肿瘤浸润淋巴细胞
肿瘤浸润淋巴细胞TIL的体外扩增方法[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810639633.5(22)申请日 2018.06.20(71)申请人 淮安诺康生物科技有限公司地址 223005 江苏省淮安市淮安经济技术开发区小康城四区60号(72)发明人 何英广 马思航 (51)Int.Cl.C12N 5/0783(2010.01)(54)发明名称肿瘤浸润淋巴细胞TIL的体外扩增方法(57)摘要本发明公开了肿瘤浸润淋巴细胞TIL的体外扩增方法，步骤为：步骤S1、TIL细胞分离：取癌旁组织剪碎浸入胶原酶溶液消化，过滤，PBS冲洗，收集滤液，离心，弃上清，加入PBS制成细胞悬液，用淋巴细胞分离液作不连续密度梯度离心，离心结束后收取下层界面的淋巴细胞，经PBS清洗后，按1×106/mL的浓度悬浮于含10％人AB型血清和IL-2的培养基内培养，每3～5d换液一次；步骤S2、培养和扩增：当孔里的淋巴细胞生长至1×107时，将其转入含抗CD3单抗、抗CD28单抗和药物的培养瓶内孵育，24h后加入IL-2连续培养，每隔2～3d半量更换含同等浓度IL-2的新鲜培养基培养22～25d。
权利要求书1页 说明书6页 附图2页CN 108753718 A 2018.11.06C N 108753718A1.一种体外扩增肿瘤浸润淋巴细胞TIL的方法，其特征在于：正式培养前使用含有抗CD3单抗、抗CD28单抗和曼宋酮C或曼宋酮G的培养基孵育24h。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，具体步骤为：步骤S1、TIL细胞分离取癌症患者手术切除的新鲜癌旁组织浸泡于PBS中，剔除周围的血块、脂肪及坏死组织，PBS清洗一遍，剪成1mm 3大小，浸入0.1μg/mL的IV型胶原酶溶液中，37℃水浴消化2h。
消化完毕后用100μm孔径的网筛过滤，用PBS冲洗组织块，收集滤液。
肿瘤浸润淋巴细胞治疗胆道癌研究进展
ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２３．０５．００５肿瘤浸润淋巴细胞治疗胆道癌研究进展万雪帅１，谢小兵２，赵海涛１，谷为岳２，张恒辉３１中国医学科学院北京协和医院肝脏外科，北京１００７３０；２卡替医疗技术有限公司，北京１０１１１１；３北京臻知医学科技有限公司，免疫细胞治疗北京市工程研究中心，北京１０２６００通信作者：赵海涛，ｚｈａｏｈｔ＠ｐｕｍｃｈ．ｃｎ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００２－３４４４－８０４４）摘要：肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）是存在于肿瘤实质和间质内的以Ｔ淋巴细胞为主的一类异质性淋巴细胞群体。
将其从肿瘤组织消化和分离出来，经体外培养活化和扩增后，回输到患者体内可以起到杀伤肿瘤细胞的作用。
ＴＩＬ具有Ｔ淋巴细胞抗原受体的高度多样性、优异的浸润肿瘤部位能力以及低毒性等优势，被认为有希望用于治疗恶性实体肿瘤。
目前，ＴＩＬ疗法已在多种实体瘤中作为二线治疗进行临床试验并取得初步疗效。
虽然目前尚无ＴＩＬ应用于胆道癌单一病种的临床队列报道，近期的多癌种临床报道提供了少数接受ＴＩＬ治疗的胆道癌患者的疗效信息，初步证实了安全性和有效性。
但由于胆道癌一般被认为是大多数效应Ｔ淋巴细胞被隔离在肿瘤边缘的免疫排斥性肿瘤，ＴＩＬ在胆道癌中的抗肿瘤作用仍难以预测。
尝试与不同抗肿瘤方法的联合治疗以及开发新技术修饰细胞以增强ＴＩＬ抗肿瘤能力是未来可能突破的发展方向。
关键词：淋巴细胞，肿瘤浸润；胆道肿瘤；治疗学基金项目：北京协和医院中央高水平医院临床科研专项（２０２２－ＰＵＭＣＨ－Ｂ－１２８）；中国医学科学院临床与转化医学研究专项“滚动支持项目”（２０２２－Ｉ２Ｍ－Ｃ＆Ｔ－Ａ－００３）；中国医学科学院医学与健康科技创新工程２０２１年“揭榜挂帅”项目（２０２１－Ｉ２Ｍ－１－０６１，２０２１－Ｉ２Ｍ－１－００３）；希思科－默沙东肿瘤研究基金项目（Ｙ－ＭＳＤＺＤ２０２１－０２１３）；希思科－恒瑞肿瘤研究基金项目（Ｙ－ＨＲ２０１９－０２３９，Ｙ－ＨＲ２０２０ＭＳ－０４１５，Ｙ－ＨＲ２０２０ＱＮ－０４１４）；国家高层次人才特殊支持计划（万人计划）Ｒｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｕｍｏｒ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓｉｎｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｂｉｌｉａｒｙｔｒａｃｔｃａｎｃｅｒＷＡＮＸｕｅｓｈｕａｉ１，ＸＩＥＸｉａｏｂｉｎｇ２，ＺＨＡＯＨａｉｔａｏ１，ＧＵＷｅｉｙｕｅ２，ＺＨＡＮＧＨｅｎｇｈｕｉ３．（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬｉｖｅｒＳｕｒｇｅｒｙ，ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７３０，Ｃｈｉｎａ；２．ＣｈｉｎｅｏＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓＣｏ．，Ｌｔｄ．，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０１１１１，Ｃｈｉｎａ；３．ＢｅｉｊｉｎｇＩｍｍｕｐｅｕｔｉｃｓＭｅｄｉｃｉｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｏ．，Ｌｔｄ．，ＢｅｉｊｉｎｇＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆＩｍｍｕｎｏｃｅｌｌｕｌａｒＴｈｅｒａｐｙ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０２６００，Ｃｈｉｎａ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＺＨＡＯＨａｉｔａｏ，ｚｈａｏｈｔ＠ｐｕｍｃｈ．ｃｎ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００２－３４４４－８０４４）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｕｍｏｒ－ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ（ＴＩＬｓ）ａｒｅａｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓｓｕｂｓｅｔｏｆｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ｍａｉｎｌｙＴｃｅｌｌｓ，ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｔｕｍｏｒｐａｒｅｎｃｈｙｍａａｎｄｓｔｒｏｍａ．Ａｆｔｅｒｂｅｉｎｇｄｉｇｅｓｔｅｄａｎｄｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅａｎｄｔｈｅｎｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎｖｉｔｒｏｆｏｒａｃｔｉｖａｔｉｏｎａｎｄｍｕｌｔｉｐｌｉｃａｔｉｏｎ，ｉｔｃａｎｂｅｉｎｆｕｓｅｄｂａｃｋｉｎｔｏｔｈｅｐａｔｉｅｎｔ’ｓｂｏｄｙｔｏｋｉｌｌｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ．ＴＩＬｓｈａｖｅｔｈｅａｄｖａｎｔａｇｅｓｏｆｈｉｇｈｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴＣＲ，ｅｘｃｅｌｌｅｎｔａｂｉｌｉｔｙｔｏｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｉｎｔｏｔｕｍｏｒｓｉｔｅｓ，ａｎｄｌｏｗｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄａｒｅｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄｐｒｏｍｉｓｉｎｇｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｍａｌｉｇｎａｎｔｓｏｌｉｄｔｕｍｏｒｓ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ＴＩＬｔｈｅｒａｐｙｈａｓｂｅｅｎｔｅｓｔｅｄａｓａｓｅｃｏｎｄ－ｌｉｎｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｉｎａｖａｒｉｅｔｙｏｆｓｏｌｉｄｔｕｍｏｒｓａｎｄｈａｓａｃｈｉｅｖｅｄｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｒｅｓｕｌｔｓ．ＡｌｔｈｏｕｇｈｔｈｅｒｅｉｓｓｔｉｌｌｎｏｃｌｉｎｉｃａｌｃｏｈｏｒｔｒｅｐｏｒｔｏｎｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＴＩＬｓｉｎｂｉｌｉａｒｙｔｒａｃｔｃａｎｃｅｒ（ＢＴＣ），ｒｅｃｅｎｔｃｌｉｎｉｃａｌｒｅｐｏｒｔｓｏｎｍｕｌｔｉｐｌｅｃａｎｃｅｒｓｈａｖｅｐｒｏｖｉｄｅｄｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｎｔｈｅｅｆｆｉｃａｃｙｏｆＴＩＬｔｈｅｒａｐｙｉｎａｓｍａｌｌｎｕｍｂｅｒｏｆＢＴＣｐａｔｉｅｎｔｓ，ｗｈｉｃｈｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｃｏｎｆｉｒｍｅｄｔｈｅｓａｆｅｔｙａｎｄｅｆｆｉｃａｃｙｏｆＴＩＬｔｈｅｒａｐｙ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｓｉｎｃｅＢＴＣｉｓｇｅｎｅｒａｌｌｙｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄａｎｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙｒｅｐｕｌｓｉｖｅｔｕｍｏｒｉｎｗｈｉｃｈｍｏｓｔｅｆｆｅｃｔｏｒＴｃｅｌｌｓａｒｅｓｅｑｕｅｓｔｅｒｅｄａｔｔｈｅｔｕｍｏｒｅｄｇｅ，ｔｈｅａｎｔｉｔｕｍｏｒｅｆｆｅｃｔｏｆＴＩＬｓｉｎＢＴＣｒｅｍａｉｎｓｄｉｆｆｉｃｕｌｔｔｏｐｒｅｄｉｃｔ．Ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｍｅｔｈｏｄｓａｎｄｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｎｅｗｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓｔｏｍｏｄｉｆｙｃｅｌｌｓｔｏｅｎｈａｎｃｅｔｈｅａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒａｂｉｌｉｔｙｏｆＴＩＬｓａｒｅｐｏｓｓｉｂｌｅｄｉｒｅｃｔｉｏｎｓｆｏｒｂｒｅａｋｔｈｒｏｕｇｈｉｎｔｈｅｆｕｔｕｒｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，Ｔｕｍｏｒ－Ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｎｇ；ＢｉｌｉａｒｙＴｒａｃｔＮｅｏｐｌａｓｍｓ；ＴｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：ＮａｔｉｏｎａｌＨｉｇｈＬｅｖｅｌＨｏｓｐｉｔａｌＣｌｉｎｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄｉｎｇ（２０２２－ＰＵＭＣＨ－Ｂ－１２８）；ＣＡＭＳＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＦｕｎｄｆｏｒＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（ＣＩＦＭＳ）（２０２２－Ｉ２Ｍ－Ｃ＆Ｔ－Ａ－００３）；ＣＡＭＳＩｎｎｏｖａｔｉｏｎＦｕｎｄｆｏｒＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ（ＣＩＦＭＳ）（２０２１－Ｉ２Ｍ－１－０６１，２０２１－Ｉ２Ｍ－１－００３）；ＣＳＣＯ－ＭＳＤＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄ（Ｙ－ＭＳＤＺＤ２０２１－０２１３）；ＣＳＣＯ－ＨｅｎｇｒｕｉＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＦｕｎｄ（Ｙ－ＨＲ２０１９－０２３９，Ｙ－ＨＲ２０２０ＭＳ－０４１５，Ｙ－ＨＲ２０２０ＱＮ－０４１４）；ＮａｔｉｏｎａｌＴｅｎ－ｔｈｏｕｓａｎｄＴａｌｅｎｔＰｒｏｇｒａｍ１ 肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）疗法概述ＴＩＬ是指存在于肿瘤实质和肿瘤间质内的以Ｔ淋巴细胞为主的一类异质性淋巴细胞群体，主要由Ｔ淋巴细胞、Ｂ淋巴细胞、自然杀伤（ＮＫ）细胞、树突状细胞（ＤＣ）、巨噬细胞和髓源性抑制细胞等组成［１］。
肿瘤浸润性淋巴细胞在癌症发生和治疗中的作用
13 Journal of China Prescription Drug Vol.16 No.7·综述·肿瘤浸润性淋巴细胞（TILs）是一类肿瘤浸润性且具有抗原效应的细胞群，由Rosenberg 等于1986 年从荷瘤小鼠肿瘤组织中发现并分离[1]。
TILs包括存在于肿瘤癌巢内的瘤内肿瘤浸润淋巴细胞（iTIL）及间质中的基质肿瘤浸润淋巴细胞（sTIL）[2-3]，以淋巴细胞为主的异质性淋巴细胞群体，被认为是免疫生物学标记物。
切除患者肿瘤分选TILs，通过一些培养方法比如体外IL-2、IL-15 、IL-7与抗CD3 抗体刺激扩增培养[4-6]，回输患者体内，并在高剂量IL- 2等的管理下进一步刺激在体内增殖[7]，然而回输的TIL细胞其实是很多细胞的混合体，并没有经过特异筛选。
有些TIL细胞是对肿瘤特异的，有些并不是特异的，所以通过基因测序寻找肿瘤细胞特异的突变基因，然后筛选针对这个突变的特异TIL细胞回输，效果可能会更好，基于这些想法，TILs细胞疗法逐步发展。
1 TILs作用机制TILs包括T细胞、B细胞和NK细胞。
大多数TILs都有CD3＋表型[8]，CD3＋TILs可进一步细分为细胞毒性T细胞（cytotoxic T cell，CD8＋ T）、记忆T细胞（memory T cell，CD45RO ＋）、辅助T细胞（regulatory T cell，CD4＋）[9-10]。
TIL的表型具有异质性，不同肿瘤来源的TILs中，CD4＋T细胞、CD8＋ T细胞比例也不同[11]。
CD8＋T细胞在肿瘤微环境肿瘤发展过程中被认为具有抗肿瘤功能，故CD8＋T细胞的数量决定其杀伤靶细胞的效率。
在肿瘤患者中已发现自发的CD4 ＋ T细胞对肿瘤抗原的反应，肿瘤浸润CD4 ＋ Th1细胞密度高的患者几乎所有肿瘤类型预后良好[12]，证据表明 CD4 ＋ T细胞在抗肿瘤免疫中起着重要作用。
细胞免疫疗法
机体内具有杀伤作用的淋巴细胞有自然杀伤细胞、杀伤细胞杀伤性T细胞等，它们本身就能够对抗肿瘤细胞的产生。
根据实验观察，一个肿瘤细胞需要上百个淋巴细胞对付它。
而一立方厘米大小的瘤块中约有10亿个瘤细胞。
因此，如果有大量的淋巴细胞，就能够有效的消灭肿瘤细胞，对抗肿瘤细胞的生成，这就是细胞免疫疗法的基本理念。
[1]简介机体内具有杀伤作用的淋巴细胞有自然杀伤细胞、杀伤细胞杀伤性T细胞等，它们本身就能够对抗肿瘤细胞的产生。
根据实验观察，一个肿瘤细胞需要上百个淋巴细胞对付它。
而一立方厘米大小的瘤块中约有10亿个瘤细胞。
因此，如果有大量的淋巴细胞，就能够有效的消灭肿瘤细胞，对抗肿瘤细胞的生成，这就是细胞免疫疗法的基本理念。
当前，以细胞免疫疗法为首的细胞生物治疗己经初露锋芒，成为肿瘤生物治疗中重要的发展方向。
细胞免疫疗法，其全称为过继性免疫细胞疗法，(adoptive cellular immunotherapy, ACI或AIT)，是指向肿瘤患者转输具有抗肿瘤活性的免疫细胞(特异性和非特异性的)，直接杀伤肿瘤或激发机体的免疫应答杀伤肿瘤细胞。
临床上是指将体外激活的自体或异体免疫效应细胞输注给患者，以杀伤患者体内的肿瘤细胞的一种治疗方式。
近年来，细胞免疫疗法一直是肿瘤生物治疗中最活跃的领域。
细胞免疫疗法对细胞免疫功能低下的患者，如大剂量化疗、放疗后、骨髓移植后、病毒感染损伤免疫细胞数量及功能的患者，尤其是血液/免疫系统肿瘤的患者更为适合。
发展细胞免疫治疗可选择性地抑制/杀伤肿瘤细胞,而且不依赖于荷瘤者的免疫功能,并可与放、化疗合用,自上世纪80年代以来已进行了大量研究。
该疗法历经LAK、TIL、CD3AK、CIK、DC-CIK、EAAL等发展阶段，其疗效、特异性、整体有效率、副作用反应等方面的情况逐步改善。
分类LAK细胞免疫治疗LAK细胞即淋巴因子激活的杀伤细胞。
将外周血淋巴细胞在体外经淋巴因子白介素-2(IL-2)激活3～5天而扩增为具有广谱抗瘤作用的杀伤细胞。
三阴性和HER-2阳性乳腺癌中肿瘤浸润淋巴细胞研究进展
三阴性和HER-2阳性乳腺癌中肿瘤浸润淋巴细胞研究进展袁静萍;阎红琳;吴娟;饶洁;袁修学【摘要】肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs)是存在于肿瘤癌巢内及间质中的淋巴细胞群体,其介导的适应性免疫是有效且持续抗肿瘤反应的关键性基础.三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)阳性的乳腺癌是最具免疫原性的乳腺癌,TILs在此类乳腺癌中浸润程度较高.近年来研究发现TIL在TNBC和HER-2阳性乳腺癌的预后及新辅助化疗疗效方面有较高的预测效能.本文综述TILs在TNBC及HER-2阳性乳腺癌中的研究进展,为探索乳腺癌新的有效治疗靶点提供理论基础.【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2018(027)004【总页数】5页(P384-388)【关键词】肿瘤浸润淋巴细胞;三阴性乳腺癌;HER-2阳性乳腺癌;预后;新辅助化疗【作者】袁静萍;阎红琳;吴娟;饶洁;袁修学【作者单位】武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉科技大学医学院病理和病理生理学教研室,武汉430065【正文语种】中文【中图分类】R737.9正常情况下，人体的免疫系统和免疫细胞维持着相对平衡的状态，这一平衡状态一旦打破，不仅会引起一些感染类的疾病，也会导致肿瘤的发生并影响患者的预后和治疗效果。
随着免疫学的发展，人们逐渐发现肿瘤的预后标记物除了肿瘤相关标记物以外，也可以是肿瘤浸润性细胞，如位于肿瘤组织周围的肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocytes，TILs），能杀伤肿瘤细胞、减少肿瘤的转移，是机体应对肿瘤、诱发免疫反应的重要形式。
肿瘤浸润性淋巴细胞免疫治疗的研究进展
·专家论坛·肿瘤浸润性淋巴细胞免疫治疗的研究进展杨涵 陈超 王冲（上海药品审评核查中心 上海 201210）摘要肿瘤浸润性淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocytes, TILs）免疫治疗通过体外分离、扩增和回输患者自己的能特异性识别肿瘤组织的肿瘤浸润性T淋巴细胞来治疗肿瘤，是目前主要的过继性细胞免疫治疗类型之一。
TILs已在用于实体瘤治疗的临床试验，尤其是在用于转移性黑色素瘤患者治疗时显现有令人鼓舞的临床效果。
然而，TILs治疗也面临一些挑战，如肿瘤相关抗原反应性T细胞难以分离及其在体内的持久性和安全性等。
本文概要介绍TILs治疗的产品生产过程、临床应用的可行性、临床研究进展，以及TILs治疗面临的挑战和解决措施，供TILs治疗的研究与开发者参考。
关键词肿瘤浸润性淋巴细胞 实体瘤 临床研究中图分类号：R979.19 文献标志码：A 文章编号：1006-1533(2022)11-0017-05引用本文杨涵, 陈超, 王冲. 肿瘤浸润性淋巴细胞免疫治疗的研究进展[J]. 上海医药, 2022, 43(11): 17-21.Research progress in tumor-infiltrating lymphocytes immunotherapyYANG Han, CHEN Chao, WANG Chong(Shanghai Center for Drug Evaluation and Inspection, Shanghai 201210, China)ABSTRACT Tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) therapy is one of the main types of adoptive cellular immunotherapyby harvesting infiltrated lymphocytes from tumors followed by ex vivo expansion and then infusing them back to patients themselves. TILs therapy has shown encouraging clinical effects in clinical trials against solid tumors, especially in treating metastatic melanoma. Nevertheless, various barriers restrict the efficacy and prevent the widespread use of TILs therapy, suchas the difficulty of isolating tumor-associated antigen-reactive T cells and their persistence and clinical safety in vivo. Herein, we summarize the manufacturing process of TILs and the feasibility analysis of the clinical application and discuss the advancesin clinical trials and the current obstacles with some strategies to be overcome, shedding light of the development of the next generation of TILs therapy.KEY WORDS tumor-infiltrating lymphocytes; solid tumors; clinical trials细胞免疫治疗，又称过继性细胞免疫治疗，是一种基于细胞的治疗方法，其使用患者自身或供体的经过基因工程改造和/或离体扩增的免疫细胞来改善患者的免疫功能，以对抗肿瘤。
肝癌的肿瘤免疫细胞浸润与预后评估
肝癌的肿瘤免疫细胞浸润与预后评估肝癌是一种常见的恶性肿瘤，其预后评估一直是临床研究的热点之一。
肿瘤免疫细胞浸润是肝癌免疫治疗的重要指标之一，也与患者的预后密切相关。
本文将探讨肝癌的肿瘤免疫细胞浸润与预后评估的相关内容。
一、肝癌的肿瘤免疫细胞浸润概述肝癌的发展与免疫系统密切相关，其中肿瘤免疫细胞浸润起到重要作用。
肝癌组织中常见的免疫细胞包括免疫活化细胞、T淋巴细胞、B 淋巴细胞、自然杀伤细胞等。
这些免疫细胞参与了免疫反应的调节与执行，直接影响了肝癌的发展和预后。
二、肿瘤免疫细胞浸润与肝癌预后评估1. 免疫细胞浸润与肝癌的临床特征研究发现，肝癌患者的肿瘤组织中免疫细胞的浸润情况与患者的临床特征密切相关。
高度浸润的免疫细胞提示免疫系统对肿瘤具有较强的识别和清除能力，通常与较好的预后相关。
而低度浸润或无浸润的免疫细胞则可能表示免疫逃逸或抑制，与恶性肿瘤的发展和预后不利相关。
2. 免疫细胞浸润与肝癌的预后评估指标在肝癌患者的预后评估中，免疫细胞浸润可作为重要的预测指标之一。
研究发现，免疫细胞的类型、数量和分布等特征与肝癌的预后密切相关。
例如，T淋巴细胞的浸润与患者的存活期和无复发的风险呈正相关。
而免疫抑制细胞（如调节性T细胞）的浸润则可能增加肿瘤的侵袭和转移风险。
3. 肝癌免疫细胞浸润与免疫治疗近年来，免疫治疗成为肝癌治疗的重要手段之一。
免疫细胞浸润情况可以作为免疫治疗效果的预测指标。
研究发现，在肿瘤组织中浸润大量活化的免疫细胞，对免疫检查点抑制剂等免疫治疗药物的反应通常较为显著。
三、肿瘤免疫细胞浸润与肝癌预后评估的临床应用1. 免疫细胞浸润的检测方法目前，常用的免疫细胞浸润检测方法包括免疫组织化学染色、流式细胞术和免疫组化等。
这些方法可以直观地观察和定量免疫细胞在肿瘤组织中的分布和数量。
2. 免疫细胞浸润的预后评估模型为了更准确地评估患者的预后，不少研究致力于建立免疫细胞浸润的预后评估模型。
这些模型通常将免疫细胞的类型、数量和分布等因素结合起来，通过统计学方法进行预测。
肿瘤浸润淋巴细胞在三阴性乳腺癌中作用的研究进展
jtmUiMeKR l f2021'心40⑵％243-247・243・•综述・肿瘤浸润淋巴细胞在三阴性乳腺癌中作用的研究进展孙雨露，尤鑫，赵怡欣,姚永忠（东南大学医学院南京鼓楼医院普外科，江苏南京210008"&摘要］三阴性乳腺癌（TNBC f具有高度异质性，侵袭性强，没有特定的分子治疗靶点，因而临床预后较差。
肿瘤浸润淋巴细胞（TILs f在肿瘤微环境中扮演重要角色，可以参与抗肿瘤免疫反应，被认为是TNBC的预后指标。
高水平的TILs与TNBC患者病理完全反应增加有关。
目前'有关自体TILs给药或免疫检查点抑制剂的研究受到广泛关注，可以为TNBC提供免疫治疗靶点，并改善TNBC的临床预后。
&关键词］三阴性乳腺癌；肿瘤浸润淋巴细胞；预后；免疫治疗；综述&中图分类号］R737.9；R730.3&文献标志码］A&文章编号］1671-6264（2021"02-0243-05doR10.3969/j.Rsn.1671-6264.2021.02.019三阴性乳腺癌（tWple-neyativv breast cancer，TN-BCf是一类不表达雌激素受体（estrogen receptor，ERf、孕激素受体（pngestenne receptor，PR f和人表皮生长因子受体2（human epidevnal growth factor receptor2，HER2f的乳腺癌亚型［1］。
与其他类型乳腺癌相比, TNBC的侵袭性更强'治疗手段相对有限，预后较差，因此，寻找有效的TNBC治疗方向迫在眉睫&2'（尽管传统上认为乳腺癌的免疫原性较低，但是TNBC的基因组相对不稳定且突变率较高,是最具免疫原性的亚型。
近些年,研究发现肿瘤免疫微环境在TNBC的发生发展过程中发挥着重要作用，其中，肿瘤浸润淋巴细胞（tumor-infiltrating lymphocytes，TILs f作为肿瘤免疫微环境的重要组成部分已成为研究焦点，越来越多的证据表明TILs是乳腺癌尤其是TNBC的重要免疫生物标志物。
一种快速高效扩增肿瘤浸润性淋巴细胞的方法[发明专利]
![一种快速高效扩增肿瘤浸润性淋巴细胞的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/9ded1e14c8d376eeafaa31c7.png)
专利名称：一种快速高效扩增肿瘤浸润性淋巴细胞的方法专利类型：发明专利
发明人：陈晚华,孙庆文,曲平波,王延春,颜廷骥,李明,张俊艺申请号：CN201310156853.X
申请日：20130502
公开号：CN103396991A
公开日：
20131120
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种快速高效扩增肿瘤浸润性淋巴细胞的方法。
其主要用于在短时间内高效快速扩增肿瘤浸润性淋巴细胞TIL(Tumor Infiltrating Lymphocytes)且基本不影响TIL表型发生变化。
所述方法包括：肿瘤组织处理、培养液使用、IL-2和OKT3剂量及培养处理。
肝癌标本从不同区域取下1-2mm的组织于24孔板各孔，将孔板置于培养箱培养，隔天观察，培养5、6天对所有孔板培养液进行半量换液，根据TIL生长状况，每隔1-2天对孔板培养液进行半量换液，一旦24孔板内长满TIL，收集各孔内TIL，培养其成为年轻型TIL。
然后对其进行体外快速扩增，扩增倍数够达4000倍以上。
申请人：陈晚华
地址：264200 山东省威海市火炬高技术产业开发区文化西路180号
国籍：CN
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肿瘤浸润淋巴细胞与结直肠癌预后关系的研究进展
・102・广东医学2020年1月第41卷第1期Guangdong Medical Journal Jan.2020,Vol.41,No.1纟宗述肿瘤浸润淋巴细胞与结直肠癌预后关系的研究进展龙美玲'，陈倩文'，刘璐2,谢菲岚2,刘锦涛"'广东医科大学研究生学院(广东湛江524000)；2广东医科大学深圳宝安临床医学院、深圳市宝安区人民医院消化内科(广东深圳518100)【摘要】结直肠癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，影响结直肠癌预后的因素较多，患者的肿瘤局部免疫反应尤为重要，目前肿瘤浸润淋巴细胞已成为结直肠癌预后的研究热点。
根据免疫细胞的浸润情况，肿瘤可分为“热肿瘤(T淋巴细胞浸润)”和“冷肿瘤(无T淋巴细胞浸润)”。
肿瘤浸润淋巴细胞在这些肿瘤中的数量及作用机制不同，它的不同亚群在结直肠癌发生发展中的作用差异极大，对其预后的影响也不尽相同。
本文介绍了结直肠癌肿瘤浸润淋巴细胞的亚型、临床分型及与患者预后关系的研究进展，为进一步研究结直癌患者抗肿瘤免疫反应的关键机制和临床治疗提供一定依据。
【关键词】结直肠癌；肿瘤浸润淋巴细胞；预后【中图分类号】R735.3；R449【文献标志码】ADOI：10.13820/ki.gdyx.20192507结直肠癌(colorectal cancer,CRC)是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，2018年全国恶性肿瘤统计发现其发病率居恶性肿瘤发病谱的第3位，仅次于肺癌和胃癌；病死率居第2位，居肺癌之后⑷。
目前,TNM分期是临床上制订CRC治疗方案的主要依据，按照指南，TNM分期I期和低危n期患者术后无需接受辅助治疗就可以达到理论上的完全治愈，并长期存活。
然而，仍有约10%的I期和20%的II期患者术后会发生复发转移⑷。
临床上亟需其他预测预后的辅助指标来更精确分期，并为术后辅助治疗提供更多的依据，因此寻找更准确的CRC 预后预测指标已成为热点问题，其中肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)是目前关注的重点。
三阴性和HER-2阳性乳腺癌中肿瘤浸润淋巴细胞研究进展
三阴性和HER-2阳性乳腺癌中肿瘤浸润淋巴细胞研究进展袁静萍;阎红琳;吴娟;饶洁;袁修学【期刊名称】《中国组织化学与细胞化学杂志》【年(卷),期】2018(027)004【摘要】肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TILs)是存在于肿瘤癌巢内及间质中的淋巴细胞群体,其介导的适应性免疫是有效且持续抗肿瘤反应的关键性基础.三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)和人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER-2)阳性的乳腺癌是最具免疫原性的乳腺癌,TILs在此类乳腺癌中浸润程度较高.近年来研究发现TIL在TNBC和HER-2阳性乳腺癌的预后及新辅助化疗疗效方面有较高的预测效能.本文综述TILs在TNBC及HER-2阳性乳腺癌中的研究进展,为探索乳腺癌新的有效治疗靶点提供理论基础.【总页数】5页(P384-388)【作者】袁静萍;阎红琳;吴娟;饶洁;袁修学【作者单位】武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉大学人民医院病理科,武汉430060;武汉科技大学医学院病理和病理生理学教研室,武汉430065【正文语种】中文【中图分类】R737.9【相关文献】1.肿瘤浸润淋巴细胞在三阴性乳腺癌中作用的研究进展 [J], 方和慧;杨芳(综述);管晓翔(审校)2.肿瘤浸润淋巴细胞在三阴性乳腺癌和HER2阳性乳腺癌中作用的最新研究进展[J], 吉芃;龚悦;狄根红3.HER-2阳性乳腺癌中肿瘤浸润淋巴细胞与雄激素受体的相关性研究* [J], Fang Liu; Lu Cao; Cong Xu; Guomin Xiang; Yun Niu4.肿瘤浸润淋巴细胞在三阴性乳腺癌中作用的研究进展 [J], 孙雨露;尤鑫;赵怡欣;姚永忠5.肿瘤浸润淋巴细胞在三阴性乳腺癌免疫治疗中的应用进展 [J], 赵佳琳;王学晶;曹希;孙强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人类膀胱癌患者中肿瘤浸润性淋巴细胞的研究进展
胞结 构 。Ｄｎｌ 等ｌＪ 察 了细 胞 结构 的变 化 对 自 ａｇ ｓ ¨观 ｅ
身 Ｔ淋 巴细 胞 活 化 的影 响。 两 种 自身膀 胱 癌 细胞
系作 为 Ｔ细 胞 的 靶细 胞 。观 察 细胞 结 构 二 维 单 向 或三维 立 体作 用 对各 种 细 胞 因 子产 量 的影 响。有
活化的 Ｃ ４ Ｄ ４和 ＩＡ Ｃ Ｍ一１ 子表 达 的减少 Ｊ 分 。
研究表 明免 疫 治疗 能 够提 高 黑 色 素 瘤 和 膀 胱 癌患 者的 生 存 率 。膀 胱癌 依据 病 理 类 型 来 分 主要
为移行细胞癌（Ｃ ） Ｔ Ｃ 或尿道上皮细胞癌（ Ｃ 。膀胱 Ｕ）
癌 的分级 是 根 据 肿 瘤 侵犯 的深 度 而 定 的 。膀 胱 壁 由被 称为移 行 上 皮 细胞 或 尿道 上 皮 细 胞 的 表 皮 细 胞层构 成 ， 们可 以 随膀胱 的尿量 多少 而 膨胀 或 缩 它
展
和其 它 细胞 黏 附分 子 与 正 常 细 胞 有所 不 同 。如 主
要 组织 相容 性抗 原家 族 中某 种 蛋 白的 表达 下 凋或
生 物合 成不完 全 Ｊ 究表 明 ， Ｈ 。研 Ｍ Ｃ的减 少增 加 了 肿瘤 进展 的不 可 逆 性 。正 常 尿 道 上 皮 细胞 表面 表
达 Ｈ Ａ一 工即 ＭＨ Ｌ Ｃ一 工 分 子 ， 类 而在 尿道 上皮 细胞 恶性 肿 瘤 中可检 测 到其 表 面 表达 Ｈ Ａ—Ａ， Ｃ分 Ｌ Ｂ，
小。
循环 免疫 细 胞 的 某种 亚 型 与 膀胱 癌 的 临床 预 后密 切相 关 。Ｃ ｒａｉ ａ ｌｄ ｂ ｌ ｏ等［ ］ 测 了 ６ 位 膀胱 癌患 １检 ０ ７
者和 ２ 位健康对照者外周血单核细胞来源 Ｎ ９ Ｋ细 胞 活性 ， 果发 现 膀胱 癌 患者 Ｎ 结 Ｋ细 胞 活性 较 正 常
肿瘤浸润性淋巴细胞及IIIB期结肠癌患者预后的关系
的密度越低，而癌组织中ＣＤ３＋细胞密度与患者的性别、年龄、肿瘤发生部位均
无明显相关；ＣＤ４５Ｒｏ＋细胞密度则与患者的性别、年龄、肿瘤发生部位及病理分 级均无明显相关。浸润到ＩＩＩＢ期结肠癌组织中的ＣＤ３＋和ＣＤ４５Ｒ０＋细胞密度均与
患者的５年生存率呈正相关关系（尸值均＜０．００１）；多因素分析提示ＣＤ３＋细胞并 不能独立影响ＩＩＩＢ期结肠癌患者的５年生存率，而ＣＤ４５Ｒｏ＋细胞的密度是影响
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学位论文作者签名：嬲嘲移导师签名：涨以Ｌ
日期：钞稗歹月Ｉ＞日
日期：协叶年瑚７ ｒ日
中山大学硕士学位论文
肿瘤浸润性淋巴细胞与ＩＩＩＢ期结肠癌患者预后的关系
原创性声名
本人郑重声名：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独 立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论 文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文 的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确的方式表明口 本人完全意识到本声名的法律效果由本人承担。
采用免疫组化方法检测７４例ＩＩＩＢ期结肠癌组织中ＣＤ３＋、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、ＣＤ５６＋
和ＣＤ４５Ｒｏ＋细胞的浸润情况，分析其与患者临床特征和预后的关系。
实验结果
浸润到ＩＩＩＢ期结肠癌组织中的淋巴细胞主要是ＣＤ３＋、ＣＤ４５Ｒｏ＋细胞，均为
细胞膜表达。ＣＤ３＋细胞主要包括ＣＤ４＋和ＣＤ８＋细胞，两者浸润密度无明显差异， 而ＣＤ５６＋细胞浸润极少。ＩＩＩＢ期结肠癌组织的病理分化程度越低，ＣＤ３＋细胞浸润
均一性较差，如混杂了结肠癌和直肠癌病例、混杂了所有分期的患者等，其结果
有可能会受这些混杂因素的影响，因此，为了消除临床分期等混杂因素对淋巴细
用于治疗癌症的肿瘤浸润淋巴细胞[发明专利]
![用于治疗癌症的肿瘤浸润淋巴细胞[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/29f90ee5185f312b3169a45177232f60dccce748.png)
(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201680078606.4(22)申请日 2016.11.18(30)优先权数据62/257,143 2015.11.18 US62/265,508 2015.12.10 US62/265,511 2015.12.10 US62/265,513 2015.12.10 US(85)PCT国际申请进入国家阶段日2018.07.11(86)PCT国际申请的申请数据PCT/US2016/062739 2016.11.18(87)PCT国际申请的公布数据WO2017/087784 EN 2017.05.26(71)申请人 杜克大学地址 美国北卡罗来纳州(72)发明人 何有文 王宇 (74)专利代理机构 中原信达知识产权代理有限责任公司 11219代理人 金海霞 杨青(51)Int.Cl.A01N 63/00(2006.01)A61K 38/20(2006.01)A61K 38/21(2006.01)A61K 39/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01)C07H 21/02(2006.01) (54)发明名称用于治疗癌症的肿瘤浸润淋巴细胞(57)摘要肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)是被积极招募到肿瘤部位以产生针对肿瘤生长和转移的免疫应答的白血细胞。
本公开提供了用于治疗癌症的方法，所述方法包括以下步骤：从来自受试者的样品中分离CD8+T细胞、在白细胞介素-10存在的条件下扩增CD8+T细胞以及将扩增的CD8+T细胞施用于受试者。
所述治疗癌症的方法可与补体信号传导通路的抑制剂组合使用。
权利要求书1页 说明书27页 附图30页CN 109068658 A 2018.12.21C N 109068658A1.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，其特征在于，所述方法包括：从来自受试者的样品中分离CD8+T细胞、将所述CD8+T细胞暴露于白细胞介素-10、将所述CD8+T细胞暴露于白细胞介素-2、扩增所述CD8+T细胞以及向所述受试者施用所述扩增的CD8+T细胞。
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肿瘤浸润淋巴细胞
1概念
1986年Rosenberg研究组首先报道了肿瘤浸润淋巴细胞（tumor
infiltrating lymphocyte,TIL）。
TIL细胞表型具有异质性，一般来说，TIL
中绝大多数细胞CD3阳性。
不同肿瘤来源的TIL细胞中，CD4+T细胞、CD8+T细
胞的比例有差异，大多数情况下以CD8+T细胞为主。
新鲜分离的TIL中CD25+细
胞百分率较低，随着体外加IL-2培养时间的延长，CD25+细胞百分率逐渐升高。
NK细胞的标记（CD16，CD56）在 TIL体外加IL-2培养过程中有先增高后降低的
趋势。
2特点
用机械处理和酶消化方法，从肿瘤局部分离出肿瘤浸润的淋巴细胞，加入高
剂量IL-2体外培养，残存的肿瘤细胞7-13天全部死亡。
经IL-2活化的TIL与
来自PBMC的LAK细胞比较，其特点是：（1）50-100倍，因此在治疗中可以减
少效应细胞和IL-2的用量，而且对LAK治疗无效的晚期肿瘤仍有一定治疗效果；
（2）主要由CD8阳性细胞诱导而来，在动物实验中发现TIL杀伤肿瘤作用具有
特异性；（3）宿主的抑制状态有利于TIL的杀伤作用，因此治疗时加用环磷酰
胺（Cy）100mg/kg可明显提高疗效，可能与免疫抑制药能消除抑制性细胞或因
子，增强过继免疫治疗作用有关，因而可减少IL-2的用量，降低毒副反应；（4）
可从手术切下肿瘤组织、肿瘤引流淋巴结、癌性胸腹水中获得淋巴细胞，经加
IL-2培养后，其生长、扩增能力强于LAK细胞。
已有报道应用TIL治疗14例转
移性肺癌等晚期肿患者，其中4例肿瘤缩小50%以上，副作用明显低于IL-2/LAK
疗法。
免疫系统
▪中枢免疫器官▪免疫器官▪外周免疫器官
▪淋巴器官▪中枢淋巴[样]器官▪周围淋巴[样]器官▪胸腺▪胸腺小体▪胸腺基质
▪骨髓▪法氏囊▪脾[脏]
▪红髓▪白髓▪围动脉淋巴鞘
▪B细胞冠区▪边缘窦▪边缘区
▪淋巴结▪初级淋巴滤泡▪生发中心
▪暗区▪明区▪胸腺依赖区
▪淋巴滤泡▪次级淋巴滤泡▪非胸腺依赖区
▪副皮质区▪初级聚合灶B细胞▪外套层
▪派尔集合淋巴结▪穹窿区▪皮肤相关淋巴组织▪黏膜免疫系统▪黏膜相关淋巴组织▪肠相关淋巴组织▪胃肠淋巴组织▪支气管相关淋巴组织▪鼻相关淋巴组织▪泌尿生殖道相关淋巴组织▪淋巴管▪输入淋巴管
▪输出淋巴管▪淋巴细胞再循环▪单核吞噬细胞系统。