项目九 血清学试验
血清学试验
•
用已知免疫血清与细菌的可溶性抗原
接触，在有适量电解质存在时，于两液交
界面形成肉眼可见的白色沉淀环，来指示 抗原的存在。
抗原、抗体必须澄清
Ag
抗体比重大，可形成清晰的界面
Ab
• （三）荚膜肿胀试验
•
1.原理
•
用荚膜免疫血清（含抗体）与检材中细菌的荚膜抗原特异性
结合形成复合物，使荚膜呈肿胀现象。
•
2.方法
• （四）制动试验 • 原理 将特异性抗血清与相应运动活泼的细菌
悬液混合，则抗鞭毛抗体与鞭毛抗原结合，使 鞭毛强直、相互粘着而失去动力，细菌运动停 止，从而证明相应细菌的存在。 • 方法 将待检标本或增菌培养液1滴置于玻片 上，用显微镜观察细菌运动情况。再于待检标 本上加1滴适当稀释的抗血清，混匀，作悬滴 镜检。 • 结果 若滴加抗血清3～5分钟内，细菌运动停 止，菌体凝集成块为制动试验阳性；反之，滴 加抗血清后，细菌运动无改变为制动试验阴性。
•
（1）处理标本
•
标本用蒸馏水洗涤，接种于小鼠皮下，次日抽取皮下渗出液
（2）取洁净玻片一张，两侧各加待测 菌1～2接种环，于一侧加抗血清，另一 侧加正常兔血清，混匀；再于两侧各加 1％美蓝水溶液，加盖玻片，湿盒内室 温5～10分钟。
标本
（3）结果 阳性：试验侧为蓝色菌体周围可见界限清晰、厚薄不等的无 色环状物。对照侧无此现象。 阴性：试验侧与对照侧均不产生无色环状物为阴性。
• 原理
• （二）固相酶联免疫试验（ELISA）
• 1.基本原理 • ⑴使抗原和抗体结合到某种固相载体表面，并保持其
免疫活性。 • ⑵使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或抗体，这
种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活 性。 • ⑶在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原） 和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗 原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的 抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载 体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加 如酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产 物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜 色反应的深浅进行定性或定量分析。
第九章血清学试验
第九章血清学试验§9-1血清学试验概述一、血清学试验的概念概念：抗原抗体反应是指抗原与相应的抗体之间发生的特异性结合反应。
因抗体主要存在于血清中，所以将体外发生的抗原抗体结合反应称为血清学反应或血清学试验。
在体内发生的抗原抗体反应是体液免疫应答的效应作用。
二、血清学试验的特点（一）特异性和交叉性（二）敏感性（三）可逆性（四）反应的二阶段性（五）最适比例与带现象（六）用已知测未知三、影响血清学试验的因素（一）电解质常用0.85%～0.9%（人、畜）或8%～10%（禽）的氯化钠或各种缓冲液（免疫标记技术）作为抗原和抗体的稀释液或反应液。
（二）温度在一定温度范围内，温度越高，加速抗原抗体结合和反应现象的出现。
（三）酸碱度血清学试验要求在一定的pH下进行，常用的pH值为6～8，（四）振荡适当的机械振荡能加速抗原抗体的结合反应（五）杂质和异物每批血清学试验都应设阳性对照和阴性对照试验。
四、血清学试验的应用及发展趋向（一）血清学试验的应用传染病、寄生虫病、肿瘤、自身免疫病、变态反应性疾病的确诊。
在动物疫病的群体检疫、疫苗免疫效果监测和流行病学调查。
生物活性物质的超微定量、物种及微生物鉴定和分型等方面。
基因分离，克隆筛选，表达产物的定性、定量分析和纯化等，已经成为现代分子生物学研究的重要手段。
（二）血清学试验的发展趋向反应的微量化和自动化方法的标准化和试剂的商品化技术的敏感特异和精密化检测技术的系列化方法简便快速。
§9-2凝集试验一、凝集试验的概念凝集试验：细菌、红细胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞、乳胶等颗粒性载体表面的可溶性抗原，与相应抗体结合后，在有适量电解质存在下，经过一定时间，复合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集试验（Agglutination test）。
参与凝集试验的抗原称凝集原，抗体称凝集素。
二、凝集试验的类型（一）直接凝集试验(Direct agglutination test)颗粒性抗原与相应抗体直接结合并出现凝集现象的试验称直接凝集试验。
血清学试验
2、胶乳凝集试验
3、协同凝集反应
抗体致敏载体，载体为金黄色葡萄球 菌A蛋白（SPA） SPA具有与IgG的Fc段结合的特性。
第三节 沉淀反应 （precipitation reaction)
可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、菌体 裂解液、病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出 液等）与相应的抗体结合，在适量电介质存在 下，形成肉眼可见的细微的白色沉淀。
第一节 血清学试验概述
二、特点
特异性与交叉性 敏感性 反应的可逆性 反应的二阶段性 最适比与带现象 用已知测未知
第一节 血清学试验概述
三、影响血清学试验的因素 电解质 温度 酸碱度 震荡 杂质和异物
第一节 血清学试验概述
四、应用及发展趋向
血清学试验在医学和兽医学领域已广泛应用，可 直接或间接从传染病、寄生虫病检出相应的抗原 或抗体。 血清学试验还广泛应用于生物活性物质的超微定 量、物种及微生物鉴定和分型等方面。 血清学试验也用于基因分离，克隆筛选，表达产 物的定性、定量分析和纯化等，已经成为现代分 子生物学研究的重要手段。
酶联免疫吸附试验（简称ELISA ）
将抗原或抗体吸附于固相载体的表面，酶标 记物与相应的抗体或抗原反应后，形成酶标 记抗原抗体复合物，在遇到相应底物时，结 合物上的酶催化底物产生水解、氧化或还原 等反应，从而生成可溶性或不溶性的有色物 质，可用肉眼或酶标测定仪判定结果。颜色 的深浅与相应的抗体或抗原量成正比，因此， 可根据颜色的深浅来定量抗体或抗原。
第三节 沉淀反应 （precipitation reaction)
可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀
第三节 沉淀反应 沉淀反应 （precipitation reaction)
第七节 血清学试验概述
畜禽疫病防治 第2章 免疫 第七节 血清学试验概述
2.琼脂凝胶扩散试验
原理
其中以双向双 扩散应用最广 泛
类型
1%琼脂凝胶孔径为85nm， 能使许多可溶性抗原与
抗体在凝胶中扩散。当
抗原与抗体在凝胶中的 一定位置上相遇时，则
单向单扩散 单向双扩散 双向单扩散 双向双扩散
两者结合形成沉淀线
第七节 血清学试验概述
血清学试验的概念
影响血清学试验的因素
血清学试验的类型
畜禽疫病防治 第2章 免疫 第七节 血清学试验概述
一、血清学试验的概念
由于抗体主要存在于血清中，所 以将体外发生的抗原抗体结合反应 称为血清学反应或血清学试验
畜禽疫病防治 第2章 免疫 第七节 血清学试验概述
二、影响血清学试验的因素
电解质 温度 酸碱度 振荡
杂质和异物
畜禽疫病防治 第2章 免疫 第七节 血清学试验概述
三、血清学试验的类型
凝集试验
沉淀试验
（一）凝集试验
概念
等颗粒性，与相应抗体结合后，在有适量电解质存 在下，经过一定载体表面的可溶性抗原细菌、红细 胞等颗粒性抗原，或吸附在红细胞、乳胶时间，复 合物互相凝聚形成肉眼可见的凝集团块，称为凝集 试验
畜禽疫病防治 第2章 免疫 第七节 血清学试验概述
类型
直接凝集试验 间接凝集试验
畜禽疫病防治 第2章 免疫 第七节 血清学试验概述
1. 直接凝集试验
概念
类型
颗粒性抗原与相应 抗体在电解质的参 与下，直接结合， 凝集成团的现象，
玻片法 试管法
称直接凝集试验
畜禽疫病防治 第2章 免疫 第七节 血清学试验概述
临床免疫血清学专业检验项目
临床免疫血清学专业检验项目
临床免疫血清学专业是临床检验医学的重要分支，其检验项目包括以下内容：
1. 免疫球蛋白检测：包括IgA、IgG、IgM等免疫球蛋白的定量测定，可用于诊断免疫性疾病、感染等。
2. 自身抗体检测：通过检测患者血液中的自身抗体水平，可诊断自身免疫性疾病。
3. 微量抗体检测：通过检测血液中微量抗体的水平，可对感染性疾病进行早期诊断。
4. 免疫功能检测：包括淋巴细胞亚群、NK细胞等免疫功能指标的检测，可评估患者免疫系统的功能状态。
5. 细胞因子检测：检测各种细胞因子水平的变化，可用于诊断免疫性疾病、炎症反应等。
6. 肿瘤标志物检测：通过检测血液中的肿瘤标志物水平，可进行肿瘤诊断和疗效监测。
以上是临床免疫血清学专业的一些常见检验项目，其检测结果对于临床诊断和治疗具有重要意义。
- 1 -。
血清学试验
微生物以及其他一些抗原性物质进入机体后，能在机体的血清中产生特异性抗体，。这种抗体与相应的抗原在体外相遇，可以表现出凝聚、沉淀、溶解、补体结合等多种反应，这些反应的试验都是采用免疫血清来进行的，所以称为血清学试验。现将其原理及其应用作简要介绍。
（ 2）试管法 在一系列的小试管中，加入等量的、不同稀释度的被检血清，最后一管以生理盐水代替血清，作为对照。在各试管中，再滴加等量细菌悬液，使均匀混合，置于水浴（ 52～ 55℃）保温约 4h后，观察结果，而后再置于 4℃冰箱中过夜，再观察结果。以最高稀释度血清管发生凝集者，为免疫血清的凝集效价。凝集效价越高，则说明抗体含量越多。
一、 抗原与抗体
（一）抗 原
凡能刺激机体产生特异性抗体，并能与所产生的抗体进行结合发生反应的物质，称为抗原。
1. 抗原的性质
（ 1）抗原一般为大分子胶体，相应分子质量在 10万以上。相对分子质量越大，抗原性越高。由于大分子胶体物质在机体内停留时间较长，因此能刺激机体产生抗体。
将微生物细胞或动物红血球的悬浊液与含有相应特异抗体的血清混合，可以在电解质（ 0.85%NaCL）溶液中发生反应，并出现肉眼可见的凝聚块，这种现象，就叫凝聚反应。参与反应的微生物细胞或血球等，称为凝集原，免疫血清中的特异抗体，称为凝集素。
1. 试验方法
（ 1）玻片法 吸取一滴经生理盐水（ 0.85%NaCL）稀释的免疫血清置于玻片上，另加一小滴细菌悬液（用生理盐水制成的菌液）。使之充分混合，在几分钟内，即可出现凝集现象。同时以生理盐水代替免疫血清作对照。
有关免疫电泳的应用，由于具体操作上的不同，还有其他多种方法，例如“火
箭”免疫电泳、交叉免疫电泳等等。
2. 沉淀反应与凝聚反应的区分
血清学试验流程
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血清学试验的种类
血清学试验的种类
血清学试验可是个很有意思的领域呢！咱就好比是在一个神秘的实验室里探索各种奇妙的反应。
你知道吗，有一种血清学试验就像是侦探在寻找线索一样，那就是凝集反应。
这就好像是一场小小的“战斗”，抗原和抗体在那里相互较量，一旦它们相遇并且结合成功，就会出现凝集现象，就像是两队士兵排好了阵仗。
通过观察凝集的情况，我们就能了解到很多信息呢！比如说血型的鉴定，是不是很神奇呀！
还有沉淀反应，这就像是两种物质在溶液里悄悄地“约会”，然后形成沉淀，告诉我们它们之间发生了特别的故事。
这在检测蛋白质之类的物质时可好用啦！
补体结合试验呢，就像是一个复杂的团队合作。
补体这个小家伙在其中起着关键的作用，它要是参与进来并且发挥作用了，那就说明有情况发生啦！这对于诊断一些疾病可是很有帮助的哦！
免疫标记技术呢，就像是给抗原或抗体穿上了一件特别的“外衣”，让它们变得更加显眼，更容易被我们发现和识别。
这可真是个聪明的办法呀！
中和试验就像是一场拔河比赛，抗体努力地去中和病毒或者毒素，看谁更厉害。
要是抗体赢了，那可就太棒啦，说明它起到了保护的作用呢！
酶联免疫吸附试验，这个名字听起来有点长，但它可实用啦！就像是在一个大盘子里进行一场精准的操作，能检测出各种微量的物质。
血清学试验的种类真的是丰富多彩呀！每一种都有它独特的魅力和用途。
它们就像是我们手中的魔法工具，帮助我们解开身体里的各种秘密，诊断疾病，保障我们的健康。
你说，这是不是很了不起呢？难道我们不应该好好去了解和利用它们吗？血清学试验，真的是医学领域里的一颗璀璨明珠啊！让我们一起好好探索这个神奇的世界吧！。
《临床检验课件-血清学方法》
间接Байду номын сангаас查血清法
间接检查血清中的物质，例如通过血清中的抗体 来检测抗原。
血清学方法在临床检验中的应用
1
药物监测
2
血清学方法可以监测药物在体内的浓度，
帮助医生确定药物治疗的剂量和频率。
3
疾病诊断
血清学方法能够帮助医生诊断各种疾病， 例如感染性疾病和自身免疫性疾病。
免疫学研究
血清学方法在免疫学研究中有广泛的应 用，例如检测抗体水平和细胞免疫功能。
《临床检验课件——血清 学方法》
这个课件将介绍血清学方法的定义、分类、直接和间接检查血清法、在临床 检验中的应用以及优缺点。通过本课件的学习，您将对血清学方法有全面的 了解。
血清学方法的定义
血清学方法是临床检验中用于研究血清中特定物质的一种方法。
血清学方法的分类
直接检查血清法
直接检查血清中的物质，例如抗体或抗原。
血清学方法的优缺点
1 优点
非侵入性且易于操作，提供准确和可重复的 结果。
2 缺点
有些血清学方法的结果可能受到其他因素的 干扰，例如感染状态或免疫状况的变化。
结论和要点
• 血清学方法是研究血清中特定物质的重要工具。 • 血清学方法可用于疾病诊断、药物监测和免疫学研究。 • 血清学方法具有优点和缺点，需要根据具体情况进行选择。
项目九血清学试验
•1、组成 •2、激活途径 •3、补体的生物学作用
项目九血清学试验
•◘补体功能及生物学意义：
•⑴细胞毒及溶菌/溶病毒作用：补体激活产生MAC，形 • 成穿膜的通道，导致细胞崩解。
项目九血清学试验
• 3.温度 抗原抗体反应一般在15一40℃范围
内均可进行，最适温度为37℃。在此范围内温 度越高，分子运动速度加快，增加抗原抗体接 触机会，反应速度越快，但亦容易引起复合物 解离;温度越低，反应速度缓慢，但抗原抗体 结合牢固，易于观察。某些特殊的抗原抗体反 应需要特定的温度，如冷凝集素在4℃时与红 细胞结合，20℃以上反而解离。
项目九血清学试验
• 1、抗原
• 抗原的理化性状、抗原决定簇的 数目和种类均可影响血清学反应 结果 例如，可溶性抗原与相 应抗体反应出现沉淀，而颗粒性 抗原与相应抗体反应则出现凝集
项目九血清学试验
2、抗体
• 抗体是血清学反应中的关键因素，对反应的 影响表现在以下三个方面:
• (1)来源:来自不同动物的免疫血清，其反应性 有差异。家兔等大多数动物的免疫血清具有 较宽的等价带，通常在抗原过量时才易出现 可溶性免疫复合物;马等大动物和人的免疫血 清等价带较窄，少量的抗原或抗体过剩，均 可形成可溶性免疫复合物
•⑵调理作用：通过与吞噬C表面结构结合而促进其吞噬 作用(抵抗全身性细菌和真菌感染的主要机制之一)。
•⑶免疫粘附作用：抗原-抗体复合物→活化补体→与补 体受体阳性细胞粘附→ 将抗原-抗体复合物转移至肝、 脾→巨噬C清除。
•⑷炎症介质作用- C3a/C5a→与肥大C/嗜碱粒C表面受 体结合→触发靶C脱颗粒/释放组胺等介质→介导局部炎 症反应。
血清学试验
抗体种类
IgA：二体 IgD： IgE： IgM：五体
IgG结构
IgA结构
Ig Ａ：存在于血清（占血清免疫球蛋白总量的 13% ） 和外分泌液中
IgM 等结构
IgＭ：血液中 IgＥ：血清中，0.002%
IgＤ：血清中，1%
抗体的产生部位
胸腺 一级淋巴器官 骨髓 (鸟)法氏囊 淋巴器官 淋巴结（约500-600个）
血清学试验
血清学试验
血清学鉴定： 用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原 血清学诊断： 用已知抗原检测血清中的特异性抗体
抗原（antigen）
是一类能刺激人或动物机体产生抗体或致敏 淋巴细胞（免疫原性），并能与这些产物在 体内或体外发生特异性反应的物质（反应原 性）。
（一）抗原的性质 抗原的性质
抗原抗体反应类型-----沉淀反应 （precipitation reaction)
可溶性抗原（如细菌的外毒素、内毒素、菌体裂 解液、病毒的可溶性抗原、血清、组织浸出液等） 与相应的抗体结合，在适量电介质存在下，形成 肉眼可见的细微的白色沉淀。
抗原抗体反应类型-----沉淀反应 （precipitation reaction) 可溶性抗原+相应抗体 肉眼可见的沉淀
抗原抗体反应类型-----间接凝集反应
协同凝集试验 葡萄球菌A蛋白是大多数金黄色葡萄球菌的 特异性表面抗原，能与多种哺乳动物血清中的 IgG 协同凝集试验 分子的Fc片段相结合，结合后的IgG仍保持其抗 体活性。当这种覆盖着特异性抗体的葡萄球菌与 相应抗原结合时，可以相互连接引起协同凝集反 应，在玻板上数分钟内即可判定结果(加图图八)。 目前已广泛应用于快速鉴定细菌、霉形体和病毒 等
血清学鉴定实验
位相变异试验的方法
简易平板法
1.配制0.7~0.8%的半固体琼脂培养基，然后倾注平板烘干表面水分。 2.在平板内滴上一滴已知的第1相或第2相血清因子，并作好标记。 3.待血清吸收到琼脂内，在标记部位的中间点种已知第1相或第2相的新鲜 待检菌株。 4.培养后，其已知相细菌的动力受到抑制，解离出另一相的细菌，并向周 围蔓延生长，形成一个大的菌落。 5.检查其菌落的边缘部分，即可确定该菌株的另一相H抗原。 6.该方法通常1~3天内可以有结果。
试管法
血清学鉴定
实验目的
掌握细菌的血清学鉴定法 。
实验原理
根据抗原抗体反应具有高度特异性的特点， 用已知抗体来检测未知抗原（细菌）。
实验材料
1.菌种 待检细菌 2.试剂 多价沙门菌O(A-F)诊断血清 3.其他 载玻片
沙门氏菌诊断血清（11种）
O2 Ha O4 Hb O7 Hc O9 Hd
Hi
A －F
+ -
Vi
+
实验进程 为非沙门氏菌属，不再继续鉴定其他 抗原成分。 初步判断为沙门氏菌属，继续鉴定其 他抗原成分。 初步判断为沙门氏菌属，但需去除菌 体Vi荚膜后再继续鉴定其他抗原成分。
血清学试验
2021/10/10
33
补体结合试验
试验系统、原理和结果判定
反应系统
指示系统
反应结果的判定
已知抗原 （抗体）
补体
绵羊红 细胞
如溶血则 为阴性
待检血清 （抗原）
溶血素
如不溶血 则为阳性
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2021/10/10
35
中和试验
概念：根据抗体能否中和病毒的感染性而建立的免
疫学试验。
心，呈脐状，但振摇时，立即散开呈均匀浑浊。 ❖ 以出现“++”的最高血清稀释倍数即为该份血清的效价，又叫凝集价。大动物
（马，牛，骆驼等）以凝集价1：100以上判为阳性，1：50的凝集价判为可 疑。中小动物（猪，羊，狗等）以凝集价1：50以上判为阳性，1：25的凝集 价判为可疑。 ❖ 如对照管不符合要求时，试管须废弃重做。
2021/10/10
30
双向双扩散方法
此法系采用1%琼脂倒于平皿或玻片上， 制成凝胶板，可按需要打孔。将抗原、 抗体分别滴入孔内，放置湿盒中，在 37˚C湿箱中24-72h后观察。
2021/10/10
31
双向双扩散用途
抗原的比较和鉴定：在抗原
与抗体孔间形成沉淀带。每
一种抗原成分出现一条沉淀
带。如两个相邻孔之间抗原
血清学诊断
2021/10/10
1
血清学试验的概念
由于抗体主要存在于 血清中，所以将体外 发生的抗原抗体结合 反应称为血清学反应 或血清学试验。
2021/10/10
2
血清学试验的特点
特异性和交叉性 敏感性 可逆性
反应的二阶段性 最适比例与带现象 用已知测未知
2021/10/10
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免疫学
二、环境因素
电解质: 生理盐水或缓冲液 酸碱度: pH6～pH9
温 度: 15℃～40℃，37℃最适
陈功轩
免疫学
l.电解质 • 抗原抗体结合后由亲水性变为疏水性， 此时易受电解质影响，如有适当浓度电 解质存在，就会使抗原抗体失去一部分 电荷而相互凝集或沉淀，出现可见反应; 若无电解质存在，则不出现可见反应。
抗体产生的一般规律
抗体产生规律可分为初次应答和再次应答 初次应答：潜伏期长，效价低，持续时间短 ，免疫作用不强 再次应答：潜伏期短，抗体产生量大，维持 时间长
抗体产生的一般规律
血清学试验
定义：是指相应的抗原和抗体在体 外进行的结合反应 试验材料：含有抗体的血清；抗原 物质 原理：抗原和抗体具有高度特异性
(2)特异性与亲和力:
• 特异性和亲和力是影响血清学反应的 两个关键因素，它们共同影响试验结
果的准确程度。用于诊断的试剂必须
才能保证和提高试验结果的可靠性。
尽量选往是与抗原相对而言。合 适的浓度才出现明显的反应现象。因此许多
试验应进行抗体预滴定，找出最适反应浓度。
陈功轩
免疫学
• 通常在血清学试验中，以8.5g/LNaCl溶液 作为抗原抗体的稀释液及反应液，其中Na+ 和Cl-可分别中和胶体颗粒上的电荷，使胶 体颗粒的电势下降，形成可见的沉淀物或 凝集物。但如果电解质浓度过高，则会出 现非特异性蛋白质沉淀，即盐析。
陈功轩
免疫学
•
2.酸碱度
合适的pH是抗原抗体反应的必要
大多数天然抗原物质的构成复杂，常含有多种抗 原决定簇。如果两种不同的抗原物质具有部分相 同或类似结构的抗原决定簇，则可与彼此相应的 抗血清出现交叉反应（cross reaction）。
信阳农业高等专科学校生物技术系
可逆性
可逆性是指在一定条件（如低pH、高浓度盐等） 下，抗原抗体复合物分子间作用力减弱而导致解 离，回复到抗原与抗体的游离状态。 抗原抗体反应遵循生物大分子热动力学反应 原则，其反应式为： [ AgAb ] K1 K1 K＝ ＝ Ag＋Ab AgAb [ Ag ][ Ab ] K2 K2 抗原抗体反应平衡取决于两个因素，一是抗原抗 体亲合力大小；二是环境因素对复合物的影响。
⑴细胞毒及溶菌/溶病毒作用：补体激活产生MAC，形 成穿膜的通道，导致细胞崩解。 ⑵调理作用：通过与吞噬C表面结构结合而促进其吞噬 作用(抵抗全身性细菌和真菌感染的主要机制之一)。
⑶免疫粘附作用：抗原-抗体复合物→活化补体→与补 体受体阳性细胞粘附→ 将抗原-抗体复合物转移至肝、 脾→巨噬C清除。
⑷炎症介质作用- C3a/C5a→与肥大C/嗜碱粒C表面受 体结合→触发靶C脱颗粒/释放组胺等介质→介导局部炎 症反应。
血清学试验的一般特点 特异性 可逆性 比例性 阶段性 稳定性
信阳农业高等专科学校生物技术系
特异性
特异性是指任何一种抗原分子，只能与由它刺激 所产生的抗体发生反应。 因为抗体CDR与抗原决定簇在化学结构和空 间构型上呈互补关系。 这种高度的特异性在传染病的诊断、防治等 医学和生物学领域都已得到了广泛的应用。
（2）表面具有复杂化学结构的大分子
在一定范围内，分子量越大，结构越复杂， 其表面抗原决定簇越多，免疫原性越强
（三） 抗原的特异性
特异抗原只能刺激机体产生特异性抗体或致
敏淋巴细胞，且仅能与该特异性抗体或淋巴细
胞结合并相互作用
物质基础：抗原决定簇
抗原决定簇（AD）
概念：抗原分子中决定抗原特异性的特殊化 学基团，又称为表位 AD的数目、性质和空间构象决定抗原特异性 抗原以AD与相应抗原受体及抗体特异性结合
T T
致敏T细胞
Ag
B
浆细胞
抗体
2.抗原性(又称免疫反应性)
指抗原分子与免疫应答产物(抗体或免疫效应 细胞)发生特异性结合的性质。
T T
致敏T细胞
Ag
B
浆细胞
抗体
1.抗原本身的理化性质 2.抗原与机体的相互作用（免疫方式）
（二） 构成抗原的基本条件
（1）异物性:非己的异物
异种物质: 病原微生物、异种蛋白、药物 种系关系相差越远，免疫原性越强 同种异体: 血型抗原、血清蛋白 自身物质: 精子、晶状体蛋白等
陈功轩
免疫学
1、凝集反应（Agglutination)
• 颗粒性抗原（完整的细菌细胞或红细胞等）与其 相应的抗体在合适条件下反应并出现凝集团的现 象。 • 用于凝集反应中的抗原称凝集原(agglutinogen)。 • 用于凝集反应中的抗体称凝集素（agglutinin)。
陈功轩
免疫学
2、沉淀反应(Precipitation)
三、补体系统
补体：活化后具有酶活性的蛋白质，可辅助 抗体介导的溶菌作用，是抗体发挥溶细胞作 用的必要补充 补体系统是由存在于人或脊椎动物血清与组 织液中的一组可溶性蛋白及存在于血细胞与 其它细胞表面的一组膜结合蛋白和补体受体 所组成。 1、组成 2、激活途径 3、补体的生物学作用
◘补体功能及生物学意义：
• 可溶性抗原（蛋白质、多糖或类脂溶液、血清、细菌 抽提液、组织浸出液等）与其相应的抗体在合适条件 下反应并出现沉淀物的现象。
• 用于沉淀反应中的抗原称沉淀原(precipitonogen)。
• 用于沉淀反应中的抗体称沉淀素（precipitin) 。
陈功轩
免疫学
3、补体结合试验(Complement fixation test ,CFT) 有补体参与，并以绵羊血红细胞和溶血
信阳农业高等专科学校生物技术系
网格学说
当多价抗原与多价抗体 在等价带结合时，相互 交叉连接成具有立体结 构的网格状复合体，形 成肉眼可见的沉淀物。 当抗原或抗体过剩时， 由于过剩方的结合价得 不到饱和，只能形成较 小复合物，不能出现可 见反应。
免疫学
血清学试验的影响因素
影响抗原抗体反应的因素较多，
条件之一。血清学试验一般以pH6--9为宜，
超出此范围可影响抗原和抗体的理化性质， 导致假阳性或假阴性结果。当pH为3左右时， 接近细菌抗原的等电点，可出现非特异性酸 凝集，造成假象。
陈功轩
• 3.温度 抗原抗体反应一般在 15一40℃范围
内均可进行，最适温度为37℃。在此范围内温
免疫学
度越高，分子运动速度加快，增加抗原抗体接
触机会，反应速度越快，但亦容易引起复合物 解离 ; 温度越低，反应速度缓慢，但抗原抗体 结合牢固，易于观察。某些特殊的抗原抗体反 应需要特定的温度，如冷凝集素在 4℃时与红
细胞结合，20℃以上反而解离。
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免疫学
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4、作用时间
抗原抗体反应应有足够的时间，不同反应时间不同。
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免疫学
此外，抗原抗体反应在液相中
反应时，适当振荡与搅拌，也 可促进抗原抗体分子的接触，
加速反应。
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免疫学
主要的抗原抗体反应
• 1、凝集反应（Agglutination) • 2、沉淀反应(Precipitation) • 3、补体结合试验(Complement fixation test ,CFT) • 4、中和试验(Neutralization test)
主要有两方面 : 一方面是受到抗原、 抗体的自身因素的影响 ; 另一方面
是受到电解质、酸碱度、温度及时
间等实验环境因素的影响。
陈功轩
一、反应物自身因素
抗原:理化性状、表位种类和数目 抗体:来源、特异性、亲和性、效价
1、抗原
• 抗原的理化性状、抗原决定簇的 数目和种类均可影响血清学反应 结果 例如，可溶性抗原与相 应抗体反应出现沉淀，而颗粒性 抗原与相应抗体反应则出现凝集
1、免疫球蛋白的分子结构
1）重链（H链）和轻链（L链） 2）可变区（V区）和恒定区（C区） 3）铰链区 4）水解片段
1、免疫球蛋白的分子结构
2、免疫球蛋白的生物学特征
主要功能：以lgG为例 VH和VL区：特异性识别 、结合Ag CH1和CL区：遗传标记 CH2:补体的结合点 CH3:细胞表面FC受体的 结合点
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比例性
比例性是指多价抗原与抗体反应，只有当二者浓 度比例适当时，才形成大的抗原抗体结合物，产 生凝集、沉淀等可见反应。 把最迅速出现可见反应时的抗原抗体的浓度 比或量比，称为抗原抗体反应的等价点 （equivalence point），抗原与抗体比例最 合适的范围称等价带（equivalencezone）。 Marrack提出的网格学说解释了抗原抗体反应比 例性的机制。
2、抗体
• 抗体是血清学反应中的关键因素，对反应的 影响表现在以下三个方面: • (1)来源:来自不同动物的免疫血清，其反应性 有差异。家兔等大多数动物的免疫血清具有 较宽的等价带，通常在抗原过量时才易出现 可溶性免疫复合物;马等大动物和人的免疫血 清等价带较窄，少量的抗原或抗体过剩，均 可形成可溶性免疫复合物
二、抗体(Antibody，Ab)
机体免疫细胞被抗原激活后，由B细 胞分化成熟的浆细胞合成、分泌的一类 能与相应抗原特异性结合的具有免疫功 能的球蛋白。
免疫球蛋白(immunoglobulin, Ig)
(1)定义：抗体和化学结构与抗体相似的球蛋白 的统称。 (2)存在形式： 膜型— B细胞膜上的抗原受体 分泌型—分泌进入血清等体液中, 介导体液免 疫应答
•
素（红细胞的特异抗体）作指标系统的
灵敏度很高的抗原抗体反应。
陈功轩
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4、中和试验(Neutralization test)