阿霉素注射次数及剂量对肾病综合征模型的影响

征模型， 是有多种原因引起的， 以大量蛋白尿、 高血脂
材料与方法 员摇 实验材料 员援 员摇 实验动物与分组摇 雄性 杂阅 大鼠 圆远 只， 杂孕云 级， 体重 员愿园 耀 圆源园 早， 由山东中医药大学动物中心提 供， 动物生产许可证号： 杂悦载运 （ 鲁） 圆园园猿园园园源 ， 自由饮 水、 饮 食。适 应 性 喂 养 猿 凿 后， 大 鼠 上 代 谢 笼， 收集 圆源 澡尿液， 检测尿蛋白含量呈阴性， 符合标准， 将 圆远 只 大鼠按照体重随机分成 远 组， 粤 为正常对照组， 月、 悦、 阅、 耘、 云 为阿霉素造模组， 粤 组 源 只， 月 组 远 只， 悦、 阅、 耘、 云 组各 源 只。 员援 圆 摇 实验试剂 摇 月杂粤 蛋白定量试剂盒， 北京普
贼葬蚤灶泽 苑援 缘 皂早 辕 噪早） ， 葬灶凿 早则燥怎责 阅 蚤泽 圆缘豫 （ 泽蚤灶早造藻 贼葬蚤造 蚤灶贼则葬增藻灶燥怎泽 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 燥遭贼葬蚤灶泽 远 皂早 辕 噪早 ） ， 贼澡藻 怎则蚤灶葬则赠 责则燥贼藻蚤灶 糟燥灶贼藻灶贼 燥枣 早则燥怎责 云
摇 摇 阿霉素肾病动物模型是一个较经典的肾病综合 症等为特征， 于 圆园 世 纪 愿园 年 代 初 期 由 国 外 文 献 报
表 圆摇 大鼠不同时期尿量、 体重、 圆源 澡 尿蛋白
怨援 员圆 依 猿援 苑园 源援 员猿 依 圆援 远 尿量 （ 皂造）
吸光度 （ nm）
y=0.000 1x+0.506 3 R=0.994 1
组别 粤组
含量比较摇 （ 曾 依 泽） 珋
员源 凿 远凿
远凿
1 000
1 500
2 000
2 500
圆员 凿
道， 由最初的单次给药， 到以后的各种不同改良方法， 所诱导的阿霉素肾病模型逐渐成熟， 是继嘌呤霉素肾 病动物模型之后， 公认的能较好模拟人类慢性肾脏病 的动物模型， 在肾脏病研究领域已被广泛应用。但是 在实际应用中发现以往的文献报道或多或少存在一
［ 员］ 。因此， 我们通过反复的实验改进， 采用一次 些缺陷
· 远苑苑·
利莱 基 因 技 术 有 限 公 司， 批 号： 圆园园怨园怨圆员 ； 阿霉素 注射用干粉， 浙江海正药业股份有限公司， 批 （ 粤阅砸） 号： 园怨园愿园员粤。 圆摇 动物模型及造模方法摇 通过参考文献确定 粤阅砸 常用的注射剂量范围， 将上述分组大鼠 分 别 处 置 如 下： 月 组， 一次性尾静脉注射 粤阅砸 苑援 缘 皂早 辕 噪早； 悦 组， 尾 静脉注射 粤阅砸 源 皂早 辕 噪早 ， 隔 员 周后尾静脉再注射 粤阅砸 猿援 缘 皂早 辕 噪早。 阅 组， 一次性尾静脉注射 粤阅砸 远 皂早 辕 噪早； 耘 组， 尾静脉注射 粤阅砸 源 皂早 辕 噪早， 隔 员 周再注射 圆 皂早 辕 噪早； 云 组， 一次性尾静脉注射 粤阅砸 缘 皂早 辕 噪早； 粤组 （ 正常对 照组） ， 尾静脉注射相同体积的生理盐水。各组注射 圆、 猿、 源 周分别上代谢笼收取不同时期的 后第 员 、 圆源 澡 尿液， 用 遭则葬凿枣燥则凿 比色法测定尿蛋白含量， 取尿蛋 ［ 圆］ 白含量 跃 员园园 皂早 辕 圆源 澡 为肾病模型成立 。同时实验期 间每天记录大鼠体重、 饮食量、 饮水量、 尿量、 粪便量。 猿摇 检测方法摇 按蛋白质定量试剂盒 （ 遭则葬凿枣燥则凿 法） 使用说 明 制 做 标 准 曲 线。 取 猿园 μ造 连 续 倍 比 稀 释 苑 次， 得到 月杂粤 标准溶液 圆 园园园 、 员 园园园 、 缘园园 、 圆缘园 、 员圆缘 、 远圆援 缘 、 猿员援 圆缘 、 员缘援 远圆缘 μ早 辕 皂造。将溶液分别加入 员 糟皂 光 径的比色皿， 用分光光度计测定 缘怨缘 灶皂 处的光吸收 值。连续 测 定 两 次， 取 平 均 值。用 标 准 蛋 白 质 浓 度 为横坐标， 用吸光度值为纵坐标作图， 即得标 （ μ早 辕 皂造） 准曲线。见图 员 。
性或分次尾静脉注射阿霉素， 拟通过考察阿霉素的给药 剂量和造模方法， 来最终确立造模的最佳条件。
①摇 山东中医药大学摇 （ 济南摇 圆缘园猿缘缘 ） △摇 通讯作者
万方数据
中国中西医结合肾病杂志 圆园员员 年 愿 月第 员圆 卷第 愿 期摇 悦允陨栽宰晕， 粤怎早怎泽贼 圆园员员 ， 灾燥造援 员圆 ， 晕燥援 愿摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇
坏死。结论： 从精神状态、 尿蛋白含量、 死亡率、 病理切片等综合比较， 尾静脉注射 粤阅砸 源 皂早 辕 噪早， 员 周后再注射 圆 皂早 辕 噪早， 源周
阅燥曾燥则怎遭蚤糟蚤灶 陨灶躁藻糟贼蚤燥灶 栽蚤皂藻 葬灶凿 阅燥泽藻 贼澡藻 陨灶枣造怎藻灶糟藻 燥枣 晕藻责澡则燥贼蚤糟 杂赠灶凿则燥皂藻 酝燥凿藻造 蕴陨晕 允蚤葬灶躁怎灶， 再粤晕郧 再燥灶早， 郧粤韵 晕葬， 藻贼 葬造 杂澡葬灶凿燥灶早 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠 燥枣 栽则葬凿蚤贼蚤燥灶葬造 悦澡蚤灶藻泽藻 酝藻凿蚤糟蚤灶藻， 允蚤灶葬灶 （ 圆缘园园猿缘 ） 摇 摇 粤月杂栽砸粤悦栽摇 韵遭躁藻糟贼蚤增藻： 栽燥 藻泽贼葬遭造蚤泽澡 葬 则葬贼 皂燥凿藻造 燥枣 灶藻责澡则蚤贼蚤糟 泽赠灶凿则燥皂藻 皂燥凿藻造 葬灶凿 藻曾责造燥则藻 贼澡藻 蚤灶枣造怎藻灶糟藻 枣葬糟贼燥则泽， 藻增葬造怎葬贼藻泽 贼澡藻
图1
BSA 蛋白标准曲线
来自百度文库
测定样本尿蛋白含量， 方法同上。根据标准曲线 和样品的 韵阅缘怨缘 值， 计算出样本的尿蛋白浓度， 用公 辕 员 园园园 ， 最终计 式： （ 尿蛋白浓度 伊 稀释倍数 伊 尿量） 算出样本尿蛋白含量 （ 皂早 辕 圆源 澡） 。 源摇 病理形态学的观察 摇 源 周末后， 大鼠用 源豫 的 水合氯醛麻醉， 腹主动脉采血后处死大鼠， 剖腹取肾 脏， 肾脏 源豫 甲醛固定、 乙醇脱水、 石蜡包埋后， 制成 远 μ皂厚的石蜡切片， 做普通 匀耘 染色， 晕蚤噪燥灶 光学显微 镜下观察肾组织形态学的改变。 缘摇 统计学方法 摇 采用 杂孕杂杂员苑援 园 统计软件包统 计学分析， 所有数据用 （曾 依 泽） 表示， 采用方差分析进 珋 行组间差异分析， 孕 约 园援 园缘 为差异有统计学意义。 员摇 实验大鼠的一般状况摇 造模 苑 凿 后， 阿霉素造 万方数据 结摇 摇 果
摇 摇 〔 摘摇 要〕 摇 目的： 建立阿霉素 （ 粤阅砸） 大鼠肾病综合征模型， 探讨相关影响因素， 考察阿霉素的给药剂量与造模方法 （一 次性注射和分次注射） ， 确立造模的最佳条件。方法： 利用尾静脉一次性注射和分次注射阿霉素， 构建大鼠肾病综合征动物
模型。结果： 阿霉素造模后大部分出现尿蛋白排出量增加、 精神不佳等现象。月 组 （ 一次性尾静脉注射 粤阅砸 苑援 缘 皂早 辕 噪早 ） 死亡 率 远远援 苑豫 ， 悦组 （ 分二次尾静脉注射 粤阅砸， 共 苑援 缘 皂早 辕 噪早） ， 阅组 （ 一次性尾静脉注射 粤阅砸 远 皂早 辕 噪早 ） 死亡率 圆缘豫 ； 云组 （ 一次性 尾静脉注射 粤阅砸 缘 皂早 辕 噪早） ， 尿蛋白含量相对于其他几组偏低； 耘组 （ 分二次尾静脉注射 粤阅砸， 共 远 皂早 辕 噪早 ） 大鼠精神状态良 ； 病理切片显示 耘 组出现肾小球局灶节段性硬化和节段性纤维素样 好， 能较快时间达到较高的尿蛋白含量 （ 跃 圆缘园 皂早 辕 圆源 澡） 后可以高效地复制出阿霉素肾病综合征大鼠模型。 〔 关键词〕 摇 阿霉素摇 肾病综合征模型摇 影响因素
0.8 0.7 0.6 ◆ ◆◆ ◆ 0.5◆ 0.4 0.3 0.2 0.1 0 0 500
◆ ◆
模组大鼠不同程度的呈现眼鼻部血性分泌物、 尾巴溃 烂、 精神不佳、 毛发蓬松、 消瘦等表现， 在实验过程中， 阿霉素造模组有 远 只死亡， 其中 圆 只出现眼鼻部血性 表 圆。 分泌物， 消瘦也很明显。见表 员 、
藻泽贼葬遭造蚤泽澡藻泽 贼澡藻 燥责贼蚤皂怎皂 糟燥灶凿蚤贼蚤燥灶泽 枣燥则 粤凿则蚤葬皂赠鄄 葬凿皂蚤灶蚤泽贼则葬贼蚤燥灶 凿燥泽葬早藻 葬灶凿 凿燥泽蚤灶早 皂藻贼澡燥凿 泽怎糟澡 葬泽 泽蚤灶早造藻 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 燥则 皂怎造贼蚤责造藻 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶， 早则燥怎责 月（ 泽蚤灶早造藻 贼葬蚤造 蚤灶贼则葬增藻灶燥怎泽 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 燥遭贼葬蚤灶泽 苑援 缘 皂早 辕 噪早） 蚤泽 远远援 苑豫 ， 贼澡藻 皂燥则贼葬造蚤贼赠 燥枣 早则燥怎责 悦（ 贼憎蚤糟藻 贼葬蚤造 蚤灶贼则葬增藻灶燥怎泽 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 燥遭鄄 糟蚤灶 灶藻责澡则燥责葬贼澡赠 则葬贼 皂燥凿藻造泽援 酝藻贼澡燥凿泽： 耘泽贼葬遭造蚤泽澡 粤凿则蚤葬皂赠糟蚤灶 灶藻责澡则燥责葬贼澡赠 则葬贼 皂燥凿藻造泽 遭赠 泽蚤灶早造藻 葬灶凿 皂怎造贼蚤责造藻 蚤灶贼则葬增藻灶燥怎泽 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 燥枣 粤凿鄄 粤凿则蚤葬皂赠糟蚤灶 皂燥凿藻造 燥遭贼葬蚤灶泽 皂燥泽贼 葬责责藻葬则 蚤灶糟则藻葬泽藻凿 怎则蚤灶葬则赠 责则燥贼藻蚤灶 葬灶凿 责燥燥则 皂藻灶贼葬造 责澡藻灶燥皂藻灶燥灶援 栽澡藻 皂燥则贼葬造蚤贼赠 燥枣 贼澡藻 则蚤葬皂赠糟蚤灶援 砸藻泽怎造贼泽：
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阿霉素注射次数及剂量对肾病综合征模型的影响
蔺建军 ① 摇 杨摇 勇 ①△ 摇 高摇 娜 ① 摇 樊志奇①
（ 泽蚤灶早造藻 贼葬蚤造 蚤灶贼则葬增藻灶燥怎泽 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 燥遭贼葬蚤灶泽 缘 皂早 辕 噪早） ， 憎葬泽 造燥憎藻则 贼澡葬灶 燥贼澡藻则 早则燥怎责泽援 栽澡藻 则葬贼泽 燥枣 贼澡藻 早则燥怎责 耘（ 贼燥贼葬造 蚤灶贼则葬增藻灶燥怎泽 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 澡藻灶泽蚤增藻 糟燥皂责葬则葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 皂藻灶贼葬造 泽贼葬贼怎泽， 怎则蚤灶葬则赠 责则燥贼藻蚤灶 糟燥灶贼藻灶贼， 皂燥则贼葬造蚤贼赠 葬灶凿 责葬贼澡燥造燥早蚤糟葬造 则藻泽怎造贼 藻贼糟， 葬凿则蚤葬皂赠糟蚤灶 灶藻责澡则燥责葬贼澡赠 葬灶蚤皂葬造 葬 皂燥灶贼澡援 皂燥凿藻造泽 糟葬灶 遭藻 藻枣枣藻糟贼蚤增藻造赠 则藻责则燥凿怎糟藻凿 贼澡则燥怎早澡 贼葬蚤造 蚤灶贼则葬 增藻灶燥怎泽 蚤灶躁藻糟贼蚤燥灶 燥遭贼葬蚤灶泽 源皂早 辕 噪早 枣蚤则泽贼造赠， 贼澡藻灶 蚤灶躁藻糟贼藻凿 圆 皂早 辕 噪早 贼澡藻 灶藻曾贼 憎藻藻噪 枣燥则 运耘再摇 宰韵砸阅杂摇 粤凿则蚤葬皂赠糟蚤灶摇 晕藻责澡则燥贼蚤糟 泽赠灶凿则燥皂藻 皂燥凿藻造摇 陨灶枣造怎藻灶糟藻 枣葬糟贼燥则泽 泽造蚤糟藻 凿蚤泽责造葬赠藻凿 贼澡葬贼 早则燥怎责 耘 澡葬凿 泽燥皂藻 泽藻糟燥灶凿葬则赠 枣燥糟葬造 泽藻早皂藻灶贼葬造 早造燥皂藻则怎造燥泽糟造藻则燥泽蚤泽 葬灶凿 枣蚤遭则蚤灶燥蚤凿 灶藻糟则燥泽蚤泽援 悦燥灶糟造怎泽蚤燥灶： 月赠 葬 糟燥皂责则藻鄄 燥遭贼葬蚤灶泽 远 皂早 辕 噪早）澡葬增藻 早燥燥凿 皂藻灶贼葬造 泽贼葬贼怎泽， 葬灶凿 糟葬灶 择怎蚤糟噪造赠 葬糟澡蚤藻增藻 贼澡藻 澡蚤早澡藻则 怎则蚤灶藻 责则燥贼藻蚤灶 糟燥灶贼藻灶贼 （ 贼澡葬灶 圆缘园 皂早 辕 圆源 澡） ； 孕葬贼澡燥造燥早蚤糟葬造
苑援 苑愿 依 远援 苑愿 源援 圆猿 依 猿援 圆愿
圆员猿援 愿猿 依 员远援 园员
体重 （ 早）
圆源 澡 尿蛋白含量 （ 皂早） 怨援 源愿 依 缘援 员苑 愿援 园员 依 远援 远苑 怨援 愿员 依 猿援 远猿
圆远苑援 圆缘 依 圆苑援 苑愿
浓度 （ μg/ml）
圆愿 凿
圆怨苑援 缘园 依 圆怨援 员怨
级别 粤组 月组 悦组 耘组 云组 阅组
表 员摇 造模后大鼠死亡数
园 源 员 员 园 园
死亡数 （ 只）
圆摇 尿量、 体重、 尿蛋白的变化 摇 实验前各组大鼠 不同时期的 圆源 澡 尿量、 体重、 尿蛋白含量差异均无统 粤阅砸 造模后与对照组比较， 第 圆愿 天 月 组、 耘 计学意义； 组尿量明显升高 （ 孕 约 园援 园缘 ） ； 悦、 阅、 云 组差异无统计学 悦 组、 耘 组大鼠体重与对照组相 意义。第 圆愿 天 月 组、 比， 显著降低 （ 孕 约 园援 园缘 ） ， 其他组差别不明显。 粤阅砸 造模后与对照组比较， 第 员源 天 耘 组尿蛋白含量明显 ； 第 圆愿 天 月 组、 悦 组、 耘 组尿蛋白含量 增加 （ 孕 约 园援 园缘 ） 仍持续增加， 差异有统计学意义 （ 月 组： 孕 约 园援 园员 ； 悦 组、 耘 组： 孕 约 园援 园缘 ） ， 其他组差异无统计学意义。结果 见表 圆 ， 图 圆 耀 图 源。