(完整版)精准检验对流式细胞术的发展和质量控制要求

常用荧光素： • FITC,激发光488nm 发射
光525nm； • PE,激发光488nm 发射光
575nm; • PE-Cy5,激发光488nm 发
射光667nm; • PE-Cy7,激发光488nm 发
射光767nm。
流式细胞仪是一种任您自由展开想 像力的、非凡的检测工具！
By the end of the 1980's,
精准检验对流式细胞术发展 和质量控制需求
盛慧明 2016年11月11日
目录
一、流式细胞术发展历史和现状 二、流式细胞术的最新进展 三、BEAMing技术 四、流式细胞术的质量控制
目录
一、流式细胞术发展历史和现状 二、流式细胞术的最新进展 三、BEAMing技术 四、流式细胞术的质量控制
一、流式细胞术发展历史和现状
Becton Dickinswenku.baidu.comn's FACScan One laser， three colors
TheLSR-Fortessa is a 4 laser, 18 colour machine
How to align the lasers?
How to compensate the fluorochromes?
流式细胞术的最新进展
使用超声波（高于2 MHz，接近医学 影像学所用的声波频率）而非流体动 力学聚焦的流式细胞仪，能够沿毛细 管中心轴将细胞定位于单一聚焦线上。
流式细胞术的最新进展
Molecules of Equivalent Soluble Fluorochrome （MESF）
DxFLEX
光谱流式细胞术（Spectral flow cytometry）
是一种对液流中排成单列的细胞或其它生物微粒（如微球，细菌， 小型模式生物等）逐个进行快速定量分析和分选的技术；
流式细胞术技术平台涵盖了细胞生物学、免疫学、血液学、肿瘤学 、药理学、遗传学及临床检验等领域，在各学科中发挥着重要的作 用。
流式细胞术发展历史
流式细胞术完成FCM计数的主要历程
1930年,Casperrsson 和Thorell 开始致力于细胞的计数; 1934年,Moldaven 是世界上最早通过光电仪记录细胞数量; 1940年,Coons 提出用结合荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白; 1953年,Croslannd Taylor 应用分层鞘流原理,奠定了流式细胞术的液流技术基础; 1956年,Coulter 生产了Coulter细胞颗粒计数器; 1953年,Parker 和Hutcheon 描述一种全血细胞计数器装置,成为流式细胞仪的雏形; 1967年, Holm 等设计了汞弧光灯激发荧光染色的细胞，再由光电设备计数的装置; 1973年, Steinkmp设计了利用激光激发双色荧光色素标记的细胞，达到计数和分选的
流式细胞术的科研应用
免疫功能研究 细胞周期和倍体分析 细胞凋亡 干细胞研究 树突细胞研究 肿瘤相关基因表达的研究 抗肿瘤药物作用机制以及多药耐药性的研究 放疗/化疗疗效的研究 。。。
目录
一、流式细胞术发展历史和现状 二、流式细胞术的最新进展 三、BEAMing技术 四、流式细胞术的质量控制
流式细胞术的临床应用
HIV免疫分型，CD4+绝对计数 淋巴细胞亚群分析（T\B\NK\Treg） 白血病和淋巴瘤的免疫分型 肿瘤的细胞周期和倍体分析 网织红细胞计数 细胞移植的免疫状态监测（Th1/Th2） 干细胞计数（CD34+） 阵发性血红蛋白尿(PNH) HLA-B27检查（AS） 血小板功能及相关疾病
1972年, Herzenberg研制出一个细胞分选器的改进型,能够检测出经荧光标记抗体染色 的细胞的较弱的荧光信号;
1973年，与Stanford University合作开发世界上第一台商用流式细胞仪FACSI.
Kamentsky
Herzenberg
流式细胞仪的基本构造
流式细胞采用的抗体
二、流式细胞术的最新进展
Science. 2015 Nov 13;350(6262):739-40. Anal. Chem. 81, 6813–6822 (2009). Curr Protoc Cytom. 2013 Jan; CHAPTER: Unit1.27. J Immunol Methods. 2015 August ; 423: 52–59.
流式细胞术 Flow Cytometry
现代流式细胞仪产生于上世纪六七十年代，源于对细胞进行分选， 所以最早是Fluorescence-activated cell sorting ，FACS；最早的omic
经过近四十年的发展和完善，今天的流式细胞仪已经十分成熟并不 断推陈出新，广泛运用于从基础研究到临床实践的各个方面；
质谱流式细胞术（Mass cytometry）
•电感耦合等离子体质谱 (Inductively Coupled Plasma – Mass Spectrometry) •飞行质谱流式细胞 (Cytometry by Time-Offlight,CyTOF)
CCD(Charge Coupled Device)是电 荷藕合器件图像传感器
光谱流式细胞术
•Based on a spectrograph and multichannel detector (usually CCD) Vs. mirrors & optical filters & photomultiplier tubes (PMT. •Rapid multiparameter collection and analysis.
装置.
流式细胞术发展历史
流式细胞术完成数据采集和分析技术整合
1965年，Kamentsky开拓性的提出两大设想：:(1) 用分光光度计定量细胞成分; (2) 结合测量值对细胞进行分类;
1969年,Van Dilla 和美国的Los Alamos小组研制出液流束、光路轴、检测系统光轴三 者相互正交的第一台流式细胞计数器；