启东18届高考生物专项复习微生物的实验室培养实验-制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆菌1练习

合集下载

高中生物高考专题12 微生物的培养和应用(解析版)

2020届高考生物难点及易错题精讲精练专题12 微生物的培养和应用【难点精讲】一、微生物的实验室培养和无菌技术例题：(2018·全国Ⅱ，37)在生产、生活和科研实践中，经常通过消毒和灭菌来避免杂菌的污染。

回答下列问题：(1)在实验室中，玻璃和金属材质的实验器具___________(填“可以”或“不可以”)放入干热灭菌箱中进行干热灭菌。

(2)牛奶的消毒常采用巴氏消毒法或高温瞬时消毒法，与煮沸消毒法相比，这两种方法的优点是_____________________________________________________________________________。

(3)密闭空间内的空气可采用紫外线照射消毒，其原因是紫外线能_______________________。

在照射前，适量喷洒________，可强化消毒效果。

(4)水厂供应的自来水通常是经过________(填“氯气”“乙醇”或“高锰酸钾”)消毒的。

(5)某同学在使用高压蒸汽灭菌锅时，若压力达到设定要求，而锅内并没有达到相应温度，最可能的原因是____________________。

【答案】(1)可以(2)在达到消毒目的的同时，营养物质损失较少(3)破坏DNA结构消毒液(4)氯气(5)未将锅内冷空气排尽【解析】(1)干热灭菌是指将物品放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃条件下加热1～2 h。

耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等，可采用干热灭菌的方法。

(2)巴氏消毒法是在70～75 ℃条件下煮30 min或在80 ℃条件下煮15 min，可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养物质损失较少。

(3)接种室、接种箱或超净工作台在使用前，可以用紫外线照射30 min，紫外线能破坏微生物的DNA结构，以杀死物体表面或空气中的微生物。

在照射前，适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液，可以强化消毒效果。

人教版高中生物选修一提分教程专题2 微生物的培养与应用课题1 第2课时含答案

第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。

2.掌握大肠杆菌的纯化方法。

3.了解菌种保藏所用的方法。

知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。

(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□02火焰。

(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻盖上□03皿盖。

(4)待平板冷却凝固后，将平板□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。

1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。

你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。

2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B 正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。

[答案] A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。

(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。

(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。

微生物实验复习提纲

实验一培养基的配置（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配置（用于分离培养细菌以及测定其数目、天然培养基，）1、称量牛肉膏可以放在小烧杯、表面皿、称量纸中称量，热水溶解后倒入大烧杯。

蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速；滤纸不可称量牛肉膏。

2、溶解加水加热搅拌，药品完全溶解（若配置固体培养基，则加入1%~2%的琼脂，再加热融化，此过程需不断搅拌，以防止琼脂糊底或溢出）定容。

若偏酸，滴加1mol/L NaOH3、调pH 待培养基冷却至室温时检测其pH 不停搅拌并随时用pH试纸检测，若偏碱，滴加1mol/L HClpH调节通常放在加琼脂之前；应注意pH不要调过头，以免回调影响各离子浓度。

液体培养基：滤纸4、过滤固体培养基：4层纱布趁热过滤固体培养基：试管高度的1/5，灭菌后摆斜面、三角瓶的1/25、分装半固体培养基：试管高度的1/36、加透气膜7、包扎将三角瓶的棉塞外包双层报纸，以防灭菌时冷凝水沾湿透气膜。

8、灭菌上述培养基121.0℃湿热灭菌20min9、摆斜面斜面长度不超过试管总长1/210、无菌检查37℃温箱培养1-2d（二）高氏1号培养基的配制（放线菌、组合培养基）1、称量和溶解可溶性淀粉加冷水调成糊状，再加水加热溶解；微量成分FeSO4*7H2O 现配成高浓度的储备液后加入：100ml+1g=0.01g/ml 再在1000ml+1ml储备液。

2、同上（三）马丁氏培养基（霉菌、半组合培养基）1、称量和溶解土豆去皮切块煮开半小时，各成分溶解好后，将孟加拉红配成1%的水溶液，在1000ml培养液中加3.3ml，加入琼脂加热融化2、同上3、链霉素的加入它受热易分解，故临用前将培养基融化后待温度降至45℃左右才能加入。

可先将其配成1%溶液，在100ml培养基中加0.3ml，使每ml培养集中含其30μg。

注意事项：称药品时牛角匙不要混用，称完药品应及时盖紧瓶盖；谨慎调pH，避免多次回调影响各离子浓度；分装过程中注意不要使培养基沾在管上，以免引起试剂污染。

实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化

实验三牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化
，必须原创
牛肉膏蛋白胨（Bacto-Proteose-Peptone，由蛋白质和多种水解物组成）培养基是分
离和纯化微生物的优质培养基，它可为微生物提供养分、气味和增强细胞代谢的稳定性，
有利于微生物的成长和繁殖，因此被广泛应用于细菌的鉴别、分离、纯化研究。

本实验介
绍牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。

1、配制牛肉膏：将牛肉的去油干片以40倍的水为底料，煮沸约30min，冷却至室温
后用离心设备至0.75—1％的浊度；
2、添加蛋白质：分别将卵白袋、硝酸蛋白、胱蛋白分别以大约6:2:2的比例添加到
牛肉膏液中，再将二次离心液收集并稀释成1:200；
3、添加添加剂：用 0.1N 的 NaOH 调盐，加入 0.2 ％的 Na2CO3、1.0 ％的 K2HPO4 和 0.007 ％的 MnCl2，使液体 pH 值为7.2 ± 0.2。

二、微生物的分离与纯化：
1、微生物的分离：将牛肉膏蛋白胨作为培养介质，以碗杯离心法将培养基放在26-28℃的恒温器中培养24-48h；
2、筛选：用滤筛得到培养液粒子，将其留在高性能液相色谱仪（HPLC）上；
3、纯化：用不同浓度的氯化钾，盐酸混合溶液或二乙醇胺溶液去除悬浮粒子，再用
离子交换树脂法去除其他污染物，萃取物可用电泳分离成单体；
4、鉴定：根据抗原或抗体鉴定微生物，将其分类编号。

三、结论：
经过牛肉膏蛋白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化实验，成功地实现了牛肉膏蛋
白胨培养基的制备、微生物的分离与纯化。

通过该实验，我们可以进一步学习、提高分离
微生物的能力，为临床抗感染药物的研究提供有力的支持。

高一生物微生物的实验室培养介绍

高一生物微生物的实验室培养介绍【导语】微生物的实验室培养是高中生物的重要考点，这方面的考点学生掌控了吗?下面是作者给大家带来的有关于微生物的实验室培养介绍，期望能够帮助到大家。

高一生物微生物的实验室培养知识点该知识点包括培养基、无菌技术、实验操作(制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌)等几个要点知识。

1. 培养基：培养基的类型(1)加入培养基中的凝固剂(如琼脂)，一样不能被微生物利用，只起到凝固作用。

(2)挑选培养基一样只生长具有特定目的的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。

2. 无菌技术：消毒与灭菌用酒精消毒时，70%的酒精杀菌成效。

若浓度过高，菌体表面蛋白质凝成一层保护层，则乙醇分子不能渗透其中;若浓度过低，杀菌能力减弱。

获得纯洁培养物的关键是避免杂菌污染，无菌技术可从以下四个方面展开：(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。

(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。

(3)为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰邻近进行。

(4)实验操作时，应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

3. 实验操作(制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌)：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤是：(1)运算：根据培养基配方比例，运算配制100ml的培养基，各种成分用量。

(2)称量：准确称取各种成分。

(3)溶化：将称好的牛肉膏加少量水溶化后，加入称量好的蛋白胨、氯化钠、琼脂加热溶解，并补加蒸馏水定容至100ml。

(4)灭菌：将配置好培养基转移到锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。

将培养基用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。

(5)倒平板：待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯邻近倒平板。

【微生物的实验室培养考点分析】考题多以非挑选题的情势显现，考核微生物的培养条件、代谢特点，实验室微生物培养规范和主要步骤。

2.1 微生物的实验室培养(2)

(3)假设培养结束后，发现培养基上菌落连成一片，可能的原因是什么？稀释倍数不够，菌液的浓度太高；划线时，划完第一次没有 (列举两项)______________________________________________________ 灭菌又接着划第二次；培养过程灭菌不严格，受到微生物的污染。解析多种因素都会导致接种的菌种密度较大，没有形成单一的菌落。
B.在皿底上标记日期等方便
C.正着放臵容易破碎
D.防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染
解析平板倒臵主要是防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
是平板划线法和稀释涂布
平板法。下列有关这两种方法的叙述错误的是( B )
1
2
3
4
A.均将大肠杆菌接种在固体培养基的表面
孢子繁殖形成，这种菌落才符合要求。
解析答案
1
2
3
4
4.右表是从土壤中分离纯化土壤细菌的培养基配方。请回答下面的问题。
(1) 培养基的类型很多，但培养基中一
般都含有水、碳源、氮源和无机盐。
上述培养基配方中能充当碳源的成分
试剂
用量
试剂
用量
牛肉膏/g
蛋白胨/g
5
10
琼脂/g —
20 —
是牛肉膏和蛋白胨。培养基配制完成
答案
应用示例
2.右图中甲是稀释涂布平板法中的部分操作，乙是平板划线法操作结果。下列叙述中，错误的是( 后才能取菌液 )
A.甲中涂布前要将涂布器灼烧，冷却 B.对于浓度较高的菌液，如果甲中的
稀释倍数仅为102，则所得的菌落不
是由单一的细胞或孢子繁殖而成
C.乙中培养皿中所得的菌落都符合要求
D.乙中的连续划线的起点是上一次划线的末端

实验法二牛肉膏蛋白胨培养基的制备

实验法二牛肉膏蛋白胨培养基的制备
实验目的：
本实验的目的是制备牛肉膏蛋白胨培养基，以备后续在培养菌种时使用。

实验原理：
牛肉膏蛋白胨培养基是一种富含氮源和碳源的培养基，可以用来培养多种微生物，包括细菌、真菌和酵母菌等。

其主要成分为牛肉膏、蛋白胨和氧化还原指示剂。

牛肉膏是从牛肉中提取的肉汁，是一种富含植物蛋白、维生素和微量元素的营养液，蛋白胨是酶解的蛋白质，是一种常用的氮源。

氧化还原指示剂可以用来检测微生物的代谢活动，当微生物代谢产生酸性代谢产物时，其颜色将变为黄色。

实验步骤：
1.准备牛肉膏蛋白胨培养基的成分：牛肉膏、蛋白胨和氧化还原指示剂；
2. 将牛肉膏和蛋白胨分别加入到约800ml的去离子水中，加热至融化，然后煮沸5分钟，搅拌至完全溶解；
3. 将氧化还原指示剂加入到煮沸后的液体中，并用酒精灯进行灭菌处理，使溶液冷却至室温；
4. 将培养基装入无菌烧杯中，经过高温高压灭菌处理，即可得到无菌牛肉膏蛋白胨培养基。

注意事项：
1.在加热牛肉膏和蛋白胨的过程中，需不断搅拌，以防止附着在底部的物质烧焦。

2. 培养基的所有成分和制备过程均需无菌操作，以保证培养基的纯度和无菌性。

3. 每次使用前应检查培养基是否有明显异味或异色，如有异常情况则应弃用。

4. 操作过程中要注意安全，避免受到高温、高压、灭菌等因素的伤害。

实验结果：
制备牛肉膏蛋白胨培养基后，应详细记录制备过程中的操作步骤、配方和注意事项，以备后续使用时参考。

制备好的培养基应无明显异味或异色，并保持无菌状态，以保证培养菌种的纯度和生长。

生物复习专项练习：微生物的培养与应用_微生物的实验室培养_实验制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌

实验——制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌课后练习(2)1．下列不属于微生物常用的分离、纯化方法的是（）A．单细胞挑取法B．平板划线法或稀释涂布平板法C．接斜面法D．选择培养基分离法2．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。

实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。

请回答与此实验相关的问题。

(1)培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。

除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。

(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是________。

(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于________中培养，培养的温度设定在37℃。

要使该实验所得的结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。

(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。

一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越________。

3．下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。

请回答：(1)充当碳源的成分是________和________。

培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行__________处理。

(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是____________和______________两种。

在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是______________。

(3)假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？________________________________________________________________________。

4．关于微生物的实验室培养技术，下列表述正确的是（）A．溶化时将称好的牛肉膏从称量纸上直接倒入烧杯B．常见的消毒方法包括灼烧、煮沸、紫外线利喷洒化学试剂等C．配制同体培养基时加入琼脂，其目的是为微生物生长提供碳源D．用移液管稀释菌液时，吹吸三次的目的是使菌液与水充分混匀5．近期网络上流行一种利用制作酸奶来判断牛奶好坏的方法，以下自制酸奶的方法也随之在网络广泛流传：①将牛奶倒入玻璃杯，放在沸水中加热10分钟。

微生物牛肉膏的实训报告

一、实训目的本次实训旨在通过牛肉膏的制备和利用，让学生了解微生物培养基的配制方法，掌握牛肉膏在微生物培养中的应用，并熟悉微生物培养的基本操作技能。

通过实训，使学生能够：1. 理解牛肉膏的成分及其在微生物培养中的作用。

2. 掌握牛肉膏培养基的配制方法。

3. 学会微生物接种和培养的基本操作。

4. 观察并记录微生物的生长情况，分析实验结果。

二、实训原理牛肉膏是一种常用的微生物培养基添加剂，其主要成分包括蛋白质、氨基酸、维生素、矿物质等。

这些成分可以为微生物提供必要的碳源、氮源、维生素和生长因子，促进微生物的生长和繁殖。

牛肉膏的制备通常包括以下步骤：1. 选择新鲜牛肉，去除筋膜和脂肪。

2. 将牛肉切成小块，用绞肉机绞碎。

3. 将绞碎的牛肉放入蒸锅中，加水煮沸。

4. 持续煮沸一段时间，使蛋白质等营养成分溶解于水中。

5. 过滤去渣，得到牛肉膏提取液。

6. 将提取液浓缩、干燥，得到牛肉膏。

三、实训材料与设备材料：- 新鲜牛肉- 纱布- 蒸锅- 绞肉机- 过滤器- 蒸馏水- 烧杯- 量筒- 玻璃棒- 微生物培养箱- 微生物接种环- 微生物培养皿设备：- 电子天平- 烧杯- 量筒- 玻璃棒- 微生物培养箱- 微生物接种环- 微生物培养皿四、实训步骤1. 牛肉膏制备：- 称取适量新鲜牛肉，去除筋膜和脂肪。

- 将牛肉切成小块，用绞肉机绞碎。

- 将绞碎的牛肉放入蒸锅中，加水煮沸。

- 持续煮沸一段时间，使蛋白质等营养成分溶解于水中。

- 过滤去渣，得到牛肉膏提取液。

- 将提取液浓缩、干燥，得到牛肉膏。

2. 牛肉膏培养基配制：- 称取牛肉膏，加入适量的蒸馏水溶解。

- 将溶解后的牛肉膏溶液加入琼脂粉，搅拌均匀。

- 将混合溶液煮沸，待琼脂完全溶解。

- 将煮沸后的溶液倒入培养皿中，待冷却凝固。

3. 微生物接种与培养：- 将微生物接种环在火焰上灼烧灭菌。

- 将接种环蘸取少量微生物，接种于牛肉膏培养基上。

- 将接种后的培养皿放入微生物培养箱中，在适宜的温度下培养。

高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养第2课时实验操作及实验结果教案高二生物教案

第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。

2.掌握大肠杆菌的纯化方法。

3.了解菌种保藏所用的方法。

知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。

02火焰。

(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻03皿盖。

盖上□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。

(4)待平板冷却凝固后，将平板□1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。

你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。

2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。

典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1] 下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是( )A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。

答案 A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。

(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。

(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。

(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。

高考生物考点一遍过考点微生物的培养和用(含解析)

藏躲市安详阳光实验学校考点71 微生物的培养和应用1．培养基（1）概念：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

（2）营养组成：一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。

此外，还需要满足微生物生长对pH、氧气以及特殊营养物质的要求。

（3）种类：按照物理性质可分为液体培养基和固体培养基。

2．无菌技术（1）含义：指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

（2）关键：防止外来杂菌的入侵。

（3）不同对象的无菌操作方法(连线)3．大肠杆菌的纯化培养（1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基①操作步骤→→→→②倒平板的方法及注意事项a．请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。

b．甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。

c．丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。

（2）纯化大肠杆菌的方法①纯化培养原理：想方设法在培养基上得到由一个细菌繁殖而来的肉眼可见的菌落，即可获得较纯的菌种。

②纯化大肠杆菌的关键步骤是接种。

③常用的微生物接种方法有两种a．平板划线法：是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

b．稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

系列稀释操作(如图所示)：涂布平板操作(如图所示)：（3）菌种的保存方法①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。

②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。

4．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数（1）分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成脲酶，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到催化作用。

（2）统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用稀释涂布平板法。

（3）实验流程：土壤取样→样品的稀释→微生物的培养与观察→细菌的计数。

5．分解纤维素的微生物的分离（1）纤维素酶①组成：纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即C1酶、C X酶和葡萄糖苷酶。

2019届高考生物专项复习微生物的培养与应用微生物的实验室培养实验__制备牛肉膏蛋白胨固体培养基纯化大肠杆

实验——制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌1．在缺乏氮源的培养基上大部分微生物无法生长；在培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌；在培养基中加入10%酚可以抑制细菌和霉菌。

利用上述选择培养基依次能从混杂的微生物群体中分离出( )A．乳酸菌、金黄色葡萄球菌、放线菌B．固氮细菌、大肠杆菌、放线菌C．固氮细菌、霉菌、放线菌D．固氮细菌、金黄色葡萄球菌、放线菌2．下列关于配制培养基的叙述，正确的是( )A．制作固体培养基必须加入琼脂B．加入青霉素可得到放线菌C．培养自生固氮菌时不需要氮源D．发酵工程一般用半固体培养基3．下列物质中，不能用作酵母菌碳源的是（）A．含碳有机物 B．蛋白胨C．含碳无机物 D．石油、花生粉饼等天然物质4．利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌，经培养后发现培养基上出现了多种菌落，不可能的原因是（）A．培养基制备过程中被杂菌污染B．接种过程中，无菌操作不符合要求C．系列稀释时，无菌操作不符合要求D．由大肠杆菌的种类不同造成的5．大肠杆菌能够在哪种培养基上生长繁殖（）A．无氮培养基B．分解尿素的细菌的选择培养基C．纤维素分解菌的选择培养基D．牛肉膏蛋白胨培养基6．下表是一种培养基的配方，请回答：(1)________、________、________等，琼脂的作用是________。

(2)在培养基定容之后，必须进行的重要步骤是____________________。

(3)该培养基从物理性质看属于________培养基，能培养的细菌从同化作用看其代谢类型是________。

(4)此培养基如要培养霉菌时需将培养基的pH调至________，如要培养细菌时需将培养基的pH调至________。

(5)若用此培养基纯化大肠杆菌，最常用的方法是________、________。

最终，使大肠杆菌在固体培养基上形成单个________，从而获得纯种菌株。

7．平板冷凝后，要将平板倒置，其原因是（）A．接种时再拿起来方便B．在皿底上标记日期等方便C．正者放置容易破碎D．可以使培养基表面的水分更好地挥发8．以下关于菌种保藏的叙述，错误的是（）。

江苏省启东市高考生物专项复习微生物的培养与应用微生物的实验室培养实验——制备牛肉膏蛋白胨固体培

实验——制备牛肉膏蛋白胨固体培养基、纯化大肠杆菌1．下列不属于微生物常用的分离、纯化方法的是（）A．单细胞挑取法B．平板划线法或稀释涂布平板法C．接斜面法D．选择培养基分离法2．某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。

实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。

请回答与此实验相关的问题。

(1)培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了________和________。

除此之外，培养基还必须含有的基本成分是________和________。

(2)对培养基进行灭菌，应该采用的方法是________。

(3)为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于________中培养，培养的温度设定在37℃。

要使该实验所得的结果可靠，还应该同时在另一平板上接种________作为对照进行实验。

(4)培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有________种细菌。

一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越________。

3．下表是用于从土壤中分离纯化土壤细菌的牛肉膏蛋白胨培养基的配方。

请回答：(1)中能充当碳源的成分是________和________。

培养基配制完成以后，一般还要调节pH并对培养基进行__________处理。

(2)分离纯化微生物最常使用的接种方法是____________和______________两种。

在接种过程中，接种针或涂布器的灭菌方法是______________。

(3)假设某同学发现培养基上细菌数目过多地连成一片，可能的原因是什么？________________________________________________________________________。

2020高中生物专题2课题1微生物的实验室培养第2课时实验操作及实验结果课时精练含解析人教版选修1

实验操作及实验结果[基础对点]知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.在培养基的配制过程中，具体有如下步骤，其正确顺序为( )①溶化②调pH ③加棉塞④包扎⑤分装⑥称量A．①②⑥⑤③④ B．⑥①②⑤③④C．⑥①②⑤④③ D．①②⑤④⑥③答案 B解析上述步骤中，培养基的配制顺序为称量→溶化→调p H→分装→加棉塞→包扎，B 正确。

2．下列有关倒平板操作的叙述，错误的是( )A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置答案 C解析整个倒平板过程要防止外来杂菌的入侵，因此灭过菌的培养皿应放在火焰旁，A正确；打开的锥形瓶瓶口应迅速通过火焰，B正确；培养皿应打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不能将培养皿盖完全打开，C错误；平板冷却凝固后需要倒过来放置，D正确。

3．下列关于制备牛肉膏蛋白胨培养基的叙述，错误的是( )A．培养基应先调pH再进行灭菌B．培养基应先灭菌再分装到培养皿C．熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌D．使用高压蒸汽灭菌锅时直接将灭菌锅密封加热答案 D解析把灭菌锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排出后，将锅密闭，继续加热使锅内气压逐步上升。

知识点二纯化大肠杆菌4.下列有关平板划线接种法的操作错误的是( )A．将接种环放在火焰上灼烧B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液C．沾取菌液和划线要在火焰旁进行D．接种环划线要将最后一区的划线与第一区的划线相连答案 D解析为了避免杂菌污染，沾取菌液和划线要在火焰旁进行，C正确；每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，A正确；灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高，杀死菌种，B正确；在平板划线时不要将最后一区的划线与第一区相连，D错误。

5．如图为纯化大肠杆菌的一个操作环节，下列相关叙述中，错误的是( )A．该操作步骤是接种，方法是平板划线法B．除第一次划线外，以后的每一次划线的起点是上一次划线的末端C．图中细菌密度最小的是5处D．每次划线前要用酒精灯灼烧接种环，接着进行下次划线答案 D解析每次划线前都要灼烧接种环灭菌，然后等其冷却后进行下次划线，D错误。

人教版生物选修一练习：专题2 课题1 第2课时实验操作及实验结果

第2课时实验操作及实验结果题型一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是()A．计算、称量、倒平板、溶化、灭菌B．计算、称量、溶化、倒平板、灭菌C．计算、称量、溶化、灭菌、倒平板D．计算、称量、灭菌、溶化、倒平板[答案] C[解析]制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。

2．在制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中加入琼脂这一理想的凝固剂，下列关于琼脂的说法错误的是()A．不被所培养的微生物分解利用，对所培养的微生物无毒害作用B．在微生物生长温度范围内保持固体状态C．琼脂凝固点低，利于微生物的生长D．琼脂在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强[答案] C[解析]琼脂不会被微生物利用且对微生物无毒害作用，在灭菌过程中不会被破坏，透明度好，凝固力强，A、D正确；琼脂在水中加热至95 ℃时开始熔化，温度降至40 ℃时才开始凝固，微生物生长最适宜的温度范围一般为16～30 ℃，所以在微生物生长温度范围内保持固体状态，B正确；琼脂的凝固点相对于微生物生长的温度较高，一般不是微生物的营养成分，只起固化作用，对微生物的生长不会产生作用，C错误。

3．下列叙述错误的是()A．右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近B．倒平板整个过程应在火焰旁进行C．打开培养皿盖，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖D．为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置[答案] C[解析]右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞，为避免污染需放在酒精灯火焰附近，A正确；为了防止杂菌污染，倒平板整个过程应在火焰旁进行，B正确；操作方法为用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，C错误；为避免水滴滴入培养基，平板应倒过来放置，D正确。

4．检验培养基是否被杂菌污染的最有效方法是()A．将未接种的培养基放在实验桌上培养B．将未接种的培养基放在窗台上培养C．将未接种的培养基放在恒温箱中培养D．将已接种的培养基放在恒温箱中培养[答案] C[解析]检验培养基有没有被杂菌污染，可将未接种的培养基放在恒温箱中培养。

高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养11

专题2课题1微生物的实验室培养
一、课题目标
1.知识目标
a.了解有关培养基的基础知识。

b.了解消毒和灭菌方法。

2.能力目标
a.进行无菌技术操作。

b.进行微生物培养。

3.情感目标
形成勇于实践、严谨求实的科学态度和科学精神。

二、课题重点
无菌技术操作。

三、课题难点
无菌技术操作。

四教学流程
水、碳源、氮源、无机盐
问题2：从细胞的化学元素组成来看，培养基中为什么都含有这些营养成分？
C、H、O、N、P、S是构成细胞原生质的基本元素，约占原生质总量的97％以上。

【小结】共同归纳培养基的基本成分和主要来源。

（2）特殊成分和条件
提醒学生培养基还需要满足不同微生物生长对PH、氧气、特殊营养物质的要求：如乳酸杆菌时需要添加维生素，霉菌需要将培养基pH调节为酸性，细菌时需要将pH调节为中性或微碱性。

（二）无菌技术
讲解：无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。

强调无菌操作是培养微生物成功的关键。

1.主要方面
讲解无菌技术主要方面：
（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；
（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；
（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。

2.消毒与灭菌的比较
列表让学生进行比较。

牛肉膏蛋白胨培养基制备实验报告

牛肉膏蛋白胨培养基制备实验报告
学习制备牛肉膏蛋白胨培养基的方法，了解牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂等的作用和用途。

实验原理：
牛肉膏：牛肉膏是从生牛肉中提取的富含营养物质的肉汁，富含氨基酸、矿物质和其他生长因子。

蛋白胨：是一种从鸡蛋中提取的高营养物质，富含多种必需氨基酸和维生素。

氯化钠：是必须添加到培养基中以提供细菌和其他细胞所需的盐类和离子。

琼脂：是一种由红藻属海藻制成的胶质，用于固化液态培养基并在固态培养基上生长细胞。

实验材料：
牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、三角瓶、试管等。

实验步骤：
1. 倒入500毫升的去离子水至三角瓶中。

2. 加入5克牛肉膏和5克蛋白胨，用玻璃棒搅拌均匀。

3. 加入5克氯化钠和2克琼脂，再次搅拌均匀。

4. 将三角瓶放入水浴中，加热至琼脂完全溶解。

5. 关闭火源，将溶液冷却至50℃左右。

6. 倒入培养基到试管中，每个试管约5毫升。

7. 放置试管直至琼脂凝固。

实验结果与分析：
制备完成的牛肉膏蛋白胨培养基呈明亮的黄色透明液体，琼脂凝固后成为浅黄色的固态培养基。

该培养基富含多种必需的营养物质，可满足多种细菌和其他微生物生长的需要，可用于多种微生物培养和研究。

实验中需要注意的问题：
1. 避免使用破损的琼脂；
2. 加热时要注意温度的控制；
3. 做好无菌操作，防止细菌和其他微生物的污染。

牛肉膏蛋白胨培养基的制备方法

牛肉膏蛋白胨培养基的制备方法培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。

培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素、能源和水。

根据微生物的种类和实验目的不同，培养基要选择合适的配比关系，选择合适的理化性质，配后要及时灭菌。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。

高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。

常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法等普通培养基配制灭菌方法及步骤1.牛肉膏蛋白胨培养基的制备(1) 计算根据配方计算出实验中各种药品所需要的量，然后再分别称量。

(2) 称量准确称取各种成分。

一些不易称量的成分如牛肉膏，可用玻璃棒取出放硫酸纸上称量，然后连同硫酸纸一起放入烧杯中。

(3) 溶解向烧杯内加入所需的水量，将牛肉膏用水洗下后，取出硫酸纸弃去。

加热搅拌全溶后稍放冷。

(4) 调pH值用酸度计或精密pH试纸测定其pH值，并用10%NaOH调至所需pH值，必要时用滤纸或脱脂棉过滤。

一般比要求的pH高出0.2，因为高压蒸汽灭菌后，pH常降低。

(5) 分装根据不同需要，可将配好的培养基分装入配有棉塞的试管或三角瓶内。

注意分装时避免培养基挂在瓶口或管口上引起杂菌污染。

如液体培养基，应装试管高度的1/4左右;固体培养基装试管高度的1/5左右;装入三角瓶的量以三角瓶容量的一半为限。

(6) 包扎试管扎成捆。

试管和三角瓶的棉塞外用硫酸纸和牛皮纸包扎，纸上表明培养基的名称、配制日期等。

(7) 灭菌培养基用0.1Mpa(15lb/in2)高压蒸汽灭菌15~20min。

2.培养基的高压蒸汽灭菌灭菌原理：水的沸点可随压力的增加而提高，当高压蒸汽灭菌锅中水煮沸时，因锅是密闭的，蒸汽不能溢出，而使压力增加，水的沸点和温度也随之增加。