江福立
北京东西分析
莱伯泰科HPLC
HPLC结构的几种形式
HPLC的不同类型主要在于高压输液泵的区别。 通常有以下几种形式：
度恒定。
高压输液泵
目前HPLC配备高压输液泵大致有两种类型：
• 一种是两个高压输液泵，各自输送流动相后进入混合器。 俗称“二元高压泵”。
• 另一种是只有一个高压输液泵，在这个输液泵之前配备一 个电磁阀控制流路，通常这种形式的泵有四个流路。俗称 “四元低压泵”。但其实质上仍是单泵。
• 有一台安捷伦HPLC和天美HPLC ，均为四元低压的单泵。
HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其 以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色 谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加 精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。与气相色谱 不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组 成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作 中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留 值和选择性，从而使不同样品得到分离。
内容概要
HPLC概述 工作原理结构组成 常见故障与维护 HPLC应用
一、HPLC 简介
高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起 来的一项高效、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重 要手段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中 的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用 (吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞 留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层 析法。
一、HPLC 简介
HPLC即 High performance liquid chromatography, 或 High pressure liquid chromatography，译为：高效液相或高压液相。 高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的 一项高效、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手 段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各 组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸 附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留 时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析 法。