肿瘤浸润淋巴细胞在人黑色素瘤组织中的形态学观察(一)

肿瘤浸润淋巴细胞在人黑色素瘤组织中的形态学观察(一)

作者：谢遵江，贺业春，贾立敏，刘颖，刘丽，郑金华

【摘要】目的探讨人黑色素瘤组织中肿瘤浸润淋巴细胞（tumorinfiltratinglymphocyte，TIL）的形态学特征。方法采用光镜、透射电镜和免疫组化方法观察9例人皮肤黑色素瘤组织中TIL的分布及形态变化。结果肿瘤浸润淋巴细胞主要分布在癌周区，病变早期，TIL数量多、集中分布；病变晚期，TIL数量少、散在分布。病变早期TIL数量明显高于病变晚期（P0.01）。电镜下，可见肿瘤浸润淋巴细胞核大，胞质少，核较圆。TIL与肿瘤细胞有接触。结论本试验提示黑色素瘤组织中TIL数量多少与肿瘤的进展有关。TIL与肿瘤细胞关系密切。

【关键词】黑色素瘤；肿瘤浸润淋巴细胞；形态学【Abstract】ObjectiveTostudythemorphologicalcharacteristicsoftumorinfiltratinglymphocytes(TIL)intumortiss ueofhumanmelanoma.MethodsThedistributiveandmorphologicalchangesofTILwereobservedbylig htmicroscopy，electronmicroscopyandimmunohisochemistry.ResultsTILmainlyappearedinthetumor-surrounding tissue.ThenumberofTILwasmoreandconcentrateddistributionintheearlierstage，butitwasalittleanddecentralizeddistributioninthelaterstage.ThenumberofTILwasmuchmoreinthee arlierstagethaninthelaterstage(P0.01).Underelectronmicroscope，thenucleusofTILwasbig.ThecytoplasmofTILwaslittle.Thenucleuswasroundinshape.Thereweretheco ntactsbetweenTILandtumorcell.ConclusionThenumbersofTILarerelatedtotheprogressoftumor.The reisacloserelationshipbetweenTILandtumorcell.

【Keywords】melanoma；tumorinfiltratinglymphocyte；morphology

肿瘤浸润淋巴细胞（tumorinfiltratinglymphocyte，TIL）是以T细胞为主的一个异质性淋巴细胞群体。有关TIL的研究多集中在肿瘤生物学治疗方面，以及在肿瘤组织中的浸润程度对肿瘤病人生存预后影响的研究〔1〕，但对有关TIL的形态学研究较少。本文通过CD3在黑色素瘤组织中的表达和电镜方法对人黑色素瘤组织中浸润淋巴细胞的形态进行研究，为研究TIL 的功能提供形态学基础。

1材料与方法

1.1试验材料人黑色素瘤标本9例，取自早晚期不同的病变阶段的手术病人。由哈尔滨医科大学附属第一、第二医院提供。根据临床表现和病理特征及临床病理诊断，将黑色素瘤分为病变早期（5例）和病变晚期（4例）两部分。

1.2取材方法根据病人病情（早、晚期），临床手术切取黑色素瘤新鲜组织标本，当即以双馏水清洗，再以0.2mol/L磷酸缓冲液冲洗，取黑色素瘤组织，一部分经10%福尔马林液固定，制成石蜡切片，HE染色；另一部分经3%戊二醛固定，电镜样品制备，光镜和电镜观察。1.3免疫组织化学方法黑色素瘤周组织经4%福尔马林液固定后，制成4μm石蜡切片。切片经脱蜡后用PBS漂洗，一抗采用兔抗人CD3抗体（武汉博士德生物工程有限公司），二抗采用山羊抗兔IgGSABC试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司），按使用说明书程序操作。1.4常规透射电镜观察常规透射电镜样品制备，透射电镜观察。

1.5统计学方法对病变早期和晚期CD3免疫组化染色切片进行观察，选择CD3阳性细胞最多处，观察5个高倍视野（×40）进行阳性细胞计数，并进行统计学处理。

2结果

2.1免疫组化（CD3）观察每例标本均可见CD3阳性细胞，主要分布在乳头层和癌周围及癌巢内。CD3表达在T淋巴细胞上。被染成棕黄色的TIL呈圆形，胞浆少，核大，其分布均匀、密集。在病变早期，TIL数量多，以集中分布为主。病变晚期，TIL数量少，多数散在分布，少数呈集中分布。通过在病变早期（72.31±5.64）和晚期（2

3.72±

4.53）TIL数量的比较，两者之间差异有非常显著性，P0.01。

2.2透射电镜观察癌早期，TIL分布范围广，数量多，聚集成堆。TIL形态不规则，但大体可分成两种：一种具有一般淋巴细胞的典型构造，核大，异染色质致密呈块状，核型较圆，胞浆少，除游离核糖体、线粒体外，其他细胞器较少；另一种TIL核呈圆形，或一侧凹陷成肾形及不规则形，胞浆较多，内有丰富内质网、溶酶体、线粒体及颗粒，呈活化状态，趋于浆细胞化。TIL还彼此接触。TIL呈环状包绕癌细胞，且TIL与癌细胞密切接触。

癌晚期，可见到淋巴细胞与肿瘤细胞融合，TIL进入癌细胞内，无膜结构，细胞核靠近，癌细胞线粒体肿胀。活化的TIL变形与癌细胞接触，并可见淋巴细胞形成，环绕癌细胞。