不同产地蒙古黄芪中黄芪甲苷_黄芪_省略_苷_和黄芪皂苷_含量的比较与分析_史静超

HQ03
HQ10 甘肃临洮连弯儿乡 HQ12 吉林汪清罗子沟镇 HQ14 宁夏隆德神林乡
HQ04
HQ05
HQ06
山西省浑源李家庄村 HQ13 宁夏隆德陈靳乡
HQ07
HQ08

HQ15 内蒙古固阳银号乡
HQ16 内蒙古固阳怀朔镇
共 购买 5 个省份包括山西、 内蒙古、 甘肃、 吉林
和宁夏产 16 批蒙古黄芪药材。全部药材样品均为 2-3 年仿野生种植， 经山西中医学院植物资源学尚彩 玲讲师鉴定为豆科植物蒙古黄芪 A. membranaceus （Fisch.） Bge. var． mongholicus （Bge.） Hsiao 的 干 燥根， 50℃烘干， 粉碎过 4 号筛备用。黄芪药材详细 情况见表 1。 2 方法与结果 5 μm） DIKMA Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm， 色 谱 柱， 流动相为乙腈 （A） -水 （B） ， 梯 度 洗 脱： 0-8 min， 30%-41%A； 8-12 min， 41%-45%A； 1214 min， 45%A； 14-16 min， 45%-65%A； 16-18 min， 65A%； 18-20 min， 65%-30%A； 流速为 1 mL · min -1， 柱温为 30℃； ELSD 检测器条件： 漂移管温度 90℃， 撞击器关闭。在上述色谱条 空气流速 2.8 L· min -1， 件下， 分离良好， 结果见图 1。 2 . 2 对照品溶液的制备
表 １ 不同产地蒙古黄芪药材表 编号 HQ01 HQ02 样品产地 山西应县白马石乡 山西五寨胡会乡 山西浑源官儿乡 山西浑源东关村 山西繁峙西石槽村 山西繁峙重沟村 甘肃陇西巩昌镇 编号 样品产地 HQ09 甘肃省岷县周寨村 HQ11 吉林柳河安口镇
进样器， Alltech ELSD 检测器， EZ-chrom 色谱工作 站） （安捷伦科技有限公司） ； 电子分析天平 （Sartorius BT25S） （赛多利斯科学仪器有限公司） ； KQ 5200V 型超声波清洗器 （昆 山 市 超 声 仪 器 有 限 公 司） ； RE-52 旋 转 蒸 发 仪 （上 海 亚 荣 生 化 仪 器 厂） ； ELGA 纯水-超纯水系统 （威立雅水处理技术有限公司） 。 1 . 2 试剂
黄芪皂苷Ⅱ y=0.829 7x+1.273 1
黄芪皂苷Ⅲ y=0.803 2x+1.759 5
0.506-3.13
0.016-1.38
0.999 6
0.999 2
表 ３ 蒙古黄芪中黄芪甲苷、 黄芪皂苷Ⅰ、 黄芪皂苷Ⅱ和黄芪皂苷Ⅲ的加样回收率情况 （n＝６） 成分 样品含量 /mg 加标量 /mg 样品量 /g 测定量 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD/% 1 0.309 2 0.309 3 0.309 3 0.309 2 0.309 3 2 2.942 7 2.942 5 2.942 6 2.942 8 3 1.632 4 2.942 7 0.309 3 0.123 7 0.123 7 0.154 6 0.154 6 0.185 5 1.177 1 1.471 2 1.471 2 1.765 7 0.652 8 0.652 8 0.816 2 0.816 2 0.979 6 0.043 9 0.054 9 0.054 9 0.065 9 0.065 9 0.979 6 1.765 7 0.185 5 2.999 8 2.999 9 3.000 0 2.999 8 3.000 2 3.000 0 2.999 9 0.429 2 0.460 5 0.460 0 0.491 3 0.493 0 4.096 9 4.094 9 4.368 8 4.413 6 4.686 6 2.282 1 2.289 3 2.454 9 2.429 8 2.599 6 2.619 8 0.152 8 0.164 5 0.163 1 0.175 6 0.174 3 0.153 2 4.708 9 0.427 8 96.96 97.83 97.51 98.12 98.06 97.89 96.95 99.99 98.76 99.52 100.3 99.68 1.3 99.05 98.61 1.3 95.85 97.55 1.2
黄 芪 为 豆 科 植 物 蒙 古 黄 芪 Astragalus membranceus（Fisch.）Bge. var. mongholicus（Bge.） Hsiao 或膜荚黄芪 A. membranaceus（Fisch.） Bge. 的 干燥根， 为传统常用大宗中药材 。黄芪在中国主要 产于山西、 内蒙古、 甘肃、 宁夏、 黑龙江、 吉林和河北等 地， 其中蒙古黄芪为主流品种。研究表明黄芪中主要 有效成分包括皂苷类、 黄酮类、 多糖类以及氨基酸类 化合物。黄芪的药理作用包括增强机体免疫力、 抗病 毒以及对心脑血管系统的作用。皂苷类化合物作为 黄芪药材的主要活性成分， 在对心脑血管疾病方面有 主要表现在对心肌重构的保护、 对心肌功 诸多功效 ，
-1 -1 -1
明方法重复性良好。 2 . 4 . 5 加样回收率试验
称取已知含量样品 6 份， 每份 3 g， 精密称定， 分
别加入高、 中、 低浓度对照品， 按供试品溶液制备方 法制备， 按 “2.1”项下色谱条件测定， 计算平均回收 率。4 种皂苷平均回收率均符合要求， 表明该方法 准确度良好。结果见表 3。 2 . 5 样品含量测定
乙腈 （色谱纯， 天津科密欧化学试剂有限公司） ，
其 它 试 剂 均 为 分 析 纯。 供 含 量 测 定 用 对 照 品 黄 芪 甲苷 （批号 : 110781-200613）购于中国食品药品检 定研究院； 黄芪皂苷Ⅰ （批号 :120610） 、 黄芪皂苷Ⅱ （批 号 :120629） 、 黄芪皂苷Ⅲ （批 号 : 120723）购 于 上海将来实业有限公司。 1 . 3 药材
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苷Ⅱ和黄 芪 皂 苷 Ⅲ 的 对 照 品 储 备 液， 分别加甲醇 稀 释。 得 到 黄 芪 甲 苷 对 照 品 溶 液 质 量 浓 度 分 别 为 0.009 24、 0.020 4、 0.030 6、 0.040 8、 0.061 2、 0.081 6、 黄芪皂苷Ⅰ对照品溶液质量浓度分别为 0.102 g · L ； 0.078 9、 0.118、 0.197、 0.276、 0.394、 0.518、 0.878 g · L ； 黄 芪 皂 苷 Ⅱ 对 照 品 溶 液 质 量 浓 度 分 别 为 0.052 7、 0.084 6、 0.113、 0.141、 0.197、 0.282、 0.313 g · L ；黄 芪皂苷Ⅲ对照品溶液质量浓度为 0.001 61、 0.002 3、 0.010 9、 0.046、 0.069、 0.115、 0.138 g · L -1。 按 上 述 色谱条件， 分别进样 10 µ L。以峰面积的自然对数 为纵坐标 （y） ， 对照品溶液进样量的自然对数为横 坐标 （x） ， 进行线性回归。 结果表明， 4 种皂苷的线 性关系良好， 结果见表 2。 2 . 4 . 2 精密度试验
N7
"

N7






UNJO





2 . 1 色谱条件

#

分别精密称取黄芪甲苷、 黄芪皂苷Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ对





UNJO





照 品 适 量， 加 甲 醇 配 制 成 含 黄 芪 甲 苷 0.204 g· L -1、 黄 芪 皂 苷 Ⅱ 0.313 g· L -1、 黄 芪 皂 苷 Ⅰ 0.878 g · L -1、 黄芪皂苷Ⅲ 0.230 g · L -1 的对照品储备液。
取 黄 芪 甲 苷、 黄 芪 皂 苷 Ⅰ、 黄芪皂苷Ⅱ和黄芪
黄芪皂苷Ⅰ y=1.390 1x-1.702 7
皂 苷 Ⅲ 质 量 浓 度 分 别 为 0.183、 0.347、 0.234、 0.192 重 g· L -1 的 混 合 对 照 品 溶 液， 复 进 样 6 次， 进 样 量 10 µ L。 结果表明， 黄芪甲苷、 黄芪皂 苷 Ⅰ、 黄芪皂苷Ⅱ和黄芪皂 苷 Ⅲ 的 峰 面 积 RSD 分 别 为 1.7%、 1.8%、 1.6%、 2.0%， 表 明本方法精密度良好。 2 . 4 . 3 供试品溶液稳定性试验
取各产地 16 批蒙古黄芪， 按供试品溶液制备方
表 ２ 蒙古黄芪中黄芪甲苷、 黄芪皂苷Ⅰ、 黄芪皂苷Ⅱ和 黄芪皂苷Ⅲ的线性考察 （n＝７） 对照品 黄芪甲苷 线性方程 y=1.122x+0.704 8 线性范围 /µg 0.092-1.02 0.789-8.78 r值 0.999 5 0.999 7
98.58%， RSD 分别为 1.2%、 1.3%、 1.3%、 （r = 0.999 2） 范围内， 平均回收率分别为 97.55%、 98.61%、 99.68%、 种皂苷含量为指标， 可将不同省份蒙古黄芪明显区分开。结论： 本方法简单、 快捷、 准确， 能够更加直接地反 映出不同产地蒙古黄芪原药材的质量状况， 为蒙古黄芪药材的质量控制研究提供了新思路。 蒙古黄芪 黄芪皂苷 产地 HPLC-ELSD 关键词： R284.1 文献标识码： A doi： 10.11842/wst.2015.05.018 中图分类号： 而同时采用 4 1.2%。聚类分析结果表明， 单一采用黄芪甲苷为指标的聚类分析无法区分各省份蒙古黄芪，
[2] [1]
能的影响、 对血管的作用、 对血流动力的影响等方面
[3-8]
。正是基于黄芪药材中皂苷类成分的诸多药理活
性， 国内学者对不同产区所产黄芪药材进行皂苷类成 分的含量测定研究也较多[9-13]。但所选样品除产地不 同外， 还存在生长年限、 生长方式的差异， 或是原药材 和经过炮制的饮片对比皂苷类成分的含量， 或存在含 量测定指标单一等问题。为系统阐明中国各主要产 区蒙古黄芪中皂苷类成分的含量差异， 准确反映各产 区蒙古黄芪的质量状况， 本实验尽量排除其它干扰因 素， 选取 16 批不同产地 2-3 年仿野生种植蒙古黄芪 原药材， 同时测定了 4 种特征皂苷类成分： 黄芪甲苷、 黄芪皂苷Ⅰ、 黄芪皂苷Ⅱ、 黄芪皂苷Ⅲ的含量， 并对含 量测定结果进行了聚类分析， 为多指标控制蒙古黄芪
＊＊ 通讯作者： 王永辉， 副教Leabharlann Baidu， 主要研究方向： 方药作用物质基础与中药药理研究。
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世界科学技术—中医药现代化★中药研究
收稿日期： 2014-05-08 修回日期： 2015-01-12 ＊ 山西省科技厅科技攻关项目 （20120313015） ： 山西特色药材规范化种植技术研究——黄芪种子与黄芪药材的主要有效成分与药理作用比较 研究及相关产品研制开发， 负责人： 王永辉； 科学技术部 “十二五” 国家科技支撑计划项目 （2011BAI07B01） ： 华北地区黄芪规范化种植基地优 化升级及系列产品综合开发研究， 负责人： 周然。
质量以及指导蒙古黄芪的 GAP 种植提供了科学依据。 1 仪器与试药 1 . 1 仪器 日立高效液相色谱仪 （5110 型泵， 5210 型自动
2 . 3 供试品溶液的制备
准确称取蒙古黄芪药材 3 g， 置索氏提取器中加
适量甲醇冷浸 12 h， 加甲醇至 150 mL 于 80℃水浴 上加热提取 6 h， 减压浓缩提取液至干， 残渣加 70% 甲醇溶液定容至 10 mL， 备用。 2 . 4 方法学考察 2 . 4 . 1 线性关系考察 取 “2.2”项 下 黄 芪 甲 苷、 黄 芪 皂 苷 Ⅰ、 黄芪皂
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不同产地蒙古黄芪中黄芪甲苷、 黄芪皂苷Ⅰ、 黄芪 皂苷Ⅱ和黄芪皂苷Ⅲ含量的比较与分析＊
史静超， 李浩铮， 王永辉＊＊， 周 然， 刘必旺
（山西中医学院 太原 030024） 黄芪皂苷 目的： 采用 HPLC-ELSD 法测定了 16 批不同产地蒙古黄芪中黄芪甲苷、 黄芪皂苷Ⅰ、 摘 要： 5 μm） 色谱柱， 乙腈 - 水为流 Ⅱ、 黄芪皂苷Ⅲ的含量。方法： 使用 DIKMA Diamonsil C18（150 mm×4.6 mm，
柱温： 30℃。ELSD 检测器参数： 漂移管温度 90℃， 空气流量 2.8 L min-1。 动相， 梯度洗脱， 流速： 1 mL min -1， · · 黄芪甲苷、 黄芪皂苷Ⅰ、 黄芪皂苷Ⅱ和黄芪皂苷Ⅲ在进样量分别为 采用 SPSS 16.0 进行聚类分析。结果： 0.093 2-1.02 µg（r = 0.999 5） ，0.789-8.78 µg（r = 0.999 7） ，0.506-3.13 µg（r = 0.999 6） ， 0.016 1-1.38 µg
注： 1. 黄芪甲苷， 2. 黄芪皂苷Ⅲ， 3. 黄芪皂苷Ⅱ， 4. 黄芪皂苷Ⅰ。
图 1 对照品（A）和黄芪药材样品（B）HPLC-ELSD 图
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