实验5-大黄中蒽醌类的提取与分离

将玻璃棒从硅胶面上由上至下缓慢匀速拉下。重复 两到三次，直到将硅胶层铺好为止（铺好的薄层可 以清晰地看见玻璃板下面的手指！）
将硅胶板室温干燥30分钟后置于烘箱内，缓慢升温 至105℃左右烘烤20分钟（使硅胶活化），然后放入 干燥箱备用。
105
℃活 化
薄层层析
用铅笔在距硅胶板点样端约2cm处平行地划上点样标记，用毛 细管点样（注意：样点的间距不能小于1cm，点的直径能够不 得超过0.5cm!），自然风干
3、芦荟大黄素：分离出大黄素的乙醚层， 继续用2.5% Na2CO3溶液60ml分四次萃取， 合并四次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤 可得芦荟大黄素沉淀。
4、大黄酚和大黄素甲醚混合物:将分离出 芦荟大黄素的乙醚层，用0.5% NaOH溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃取液，用浓 盐酸调 pH2-3,抽滤，得大黄酚和大黄素甲 醚混合物。
在烧杯中倒入1cm深的展开剂，将点样后的薄板斜放入其中， 迅速罩好
1～2小时后， 当展开剂前沿 到达薄板3／4 高度时，将薄 板自层析缸内 取出，立即用 铅笔记下展开 剂前沿的位置， 自然风干
注意事项
1.本实验提取方法是采用酸水解法，使药材中蒽醌苷水解 得到游离蒽醌化合物，再用连续回流的方法，使游离蒽醌 被氯仿提取出来，这样提取的游离蒽醌类成分较为完全， 收率高。
酸化结晶
酸
碱
化
液
后
6.硅胶薄层层析
薄层层析是一种快速分离和定性分析少量 物质的实验技术。
它是将某种吸附剂在玻璃板（或硬制塑料板等） 上均匀地铺成薄层，把待分析鉴定的样品溶液点 在薄层的一端，然后选择合适的溶剂作为流动相 （展开剂），在密闭的层析缸内进行层析，从而 达到分离鉴定的目的。
本实验中
2.酸水解后的滤饼一定要水洗至中性，为了节省时间，可 将第一次抽滤得到的滤饼混悬在水中，加10%NaOH水溶 液调pH值至6，抽滤后再水洗至中性。
3.pH梯度萃取法分离羟基蒽醌，是利用羟基蒽醌的酸性不 同，可溶于不同 pH的碱液中，在分离时，应注意萃取的 次数不宜过多，否则被分离的成分间回游混杂，最好同时 用薄层对照。所用碱液的pH值分别如下：5%碳酸氢钠为8， 5%碳酸钠为10-11，0.5%氢氧化钠为12以上。
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二、实验原理
大黄(Rheum palmatum L.)
蓼科多年生草本植物，掌叶。大黄的干燥根可入药，性 寒味苦，具有清热解毒、活血化瘀、泻火凉血等多种作用。
80目
2.酸解
取大黄粉20 g，加20%H2SO4 200ml，在70℃ 水浴上加热 3~4小时。
70
20g
℃
3.水洗、抽滤、干燥
抽滤，滤饼水洗至中性后，于70℃左右干燥， 研成粉末。
水洗至中性
真空泵
4.索式提取器
圆底烧瓶内的抽提剂受热挥 发，蒸气经导气管向上，在 冷凝管中冷却为液体，滴入 装有样品滤纸筒的管中，使 样品浸在纯净的抽提剂中。
5.pH梯度萃取
取乙醚提取液2/3量，置 250ml分液漏斗中。
1、大黄酸：用2.5% NaHCO3溶液 60ml,分三次萃取，合并三次萃 取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤， 得大黄酸沉淀。
2 、大黄素：分离出大黄酸的乙醚层，用 2.5% Na2CO3溶液60ml分三次萃取，合并三 次萃取液，用浓盐酸调 pH2-3,抽滤可得大 黄素沉淀。
初步检测
乙醚提取液经薄层检查含有大黄酸、芦荟 大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。
检测方法：取硅胶-CMC-Na板，将上述乙醚 提取液点样后，用石油醚（60-90℃）-醋酸 乙酯（7：3）为展开剂，展开晾干，在可见 光下观察，可见到4个黄色斑点，Rf值由大 到小分别是大黄酚与大黄素甲醚的混合物、 大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。置氨蒸汽 中熏后，斑点变为红色。
大黄中主要有效成分及结构
大黄中化学成分复杂，主要以蒽醌衍生物为主。 包括游离蒽醌、蒽醌苷、二蒽酮苷、鞣质等。
游离蒽醌主要有大黄酚、大黄素、大黄素甲醚、
芦荟大黄素、大黄酸。
R1
R2
大黄酚
CH3 H
大黄素
CH3 OH
大黄素甲醚 CH3 芦荟大黄素 H
大黄酸
H
OCH3 CH2OH COOH
提取分离原理
吸附剂：硅胶—CMC 展开剂：石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯＝7：3
薄层的制备
2g硅胶G + 20ml 0.25% CMC ，混合均匀
取20cm×5cm的光滑洁净玻璃板一块，水平放置， 将已调制好的硅胶G均匀地涂布于玻璃板上
取一洁净的玻璃棒，两手用拇指，食指，中指控 制住玻璃棒的两端并始终保持玻璃棒与桌面平行。 调整玻璃棒高度使之与玻璃板间的距离约为1.0 mm
药品：
大黄20g、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓硫酸、浓盐酸、 浓硝酸、乙醚、石油醚、乙酸乙酯、硅胶G、CMC
四、实验步骤
1.粉碎 2.酸解 3.水洗、抽滤、干燥 4.索式提取 5.萃取结晶 6.硅胶薄层层析 7.纤维素柱层析
1.粉碎
将大黄药材切片剪碎，用粉碎机粉碎得到 大黄粗粉，经80目筛子得到大黄细粉。
待提取物质逐渐从样品中溶 解到抽提剂中。当样品管中 的抽提剂液面逐渐上升到与 回流管（虹吸管）上端齐平 时，在虹吸作用下，携带所 提取的物质一同从侧面的虹 吸管流入烧瓶中即完成一轮 循环。
实验装置
提取过程
滤饼经干燥后，置索氏提取器中以乙醚约 150ml回流提取3~4小时，得乙醚提取液。
注意颜色 的变化 喔～
大黄中蒽醌类的提取与分离
指导老师：肖靓
小老师： 罗天明 潘少涛 武雪莹
大黄中蒽醌类的提取与分离
1
实验目的
2
实验原理
3
实验材料
4
实验步骤
5
思考题
一、实验目的
1
2
学习目的 知识要求Байду номын сангаас
3
能力要求
掌握大黄中蒽醌类 化学成分的提取分 离技术。
掌握大黄中蒽醌类 化合物的提取、分 离原理。
熟悉大黄中蒽醌类 化合物的结构及主 要理化性质。
五、思考题
1.简述大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的酸 性与结构的关系。
2. pH梯度萃取法的原理是什么？如何利用 该方法分离大黄中的5种游离羟基蒽醌化合 物？
3.大黄中5种游离羟基蒽醌化合物的极性与 结构的关系如何？薄层鉴别时常用何类吸 附剂？Rf值顺序如何？
大黄中的蒽醌苷经 酸水解成游离蒽醌 苷元，苷元可溶于 乙醚而被提取出来。 再利用各种蒽醌类 化合物酸性不同， 采用pH梯度萃取法 分离得到各种蒽醌 类化合物。
三、实验材料
器材：
500ml圆底烧瓶、烧杯、滴管、橡皮管、球形冷凝 管、30cm层析缸、标本瓶、索氏提取器一套、 250ml分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、普通滤纸、 薄层板、喷雾器、广泛PH试纸