绿僵菌的培养及其防治白蚁的效果

生长速度
１．３ １．５ １．４ １．５ １．４ １．４
１．４
ｃｍ·ｄ－ １
每平板产孢量
６．０ ４．９ １８．３ ６．０ １３．８ ３．７
５．２
１０９ 孢子
２．７ 绿僵菌对黑翅土白蚁的防治效果 从表 ７ 可以看出， 绿僵菌对黑翅土白蚁有强烈
的毒杀作用。在绿僵菌 ３ 种浓度处理中， 尤以每毫 升 １×１０８ 孢子杀灭白蚁效果最好， 喷绿僵菌后第 ５ 天白蚁开始死亡， 第 １５ 天时死亡率为 ７２％， 第 １８ 天时死亡率为１００％。
温度 ／℃
２２ ２５ ２８ ３４ ３９
生长速度 ／ｃｍ·ｄ－１
１．１ １．１ １．３ ０．６ ０．５
每平板产孢量 ／１０９ 孢子 ６．３ ６．４ ８．５ １．６
０
２．２ ｐＨ 对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响 由表 ２ 可以看出， 绿僵菌在 ｐＨ 值 ７．０ 的培养
基中生长最好， 产孢量最多； 在 ｐＨ 值 ５．０、６．０、８．０、 ９．０ 的培养基中菌丝生长情况基本相同， 但在 ｐＨ 值 ６．０、８．０ 培养基中的产孢 量 明 显 高 于 ｐＨ 值 ５．０、９．０ 培养基中的产孢量； 在 ｐＨ 值 ４．０、１０．０ 的培养基中 菌丝生长最差， 产孢量最少。由此可见， 绿僵菌菌丝 生长的 ｐＨ 值范围较广， 其培养最适 ｐＨ 值为 ７．０。
摘要： 在平板上测定了不同温度、ｐＨ 值、碳氮源、微量元素及生长因子（ 维生素） 对 绿 僵 菌 菌 丝 生 长 及 产
孢量的影响。结果表明： ｐＨ 值 ７．０、温度 ２８℃时最适合绿僵菌的生长； 以玉米粉为碳源、酵母膏为氮源时
菌丝生长最好、产孢量最高； 加入适量的微量元素及维生素有利于菌丝生长及产孢量 的 提 高 ， 其 中 以 加
３ 小结与讨论
１） 从绿僵菌菌丝生长来看， 以玉米粉为碳源， 酵母膏为氮源， 并添加适量微量元素 Ｍｎ 和维生素 Ｃ， 菌丝生长最好； 从产孢量来看， 以玉米粉或 红 薯 粉为碳源， 以酵母膏为氮源， 并添加适量的微量元 素 Ｍｎ 和维生素 Ｃ 时， 产孢量最大。
表 ７ 绿僵菌防治黑翅土白蚁室的试验结果
Ｍｎ、Ｚｎ、Ｃａ、Ｍｏ 和 Ｃｏ， 绿僵菌菌丝生长均较快， 以添 加 Ｍｎ、Ｃａ、Ｍｏ 时的产孢量较高， 其中以添加 Ｍｎ 的 培养基产孢量最高。Ｃｕ 对菌丝的生长和孢子的产 生有明显的抑制作用。因此， 培养绿僵菌时， 加入 Ｍｎ 可促进其菌丝的生长和产孢量的提高。
表 ５ 不同微量元素对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响
表 ２ 不同 ｐＨ 值对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响
ｐＨ
４．０ ５．０ ６．０ ７．０ ８．０ ９．０ １０．０
生长速度 ／ｃｍ·ｄ－１
０．７ １．０ １．１ １．３ １．０ ０．９ ０．６
每平板产孢量 ／１０９ 孢子 ０．８ １．７ ５．９ ８．９ ５．４ １．６ ０．９
２．３ 碳源对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响 不同碳源对绿僵菌菌丝生长和产孢量有较大
表 ４ 不同氮源对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响
氮源
蛋白胨 黄豆粉 酵母膏 牛肉膏 ＮａＮＯ３ ＮＨ４ＮＯ３ 尿素
生长速度 ／ｃｍ·ｄ－１ １．４ １．３ １．５ １．４ １．１ １．２ ０．４
每平板产孢量 １０．１ １３．１ １７．２ ６．１ １．９ ２．６ ０
１０９ 孢子
２．５ 微量元素对绿僵菌菌丝生长及产孢量的影响 由表 ５ 可知， 在培养基中分别加入微量元素
影 响 。 其 中 以 玉 米 粉 、红 薯ห้องสมุดไป่ตู้粉 或 蔗 糖 为 碳 源 时 菌 丝 生长最好， 产孢量最多； 用甘油、麦芽糖、葡 萄 糖 或 淀粉作碳源时菌丝生长较差， 产孢量较少（ 表 ３） 。
表 ３ 不同碳源对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响
碳源
玉米粉 红薯粉 甘油 麦芽糖 葡萄糖 淀粉 蔗糖
生长速度 ／ｃｍ·ｄ－１
试验处理
每缸喷 １ｍＬ Ｈ２Ｏ（ＣＫ） 每缸喷 １ｍＬ １０６ 孢子／ｍＬ 每缸喷 １ｍＬ １０７ 孢子／ｍＬ 每缸喷 １ｍＬ １０８ 孢子／ｍＬ
死亡数 ／头 ０ｂ ０ｂ ０ｂ ２ａ
死亡率 ／％ ０ ０ ０ ４％
第 ４５ 卷第 １ 期 ２００６ 年 １ 月
湖北农业科学 Ｈｕｂｅｉ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
文章编号： ０４３９－ ８１１４（ ２００６） ０１－ ００６２－ ０３
绿僵菌的培养及其防治白蚁的效果
Ｖｏｌ． ４５ Ｎｏ．１ Ｊａｎ．， ２００６
黄 海， 董昌金 （ 武汉大学生命科学学院， 武汉 ４３００７２）
取供试斜面菌种加入适量无菌水 （ 添加 ０．１％
Ｔｗｅｅｎ８０） 无 菌 操 作 将 孢 子 打 散 混 匀［２］， 稀 释 至 适 宜 浓度涂布在平板上。变换培养基成分及培养条件， 用直尺随机选取 ５ 个菌落测量菌体生长速度的平 均值［３］。产孢量的测定是用含 ０．１％ Ｔｗｅｅｎ８０ 的无菌 水将平板上的孢子全部洗脱下来， 打散孢子团， 制 成菌悬液， 并用血球计数板计数。 １．２．１ 温 度 对 绿 僵 菌 菌 丝 生 长 及 产 孢 量 的 影 响 把 ０．１ｍＬ 绿僵菌孢子悬液（ 每毫升约 １０ 个孢子） 接 种在基本培养基平板上， 每处理 ３ 个重复， 分别放 在 ２２℃、２５℃、２８℃、３４℃、３９℃下培养 ７ ｄ， 测量其菌 丝生长速度和产孢量， 观察温度对菌丝生长和产孢 的影响。 １．２．２ ｐＨ 对绿僵菌菌丝生长及产孢量的影响 把 基本培养基的 ｐＨ 值分别调为 ４．０， ５．０， ６．０， ７．０， ８．０， ９．０， １０．０， 培养基灭菌后倒平板， 并接入适量的绿僵 菌孢子， 于 ２５℃下恒温培养 ７ ｄ， 分别测量菌丝生长 速度和产孢量。 １．２．３ 不 同 碳 源 对 绿 僵 菌 菌 丝 生 长 及 产 孢 量 的 影 响 在基本培养基中， 固定以 ＮａＮＯ３ 为 氮 源 ， 变 换 不 同 的 碳 源 （ 玉 米 粉 、红 薯 粉 、甘 油 、麦 芽 糖 、葡 萄 糖、淀粉和蔗糖 ） ， 接种适量的绿僵菌 孢 子 ， 于 ２５℃ 下培养７ ｄ， 观察不同碳源对菌丝生长和产孢量的影 响。 １．２．４ 不 同 氮 源 对 绿 僵 菌 菌 丝 生 长 及 产 孢 量 的 影 响 在基本培养基中， 固定以蔗糖为碳源， 变换不
收稿日期： ２００５－ １０－ ２１ 基金项目： 湖北省教育厅重点课题资助项目（ ２００４ Ｄ００１） 作者简介： 黄 海（ １９８４－ ） ， 男， 湖北宜昌人， 硕士研究生， （ 电话） １３５４５０４９２１２（ 电子信箱） ｄｏｎｇｃｈａｎｊｉｎ２００５＠．ｃｏｍ； 通讯作者： 董昌金。
第１期
１ 材料与方法
１．１ 供试材料 绿 僵 菌 ８６ （ Ｍａｔａｒｈｉｚｉｕｍ ａｎｉｓｏｐｌｉａｅ） ， 由 武 汉 大
学 生 命 科 学 学 院 提 供 ； 黑 翅 土 白 蚁 （ Ｏｄｏｎｔｏｔｅｒｍｅｓ ｆｏｒｍｏｓａｎｕｓ） ， 取自武汉大学珞珈山。
基本培养基： 蔗糖 ３０ ｇ， ＮａＮＯ３ ３ ｇ， ＫＣｌ ０．５ ｇ， ＭｇＳＯ４ ０．５ ｇ， Ｋ２ＨＰＯ４ １ ｇ， ＦｅＳＯ４ ０．０１ ｇ， 琼脂 ２０ ｇ， 水 １０００ ｍＬ。 １．２ 试验方法
２ 结果与分析
２．１ 温度对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响 由表 １ 可知， 绿僵菌在 ２８℃下生 长 最 好 ， 产 孢
量最多， 在 ２２℃和 ２５℃下生长次之， ３４℃下微弱生 长， 产孢量较少， ３９℃下仅有极少数孢子产生。由此 得知， 绿僵菌不耐高温， 其最适培养温度为 ２８℃。
表 １ 不同温度对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响
黄 海等： 绿僵菌的培养及其防治白蚁的效果
６３
同的氮源（ 蛋白胨、黄豆粉、酵母膏、牛肉膏、ＮａＮＯ３、 ＮＨ４ＮＯ３ 和尿素 ） ， 接 种 适 量 的 绿 僵 菌 孢 子 ， 于 ２５℃ 下培养 ７ ｄ， 观察不同氮源对菌丝生长和产孢量的 影响。 １．２．５ 微 量 元 素 对 绿 僵 菌 菌 丝 生 长 及 产 孢 量 的 影 响 以基本培养基为基础， 在 １０００ ｍＬ 培养基中， 分别加入 １５ μｇ 不同微量元素（ Ｍｎ、Ｚｎ、Ｃａ、Ｍｏ、Ｃｏ、 Ｂ、Ｃｕ） ， 接种适量的绿僵菌孢子， 于 ２５℃下培养 ７ ｄ， 观察不同微量元素对菌丝生长和产孢量的影响。 １．２．６ 维生素对 绿 僵 菌 菌 丝 生 长 及 产 孢 量 的 影 响 以基本培养基 为 基 础 ， 在 １０００ ｍＬ 培 养 基 中 ， 分 别 加 入 １５ μｇ 不 同 维 生 素 及 其 组 合 （ ＶＢ１、ＶＢ６、ＶＣ、 ＶＢ１＋ＶＢ６、ＶＢ１＋ＶＣ、ＶＢ６＋ＶＣ、ＶＢ１＋ＶＢ６＋ＶＣ） ， 接种适 量的绿僵菌孢子， 于 ２５℃下培养 ７ ｄ， 观察不同维生 素及其组合对菌丝生长和产孢量的影响。 １．２．７ 绿 僵 菌 防 治 黑 翅 土 白 蚁 效 果 试 验 把 黑 翅 土白蚁 ２５０ 头分装于 ５ 个玻璃缸中， 每缸饲养白蚁 成虫 ５０ 头， 缸底垫以滤纸作为白蚁的食料， 并放湿 棉花球保湿。毒力测定方法： 分别将 １ｍＬ 绿僵菌孢 子悬液按每毫升 １×１０６ 个孢子、１×１０７ 个孢子和 １× １０８ 个孢子 ３ 种浓度喷在 琉 璃 缸 底 部 的 滤 纸 上 ， 以 喷蒸馏水作对照， 让白蚁在滤纸上爬行。每处理 ５ 个重复， 定期观察各处理重复间白蚁死亡数， 计算 死亡率。
微量元素
Ｍｎ Ｚｎ Ｃａ Ｍｏ Ｃｏ Ｂ Ｃｕ
生长速度 ／ｃｍ·ｄ－１ １．５ １．３ １．４ １．４ １．４ １．１ ０
每平板产孢量 １０９ 孢子
２３．８ １２．４ １０．８ １８．３ １０．９ ８．５ ０
６４
湖 北 农 业 科学
２００６ 年
２．６ 维生素对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响 表 ６ 中， 在培养基中分别添加 ＶＢ１、ＶＢ６、ＶＣ 或
组合， 菌丝生长情况基本相同， 但产孢量有显著差 异， 添加 ＶＣ 时产孢量最高 ， 添 加 ＶＢ１＋ＶＣ 时 次 之 ， 添加 ＶＢ６ 或 ＶＢ６＋ＶＣ 时产孢量最低。由此可知， 培养 基中加入适量的 ＶＣ 有利于孢子的产生。
表 ６ 不同维生素对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响
维生素 ＶＢ１ ＶＢ６ ＶＣ ＶＢ１＋ＶＢ６ ＶＢ１＋ＶＣ ＶＢ６＋ＶＣ ＶＢ１＋ＶＢ６＋ＶＣ
入微量元素 Ｍｎ 和维生素 Ｃ 的效果最佳。绿僵菌对黑翅土白蚁具有强烈的毒杀效果。
关键词： 绿僵菌； 菌丝生长； 产孢量； 白蚁； 防治
中图分类号： Ｑ９３９
文献标识码： Ａ
白 蚁 是 分 布 很 广 、危 害 严 重 、造 成 经 济 损 失 巨 大 的 重 要 害 虫 。 特 别 是 对 房 屋 建 筑 、 仓 储 物 资 、枕 木 、船 只 、家 俱 衣 物 、图 书 档 案 、林 木 果 园 、水 库 堤 坝 等破坏极大， 使国民经济每年蒙受数十亿元的损 失。白蚁的防治主要有化学防治和生物防治两种方 法 。 由 于 化 学 农 药 的 长 期 使 用 造 成 环 境 污 染 、害 虫 抗药性提高等问题日益严重， 因而利用昆虫病原真 菌进行害虫的生物防治已引起国内外的广泛关注［１］。 绿僵菌是最常用的广谱性昆虫寄生真菌， 属半知菌 类， 丛梗菌目， 丛梗霉科， 绿僵菌属， 能寄生昆虫 ８ 目 ３０ 科， 共约 ２００ 余种， 也能寄生白蚁、螨类、蟑螂 等， 具有广阔的应用前景。我们对绿僵菌在不同培 养条件下的生长和产孢量及其防治白蚁的效果进 行了研究。
１．４ １．３ ０．８ １．１ １．１ ０．８ １．２
每平板产孢量／１０９ 孢子 １３．６ １４．８ １．３ ０．９ ２．１ １．８ １１．６
２．４ 氮源对绿僵菌菌丝生长和产孢量的影响 不同氮源对绿僵菌菌丝生长和产孢量亦有较
大影响。从菌丝生长来看， 用蛋白胨、黄豆粉、酵母 膏、牛肉膏作氮源时菌丝生长均 较 好 ； 用 尿 素 作 氮 源时菌丝生长最差， 表明尿素对菌丝生长有明显的 抑制作用。从产孢量来看， 用蛋白胨、黄豆粉、酵母 膏作氮源时产孢量均较高， 而用尿素作氮源时则无 孢子产生。用 ＮａＮＯ３、ＮＨ４ＮＯ３ 等无机氮作氮 源 时 ， 菌丝生长及产孢量均较差， 由此可见， 有机氮源比 无机氮源更有利于绿僵菌菌丝生长和产孢量的提 高（ 表 ４） 。