花椒麻味物质测定标准

ICS 67.220.10 X04

备案号：25259-2009

DB

花椒麻味物质的检测方法

高效液相色谱法

Determination of numb-taste components in prickly ash －

High performance liquid chromatography

重庆市质量技术监督局 发布

前言

本标准中附录A、B为资料性附录。

本标准由重庆计量质量检测研究院提出。

本标准起草单位：西南大学食品科学学院、重庆计量质量检测研究院。本标准主要起草人：阚建全、屠大伟、刘雄

本标准由西南大学食品科学学院和重庆计量质量检测研究院负责解释。

花椒麻味物质的检测方法

高效液相色谱法

1 范围

本标准规定了花椒麻味物质的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于花椒麻味物质的检测。

本方法最低检出浓度为0.044 μg/mL花椒麻味物质的待测液。

2 规范性引用文件

下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。

GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法（ISO 3696：1987，MOD）

3 术语和定义

下列俗语和定义仅适用于本标准。

3.1

花椒麻味物质numb-taste components in prickly ash

花椒麻味物质是花椒中呈现麻味的所有物质的总称，主要是由一类不饱和脂肪族酰胺组成，是花椒呈现麻味的物质基础。

4 方法原理

试样经无水乙醚或甲醇提取，经甲醇定容，高效液相色谱分离，外标法定量。

5 试剂与标准品

除非有另外说明，所有试剂应为分析纯，水为GB/T 6682-2008规定的一级水。

5.1 甲醇：色谱纯。

5.2 花椒麻味物质对照品，见附录A。

5.3 花椒麻味物质对照品贮备液（100 μg/mL的甲醇溶液）：准确称取100 mg花椒麻味

物质对照品，在容量瓶中用甲醇定容至1000mL。-10 ℃以下，可保存2年。

5.4 花椒麻味物质对照品使用液：分别吸取花椒麻味物质对照品贮备液（5.3）1.0 mL、

2.0 mL、

3.0 mL、

4.0 mL、

5.0 mL，用甲醇溶解并定容至10mL，配制成分别相当于10 μg/mL、

20 μg/mL、30 μg/mL、40 μg/mL、50 μg/mL浓度的花椒麻味物质对照品使用溶液。

6 仪器与设备

实验室常规仪器设备和以下各项。

6.1 高效液相色谱仪：配有紫外可见光检测器。

6.2 分析天平：感量0.0001 g。

6.3 色谱柱：C18反相柱。

7 分析步骤

7.1样品处理

7.1.1 整粒、块粒状、粉末状干花椒

准确称取1 g(精确到0.01 g)粉碎后的样品，用滤纸包好，在索式脂肪提取器中用无水乙醚于45℃~55℃恒温水浴中回流提取12 h~18 h。待乙醚提取液自然挥干后，再用甲醇定容至500 mL，并用0.45μm 滤膜过滤，滤液待测。

7.1.2 花椒（整粒、块粒状、粉状）的液态产品及鲜花椒

将样品用组织捣碎机粉碎混匀后，准确称取3 g(精确到0.01 g)，置于具塞三角瓶中，用150mL的分析纯甲醇于40℃~50℃水浴中振荡浸提12 h~18 h后，再用砂芯过滤器（G1）过滤，滤渣用少量分析纯甲醇洗涤2次～3次。洗涤液与滤液合并后，再将其转移到分液漏斗中，振摇2 min，静置分层后，收集甲醇萃取液。甲醇不溶部分再用少量甲醇萃取2次～3 次，合并甲醇萃取液，定容至500 mL，并用0.45 μm 孔径滤膜过滤，滤液待测。

7.1.3 含花椒（整粒、块粒状、粉状）的固态产品

这类产品按其是否含有油脂，可分为不含油脂的固态产品和含油脂的固态产品两类。

不含油脂的固态产品如整粒或块粒状或粉状的复合调味料等的预处理按7.1.1的预处理方法制备样品花椒麻味物质的待测液；

含有油脂的固态产品如火锅底料等的预处理方法：首先加热使油脂熔融后，再按7.1.2的预处理方法制备待测液。

7.1.4 含花椒提取物的固态产品

准确称取1 g(精确到0.01 g) 粉碎后的样品，置于具塞三角瓶中，用150mL的分析纯甲醇于40℃~50℃水浴中振荡浸提30min后，再用砂芯过滤器（G1）过滤，滤渣用少量分析纯甲醇洗涤2次～3次。洗涤液与滤液合并后，再将其转移到分液漏斗中，振摇2 min，静置分层后，收集甲醇萃取液。甲醇不溶部分再用少量甲醇萃取2次～3 次，合并甲醇萃取液，定容至500 mL，并用0.45 μm孔径滤膜过滤，滤液待测。

7.1.5 含花椒提取物的液态产品

准确称取样品0.5g-1 g(精确到0.01 g)，置于具塞三角瓶中，用150mL的分析纯甲醇于40℃~50℃水浴中振荡浸提30min后，再将其转移到分液漏斗中，振摇2 min，静置分层后，收集甲醇萃取液。甲醇不溶部分再用少量甲醇萃取2次～3 次，合并甲醇萃取液，定容至500 mL，并用0.45 μm孔径滤膜过滤，滤液待测。

7.2测定

7.1.6 色谱参考条件

色谱柱：DIKMA Platisil(铂金) ODS （250 mm×4.6mm）或其他等效液相色谱柱。

流动相：水-甲醇（v/v）。梯度洗脱条件如表1。

进样量：20 μL。

流速：0.8 mL/min。

检测波长：254 nm。

表1 液相色谱梯度洗脱条件