RNA的变性电泳原理
RNA凝胶电泳步骤及注意事项
R N A凝胶电泳步骤及注意事项内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）R N A凝胶电泳步骤及注意事项1%的RNA琼脂糖凝胶电泳可以用来检测RNA的完整性，本实验的主要目的是熟悉植物总RNA非变性胶电泳操作原理和操作方法与步骤。
一、实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。
二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。
非变性电泳使用%%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。
只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。
因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。
在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。
三、实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。
电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。
琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，μg/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。
四、实验步骤(1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
(2)在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。
在实验台上再加入5μl 1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
(3)打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。
在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。
试剂：(1)MOPS缓冲液(10*):L 吗啉代丙烷磺酸(MOPS) ，L NaAc, 10mol/L EDTA。
(2)上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,%溴酚蓝，%二甲苯蓝。
(3)甲醛。
(4)去离子甲酰胺。
v电泳槽清洗：去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——%DEPC水冲洗。
RNA甲醛变性凝胶电泳
RNA甲醛变性胶电泳提取样品的总RNA后，一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量。
由于RNA容易形成二级结构，因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳，得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。
一、试剂：DEPC（Sigma公司产品），MOPs（Bocherigmer公司产品），甲酰胺（Formamide，Sigma公司产品），溴酚蓝（Bromphenol Blue，Sigma公司产品）。
EDTA-Na2，氢氧化钠，醋酸钠，甲醛，甘油，分析纯，国产。
二、试剂配制：1、DEPC 水的处理：用量筒量取去离子水2L，在通风橱中，加入2ml DEPC到2升去离子水中，终浓度为0.1%的DEPC。
迅速盖上盖子，混匀，然后放在摇床中中速摇荡至少4hr，再高压灭菌。
灭菌时将瓶盖松开，15磅灭菌20min。
2、10 × FA Buffer（formaldehyde agarose buffer：200 mM的MOPs，50 mM的NaAc，10 mM的EDTA）：配制500ml，称取3.4g NaAC•3H2O放入1000ml烧杯中，加入400ml DEPC 处理过的去离子水，加入搅拌子，放在磁力搅拌器上溶解。
然后加入20.9g MOPs，放在磁力搅拌器上溶解。
再加1.86g EDTA二水二钠，放在磁力搅拌器上溶解。
用1M灭过菌的NaOH 调PH至7.0（约用NaOH 40ml），用DEPC 处理过的去离子水定容至500ml，装入棕色瓶中，写好标签，室温避光保存。
4、5 ×甲醛变性胶加样缓冲液（5×loading buffer）：配制10ml。
预先配制水饱和的溴酚蓝溶液：在1.5ml 离心管中加入约0.1mg溴酚蓝，加入1ml DEPC水溶解，充分振荡溶解，离心，可见离心管底部有溴酚蓝粉末剩余，上层液体即水饱和的溴酚蓝液。
在15ml灭菌离心管中，依次加入以下各种成分：4.0ml 10 × FA buffer3.1ml 甲酰胺2.0ml 100%的甘油720ul 37%的甲醛80ul0.5M的 EDTA （PH 8.0）16ul 水饱和的溴酚蓝100ul DEPC水混匀，分装，-20℃保存，常用放4℃保存。
RNA凝胶电泳步骤及注意事项
R N A凝胶电泳步骤及注意事项IMB standardization office【IMB 5AB- IMBK 08- IMB 2C】R N A凝胶电泳步骤及注意事项1%的RNA琼脂糖凝胶电泳可以用来检测RNA的完整性，本实验的主要目的是熟悉植物总RNA非变性胶电泳操作原理和操作方法与步骤。
一、实验目的掌握植物总RNA非变性胶电泳的原理和方法。
二、实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。
非变性电泳使用%%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。
只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。
因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。
在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。
三、实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。
电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。
琼脂糖，1XTAE 电泳缓冲液，μg/ml溴化乙锭(EB)10X载样缓冲液。
四、实验步骤(1)用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
(2)在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4μl于封口膜上。
在实验台上再加入5μl1×TAE电泳缓冲液及1μl 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
(3)打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。
在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。
试剂：(1)MOPS缓冲液(10*):L吗啉代丙烷磺酸(MOPS)，LNaAc,10mol/LEDTA。
(2)上样染料：50%甘油，1mmol/LEDTA,%溴酚蓝，%二甲苯蓝。
(3)甲醛。
(4)去离子甲酰胺。
v电泳槽清洗：去污剂洗干净(一般浸泡过夜)——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——%DEPC水冲洗。
电泳检测RNA
一．原理带电荷的物质在电场中的趋向运动称为电泳。
其中，凝胶电泳由于其操作简便、快速、灵敏等优点，使它成为分离、鉴定和提纯核酸的首选标准方法。
与蛋白质分子类似，核酸分子也是两性解离分子。
在pH3.5时，碱基上的氨基基团解离，而三个磷酸基团中只有第一个磷酸解离，整个分子带正电荷，在电场中向负极泳动；在pH值为8.0-8.3时，碱基几乎不解离，磷酸全部解离，核酸分子带负电荷，向正极移动。
不同大小和构象的核酸分子的电荷密度大致相同，在自由泳动时，各核酸分子的迁移率区别很小，难以分开。
所以采用适应浓度的凝胶介质作为电泳支持物，发挥分子筛的功能，使不同分子大小和构象不同的核酸分子泳动率出现较大差异，达到分离的目的。
1）影响泳动的四大因素：①影响泳动的首要因素是电泳样品的物理性质：包括电荷多少、分子大小、颗粒形状和空间结构。
一般来说颗粒带电荷的密度愈大，泳动速率愈快；颗粒物理形状愈大，与支持物的摩擦力越大，泳动速率越小。
即泳动率与颗粒的分子大小、介质粘度成反比；与颗粒所带电荷成正比。
②支持物介质：DNA的凝胶电泳常使用两种支持材料：琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶。
通过这两种介质的浓度变化调整所形成凝胶的分子筛网孔大小，分离不同分子量的核酸片断。
琼脂糖的孔径大，可以分离长度为100bp至60kb的核酸片断；聚丙烯酰胺凝胶的孔径小，可分离小片断（5-50bp）的核酸。
③电场强度：电泳场两极间单位支持物长度的电压降即为电场强度或电压梯度。
电场强度愈大，带电颗粒的泳动率愈快，但凝胶的有效分离范围随电压的增大而减小。
在低电压时，线性DNA分子的泳动率与电压成正比。
一般凝胶电泳的电场强度不超过5V/cm。
④缓冲液离子强度：缓冲液是电泳场中的导体，它的种类、pH值、离子浓度直接影响电泳的效率。
Tris·Cl缓冲体系中，由于Cl-的泳动速度比样品分子快得多，易引起带型不均一现象，所以常用TAE、TBE、TPE三种缓冲体系。
RNA提取、电泳注意事项
实验十一 动物组织细胞总RNA 的提取一、实验原理RNA 是基因表达的中间产物，存在于细胞质与核中。
对RNA 进行操作在分子生物学中占有重要地位。
获得高纯度和完整的RNA RNA 是很多分子生物学实验所必需的，如是很多分子生物学实验所必需的，如Northern 杂交、杂交、cDNA cDNA 合成及体外翻译等实验的成败，在很大程度上取决于RNA 的质量。
由于细胞内的大部分RNA 是以核蛋白复合体的形式存在，所以在提取RNA 时要利用高浓度的蛋白质变性剂，迅速破坏细胞结构，使核蛋白与RNA 分离，释放出RNA RNA。
再通。
再通过酚、氯仿等有机溶剂处理、离心，使RNA 与其他细胞组分分离，得到纯化的总RNA RNA。
在提取的过程中要。
在提取的过程中要抑制内源和外源的RNase 活性，保护RNA 分子不被降解。
因此提取必须在无RNase 的环境中进行。
可使用RNase 抑制剂，如DEPC 是RNase 的强抑制剂，常用来抑制外源RNase 活性。
提取缓冲液中一般含SDS SDS、酚、、酚、氯仿、胍盐等蛋白质变性剂，也能抑制RNase 活性。
并有助于除去非核酸成分。
本实验介绍异硫氰酸胍法和TRIzol 法提取动物组织总RNA 并通过电泳并通过电泳 进行鉴定。
进行鉴定。
二、仪器和试剂1.1.仪器：仪器：仪器：超净工作台、高速冷冻离心机、电泳仪、紫外分光光度计、凝胶成像系统、振荡器、移液器、吸头、Ep 管、玻璃匀浆器、试管、玻璃匀浆器、试管、玻璃器皿洗净后置180℃烘烤8h 8h；不耐高温的器皿（如塑料制品）应用；不耐高温的器皿（如塑料制品）应用0.1% DEPC 浸泡2h,702h,70～80℃烘烤～80℃烘烤干燥，120℃高压20min 20min，再，再7070～80℃烘烤干燥方可使用。
～80℃烘烤干燥方可使用。
～80℃烘烤干燥方可使用。
2.2.试剂：试剂：试剂：(1)(1)细胞裂解液：细胞裂解液：细胞裂解液：异硫氰酸胍异硫氰酸胍 4mol/L 4mol/L柠檬酸钠（柠檬酸钠（pH7.0pH7.0pH7.0）） 25mmol/L十二烷基肌氨酸钠十二烷基肌氨酸钠 0.5% 0.5%β-巯基乙醇巯基乙醇 0.1mol/L 0.1mol/L称取柠檬酸钠0.64g 0.64g，十二烷基肌氨酸钠，十二烷基肌氨酸钠0.415g 0.415g，吸取，吸取β-巯基乙醇0.7ml 0.7ml，用无，用无Rnase 的蒸馏水溶解，定容至50ml 50ml。
RNA甲醛变性胶电泳
RNA甲醛变性胶电泳发布时间：11-10-28 来源：科学实验仪器网点击量：9312 字段选择：大中小RNA甲醛变性胶电泳提取样品的总RNA后，一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量。
由于RNA容易形成二级结构，因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳，得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况一、试剂：DEPC（Sigma公司产品），MOPs（Bocherigmer公司产品），甲酰胺（Formamide，Sigma公司产品），溴酚蓝（Bromphenol Blue，Sigma 公司产品）。
EDTA-Na2，氢氧化钠，醋酸钠，甲醛，甘油，分析纯，国产。
RNA甲醛变性胶电泳二、试剂配制：1、DEPC 水的处理：用量筒量取去离子水2L，在通风橱中，加入2ml DEPC 到2升去离子水中，终浓度为0.1%的DEPC。
迅速盖上盖子，混匀，然后放在摇床中中速摇荡至少4hr，再高压灭菌。
灭菌时将瓶盖松开，15磅灭菌20min。
2、10 × FA Buffer（formaldehyde agarose buffer：200 mM的MOPs，50 mM的NaAc，10 mM的EDTA）：配制500ml，称取3.4g NaAC?3H2O放入1000ml烧杯中，加入400ml DEPC 处理过的去离子水，加入搅拌子，放在磁力搅拌器上溶解。
然后加入20.9g MOPs，放在磁力搅拌器上溶解。
再加1.86g EDTA二水二钠，放在磁力搅拌器上溶解。
用1M灭过菌的NaOH调PH至7.0（约用NaOH 40ml），用DEPC 处理过的去离子水定容至500ml，装入棕色瓶中，写好标签，室温避光保存。
4、5 ×甲醛变性胶加样缓冲液（5×loading buffer）：配制10ml。
预先配制水饱和的溴酚蓝溶液：在1.5ml 离心管中加入约0.1mg溴酚蓝，加入1ml DEPC水溶解，充分振荡溶解，离心，可见离心管底部有溴酚蓝粉末剩余，上层液体即水饱和的溴酚蓝液。
RNA变性电泳
采用RNA变性电泳法检测RNA质量方法如下: ⑴凝胶制备制备1.2琼脂糖凝胶电泳槽体积为50ml ①称取0.6g琼脂糖加入43.5ml水加热溶解并降温到60℃。
②加入5ml 10×甲醛变性电泳缓冲液并加入 1.5ml 37的甲醛混合均匀。
③倒入电泳槽中制胶甲醛有毒制胶应在通风橱中进行。
⑵ RNA
甲模板准备57.5μg total RNA ①制备如下混合液9.7μl 10×醛变性电泳缓冲液 1.25μl 37的甲醛 2.2μl 甲酰胺 6.25μl ②加入2.8μl RNA使总体积达到12.5μl ③混合后离心510 sec1
甲醛凝胶加0002 000 r/min ④ 55℃加热15 min ⑤加入2.5μｌ
混合后离心 5 sec ⑥将样品样缓冲液再加点EB约0.20.5μｌ
加入点样孔⑦在5v/cm的电压下电泳至溴酚蓝带跑到电泳
槽中央20cm长电泳槽用95v电压1小时左右RNA甲醛变性凝胶电泳和转膜从组织或细胞中提取出来的核酸
DNA/RNA经琼脂糖凝胶电泳将其按分子量的大小分离然后
将其转移到固相支持物上如硝酸纤维素膜用被标记的已知
核酸片断探针对固相支持物上的待检测核酸进行检测杂交。
一、RNA电泳甲醛变性电泳【目的】将DNA/RNA通过凝胶电泳使之在凝胶中分离出来通过加入标准核酸分子
markers对其进行鉴定并用于转膜、杂交等。
【试剂】
10×MOPS缓冲液0.2mol/L MOPS3-〔N-吗啉〕丙磺酸
80mmol/L NaAc 10mmol/L EDTANa2 先用400 ml DEPC水溶解20.9g MOPS和4.1gNaAc后加入10ml 0.5mol/L EDTA。
rna电泳条带 原理
rna电泳条带原理
RNA电泳条带是一种常用的实验方法，用于分离和鉴定RNA
分子。
其原理是根据RNA分子的大小和电荷差异，通过将RNA样品经过电泳分离，将RNA分子按照大小从大到小排列，并形成可视化的条带。
具体而言，RNA电泳条带的形成过程如下：
1. 样品准备：首先，将要分离的RNA样品与一定量的电泳缓
冲液混合，通常会加入一种化学荧光染料以便观察分离效果。
2. 样品加载：将混合好的RNA样品用微量移液器加载到预制
的电泳孔中。
通常会在一侧留出一个负空间，用于放置分子量标记物。
3. 定向电场：将加载好RNA样品的凝胶板放入电泳槽中，接
通电源。
通过在两端施加电场，使得RNA分子在电场力的作
用下向负极（电源的负极）移动。
4. 电泳进行：打开电源，让电场作用一段时间（通常30分钟
至几个小时），使得RNA分子在凝胶中运动。
大分子移动较慢，小分子移动较快，这样就实现了分离。
5. 结果可视化：电泳结束后，将凝胶板取出，使用紫外灯或特定的染色剂照射测量，可以看到凝胶上形成的一系列RNA条带。
较大的RNA分子会停留在距离负极较近的位置，较小的RNA分子则会移动到距离负极较远的位置。
通过观察RNA电泳条带的分布情况，可以确定RNA样品中RNA分子的大小范围和含量。
同时，利用分子量标记物的位置，可以估算未知RNA分子的分子量大小。
这种方法被广泛
应用于RNA分子的研究和分析，例如检测RNA的降解情况、分析基因表达水平等。
rna琼脂糖凝胶电泳
rna琼脂糖凝胶电泳
1、rna琼脂糖凝胶电泳是一种生物学分析方法，经常用于研究和纯化重要的核酸分子，如染色体DNA、转录因子和核苷酸多肽等。
它的使用有助于分析和准确地鉴定蛋白质的结构、表达和形成的复合物，以及蛋白质在生物体中的功能。
2、rna琼脂糖凝胶电泳的执行需要琼脂糖性能良好的琼脂糖凝胶、均一的电流、特定的物质添加剂及萃取溶液等。
通过在电泳条件下将具有内在可交换力的多聚核苷酸（如胶原或DNA模板）与琼脂糖凝胶结合，当电流通过凝胶时，琼脂糖凝胶内的离子通过它，带着离子进入凝胶中，将核苷酸隔开并分离到凝胶中不同的位置。
由于每种杂交质形成不同体系，因此可以加以分离，从而可以测量和研究杂交质种类、序列及子组。
3、总之，RNA琼脂糖凝胶电泳技术在生物学和医学领域的应用非常重要，其分析的结果有助于研究和鉴定蛋白质的结构，表达和形成的复合物，以及蛋白质在生物体中的功能。
核酸电泳原理
核酸电泳原理
核酸电泳是一种分离和分析DNA或RNA的方法，其原理基于核酸在电场下的运动速率受其分子长度和电荷量的影响。
首先，核酸样品会被加入到含有琼脂糖的琼脂糖凝胶中。
琼脂糖凝胶是一种聚合物基质，具有孔隙结构。
这些孔隙可以使核酸分子根据其大小和电荷移动通过。
然后，在电泳槽两端建立一个电场，通常是通过在槽中放置两个电极并连接电源。
核酸样品会在电场作用下沿着凝胶孔隙向电极移动。
较小的核酸片段移动得更快，而较大的核酸片段移动得更慢。
在电泳过程中，核酸样品会在凝胶中形成一条或多条带状物。
这些带状物的位置和宽度反映了核酸样品中不同片段的大小和相对丰度。
为了可视化这些带状物，可以在核酸中加入荧光染料或通过其他方法进行标记。
然后，在电泳结束后，可以使用影像分析仪或紫外光照射来观察和记录核酸带状物的位置和强度。
总的来说，核酸电泳是通过利用核酸分子在电场下的运动速率差异来分离和分析核酸样品中的不同片段。
它是一种常用的核酸研究技术，可以用于检测DNA或RNA的长度、纯度、相对丰度以及其他相关信息。
RNA研究相关的实验原理及操作介绍
RNA研究相关的实验原理及操作介绍RNA研究是生物科学中重要的研究领域之一，主要关注RNA的功能和调控。
RNA研究方法的选择可以根据所需的信息和特点来确定，包括RNA 的结构、表达量、相互作用等。
在下面的文章中，我将介绍几种常用的RNA研究实验原理及操作步骤。
1.RNA提取提取RNA是进行RNA研究的第一步。
RNA可以从细胞中提取出来进行后续的实验分析。
常见的RNA提取方法包括酚/氯仿法、硅胶柱法和磁珠法。
其中，酚/氯仿法是一种传统的方法，通过加入酚类物质和氯仿溶解细胞膜，然后通过离心将RNA从混合物中分离出来。
硅胶柱法则是一种常用的高质量RNA提取方法，通过将细胞裂解液通过硅胶柱进行柱洗提纯。
磁珠法则是一种快速和高通量的方法，利用表面上修饰的磁珠吸附RNA分子。
2.反转录和合成cDNA反转录是将RNA转化为DNA的过程，便于进行后续的分析。
反转录过程通常使用反转录酶来完成。
在反转录过程中，需要一个适当的引物（一般是克隆引物或随机引物）和逆转录酶。
引物可以在RNA的末端和整个RNA链上结合。
逆转录酶可以从常见的商业供应商中购买。
通过引物和逆转录酶的作用，RNA将转化为相应的互补DNA，即cDNA。
反转录反应的核心是在适当的温度下进行，以使引物和RNA链结合。
随后，逆转录酶通过其RNA依赖的DNA聚合酶和RNA酶H活性将RNA分解。
在此过程中，DNA 链的合成也在同一时间进行。
3.PCR扩增PCR（聚合酶链式反应）是一种通过酶催化链式扩增DNA分子的技术，可以用于快速合成大量复制的DNA分子。
在RNA研究中，PCR可用于检测RNA的存在、分析RNA的差异表达等。
PCR需要一对特定的引物，引物的选择需要根据所需扩增的RNA片段来确定。
引物被设计为与RNA片段两端互补，使其成为PCR反应的起始点。
PCR反应的步骤包括：变性、退火和延伸。
反应开始时，样品被加热至高温（通常为95℃），以使DNA解旋（变性）。
核酸电泳原理
核酸电泳原理
核酸电泳是一种常用的生物分离技术，它利用核酸分子在电场中的迁移速度差
异来实现核酸的分离和检测。
核酸电泳原理主要包括电泳基本原理、电泳仪器和试剂、电泳操作步骤等内容。
首先，电泳基本原理是核酸在电场中的迁移速度与其分子大小和电荷有关。
核
酸分子在电场中受到电荷作用力的影响，不同大小和电荷的核酸分子受到的作用力不同，从而导致它们在电场中的迁移速度不同，最终实现核酸的分离。
其次，电泳仪器和试剂是进行核酸电泳实验的关键设备和材料。
电泳仪器通常
由电泳槽、电源、电极和冷却系统等部分组成，而电泳试剂包括电泳缓冲液、核酸染料和分子量标记物等。
这些设备和试剂的选择和使用对于电泳实验的结果具有重要影响。
最后，电泳操作步骤是进行核酸电泳实验的具体操作流程。
首先是样品处理，
包括核酸提取、纯化和定量等步骤；然后是电泳样品的制备，将样品与电泳缓冲液和染料混合后加入电泳槽中；最后是电泳操作，通过设定合适的电场强度和时间来实现核酸的分离和检测。
总之，核酸电泳原理是基于核酸分子在电场中的迁移速度差异来实现核酸的分
离和检测。
通过合理选择电泳仪器和试剂，并严格按照电泳操作步骤进行实验操作，可以获得准确可靠的实验结果。
这项技术在生物学研究和临床诊断中具有重要应用，对于推动生命科学领域的发展具有重要意义。
RNA抽提到电泳步骤
RNA抽提到电泳步骤RNA抽提是一种常用的实验方法，用于从细胞或组织中提取RNA分子。
RNA抽提的步骤通常包括样本的收集、细胞破碎、RNA溶解和纯化。
在RNA溶解和纯化的步骤中，常常使用电泳方法来检测和分离RNA分子。
下面将详细介绍RNA抽提到电泳的步骤。
1.样本收集：收集需要提取RNA的样本，可以是细胞、组织或其他生物材料。
收集样本时应注意避免RNA的降解，最好在液氮中快速冷冻样本。
2.细胞破碎：将样本中的细胞破碎以释放RNA。
破碎方法可以是机械破碎或化学破碎。
机械破碎可以通过高压均质器、超声波或玻璃珠破碎器等方式进行。
化学破碎则是利用化学试剂解离细胞膜。
3. RNA溶解：将破碎的细胞溶解以释放RNA。
常用的方法是使用三氯醋酸（Trizol）试剂。
将细胞破碎物与Trizol混合，经离心后，RNA会溶解于上清液中。
4.RNA纯化：从溶解的细胞破碎物中纯化RNA分子。
RNA纯化的方法有很多种，常用的包括酚-氯仿萃取和柱层析法等。
5.RNA电泳：将纯化后的RNA样品进行电泳分析。
RNA电泳主要是通过凝胶电泳的原理进行分离和检测RNA分子。
- 准备电泳凝胶：通常使用琼脂糖凝胶，如琼脂糖琼脂糖凝胶（agarose gel）或聚丙烯酰胺凝胶（polyacrylamide gel）。
根据需要选择不同的分辨率和分离范围。
- 加载RNA样品：将纯化的RNA样品与一定体积的缓冲液混合，如甘氨酸-EDTA（glycine-EDTA）缓冲液或Tris-EDTA（TE）缓冲液。
将样品加载到凝胶上的样品孔或井中。
-电泳运行：将装有RNA样品的凝胶安装在电泳槽中，并加入足够的缓冲液使之能够浸没整个凝胶。
连接电源进行电泳运行。
电泳条件包括电流大小、电场强度和运行时间等。
-可视化：电泳运行完成后，需要对凝胶进行染色或标记，以便于可视化和分析RNA分子的迁移情况。
常见的染色方法包括乙溴化乙锭染色和银染色法。
-分析和定量：通过比较RNA分子在凝胶上的迁移距离，可以初步了解RNA的大小和相对浓度。
rna跑胶 讲解
rna跑胶讲解摘要：1.RNA 跑胶的概念与原理2.RNA 跑胶的操作步骤3.RNA 跑胶的应用领域4.RNA 跑胶的注意事项正文：RNA 跑胶是一种用于分离和检测RNA 分子的技术，其全称为聚丙烯酰胺凝胶电泳。
通过将RNA 样本与电泳缓冲液混合，再加入丙烯酰胺凝胶中，利用电场作用力，RNA 分子会在凝胶中迁移，从而达到分离目的。
下面，我们将详细介绍RNA 跑胶的相关内容。
首先，来了解一下RNA 跑胶的原理。
RNA 跑胶是基于RNA 分子在不同浓度的丙烯酰胺凝胶中迁移速度不同的原理进行的。
通常情况下，RNA 分子在较高浓度的丙烯酰胺凝胶中迁移速度较快，而在较低浓度的丙烯酰胺凝胶中迁移速度较慢。
通过调节丙烯酰胺的浓度，可以实现对RNA 分子的分离。
接下来，我们来介绍一下RNA 跑胶的操作步骤。
RNA 跑胶的操作步骤可以分为以下几个步骤：1.准备RNA 样本：首先需要从生物组织或细胞中提取RNA，并去除其中的DNA 和蛋白质。
2.配制电泳缓冲液：根据实验需要，配制适当的电泳缓冲液。
3.制备丙烯酰胺凝胶：将丙烯酰胺和缓冲液混合，制成凝胶。
4.加样：将RNA 样本加入电泳缓冲液中，混合均匀后，倒入丙烯酰胺凝胶中。
5.电泳：将加样后的凝胶放入电泳槽中，连接电源，开始电泳。
6.检测：电泳结束后，通过染色和成像技术检测和分析RNA 分子的分离情况。
RNA 跑胶技术广泛应用于分子生物学、遗传学等领域。
通过RNA 跑胶，研究人员可以对RNA 分子进行定性和定量分析，为研究基因表达和调控提供有力手段。
最后，我们来谈谈RNA 跑胶的注意事项。
在进行RNA 跑胶实验时，需要注意以下几点：1.RNA 提取和纯化：RNA 提取和纯化的质量直接影响到RNA 跑胶的结果，因此需要严格操作。
2.避免RNA 降解：在实验过程中，需要避免RNA 降解，尤其是在加样和电泳过程中。
3.控制实验条件：实验过程中需要严格控制温度、电压等条件，以保证实验结果的可靠性。
RNA的变性电泳原理
RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。
非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。
只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。
因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。
在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。
基本过程同DNA电泳一样，但应明确一点的是，因为RNA分子对RNA酶的作用非常敏感，因此必须用对RNA酶有抑制作用DEPC水来配置所有溶液，所有与RNA接触的仪器和装置都要严格处理以尽量减少RNA酶对样品的降解；另外，因为RNA分子有二、三级结构可以影响其电泳结果，因此电泳时应在变性剂存在下进行，常用的变性剂为甲醛和戊二醛。
RNA非变性琼脂糖凝胶检测实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。
电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。
琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5μg/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。
实验步骤（1）用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
（2）在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4 ul于封口膜上。
在实验台上再加入5 ul 1×TAE电泳缓冲液及1 ul 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
（3）打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。
在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。
非变性电泳：上样量超过3ug，电压超过6V/cm，电泳缓冲液时间太长，均可能导致28S 和18S 条带分不开。
使用2ug 上样量，电压小于6V/cm，使用新鲜的电泳缓冲液并且频繁混匀两极的缓冲液，是获得好的电泳结果的前提。
(以DNA 标准为参照，28S 和18S 分别位于2.0kb 和0.9kb 左右。
RNA的变性琼脂糖凝胶电泳实验原理、材料和操作步骤
RNA的变性琼脂糖凝胶电泳实验原理、材料和操作步骤一、实验目的学习RNA琼脂糖凝胶电泳的使用技术。
二、实验原理RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测。
在非变性电泳中，可以分离混合物中不同分子量的RNA分子，凡是无法确定分子量。
只有在变性情况下，RNA 分子完全伸展，其泳动率才与分子量成正比。
判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。
完整的未降解的RNA 制品的电泳图谱应可清晰看到18s rRNA、28s rRNA、5s rRNA的三条带，且28s rRNA的亮度应为18s rRNA的两倍。
三、材料、试剂及器具1、材料总RNA提取物。
2、试剂（1）0.1%DEPC水：200ml双蒸去离子水加0.2mlDEPC焦炭酸、二乙酯混匀，室温放置过夜，高压灭菌。
（2）10x电泳缓冲液。
吗啉代丙烷磺酸（MOPS）0.4mol/L（pH 7.0）NaAc 0.1mol/L乙二胺四乙酸(EDTA) 10mmol/L（3）50mL变性琼脂糖凝胶（1%）（4）10x电泳缓冲液5 mL琼脂糖0.5 g0.1%DEPC水36.5 mL加热溶解，稍冷却，加入8.5 mL 37%甲醛。
（5）上样缓冲液：50%甘油，1mmmol/LEDTA，0.4% 溴酚兰，0.4%二甲苯蓝。
（6）甲酰胺（去离子）。
3、器具（1）电泳系统（2）紫外透视仪四、操作步骤1、将制胶用具用70%乙醇冲洗一遍，晾干备用。
2、制胶：称取0.5g琼脂糖粉末，加入放有36.5mL的DEPC水的锥形瓶中，加热使琼脂糖完全溶解。
稍冷却后加入5mL的10x电泳缓冲液、8.5mL的甲醛。
然后在胶槽中灌制凝胶，插好梳子，水平放置待凝固后使用。
3、加样：在一个洁净的小离心管中混合以下试剂：电泳缓冲液（10x）2μl、甲醛3.5mL、甲酰胺10mL、RNA样品3.5μl。
混匀，置60℃保温10min，冰上速冷。
加入3μl的上样缓冲液混匀，取适量加样于凝胶点样孔内。
rna琼脂糖凝胶电泳的原理
rna琼脂糖凝胶电泳的原理RNA琼脂糖凝胶电泳是一种常用的生物分子分离和分析方法，特别适用于RNA的分离和检测。
它基于RNA分子的大小和电荷差异，在琼脂糖凝胶中进行分离和检测。
本文将介绍RNA琼脂糖凝胶电泳的原理及其在生物学研究中的应用。
RNA琼脂糖凝胶电泳的原理主要涉及琼脂糖凝胶的制备和电泳条件的选择。
琼脂糖凝胶是一种由琼脂糖和缓冲液组成的凝胶，具有一定的孔隙结构。
在电泳过程中，RNA样品被加载到琼脂糖凝胶中，然后通过电场的作用，RNA分子在凝胶中移动分离。
琼脂糖凝胶的制备是RNA琼脂糖凝胶电泳的第一步。
通常使用琼脂糖、缓冲液和硼酸进行制备。
首先，将适量的琼脂糖加入缓冲液中，加热搅拌使其溶解。
然后，加入适量的硼酸并再次搅拌均匀。
最后，将混合溶液倒入电泳槽中，待其凝固形成琼脂糖凝胶。
在琼脂糖凝胶电泳中，电泳条件的选择对于分离效果至关重要。
通常使用缓冲液作为电解质，以维持电泳过程中的pH值和离子强度。
常用的缓冲液有Tris-borate EDTA缓冲液（TBE缓冲液）和Tris-acetate EDTA缓冲液（TAE缓冲液）。
此外，还需要选择适当的电场强度和电泳时间，以实现RNA分子的分离。
RNA琼脂糖凝胶电泳的原理基于RNA分子的大小和电荷差异。
由于RNA分子的大小和结构差异，不同长度的RNA分子在琼脂糖凝胶中的迁移速度也不同。
较短的RNA分子迁移较快，而较长的RNA分子迁移较慢。
此外，RNA分子带有负电荷，会受到电场的作用而向阳极迁移。
通过调节琼脂糖凝胶的孔隙大小、电泳条件和电泳时间，可以实现对RNA分子的分离。
通常，使用分子量标记物作为参照物，根据参照物的迁移距离和RNA样品的迁移距离，可以确定RNA分子的大小。
RNA琼脂糖凝胶电泳在生物学研究中具有广泛的应用。
它可以用于检测RNA的纯度和完整性，评估RNA的降解程度。
此外，它还可以用于分离和鉴定RNA分子，例如mRNA、rRNA和tRNA等。
微流控rna电泳原理
微流控rna电泳原理微流控RNA电泳原理微流控技术是一种基于微型流体学的技术，可以将微小的液滴或流体精确地控制在微型通道中。
在生物医学领域，微流控技术已经被广泛应用于DNA和RNA的分离和检测。
本文将介绍微流控RNA电泳的原理和应用。
一、微流控技术微流控技术是一种基于微型流体学的技术，可以将微小的液滴或流体精确地控制在微型通道中。
微流控技术的优点在于可以实现高通量、高灵敏度、高分辨率和低成本的分析。
在生物医学领域，微流控技术已经被广泛应用于DNA和RNA的分离和检测。
二、RNA电泳原理RNA电泳是一种将RNA分离和检测的方法。
RNA电泳的原理是利用RNA在电场中的迁移速度不同，通过电泳分离RNA。
RNA电泳可以分离不同大小和电荷的RNA分子，从而实现RNA的分离和检测。
三、微流控RNA电泳原理微流控RNA电泳是将微流控技术和RNA电泳技术相结合的一种新型技术。
微流控RNA电泳的原理是将RNA样品通过微型通道，利用电场将RNA分离。
微流控RNA电泳可以实现高通量、高灵敏度、高分辨率和低成本的RNA分离和检测。
四、微流控RNA电泳的应用微流控RNA电泳已经被广泛应用于RNA的分离和检测。
微流控RNA 电泳可以用于研究RNA的结构和功能，以及RNA在疾病诊断和治疗中的应用。
微流控RNA电泳还可以用于RNA的高通量筛选和分析，从而实现高效的RNA研究和应用。
总之，微流控RNA电泳是一种新型的RNA分离和检测技术，具有高通量、高灵敏度、高分辨率和低成本的优点。
微流控RNA电泳已经被广泛应用于RNA的研究和应用，为RNA研究和应用提供了新的思路和方法。
rna琼脂糖电泳方法
rna琼脂糖电泳方法RNA琼脂糖电泳方法引言：RNA琼脂糖电泳是一种常用的分离和分析RNA分子的方法。
它基于RNA在琼脂糖凝胶中的迁移速率差异，能够根据RNA分子的大小和电荷差异将其分离开来。
本文将对RNA琼脂糖电泳方法进行详细介绍。
一、原理RNA琼脂糖电泳是利用琼脂糖凝胶电泳的原理对RNA分子进行分离。
琼脂糖凝胶是一种由琼脂糖和缓冲液构成的凝胶，它具有化学稳定性好、成本低廉、操作简便等优点。
在电场作用下，RNA分子会在琼脂糖凝胶中迁移，迁移速率与RNA分子的大小和电荷有关，较长的RNA分子迁移较慢，较短的RNA分子迁移较快。
二、实验步骤1. 样品制备：将待分析的RNA样品经过提取和纯化后，加入适量的RNA加载缓冲液，使其含有一定的离子浓度和pH值，以保持RNA的稳定性。
2. 样品加载：将样品加载到琼脂糖凝胶槽中的孔上。
加载时要注意避免气泡的产生，以免影响结果的准确性。
3. 电泳条件设置：根据RNA分子的大小和预期分离效果，设置适当的电压、电流和电泳时间。
4. 电泳进行：将凝胶槽放入电泳仪中，通电进行电泳。
电泳结束后，取出琼脂糖凝胶进行染色或转印等后续处理。
三、结果分析通过观察琼脂糖凝胶的迁移带，可以得到RNA分子的分离结果。
一般情况下，琼脂糖凝胶上会出现多个清晰的迁移带，每个带代表一个RNA分子的不同大小。
根据迁移带的位置和数目，可以初步判断RNA样品中的RNA种类和相对含量。
四、优缺点1. 优点：RNA琼脂糖电泳方法操作简单、成本低廉，适用于常规实验室使用。
琼脂糖凝胶的孔隙大小可调，可以根据需要选择不同的琼脂糖凝胶，实现对不同大小RNA分子的分离。
2. 缺点：琼脂糖凝胶电泳对RNA分子的分离能力相对较低，不能分离出具有相似大小但不同电荷的RNA分子。
此外，琼脂糖凝胶电泳对于较长的RNA分子，如mRNA，其迁移速率较慢，易出现模糊或堆积现象。
五、应用领域RNA琼脂糖电泳方法广泛应用于生物医学研究中，特别是在RNA 分子的分离和纯化方面。
电泳的原理
电泳的原理电泳是一种常见的生物化学实验技术，它利用电场的作用将带电粒子在溶液中移动，从而实现分离、富集或纯化的目的。
电泳技术广泛应用于蛋白质、核酸等生物大分子的分离和检测，是生物化学实验中不可或缺的重要手段。
在电泳的实验过程中，我们需要了解电泳的原理，以便更好地理解实验结果和优化实验条件。
电泳的原理可以简单地概括为受电荷粒子在电场作用下的迁移。
在电泳实验中，通常会使用琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶作为固相介质，将待分离的生物大分子样品加载到凝胶中，然后在两极施加电压，产生电场。
由于生物大分子带有电荷，它们会在电场的作用下向相反方向迁移，移动的速度与电荷大小和分子大小有关。
通过这种方式，不同大小、不同电荷的生物大分子可以在凝胶中被分离开来。
电泳的分离原理可以根据不同的电泳方式和凝胶类型而有所不同。
例如，在蛋白质电泳中，常用的凝胶电泳方式包括聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和聚丙烯酰胺凝胶双向电泳（2D-PAGE）。
在核酸电泳中，常用的凝胶电泳方式包括琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。
不同的凝胶类型和电泳条件可以实现对不同生物大分子的有效分离。
除了分离作用外，电泳还可以用于富集和纯化。
例如，在蛋白质电泳中，可以通过电泳将目标蛋白从复杂混合物中富集出来，为后续的蛋白质鉴定和分析提供样品。
在核酸电泳中，也可以通过电泳将目标DNA或RNA分离纯化出来，用于后续的测序、克隆等实验。
总的来说，电泳是一种简单而有效的生物大分子分离技术，其原理基于受电荷粒子在电场中的迁移。
通过合理选择凝胶类型和电泳条件，可以实现对生物大分子的分离、富集和纯化，为生物化学实验提供了重要的技术支持。
深入理解电泳的原理，有助于我们更好地设计和优化电泳实验，获得准确可靠的实验结果。
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RNA的琼脂糖凝胶电泳实验原理RNA电泳可以在变性及非变性两种条件下进行。
非变性电泳使用1.0%--1.4%的凝胶，不同的RNA条带也能分开，但无法判断其分子量。
只有在完全变性的条件下，RNA的泳动率才与分子量的对数呈线性关系。
因此要测定RNA分子量时，一定要用变性凝胶。
在需快速检测所提总RNA样品完整性时，配制普通的1%琼脂糖凝胶即可。
基本过程同DNA电泳一样，但应明确一点的是，因为RNA分子对RNA酶的作用非常敏感，因此必须用对RNA酶有抑制作用DEPC水来配置所有溶液，所有与RNA接触的仪器和装置都要严格处理以尽量减少RNA酶对样品的降解；另外，因为RNA分子有二、三级结构可以影响其电泳结果，因此电泳时应在变性剂存在下进行，常用的变性剂为甲醛和戊二醛。
RNA非变性琼脂糖凝胶检测实验材料、器具及药品蘑菇的总RNA溶液。
电泳仪，电泳槽，电子天平，移液器，枪头，微波炉，紫外透射检测仪等。
琼脂糖，1XTAE电泳缓冲液，0.5μg/ml溴化乙锭（EB）10X载样缓冲液。
实验步骤（1）用1×TAE电泳缓冲液制作琼脂糖凝胶，加1×TAE电泳缓冲液至液面覆盖凝胶。
（2）在超净工作台上，用移液器吸取总RNA样品4 ul于封口膜上。
在实验台上再加入5 ul 1×TAE电泳缓冲液及1 ul 的10X载样缓冲液，混匀后，小心加入点样孔。
（3）打开电源开关，调节电压至100V，使RNA由负极向正极电泳，约30min后将凝胶放入EB染液中染色5min,用清水稍微漂洗。
在紫外透射检测仪上观察RNA电泳结果。
非变性电泳：上样量超过3ug，电压超过6V/cm，电泳缓冲液时间太长，均可能导致28S 和18S 条带分不开。
使用2ug 上样量，电压小于6V/cm，使用新鲜的电泳缓冲液并且频繁混匀两极的缓冲液，是获得好的电泳结果的前提。
(以DNA 标准为参照，28S 和18S 分别位于2.0kb 和0.9kb 左右。
)变性电泳条带变淡：EB 与单链的结合能力要差一些，故同样的上样量，变性电泳比非变性电泳要淡一些。
另外的可能是甲醛的质量不高。
RNA的变性琼脂糖凝胶检测试剂：（1）MOPS缓冲液（10*）:0.4mol/L 吗啉代丙烷磺酸（MOPS）(PH7.0)，0.1mol/L NaAc, 10mol/L EDTA。
（2）上样染料：50%甘油，1mmol/L EDTA ,0.4%溴酚蓝，0.4%二甲苯蓝。
（3）甲醛。
（4）去离子甲酰胺。
电泳槽清洗：去污剂洗干净（一般浸泡过夜）——水冲洗——乙醇干燥——3%H2O2灌满——室温放置10分钟——0.1%DEPC水冲洗。
操作：（1）将制胶用具用70%乙醇冲冼一遍，晾干备用。
（2）配制琼脂糖凝胶。
①称取0.5g琼脂糖，置干净的100ml锥形瓶中，加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使琼脂糖彻底溶化均匀。
②待胶凉至60--70 ℃，依次向其中加入9ml甲醛、5ml 10X MOPS缓冲液和0.5 ul溴化乙锭，混合均匀。
③灌制琼脂糖凝胶。
（3）样品准备：①取DEPC处理过的500 ul小离心管，依次加入如下试剂：10x MOPS缓冲液2ul，甲醛3.5 ul,甲酰胺（去离子）10 ul，RNA 样品4.5 ul,混匀。
②将离心管置于60℃水浴中保10分钟，再置冰上2分钟。
③向管中加入3 ul上样染料，混匀。
（4）上样。
（5）电泳：电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于7.5V/ml 的电压下电泳。
（6）电泳结束后，在紫外灯下检查结果。
RNA提取、电泳注意事项，有几点说得很好啊快速的操作，低温环境，少量取上清主要是抽提之后吸取上清时要特别小心，只要不把蛋白层吸出来就不会有RNase污染。
分子克隆第二版343页,上关于提取RNA所用的玻璃容器的处理方法,是用前180度干烤8小时或更长时间;另一种方法是0.1%的depc水浸泡(37度2小时),然后灭菌水淋洗数次,100度干烤15分钟,然后高压灭菌除去depc.我们实验室一直是用170度考4小时,且不准离人,不准过夜,可能是怕烤箱长时间高温,线路老化会发生危险吧提取RNA所用的枪头，EP管。
直接高压烘干即可。
如果用0.1％DEPC处理，要在DEPC配置后振摇1小时后再浸泡枪头，EP管方有效。
我做的都是将枪头泡在配制好的depc中，摇振过夜，然后倒掉depc注意要到干净，再高压，为了防止仍残留液体可120度干烤一会A.对于提取RNA来说,我认为关键的一点在于实验器材的准备.包括从最初的标本的制备,保存,以及之后的试剂的准备,匀浆器,镊子,tip头的去除RNase处理,尤其是去除RNase的DEPC 处理步骤B. 您在处死大鼠前,先准备好干净的冻存管(用1.5ml的Ep管也可以,就是后面您在从液氮中取出的时候容易爆,您的注意安全),然后将去除的骨骼肌立即用干净的剪刀分成半颗到一颗黄豆大小,装入冻存管后立即投入液氮保存.个人认为在这里使用装标本的管子没必要用DEPC处理C.在提取RNA之前,将试剂(TRIzol)和器械(tip头,镊子,匀浆器)都准备好D.从液氮取出标本后,立即转移进入事先加入TRIzol的匀浆器内(最好置冰上操作),立即匀浆,一直到标本完全碾磨碎,这个时候TRIzol液体成浑浊状,而且匀浆器的壁上没有太多的黏附组织,然后将TRIzol转出,继续后续的步骤.1 RNase是一种蛋白酶，能够降解RNA。
2我们的手上皮肤上有很多，应该是对我们的身体起保护作用。
保护不被RNA病毒感染？或者什么的。
3 这个酶高效稳定。
要么在DEPC水中处理n小时，要么在160度高温烘烤6小时。
此酶才会失效。
4 所谓DEPC，是一种叫做焦碳酸二乙酯的东西。
有毒啊。
所谓DEPC水，一般指两种状态，a，配制好未消毒；b，配制好已消毒。
通过高压消毒，该物质会降解，从而无毒。
1 无菌蒸馏水中加入0.1%(v/v)焦碳酸二乙酯（DEPC），室温搅拌4小时以上至完全溶解，高压灭菌20分钟，冷却备用。
这个是DEPC水的b状态。
2 如果你要用DEPC水处理Tips等等东东，那么就要用高压前的水，即DEPC水的a状态。
把枪头管子等完全浸泡至少8小时，我一般都是过夜的，或者平时就泡在里面备用。
RNA 提取必须创造无RNase的环境，所有仪器与试剂均按照以下方法进行处理：研钵、研棒、药匙、玻璃器皿等需在180℃烘干4h以上；电泳槽、胶板、梳子、用0.1 %～0.2%DEPC 水处理过夜或者用洗涤灵清洗干净后用0.5%的SDS (Sodium dodecyl sulfate，抑制RNase的活性)浸泡过夜，然后用ddH2O冲洗干净，晾干备用；离心管，枪头等塑料器皿要用0.1%～0.2%DEPC水处理之后(DEPC有致癌之嫌，须小心操作)。
37℃保温12h以上，然后高压灭菌，灭活DEPC ( Diethypyrocarbonate )；溶液都需用经DEPC处理过的水配置，RNA提取的所有操作应尽可能在超净工作台上进行。
我们研究所里提RNA用的枪头和EP管都是高压两遍的，没有用DEPC水处理。
1、有灭菌过的DEPC水，这一般是用来配75%乙醇用，因为乙醇若高压灭菌会挥发，所以乙醇是新开封专用的。
2、没有经高压灭菌的DEPC水，这主要是用于配你提RNA所用的其他试剂（所说的试剂是可以经高压灭菌的），总的来说，都得经过高压灭菌，目的就是要去除DEPC，以防止它以随后实验的干扰。
3、DEPC处理水：无菌蒸馏水中加入0.1%(v/v)焦碳酸二乙酯（DEPC），室温搅拌4小时以上，121 度高压灭菌20分钟，冷却备用。
凡是不能用高温烘烤的材料如塑料容器等皆可用0.1%的焦碳酸二乙酯(DEPC)水溶液处理,再用蒸馏水冲净。
DEPC是RNA酶的化学修饰剂,它和RNA 酶的活性基团组氨酸的咪唑环反应而抑制酶活性。
DEPC与氨水溶液混合会产生致癌物,因而使用时需小心。
试验所用试剂也可用DEPC处理,加入DEPC至0.1%浓度,然后剧烈振荡10分钟,再煮沸15分钟或高压灭菌以消除残存的DEPC,否则DEPC也能和腺嘌呤作用而破坏mRNA活性。
但DEPC能与胺和巯基反应,因而含Tris和DTT的试剂不能用DEPC处理。
Tris溶液可用DEPC处理的水配制然后高压灭菌。
配制的溶液如不能高压灭菌,可用DEPC处理水配制,并尽可能用未曾开封的试剂.为啥在28s之后还是有影影约约的片断？和模糊的smear？这都与非变性电泳方式有关。
RNA的电泳，严格讲是要使用变性电泳的，我们平时所知道的RNA 电泳的知识，实际上都是由变性电泳获得的。
但因为非变性电泳实在是太方便了，同时，就一般检测而言，完全可以替代变性电泳，所以我们日常检测就都使用非变性电泳了。
电泳时间太长了容易产生降解。
最好是在120V左右。
操作的时候有没有注意戴口罩和手套，注意，手套要经常换，不要太节约了。
那样也会影响RNA的质量。
无论你是提什么RNA只要是用异丙醇沉淀的，都得用75％的酒精洗涤一次。
1 样品不要太多，抽提务必充分，室温放置5min；2 200ul氯仿剧烈振荡20s，室温放置2－15min；3 13000g 离心15min;4 取上层水相,一般400-450ul就足够了，千万不要贪多！***5 加入500ul异丙醇摇匀，室温放置10min；6 12000g 离心10min；7 75％乙醇1000ul 洗涤沉淀；8 7500g 离心5min；（12000转速太高了吧，沉淀不容易溶解的）9 弃乙醇，吸干净残余的微量乙醇，室温干燥3－5min；（时间太久沉淀不易溶解）10 适量DEPC水溶解沉淀。
电泳的上样量1ug，电泳buffer用DEPC处理的水配制，电泳时间不要太久，95V，10－15min 足够了。
建议跑RNA电泳。
先用2％琼脂糖胶，若分离效果不好，可用甲醛变性胶。
在上样缓冲液中注意加入RNA酶抑制剂。
注意观察带形，质量较好的RNA亮度。
28S:18S应为2:1。
还要注意观察，在加样孔或刚出加样孔附近，有没有带，若有，可能为基因组DNA污染。
OD值只有1.5，可能为基因组DNA污染。
参考一下分子克隆3。
上面有OD值与污染DNA的关系。
建议，酚氯仿抽提后，上清可少吸一些。
提取后的RNA样品可用无RNA酶的DNA酶消化一下。
注意该酶的buffer中有一种物质在OD260有吸光度，应严格按照其protocol操作，减少误差。
只要用DEPC处理过的水，打开一瓶新的无水乙醇（或者专用于RNA的，即只用处理过的枪头取过乙醇的）配就可以了。
DEPC高温高压时变成CO2和水，再加上乙醇也很容易气化，可能是因为有气体产生吧，如果盖子太紧容易发生瓶子破掉的事情。
（我还从来没有听说过把乙醇高温灭菌过）而且，湿热灭菌本身不足以去除RNA酶，所以我觉得有时候，灭菌可能反而引入RNA酶污染也不一定哦75%的乙醇用于提取RNA 时最好还是现用现配，乙醇最好是新的且以后不要用于其他方面，也就是留一瓶专门用于提取RNA。