195-矿泉水大肠菌群、铜绿、产气荚膜梭菌检测

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编号：XDCDC/FL I-195
成都市新都区疾病预防控制中心
饮用天然矿泉水检测原始记录
□大肠菌群 GB/T 8538-2008《饮用天然矿泉水检验方法》 □铜绿假单胞菌 GB/T 8538-2008《饮用天然矿泉水检验方法》 □产气荚膜梭菌 GB/T 8538-2008《饮用天然矿泉水检验方法》
主要检测仪器：0200025广东环凯HKP-9172A 电热恒温培养箱 抽滤装置 00278 HH600恒温水浴箱
0200002 SW-CJ-2FD 超净工作台 00472法国梅里埃VITEK2-compact 15全自动微生物分析系统 培养基配制信息：见培养基配制记录本 一、大肠菌群检测：多管发酵法（15管法）
1.1 推测性检验：选用原液10mL 、1mL ，10倍稀释液1mL 三种梯度，每个梯度接种5支乳糖胆盐发酵培养液，原液10mL 的用10mL
双料乳糖胆盐发酵培养液，原液1mL 、10倍稀释液1mL 的用10mL 单料乳糖胆盐发酵培养液中，于 （36℃±1℃）℃培养 （24h ）小时，观察每支的产气情况，产气的推测为大肠菌群阳性，记录为“+”；不产气的确定为大肠菌群阴性，记录为“—”。

1.2确证性试验：自推测为阳性的管内取一环，接种于亮绿乳糖胆盐（BGB ）培养液中，于 （36℃±1℃）培养 （48h ）小时，
观察每支的产气情况，产气的确认为大肠菌群阳性，记录为“+”；不产气的确定为大肠菌群阴性，记录为“—”。

记录BGB 阳性管数，查MPN 表32，得出水样中大肠菌群的MPN 值。

1.3记录：
2.1 水样抽滤：无菌条件下，取水样250mL ，采用0.45μm 的无菌滤膜抽滤水样。

2.2培养观察计数：将上述滤膜贴在CN 琼脂平板上，置于 （36℃±1℃）培养 （40~48h ）小时，观察有无可疑菌落。

2.2.1计数所有显蓝色或绿色的菌落，判定为铜绿假单胞菌，并计数 P= 。

2.2.2在紫外线下检查滤膜上菌落的荧光情况，计数滤膜上所有发荧光不产生绿脓色素疑似铜绿假单胞菌菌落，并进行乙酰胺肉汤确
证性试验，阳性者判定为铜绿假单胞菌，并计数 F= C F = n F = 。

2.2.3将其他所有红褐色不发荧光的菌落进行氧化酶测试、乙酰胺肉汤、金氏B 培养基试验，旭培养的置于36
℃±1℃培养20~24h
小时观察结果，三种试验全部阳性者判定为铜绿假单胞菌，并计数 R= C R = n R = 。

2.3结果计算：N=P+F(C F / n F )+R(C R / n R ) 公式说明见4.54.6
2.4 结果报告：250mL 水样中检出铜绿假单胞菌数量为： CFU/250mL 三、产气荚膜梭菌检测：
3.1 水样抽滤：无菌条件下，取水样50mL ，采用0.22μm 的无菌滤膜抽滤水样。

3.2培养观察计数：将上述滤膜贴在SPS 琼脂平板上，置于 （36℃±1℃）厌氧培养 （24h ）小时，观察（1）、无可疑黑色菌
落；（2）、有可疑黑色菌落，计数黑色菌落数：
3.3确证性试验：挑取上述平板上的可疑黑色菌落3~5个，分别接种FT 培养基，置于 （36℃±1℃）培养 （18~24h ）小时，做以下试验：（具体试验方法见
4.5
5.5.4确证性试验） CFU/50mL
主检： 审核：。