烟草花药培养

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三、实验方法和步骤：
6、结果观察 花药培养2-3周后，在载玻片上加 一滴醋酸洋红，在醋酸洋红中剖 开培养的花药，即可看到幼龄的 花粉胚。培养5周后，花粉胚形成 小植株。
花粉胚形成的小植株
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三、实验方法和步骤：
7、当小植株长到适当大小时，取根尖用醋酸洋红染色， 以证实它们的单倍染色体数。 8、当需要进行染色体加倍时，可将刚长出小植株不久 的花药浸入灭过菌的浓度为0.5%的秋水仙素溶液中2448小时，然后用无菌水洗净，将小植株接入无激素培养 基中培养。
对光照的要求在物种间差异更为明显，例如连续光照可显 著增加烟草花粉胚的产量，却强烈抑制曼陀罗的花粉胚胎 发生。禾谷类植物在花粉愈伤组织诱导期间则以暗培养或 散射光培养效果较好。
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四、花药培养的一般程序
7、单倍体植株的二倍化
秋水仙素处理诱导染色体加倍： 禾本科植物，一般都是在分蘖盛期用秋水仙素溶液浸泡分 蘖节； 把含有秋水仙素的羊毛脂涂于上部叶片的腋芽上，然后把 主茎的顶芽去掉，以刺激侧芽长成二倍体的可育枝条。 采用愈伤组织和试管苗染色体加倍。把幼小的花粉植株浸 于过滤灭菌的O.4％秋水仙素溶液中96h（烟草），然后转移 到培养基上使其进一步生长。
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四、花药培养的一般程序
3、消毒
花药适宜培养时，花蕾尚未开放，花药在花被或颖片的严 密包被之中，本身处于无菌状态，因此，通常只要以70% 酒精喷洒或擦拭花器或包被着麦穗的叶鞘表面，即可达到 灭菌要求。
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四、花药培养的一般程序
4、接种
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三、花药培养的意义
迅速获得纯合型材料，提高选择效率，缩短育种年限 获得育种中间材料 突变体选育 体细胞融合 获得染色体异附加系和代换系 遗传研究 遗传工程受体
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四、花药培养的一般程序
1、取材
花药在接种以前，应预先用醋酸洋红压片法进行镜检， 以确定花粉的发育时期，并找出花粉发育时期与花蕾或幼穗 的大小、颜色等外部特征之间的对应关系。 一般而言，花粉处于单核后期的花药对 培养反应较好，在烟草中，此时花蕾的 花冠大约与萼片等长
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四、花药培养的一般程序
2、预处理
适当的预处理可以显著提高花药的愈伤组织诱导率。常用 的预处理方法是低温冷藏，具体的处理温度和时间长度因 物种而异：烟草7～9℃，7～14 d；水稻7～1O℃，10～15 d；黑麦1～3℃，7～14 d；大麦3～7℃，7～14 d。但低温 预处理对小麦效果不稳定，有时还有负效果。
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五、影响雄核发育的因子
雄核发育指小孢子沿孢子体途径发育成花粉植株的过程。 ➢ 基因型 ➢ 生理状态：幼年植株的花药反应能力较好 ➢ 花粉发育时期：一般而言单核后期花药对培养反应较好 ➢ 药壁因子：花药壁对同一物种及不同物种离体花粉雄核
发 育有看护作用。 ➢ 培养基：基本培养基、碳源、植物激素、活性炭
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烟草花药培养实验
一、实验目的： 掌握花药培养和外植体取材的方法 二、实验材料： 烟草的蕾期植株
烟草的蕾期植株
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三、实验方法和步骤：
1、取材与预处理：摘取花 冠长度为21-23mm的花蕾 （花冠与萼片等长，此时 单核花粉行将完成第1次有 丝分裂），置于7-9℃低温 下预处理7天。
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三、实验方法和步骤：
4、接种：剥去萼片和花瓣，将花药取出。由不同花蕾 取出的花药各为一组分别放置。由每组中取出1个花药， 用醋酸洋红压片，以确定花粉发育时期。 如果在用于压片的花药中花粉正处于适当的发育时期， 即花粉第1次有丝分裂期，则将该花蕾的所有其余花药 进行培养。且接种前必须将花丝去掉。每瓶培养基接种 6个花药。 ５、培养：花药接种后，放在培养室内，25 ℃条件下 见光培养。
把雄蕊上的花药轻轻地从花丝上摘下，水平地放在培养基上进 行培养，在整个操作过程中不应使花药受到损伤，若受损伤， 则应淘汰，因为损伤常常会刺激花药壁形成二倍体愈伤组织。
由于花药对离体培养的反应存在“密度效应”，因此每个容器 中接种的花药数量不宜太少，以形成一个合理的群体密度。
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不同大小的烟草花蕾
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三、实验方法和步骤：
2、配制培养基 MS基本培养基，添加30克蔗糖，5克活性炭。 1号； 不加激素； 2号； 2，4-D 0.2mg/L + BA 0.1mg/L；
3、烟草花蕾表面消毒 将烟草花蕾在70%酒精中浸数秒，倒掉酒精， 再用0.1%升汞处理 8min后，无菌水冲洗4次。
四、作业：
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1、观察花粉胚小植株形成的过程，并统计花 粉胚小植株形成的频率。 2、证实花粉胚小植株染色体的倍数。
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一、花药培养的定义
花药培养: 将花粉发育至一定阶段的花药培养 在人工培养基上，诱导其花粉粒改变发育进程， 形成花粉胚或愈伤组织，进而分化成苗的过程。
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二、花药培养的历史
20世纪60年代中期Guha和Maheshwari(1964， 1966)首次报道由毛曼陀罗花药培养获得了大量花粉 起源的单倍体以来，这项技术已被成功地推广到至少 52个属的153个种，其中包括不少有重Fra Baidu bibliotek经济价值的 植物。
四、花药培养的一般程序
5、培养方式
➢ 在琼脂固化培养基表面培养; ➢ 在加人30％Ficoll的液体培养基表面飘浮培养 ➢ 利用固体一液体双层培养基培养，以便既能保
持较高的接种密度，培养基又不易失水
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四、花药培养的一般程序
6、培养条件
对于大多数小麦品种来说，在培养的最初6d给以30～32 ℃ 的较高温度，然后再转入28～30℃下培养。水稻花药培养 的适宜温度从一开始就是27℃。