猪小肠粘膜上皮细胞的分离及体外原代培养模型的建立

离了猪 小肠粘膜 上 皮细胞 （ｎｅｔ ａ ｅ ｉ ｅ ａ ｃｉ， Ｅ ） Ｉｔ ｉ ｌ ｐｔ ｌ ｌ ｅｌ Ｉ Ｃ 且在体 外培 养传代 ， ｓｎ ｈ ｉ ｓ 并采 用碱 性磷 酸 酶和 角
蛋 白免 疫学试验鉴 定 ， 果表 明 ： 结 体外培 养的猪 ＩＣ在 Ｄ Ｅ Ｆ ２培养基 中， Ｅ Ｍ Ｍ— １ 细胞在 １２ｄ贴壁 ，～ ～ ５６
Ｉ７ Ｘ ０型倒 置 生 物显 微镜 （ｌ ｕ 公 司 ， Ｏｙ ｓ ｍｐ 日本１５ ０ Ｒ ；８４ 型高速 大容量 冷冻离 心机（ｐ ｅ ｄｒ公 司， 国） Ｗ— Ｅ ｐｎｏ ｆ 德 ； Ｓ Ｃ Ｆ型超 净 丁作 台（ 州净 化 ， 国）ＨＶ 一 ０型高 卜１ 苏 中 ； Ｅ５
压 蒸 汽 灭 菌 锅 （ ＲＡＹＡＭＡ 公 司 ， ＇ ＨＩ 日本） Ｇ — ０ ０型 ； Ｆ Ｍ２ ０
细胞 系的研 究结果 来解 释正常细 胞的行 为 ， 显有其 酶标仪 （ 明 山东高密 彩虹仪器公 司 ）Ｃ １ １２ Ｂ型鼓 风 ；Ｓ ０ — Ａ 不足 。 原代培养 是从供体 取得组织 绌胞 后在体 外进 行 干燥箱 （ 庆试验设备 厂）７ — 型磁 力加热搅 拌器ｆ 重 ；９ １ 江
的 首 次培 养 ，原 代 培 养 的 细 胞 生 物 学 特 性 变 化 较 少 ．
￥ ２ ８８ 中 图分 类 号
肠卡 膜上皮 细胞（ ｔｓｎｌ ｐｔｅ ａ ｃｌ ， 占 Ｉ ｅｔ ａ ｅ ｉ ｌ ｌ ｅ ｓ ｍＯ是 省 原 种 猪 场 ｎ ｉ ｈ ｉ ｌ
肠 道 的 重 要 功 能 细 胞 ， 与肠 道 食 糜 的 消 化 、 收 、 参 吸 免 疫 屏 障 和应 激 反 应 等 ， 与 肠 道 的 内 、 分 泌 功 能 关 并 外 系 １ 分 密 切 长 期 以来 ， 研 究 Ｉ Ｃ的 生 物 学 功 能 、 在 Ｅ 细 胞 增 殖 和分 化 的调 控 因素 ， 质 吸 收 与 代 谢 等 多 采 用 物 肠 道 肿 瘤 细 胞 系 为试 验 模 型 【 ｌ １ 。然 而 癌 细 胞 是 非 正 常 的 细 胞 ， 生 理 特 征 明 显 不 同 于 常 细 胞 ， 纯 由 癌 其 单 １ 主 要 仪 器 设 备 与 试 剂 ． ２ Ｎ 一 ５ ０型 Ｃ 胞 培 养 箱 Ｎ ａ ｅ 司 ， 国） Ｕ ２０ Ｏ细 － ｕｉ 公 ｒ 美 ；
ｄ ｆ管 以 １ｍ ／ 分装 ，２ 保 存 备用 。Ｄ Ｅ Ｆ ２ ｏ ｌ 管 一 ０ｃ ｃ Ｍ Ｍ— Ｉ ＭＥ Ｆ ２不完 全培 养基加 １％的胎 ０ 职 爱 民 ，河 南 省农 业 科 学 院 农 业 部 动 物 免 疫 学重 点 开放 完全培 养基为 Ｄ Ｍ— １
实验 室， 士， 博 副研 究员，５ ０２ 河南省郑州市农业路 １ ４００ ， 号。 学动物科学学院 、
０２ ｔ ．２Ｉ ． ｍ过滤除菌 ， 分装 ， Ｃ ４ｑ避光 保存备用 。 Ｉ １ｇ ｌ型
胶 原 酶 干 粉 溶 于 １０ｍ 上 述 配 好 的 Ｄ Ｍ— １ ０ ｌ ＭＥ Ｆ ２不 完 全 培 养 液 ，．２ ｍ 微 孔 滤 膜 过 滤 除 菌 ，． ｍ ｐ ｅ ０２ １ ｌ ｐｎ ５ Ｅ
内关 于动物体 细胞 原 代培养 的报 道 多集 中住其 它动
物 身 【 ， 天 于 猪 ＩＣ原 代 培 养 的 方 法 一 直 属 于 空 叫 ｆ 而＿ Ｅ ｈ 。 试 验 的 目的就 是 通 过 机 械 和 酶 消 化 结 合 的方 法 本 建立 猪 Ｉ Ｃ原 代 培 养 的 系 统 ， 猪 肠 道 营 养 的 研 究 提 Ｅ 为 供 新 的 试 验 材 料
１ 试 验 材 料
丙酮 、 硝酸钙 、 硫酸镁等试 剂均为 国产 、 分析纯 。
２ 试 验 方 法
２１ 猪 ＩＣ 的分 离 培 养 ． Ｅ
２１１ 主 要 试 剂 配 制 ．．
按 照 说 明 书 配 制 Ｄ Ｅ Ｆ ２不 完 全 培 养 基 ． Ｍ Ｍ— １
１Ｉ 试 验 动 物 ． 新 生 ＊ ｘ长×久 元 杂 交 仔 猪 （ 吮奶 ） 购 于 广 东 ｋ 术 。
ｊ 究 研
《 饲料工业》 ２ １ ・０ ０年第 ３ 琶第 １ １ 期
¨。
ｊ 肠 膜 上皮 细胞 的分 离及 俸 外 原代 培 养模 型的 蚕 ｊ ！ ｌ 智 粞 琶
职要是小肠粘膜加胶 原酶 Ⅱ消化 的方 法 ， 用新 生未吮 乳仔猪 小肠组 织 ， 采 成功地 分
收 稿 日期 ：０ ９ ｌ — ６ ２０ 一 ０ ２
（形成 细胞 克隆 ，～ ｌ Ｊ ９ Ｊ ｄ融合 成片 ； 碱性磷 酸酶 和生物 素标记 的细胞 角蛋 白抗 体鉴定 结果显 示 ９ ％培 ０
养的细胞 为阳性 ， 分别从 生化的 角度证 明和 细胞 生物 学角度鉴 定 了所培 养的 细胞 为 ＩＣ Ｅ 。
关键词 猪； 小肠粘膜 细胞 ； 原代培 养
最 能 反 映 和 接 近 体 内 生 长 特 性 ， 一 种 良好 的 试 验 载 是
苏金 坛 荣 华仪 器 总 厂１Ｏ ｉ ４ ０ ＋ ： ｒ ｎ ２ Ａ 型酸 度计 Ｔ ｅｍ ｏ ｈｒｏ
Ｅｅ ｔ ｎ公 司 ， 国 ）Ｄ Ｍ 培 养 基 、 牛 血 清 、 酶 ｌ ｒ ｃｏ 美 ； ＭＥ 胎 胰
体。 同外 存 １ ９ 年就有猪肠细胞原代 培养的报道 ， ９３
其 它 类 型 的 猪 组 织 细 胞 原 代 培 养 的报 道 也 不 少 ， 国
和胶原 酶 Ⅱ￣（ ｉｉ 公 司）标 准胎 牛血清 （ ６ｂｃ ｏ ， 杭州 四季 青公 司 ）青霉 素 、 霉 素 、 一 ， 链 ｐ 甘油磷 酸 钠 、 酸钴 、 硝 硫 化铵（ ｇ ａ 司）Ｎ Ｃ 、 Ｃ 、ａ ２Ｏ ・２ ２ ＫＨ Ｏ 、 Ｓ ｍ 公 ｉ ， ａ １ １ Ｈ， ４１ ＨＯ， ２ Ｐ ４ Ｋ Ｎ Ｐ ，