实验5-大黄中蒽醌类的提取与分离
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2.酸水解后的滤饼一定要水洗至中性，为了节省时间，可 将第一次抽滤得到的滤饼混悬在水中，加10%NaOH水溶 液调pH值至6，抽滤后再水洗至中性。
3.pH梯度萃取法分离羟基蒽醌，是利用羟基蒽醌的酸性不 同，可溶于不同 pH的碱液中，在分离时，应注意萃取的 次数不宜过多，否则被分离的成分间回游混杂，最好同时 用薄层对照。所用碱液的pH值分别如下：5%碳酸氢钠为8， 5%碳酸钠为10-11，0.5%氢氧化钠为12以上。
大黄中主要有效成分及结构
大黄中化学成分复杂，主要以蒽醌衍生物为主。 包括游离蒽醌、蒽醌苷、二蒽酮苷、鞣质等。
游离蒽醌主要有大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、
芦荟大黄素、大黄酸。
R1
R2
大黄酚
CH3 H
大黄素
CH3 OH
大黄素甲醚 CH3 芦荟大黄素 H
大黄酸
H
OCH3 CH2OH COOH
提取分离原理
了解大黄中蒽醌类 化合物的提取分离 新进展。
熟练进行大黄中 蒽醌类化合物的 提取、分离及鉴 定操作。
学会大黄中大蒽 醌类化合物的色 谱鉴定技术。
二、实验原理
大黄(Rheum palmatum L.)
蓼科多年生草本植物，掌叶。大黄的干燥根可入药，性 寒味苦，具有清热解毒、活血化瘀、泻火凉血等多种作用。
将玻璃棒从硅胶面上由上至下缓慢匀速拉下。重复 两到三次，直到将硅胶层铺好为止（铺好的薄层可 以清晰地看见玻璃板下面的手指！）
将硅胶板室温干燥30分钟后置于烘箱内，缓慢升温 至105℃左右烘烤20分钟（使硅胶活化），然后放入 干燥箱备用。
105
℃活 化
薄层层析
用铅笔在距硅胶板点样端约2cm处平行地划上点样标记，用毛 细管点样（注意：样点的间距不能小于1cm，点的直径能够不 得超过0.5cm!），自然风干
待提取物质逐渐从样品中溶 解到抽提剂中。当样品管中 的抽提剂液面逐渐上升到与 回流管（虹吸管）上端齐平 时，在虹吸作用下，携带所 提取的物质一同从侧面的虹 吸管流入烧瓶中即完成一轮 循环。
实验装置
提取过程
滤饼经干燥后，置索氏提取器中以乙醚约 150ml回流提取3~4小时，得乙醚提取液。
注意颜色 的变化 喔～
酸化结晶
酸
碱
化
液
后
6.硅胶薄层层析
薄层层析是一种快速分离和定性分析少量 物质的实验技术。
它是将某种吸附剂在玻璃板（或硬制塑料板等） 上均匀地铺成薄层，把待分析鉴定的样品溶液点 在薄层的一端，然后选择合适的溶剂作为流动相 （展开剂），在密闭的层析缸内进行层析，从而 达到分离鉴定的目的。
本实验中
在烧杯中倒入1cm深的展开剂，将点样后的薄板斜放入其中， 迅速罩好
1～2小时后， 当展开剂前沿 到达薄板3／4 高度时，将薄 板自层析缸内 取出，立即用 铅笔记下展开 剂前沿的位置， 自然风干
注意事项
1.本实验提取方法是采用酸水解法，使药材中蒽醌苷水解 得到游离蒽醌化合物，再用连续回流的方法，使游离蒽醌 被氯仿提取出来，这样提取的游离蒽醌类成分较为完全， 收率高。
80目
2.酸解
取大黄粉20 g，加20%H2SO4 200ml，在70℃ 水浴上加热 3~4小时。
70
20g
℃
3.水洗、抽滤、干燥
抽滤，滤饼水洗至中性后，于70℃左右干燥， 研成粉末。
水洗至中性
真空泵
4.索式提取器
圆底烧瓶内的抽提剂受热挥 发，蒸气经导气管向上，在 冷凝管中冷却为液体，滴入 装有样品滤纸筒的管中，使 样品浸在纯净的抽提剂中。
3、芦荟大黄素：分离出大黄素的乙醚层， 继续用2.5% Na2CO3溶液60ml分四次萃取， 合并四次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤 可得芦荟大黄素沉淀。
4、大黄酚和大黄素甲醚混合物:将分离出 芦荟大黄素的乙醚层，用0.5% NaOH溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓 盐酸调 pH2-3,抽滤，得大黄酚和大黄素甲 醚混合物。
5.pH梯度萃取
取乙醚提取液2/3量，置 250ml分液漏斗中。
1、大黄酸：用2.5% NaHCO3溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃 取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤， 得大黄酸沉淀。
2 、大黄素：分离出大黄酸的乙醚层，用 2.5% Na2CO3溶液60ml分三次萃取，合并三 次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤可得大 黄素沉淀。
吸附剂：硅胶—CMC 展开剂：石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯＝7：3
薄层的制备
2g硅胶G + 20ml 0.25% CMC ，混合均匀
取20cm×5cm的光滑洁净玻璃板一块，水平放置， 将已调制好的硅胶G均匀地涂布于玻璃板上
取一洁净的玻璃棒，两手用拇指，食指，中指控 制住玻璃棒的两端并始终保持玻璃棒与桌面平行。 调整玻璃棒高度使之与玻璃板间的距离约为1.0 mm
五、思考题
1.简述大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸 性与结构的关系。
2. pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用 该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合 物？
3.大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的极性与 结构的关系如何？薄层鉴别时常用何类吸 附剂？Rf值顺序如何？
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
大黄中蒽醌类的提取与分离
指导老师：肖靓
小老师： 罗天明 潘少涛 武雪莹
大黄中蒽醌类的提取与分离
1
实验目的
2
实验原理
3
实验材料
4
实验步骤
5
思考题
一、实验目的
1
2
学习目的 知识要求
3
能力要求
掌握大黄中蒽醌类 化学成分的提取分 离技术。
掌握大黄中蒽醌类 化合物的提取、分 离原理。
熟悉大黄中蒽醌类 化合物的结构及主 要理化性质。
大黄中的蒽醌苷经 酸水解成游离蒽醌 苷元，苷元可溶于 乙醚而被提取出来。 再利用各种蒽醌类 化合物酸性不同， 采用pH梯度萃取法 分离得到各种蒽醌 类化合物。
三、实验材料
器材：
500ml圆底烧瓶、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝 管、30cm层析缸、标本瓶、索氏提取器一套、 250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、 薄层板、喷雾器、广泛PH试纸
初步检测
乙醚提取液经薄层检查含有大黄酸、芦荟 大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。
检测方法：取硅胶-CMC-Na板，将上述乙醚 提取液点样后，用石油醚（60-90℃）-醋酸 乙酯（7：3）为展开剂，展开晾干，在可见 光下观察，可见到4个黄色斑点，Rf值由大 到小分别是大黄酚与大黄素甲醚的混合物、 大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。置氨蒸汽 中熏后，斑点变为红色。
药品：
大黄20g、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓硫酸、浓盐酸、 浓硝酸、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、硅胶G、CMC
四、实验步骤
1.粉碎 2.酸解 3.水洗、抽滤、干燥 4.索式提取 5.萃取结晶 6.硅胶薄层层析 7.纤维素柱层析
1.粉碎
将大黄药材切片剪碎，用粉碎机粉碎得到 大黄粗粉，经80目筛子得到大黄细粉。
3.pH梯度萃取法分离羟基蒽醌，是利用羟基蒽醌的酸性不 同，可溶于不同 pH的碱液中，在分离时，应注意萃取的 次数不宜过多，否则被分离的成分间回游混杂，最好同时 用薄层对照。所用碱液的pH值分别如下：5%碳酸氢钠为8， 5%碳酸钠为10-11，0.5%氢氧化钠为12以上。
大黄中主要有效成分及结构
大黄中化学成分复杂，主要以蒽醌衍生物为主。 包括游离蒽醌、蒽醌苷、二蒽酮苷、鞣质等。
游离蒽醌主要有大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、
芦荟大黄素、大黄酸。
R1
R2
大黄酚
CH3 H
大黄素
CH3 OH
大黄素甲醚 CH3 芦荟大黄素 H
大黄酸
H
OCH3 CH2OH COOH
提取分离原理
了解大黄中蒽醌类 化合物的提取分离 新进展。
熟练进行大黄中 蒽醌类化合物的 提取、分离及鉴 定操作。
学会大黄中大蒽 醌类化合物的色 谱鉴定技术。
二、实验原理
大黄(Rheum palmatum L.)
蓼科多年生草本植物，掌叶。大黄的干燥根可入药，性 寒味苦，具有清热解毒、活血化瘀、泻火凉血等多种作用。
将玻璃棒从硅胶面上由上至下缓慢匀速拉下。重复 两到三次，直到将硅胶层铺好为止（铺好的薄层可 以清晰地看见玻璃板下面的手指！）
将硅胶板室温干燥30分钟后置于烘箱内，缓慢升温 至105℃左右烘烤20分钟（使硅胶活化），然后放入 干燥箱备用。
105
℃活 化
薄层层析
用铅笔在距硅胶板点样端约2cm处平行地划上点样标记，用毛 细管点样（注意：样点的间距不能小于1cm，点的直径能够不 得超过0.5cm!），自然风干
待提取物质逐渐从样品中溶 解到抽提剂中。当样品管中 的抽提剂液面逐渐上升到与 回流管（虹吸管）上端齐平 时，在虹吸作用下，携带所 提取的物质一同从侧面的虹 吸管流入烧瓶中即完成一轮 循环。
实验装置
提取过程
滤饼经干燥后，置索氏提取器中以乙醚约 150ml回流提取3~4小时，得乙醚提取液。
注意颜色 的变化 喔～
酸化结晶
酸
碱
化
液
后
6.硅胶薄层层析
薄层层析是一种快速分离和定性分析少量 物质的实验技术。
它是将某种吸附剂在玻璃板（或硬制塑料板等） 上均匀地铺成薄层，把待分析鉴定的样品溶液点 在薄层的一端，然后选择合适的溶剂作为流动相 （展开剂），在密闭的层析缸内进行层析，从而 达到分离鉴定的目的。
本实验中
在烧杯中倒入1cm深的展开剂，将点样后的薄板斜放入其中， 迅速罩好
1～2小时后， 当展开剂前沿 到达薄板3／4 高度时，将薄 板自层析缸内 取出，立即用 铅笔记下展开 剂前沿的位置， 自然风干
注意事项
1.本实验提取方法是采用酸水解法，使药材中蒽醌苷水解 得到游离蒽醌化合物，再用连续回流的方法，使游离蒽醌 被氯仿提取出来，这样提取的游离蒽醌类成分较为完全， 收率高。
80目
2.酸解
取大黄粉20 g，加20%H2SO4 200ml，在70℃ 水浴上加热 3~4小时。
70
20g
℃
3.水洗、抽滤、干燥
抽滤，滤饼水洗至中性后，于70℃左右干燥， 研成粉末。
水洗至中性
真空泵
4.索式提取器
圆底烧瓶内的抽提剂受热挥 发，蒸气经导气管向上，在 冷凝管中冷却为液体，滴入 装有样品滤纸筒的管中，使 样品浸在纯净的抽提剂中。
3、芦荟大黄素：分离出大黄素的乙醚层， 继续用2.5% Na2CO3溶液60ml分四次萃取， 合并四次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤 可得芦荟大黄素沉淀。
4、大黄酚和大黄素甲醚混合物:将分离出 芦荟大黄素的乙醚层，用0.5% NaOH溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓 盐酸调 pH2-3,抽滤，得大黄酚和大黄素甲 醚混合物。
5.pH梯度萃取
取乙醚提取液2/3量，置 250ml分液漏斗中。
1、大黄酸：用2.5% NaHCO3溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃 取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤， 得大黄酸沉淀。
2 、大黄素：分离出大黄酸的乙醚层，用 2.5% Na2CO3溶液60ml分三次萃取，合并三 次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤可得大 黄素沉淀。
吸附剂：硅胶—CMC 展开剂：石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯＝7：3
薄层的制备
2g硅胶G + 20ml 0.25% CMC ，混合均匀
取20cm×5cm的光滑洁净玻璃板一块，水平放置， 将已调制好的硅胶G均匀地涂布于玻璃板上
取一洁净的玻璃棒，两手用拇指，食指，中指控 制住玻璃棒的两端并始终保持玻璃棒与桌面平行。 调整玻璃棒高度使之与玻璃板间的距离约为1.0 mm
五、思考题
1.简述大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸 性与结构的关系。
2. pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用 该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合 物？
3.大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的极性与 结构的关系如何？薄层鉴别时常用何类吸 附剂？Rf值顺序如何？
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
大黄中蒽醌类的提取与分离
指导老师：肖靓
小老师： 罗天明 潘少涛 武雪莹
大黄中蒽醌类的提取与分离
1
实验目的
2
实验原理
3
实验材料
4
实验步骤
5
思考题
一、实验目的
1
2
学习目的 知识要求
3
能力要求
掌握大黄中蒽醌类 化学成分的提取分 离技术。
掌握大黄中蒽醌类 化合物的提取、分 离原理。
熟悉大黄中蒽醌类 化合物的结构及主 要理化性质。
大黄中的蒽醌苷经 酸水解成游离蒽醌 苷元，苷元可溶于 乙醚而被提取出来。 再利用各种蒽醌类 化合物酸性不同， 采用pH梯度萃取法 分离得到各种蒽醌 类化合物。
三、实验材料
器材：
500ml圆底烧瓶、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝 管、30cm层析缸、标本瓶、索氏提取器一套、 250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、 薄层板、喷雾器、广泛PH试纸
初步检测
乙醚提取液经薄层检查含有大黄酸、芦荟 大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。
检测方法：取硅胶-CMC-Na板，将上述乙醚 提取液点样后，用石油醚（60-90℃）-醋酸 乙酯（7：3）为展开剂，展开晾干，在可见 光下观察，可见到4个黄色斑点，Rf值由大 到小分别是大黄酚与大黄素甲醚的混合物、 大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。置氨蒸汽 中熏后，斑点变为红色。
药品：
大黄20g、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓硫酸、浓盐酸、 浓硝酸、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、硅胶G、CMC
四、实验步骤
1.粉碎 2.酸解 3.水洗、抽滤、干燥 4.索式提取 5.萃取结晶 6.硅胶薄层层析 7.纤维素柱层析
1.粉碎
将大黄药材切片剪碎，用粉碎机粉碎得到 大黄粗粉，经80目筛子得到大黄细粉。