三种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的比较

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金黄色葡萄球菌检测方法

金黄色葡萄球菌检测方法Revised as of 23 November 2020金黄色葡萄球菌检测方法1.纸片法目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。

采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。

技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。

技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。

此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。

但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。

使目视效果下降，导致计数偏低。

2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。

抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。

金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。

在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。

目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。

免疫学方法包括下面两个部分：（1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌五种表型检测法的评价

１１主要仪器与试剂ＶＴＫ３全自动细菌鉴．２．ＥＩ－２
便、快速的优势，因此在临床上得到广泛应用。为比
较和评价各种ＭＲＡ的表型检测方法，Ｓ以利于临床
定仪系生物梅里埃公司产品：ｉｔｃｒ光ＰＲＬｇｃｌ荧ｈｙｅＣ
球菌。金黄色葡萄球菌质控菌株ＡＣ４３０ＴＣ３０、
ＡＣ２９３ＡＣ２２３购自于国家药品生物制品ＴＣ５２、ＴＣ９１
检定所。．
其感染的关键［目前，ＲＡ的主要检澳方法有表２１。ＭＳ
型检测法和基因检测法表型检测法由于具有简
扩散法（１％）ＶＴＫ仪器法（１％）苯唑西林琼脂筛选法（３％）苯唑西林纸片扩散法（３Ｏ）特９．、ＩＥ９９．、９７．、Ｏ７．；％
异性以头孢西丁纸片扩散法、唑两林纸片扩散法、苯苯唑西林琼脂筛选法为最高（为１０，均０￣）随后依次
为ＶＴＫ仪器法（３％）头孢西ｒ脂筛选法ｆ３１；ＩＥ９．、４琼９％）五种表型法ＲＣ曲线下面积按大小依移为：Ｏ（头孢西丁纸片扩散法０５、孢西丁琼脂筛选法０５、Ｉ．９头９．２Ｖｑ仪器法０２、唑西林琼脂筛选法Ｏ８５９￣Ｋ，５苯９．、６

三种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法的评估

文章编号１０ — ０３２０）５０５ — ２０８０２（０７０ — ４１０
【要】目的评价ＰＰａ乳胶凝集法、孢西丁纸片扩散法和苯唑西林纸片扩散法对检测耐甲氧西摘Ｂ２头
林金黄色葡萄球菌（ＲＡ）Ｉ应用价值。方法以ＰＲ法扩增ＩｅＡ基因为金标准，三种方法对ＭＳ的临床Ｃｎｃ用
９．％结论８８
头孢两丁纸片扩散法与ＰＰａ胶凝集法一样比苯唑西林纸片扩散法能更准确检测Ｂ２乳
ＭＲＡ．得推广应用Ｓ值
【键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；胶凝集法；关乳头孢两丁纸片扩散；唑西林纸片扩散法苯
Ｓｉｅ．ＭＲＡｅｃｉ试剂盒为法国ｌｘｄＳＤｔｔｎｅｏ
ｂｏ６ｉｘ公司产品。ｉＭｒｕｅ头孢西丁（０ｇ、唑西林纸３）苯
片（ｔ）药敏试验所用培养基Ｍｕｌ — ｎｏ（１ｇ和ｘｅｌＨｉｔＭ— ｅｎＨ）琼脂为英国ＯＯＤ公司商品ＰＲ相关试剂ＸＩＣ均购自上海生物工程公司
Ｉ分离的１５株金黄色葡萄球菌进行检测并作比较结果临床０１５株细菌中有８０２株ｉｃｎＡ基因阳性．ｅ头孢西丁纸片扩散法、乳胶凝集法与ＰＲ法结果一致．苯唑西林纸片扩散法与ＰＲ法结果相符合均为ＣＣ

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 检测(荧光PCR法)

XX,
汇报人：XX
01
03
05
02
04
荧光PCR法是一种基于DN聚合酶链反应的检测方法
荧光PCR法通过荧强弱来定量分析DN序列
荧光PCR法具有高灵敏度、高特异性、快速、简便等优点
灵敏度高：能够检测到极低浓度的MRS 特异性强：能够准确区分MRS和其他细菌快速简便：操作简便，检测时间短结果准确：检测结果准确可靠，重复性好
护公众健康
灵敏度高：荧光PCR法具有较高的灵敏度，能够检测到极低浓度的MRS
特异性强：荧光PCR法具有较高的特异性，能够准确区分MRS和其他细菌
快速高效：荧光PCR法具有快速高效的特点，能够在短时间内完成MRS的检测
自动化程度高：荧光PCR法可以实现自动化操作，提高检测效率和准确性
荧光PCR法在MRS检测中的前景展望：提高灵敏度和特异性，提高检测准确性和可靠性，降低检测成本，提高检测效率，推动MRS检测技术的发展。
汇报人：XX
临床诊断：用于检测MRS感染，快速准确
科研研究：用于研究MRS的传播、变异和耐药性
公共卫生：用于监测MRS的流行病学和防控策略
食品检测：用于检测食品中的MRS污染，保障食品安全
样本类型：血液、尿液、痰液等
采集方法：无菌操作，避免污染
保存条件：低温、干燥、避光
处理方法：离心、过滤、稀释等
样品采集：采集患者样本，如血液、痰液等
核酸提取：使用核酸提取试剂盒提取样本中的DN或RN
荧光PCR反应：将提取的核酸与荧光PCR反应试剂混合，进行 PCR反应
荧光PCR检测：使用荧光PCR检测仪检测反应产物，判断样本中是否存在MRS

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三种筛查方法比较

性９％．异性１０快速胶乳检测法检测ＭＲＡ阳性４８特０％。Ｓ９株，阴性３７株，感性９．％，敏８０特异性９．％。７４结论：头孢西丁纸片法、快速胶乳检测法与ＰＲ法这个金标准有很高的一致性。Ｃ【关键词１耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（，Ａ）头孢西丁纸片法；速乳胶检测法；唑西林纸片法；ＭＰＳ；．快苯筛查【中图分类号１４６４Ｒ【文献标识码】Ｂ【文章编号】１７ — ２０（０８）７ｂ一０ — ２６３７１２００（）１８０１Ｉ唑西林纸片法检测此方法为临床检验科常用方法。．４苯２苯唑西林含量为１片，平皿中Ｍ— 琼脂厚度为４ｍ菌Ｈｍ，
２结果２１ＰＲ法ｍｅＡ基因检测结果．Ｃｃ
Hale Waihona Puke １１．．１菌株来源实验菌株为２００３年５月来本院微生物实验室从临床标本分离出的金黄色葡萄球菌８８株，标准参考菌株ＡＣ５２ＴＣ２９３来自军事医学科学院微生物流行病研究所。１１．．２材料和试剂ＭＲＡ快速胶乳检测试剂由英国Ｏｏｄ公Ｓｘｉ
胶乳凝聚法检测出３７株，异性为９．％。头孢西丁纸片法特７４检测出敏感株３８株．异性为１０。苯唑西林纸片法检测特０％
京天坛药物生物技术公司。水解酪蛋白（Ｈ）Ｍ— 琼脂为杭州天和微生物试剂有限公司产品。革兰阳性球菌鉴定板条，由温

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测及药敏结果分析

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测及药敏结果分析摘要】目的:了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的感染情况及对临床常用抗生素的耐药性，指导临床合理使用抗生素。

方法:应用琼脂筛选法，纸片（K-B）法，法国梅里埃公司生产的VITEK2compact全自动细菌鉴定药敏仪器法三种方法进行MRSA检测,应用法国梅里埃公司生产的VITEK2compact全自动细菌鉴定药敏分析系统进行细菌鉴定及药敏分析。

结果:三种方法检测MRSA，以苯唑西林盐琼脂法为标准，纸片法，仪器法与其比较，204株金黄色葡萄球菌检出121株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）,阳性率(5931%)，三种鉴定分型方法对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检出率基本一致，组间比较无显著性差异(P＜005)。

121株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌对万古霉素均敏感，对青霉素，苯唑西林，氨苄青霉素，头孢唑林，亚胺硫霉素，阿莫西林/棒酸全部耐药。

结论:万古霉素是有效控制MRSA感染的最佳抗生素,临床治疗葡萄球菌感染时应进行MRSA的检测，合理使用抗生素。

【关键词】甲氧西林耐药；葡萄球菌；抗生素敏感性试验【中图分类号】R453【文献标识码】B【文章编号】1003-5028(2013)10-0312-01近几年来对医院感染病原菌的分析中发现，革兰氏阳性球菌为主要的病原菌［1］。

革兰氏阳性菌中又以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌为主。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌具有非常广泛的传播途径,且其耐药性呈现多重耐药的特点,临床治疗具有较大的困难。

本组资料中，我们对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测方法进行了探讨，并将临床常用的抗革兰氏阳性菌的抗生素对其的敏感性进行了测试，旨在指导临床提高对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染的诊治水平提供参考，现将研究结果报道如下：1资料与方法11一般资料：所有病原菌均来自于我院2009年10月~2012年10月期间收治的金黄色葡萄球菌感染患者的血液、痰液、尿液及分泌物等样本共204分，其中共检出121株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，占比为：593%。

五种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方法的比较

陈碧英，马晨芸，李志兰，陈佩宏，陆志成，郎立中（上海市第七人民医院检验科，上海２００１３７）
摘要：目的评价快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＭＲＳＡ）的方法。方法收集上海市第七人
民医院临床分离的金黄色葡萄球菌１５８株、表皮葡萄球菌１２株、溶血葡萄球菌１０株、人葡萄球菌１株，用ＭＲＳＡＩＤ产色培养基法、苯唑西林最低抑菌浓度（ＭＩＣ）法、头孢西丁纸片扩散法、青霉素结合蛋白（ＰＢＰ２ａ）乳胶凝集法４种方法检测ＭＲＳＡ，并与荧光聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测ｍｅｃＡ基因进行比较。结果ＭＲＳＡＩＤ产色培养基法检出ＭＲＳＡ１２４株，敏感性和特异性分别为１００．０％、９１．９％，头孢西丁纸片扩散法检出ＭＲＳＡ１１９株，敏感性和特
较好的一致性。结论头孢西丁纸片扩散法检出ＭＲＳＡ的敏感性和特异性最高，ＩＤ产色培养基法检测ＭＲＳＡ
比常规方法报告时间缩短２４ｈ，是一种快速、简便、特异性好且便于临床实验室检测ＭＲＳＡ的方法。关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；ｍｅｃＡ基因；头孢西丁；产色培养基
ＳｅｖｅｎｔｈＰｅｏｐｌｅｓＨｏｓｐｉｔａＺ，ａｎｇｈａｉ２００１３７，ｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：０ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｒａｐｉｄａｎｄａｃｃｕｒａｔｅｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ．ｒｅｓｉｓｔａｎｔ

金黄色葡萄球菌检测方法

金黄色葡萄球菌检测方法1.纸片法目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。

技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。

技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。

此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。

使目视效果下降，导致计数偏低。

2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。

抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。

金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌SCCmec分型方法的比较

有优缺点。结论：ＳＭＲＡ菌株ＳＣｅＣｍｃ的地区性差异仅通过一种方法不能很好地鉴别，Ｃｍｃ分型研究应结ＳＣｅ
合实际选择合适的分型方法。

关键词甲氧西林抗药性；葡萄球菌，黄色；ＳＣｃ分型方法金Ｃｍｅ；
４Ｃ止。ｃ停１７电泳取ＰＲ产物７．Ｃ
１１菌株从临床收集３．０株ＭＲＡ作为分型方Ｓ法比较实验用菌株。临床分离的金黄色葡萄球菌按常规方法进行鉴定。根据参考文献使用双基因扩增法验证ＭＲＡ．ｍＢ和ｍｃ基因双阳性为ＳｆｅｅＡ
ＳＣｅ型选择合适的方法方法：别用２０ＣｍＣ分分０２年Ｏｉｅａ的多重ＰＲ方法和２０ｌｉｖｒＣ０５年Ｚａｇ的多重ＰＲｈｎＣ方法对３０株ＭＲＡ菌株进行ＳＣｃ分型。果：种分型方法分型效率经统计学检验差异无显著性，各ＳＣｍｅ结两但
实用医学杂志２１００年第２６卷第９期
１３６３
・
检验与临床・
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌ＳＣｃ分型方法的比较Ｃｍｅ
邵冬华徐国宾
摘要目的：比较两种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（ＳＳＣｅＭＲＡ）Ｃｍｃ分型方法的分型效果，ＭＲＡ的为Ｓ
１材料与方法
ＳａｈＰｕ乳胶凝集试剂购于梅里埃公司；ＣｔｐｌｓＰＲ扩

三种检测甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌方法的比较

１材料与方法
待测菌配成０５麦氏单位菌液，棉签蘸取菌液后在．用管壁内轻压，后在含６Ｉ／然ｇｍＬ苯唑西林及４ｘ％氯化钠的Ｍ．琼脂平板上接种，接种面积为直径约１Ｈ５ｍｍ的圆形区域，平板３￣空气培养２对光检将５Ｃ４ｈ后查平板。平板接种处出现一个以上的菌落或细菌呈若薄膜样生长，为待测菌对苯唑西林耐药。标准菌株视金黄色葡萄球菌ＡＣ２２３作为阴性质控，金黄色ＴＣ９１葡萄球菌Ｂ５为阳性质控。１８作１．Ｌ．３Ａ法检测金黄色葡萄球菌ＰＰ按试剂盒３Ｂ２操作说明进行，对结果观察时间略加修改。４滴但将１提取液加入一支５０Ｉ号０Ｌ微量离心管内，用５Ｌｘ接种环挑取５％羊血平板上３￣过夜培养的待测菌，５Ｃ在离心管内研磨成浓菌液，在Ｖｒｘ拌器上混匀ｏｔ搅ｅ１。将离心管９￣热３ｍｎ取出离心管冷却至０Ｓ５Ｃ加ｉ，室温，入１２号提取液并于Ｖｒｘ搅拌器上混匀加滴ｏｅｔ
ＰＰＢ２，是鉴定ＭＲＡ最准确的方法。ＰＲ技术对临ＳＣ床实验室技术人员要求较高且实验条件严格，适于不临床实验室常规开展，Ａ法实验条件要求不高，作Ｌ操简单，直接快速检测ＭＲＡ。可Ｓ本研究比较了苯唑西林纸片扩散法、ＳＳ和ＬＯＡＡ法检测本院分离的ＭＲＡ和甲氧西林敏感金黄色葡Ｓ萄球菌（ＳＡ）ＭＳ的一致性，报告如下。现

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌3种检测方法的评...(1)

［作者简介］ ! 熊艳（ "#$% & ），女，硕士，检验医师，主要从事细菌耐药性研究。
1/6
中国卫生检验杂志 166= 年 1 月第 /= 卷第 1 期9 -%#DLFL OCB@D?A CT JL?A$% H?UC@?$C@V YLM%DCAC>V， +LU 166= ； SCA /=9 GC 1 表 !" #$% 株金黄色葡萄球菌纸片扩散法（ &&）筛检 ’()* 结果与 +,( 扩增法比较 !! "#$% &’( ) * 1 45 !! "#$% +&’ ) /02 6 * / 72
表 #" #$% 株金黄色葡萄球菌琼脂稀释法筛检 ’()* 结果与 +,( 扩增法比较 (>?@ !#AB$#CD ) ,-. !"#$ ) * /01 / * 1 71
转变为苯唑西林耐药，因此一旦发现金葡菌携带有 !"#$ 基因就应视为 :.;(，其治疗过程中应避免使用 ! * 内酰胺类抗生素。快速鉴定出携带 !"#$ 基因的金葡菌，可使我们及时选择治疗肯定有效的药物，如：万古霉素，迅速控制耐甲氧西林的金葡菌所造成的感染，限制其播散，同时也可以减少抗生素的滥用，减缓对万古霉素耐药葡萄球菌的出现。 !"#$ 基因 ,-. 检测是目前鉴定 :.;( 的 “ 金标准” ，但因设备、试剂和费用等方面的因素，使得该方法在临床实验室的应用受到限制。纸片扩散法简便易行，成本低廉，与 ,-. 扩增法符合率较高，仍可推荐临床实验室常规使用。尤其是 G--H; 最新推荐的头孢西丁纸片扩散法，其敏感性和特异性较苯唑西林纸片扩散法更高，可用于临床实验室常规筛检 :.;(。［参考文献］

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

7、DNA探针杂交上述的方法都是检测 NhomakorabeaRSA耐药表型的方法。MRSA根据其耐药频率可
分为1、2、3、4类，其耐药频率为10－7、10－4、10－3以及10－1[12]。上述常规的检测方法对于3、4类MRSA一般不存在问题，但对于低频率的 1、2类则很容易造成漏检。因此，对于低水平耐药或临界水平耐药的 MRSA，应选择特异性高的分子生物学方法来检测。DNA探针杂交是用特异性的mec A DNA片段经地高辛标记，与可疑菌株进行杂交，有学者报告[13]，DNA探针仅与MRSA DNA杂交，与MSSA DNA无杂交带，其特异性高于琼脂稀释法，敏感性高于肉汤稀释法，而且可直接用于临床标本，无需先进行细菌分离培养，但探针较贵，保存期较短。
MRSA耐药性的产生主要归咎于β-内酰胺类抗生素及喹诺酮类抗生素的不当使用。英国一项大型病例控制研究表明，不断增长的抗生素使用与CA–MRSA的发生有着明显的关系。现对MRSA的治疗难度不仅存在于其广泛耐药性，而且MRSA 的毒力提高，已有许多证据表明不合理的使用抗生素不仅会造成MRSA的过度生长，而且还会提高MRSA的病原性。
试验操作：选用BHI琼脂，6ug/ml万古霉素抗菌药物浓度，将菌悬液调至0.5麦氏。（最好选用微量移液管吸取10ul菌液点种于琼脂表面或用棉拭子蘸取菌液，挤掉多余液体后涂成一个直径10-15mm的区域或划线接种平板一小区域），在35℃±2℃空气培养24h；
结果：折射光仔细检查，>1个菌落或或薄膜生长； >1个菌落 =推测对万古霉素敏感性降低。
MRSA的检测：由于MRSA的不均一耐药性，给其检测带来一定的困难。MRSA的检出率受孵育温度、时间、培养基的pH和NaCl的浓度、菌液的数量等多种因素的影响。因此，目前还没有一种最佳的检测方法。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方式的比较

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测方式的比较李蓓，刘晶靖，孙竞，范金明，朱怡，熊琛[关键词] 金黄色葡萄球菌;甲氧西林;乳胶凝集实验耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是临床院感的常见致病菌，目前用于检测的的纸片法尽管简便，但其灵敏性和准确率都不太理想。

而PCR扩增mecA基因对实验条件的要求又比较高。

检测mecA基因编码产物PBP2a的表达将是判定金黄色葡萄球菌对甲氧西林是不是耐药的最直接证据[1]。

基于此基础上的快速乳胶凝集检测试剂盒在美国已经取得FDA认证，但在我国此检测方式还未普及。

为了对这几种检测方式的灵敏性、准确性有一个全面的了解以寻求更准确、迅速、经济的检测方式，本实验将对纸片检测、基因检测与蛋白质检测方式进行比较。

1 材料与方式1.1 材料1.1.1 菌株来源：实验菌株为十堰地域2003年5月~2004年6月间住院及门诊各类临床感染样本中分离保留的52株金黄色葡萄球菌。

对甲氧西林灵敏的金黄色葡萄球菌标准参考菌株ATCC 25923由军事医学科学院微生物流行病研究所保留。

1.1.2 药物纸片与检测试剂盒:以苯氧西林药物纸片代替甲氧西林药物纸片，购自北京卫生部生物制品鉴定所；水解酪蛋白(M-H) 琼脂为杭州天和生物产品；耐甲氧西林金葡菌快速乳胶检测试剂盒购自英国oxoid公司。

1.1.3 引物设计与合成：从GeneBank中查到金黄色葡萄球菌mecA基因的全序列，通过Array designer软件设计相应的引物，MecA-F, 5'-CAAGATATGAAGTGGTAAATGGT-3' MecA-R,5'-ACTGCCTAATTCGAGTGCTAC-3'送上海生物工程公司合成。

DNA 标准分子量标准购自北京天为时期公司。

1.2 方式1.2.1 实验菌株的确信：所有菌株均以常规方式培育分离，革兰氏染色、血浆凝固酶实验和生化实验进行鉴定，确信为金黄色葡萄球菌。

耐甲氧西林葡萄球菌临床检测方法评价

辽宁大学学报自然科学版第40卷第3期2013年J oU R N A L oF uA oN I N G U N r vE R sl T YN at u r al Sci enc es Edi t i onV ol_40N o．32013。

耐甲氧西林葡萄球菌临床检测方法评价陈烨+，王蕊，卢红，邓晶晶，刘晶，王洋，刘举(辽宁大学药学院辽宁省新药研发重点实验室，辽宁沈阳110036)摘要：目的评价三种方法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M R SA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(M R C N S)的可靠性和临床实用性．方法根据N C C I_s的判定标准，采用m ecA基因PC R扩增法检测临床分离的85株金黄色葡萄球菌和80株凝固酶阴性葡萄球菌，并与苯唑西林琼脂稀释法和头孢西丁纸片扩散法进行比较．结果苯唑西林琼脂稀释法筛选M R SA(M R C N S)的检出率分别93．75％(95．35％)、95．24％(54．05％)；头孢西丁纸片扩散法筛选M R SA(M R C N S)的检出率分别为98．43％(95．35％、)、90．48％(64．86％)．结论对于M R S A的检测，选用PC R扩增法，该法具有快速、灵敏和特异性强的特点，且纸片法与PC R扩增法检测结果符合率很高；对于M R C N S的检测，通过表型法筛选后，最好能得到m eeA基因的确证．关键词：M R SA；琼脂稀释法；纸片扩散法；m e cA基因；PCR中图分类号：R378．1文献标志码：A文章编号：1000-5846(2013)03-0278-06E val uat i on of C l i ni cal Tes t i ng M et hod f or D et eet i on ofM et hi ci H i n-r esi s t ant St aphyl ococcusC H E N Y e+，W A N G R ui，L U H ong，DE N G Ji ng-j i ng，LI U Ji ng，W A N G Y ang，L I U J u(School of Pha r m a c y，L i a oni ng U ni ve r s i t y，N ew D r ug R&D K ey Labor a t or y ofL i a oni ng Pr ovi nc e，S henya ng110036，C hi na)A bs t ract：O bj ect i ve：T o eva l ua t e t he cl i ni cal r el i abi l i t y and appl i cat i on of t he t hr ee m et hodsf or det ect i on of m et hi ci l l i n r es i s t ant st aph)7l oc occus a ur eus(I V l R S A)a nd m et hi ci l l i n r es i s t antc oa gul a se negat i ve s t aphyl ococci(M R C N S)．M et hods：A ccor di ng t o t he st andard of N C C LS，at ot a l of85s t r ai ns of SA U and80s t r ai ns of C N S w hi ch w e r e i s ol at ed f r om cl i ni cal s peci m ens w erede ce t e d by m ecA PC R as say，and com p ar i ng w i t h oxaci l l i n aga r di l u t i on m et hod and cef oxi f i ndi sks di f f usi o n m et hod．R es ul t s：The s ens i t i vi t y and s peci fi ci ty of oxaci l l i n agar di l u t i on m et hodf or det ect i ng M R SA(M R C N S)w er e93．75％(95．35％)and95．24％(54．05％)respect i vel y．收稿日期：2013—03—29基金项目：国家“十二五”规划“重大新药创制”重大科技专项资助项目(2011Z X09102一007—02)；辽宁大学“211工程”三期建设重点资助项目+作者简介：陈烨(1965一)，男，汉族，沈阳人，副研究员，硕士生导师，主要从事抗肿瘤药物、抗微生物病原菌药物的研制，Tcl：139********E—m ai l：．s y-che nye@163．t om ．第3期陈烨，等：耐甲氧西林葡萄球菌临床检测方法评价279T he s ens i t i vi t y and s peci f i ci t y of cef oxi t i n di sk di f f usi o n f or det ect i ng M R S A(M R C N S)w er e 98．43％(95．35％、)and90．48％(64．86％)respect i vel y．Concl us i on：Sel ect ed PC R m et hod f or det ect i on of M R SA，beca us e i t s f as t，s ens i t i vi t y and speci f i cit y，and hi曲l oadi ng r at e of t he di s k di f f usi o n m et hod．D et ect i on of M R C N S，af t er phe not ypi c s cr eeni ng，i t i s bes t t O be concl usi vee vi de nce Of t he m ecA ge ne．K ey w or ds：M R SA；agar di l u t i on m et hod；di sk di f f usi o n m et hod；m ecA gene；PC R自从耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M R SA)于1961年首次被发现后，其在医院感染患者中所占的比例逐年攀升，目前已被列为临床三大感染源之一…．在美国，临床分离的金葡菌中M R SA的比例从1975年的2．4％上升到2003年的59．5％【2'31；目前美国分离率约50％～70％[4J；而我国，2001年M R SA的分离率为37．4％，2008年达到62．3％”J．同时，由耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(M RC N S)引起的导管相关感染以及与置人人工假体引起的相关感染的发病率逐年上升．因此，快速准确的检测M R SA和M R C N S对于医院预防和治疗由这两种耐药菌引起的感染具有现实意义．本实验采用苯唑西林琼脂稀释法、头孢西丁药敏纸片法和PC R扩增法对临床分离的85株金黄色葡萄球菌和80株凝固酶阴性葡萄球菌进行测定，并对实验结果进行了评价．1仪器与材料1．1仪器设备PCR扩增仪(德国ana l yt i k l er a com pany)；琼脂糖凝胶电泳(北京君意东方电泳设备有限公司，JY一600C)；凝胶成像分析仪(北京君意东方电泳设备有限公司，J Y04S一3C)；T G L一20M高速台式冷冻离心机(湘潭湘仪仪器有限公司)．1．2菌株及来源85株金黄色葡萄球菌和80株凝固酶阴性葡萄球菌，来自中国人民解放军沈阳军区总医院临床分离的菌株；标准菌株金葡菌(A T C C29213)和金葡菌(A TC C25923)作为阴性对照，M R SA(A TC C 43300)作为阳性对照，均购自卫生部临床检验中心．1．3主要试剂头孢西丁(30pg／片)和M H培养基购自北京天坛生物制品公司；苯唑西林购自中国药品生物制品检定所；PC R试剂：Taq酶、10X buf f er、dN TPs为T aK aR a公司产品；D N A M a r ke r为北京天根生化科技有限公司产品；溶菌酶、蛋白酶K、％s(pH=8．0)、ED TA、SD S、酚混合液购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司．1．4寡核苷酸引物m ec A基因扩增引物：上游引物pl：5'-TG G C T AT C GT G T C A C恕盯C G一3’，下游引物p2：5’一C T GG A AC T T G，丌G A G C A G A G-3’由北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司合成．2实验方法2．1菌悬液制备挑取单个菌落于M H培养基中，于37℃恒温孵育16—18h，用生理盐水稀释菌悬液至终浓度为280辽宁大学学报自然科学版2013正0．5麦氏比浊度(1．5×108cf u／m L)．2．2琼脂稀释法将苯唑西林倍比稀释成12个浓度，浓度范围在1280—0．6仙g／m L．将稀释好的不同浓度的苯唑西林分别再与灭菌的M H琼脂液以1：9的比例混匀．用多头接种器将菌液(约107c f u／m L)接种在培养基上，每接种点细菌量为104cf u／m L，置35℃恒温箱中孵育16～24h后菌落生长被完全抑制的最低浓度为苯唑西林对此菌的M I C根据N C C LS的M I C常规标准的规定，对于金黄色葡萄球菌，苯唑西林M I C≤2斗g／m L为耐药，M I C≥4斗g／m L为敏感；对于凝固酶阴性葡萄球，苯唑西林M I C≤0．251乩g／m L为耐药，M IC，>0．5“g／m L为敏感．2．3纸片扩散法用无菌棉签蘸取菌悬液，挤出多余水分后均匀涂布于含4％N a C l的琼脂表面，然后将含30斗g 头孢西丁的药敏纸片贴于其上，每株菌涂两个琼脂平板，置35℃恒温箱中孵育24h后记录抑菌圈直径．根据N C C LS判定标准N o：对于金黄色葡萄球菌，头孢西丁抑菌圈直径妒≤19m／n为耐药，妒≥20m m为敏感；对于凝固酶阴性葡萄球菌，头孢西丁抑菌圈直径t p，<24m l T l为耐药，q够>25t oni为敏感．2．4PC R扩增法2．4．1D N A模板的制备取0．5麦氏浊度的菌悬液1m L置于E P管中，以2500r／m i n的转速离心15m i n，弃去上清液，加入20斗g／m L溶菌酶100I xL，振荡，在37℃水浴中放置30m i n；于15000r／m i n(4℃)离心10m i l l；弃上清，加入1m g／m L蛋白酶K40止、T E一10％SD S100止，在55℃水浴中放置1h，煮沸5m i n；加入生理盐水300止、N aCl溶液(5m oV L)5止和400w E酚的混合液(酚一氯仿一异戊醇，体积比=25：24：1)，均匀混合，于15000r／m i n离心10m i n．取400止水相，加l m L冷无水乙醇，再于15000r／m i n离心10m i n，弃去上清液，加75％酒精400止，洗涤沉淀1次，10000r／m i n离心5m i n．干燥后加入50止TE缓冲溶液，即制得细菌的D N A模板【6]．2．4．2PC R扩增扩增反应的总体积为25止：10×buf f e r(20m M M92+)2．5止、dN TPs(10m m oV L)2止、引物1和引物2(10斗m ol／L)各1止、T aq酶(2U／止)1．5斗L、模板2曲、无菌双蒸水15止．扩增参数：94℃预变性5m i n，94℃变性30S，52．5℃退火30S，72oC退火100s，30个循环后，72℃再延伸5m i n，14oC终止反应．2．4．3扩增产物的鉴定取扩增产物10“L，加入5止l oadi ng buf fer染色，经1．5％琼脂糖进行电泳，100V电压下电泳1h，溴化乙锭染色后于紫外凝胶成像仪上观察结果．3结果3．1三种方法的阳性检出率采用苯唑西林琼脂稀释法、头孢西丁纸片扩散法、PC R扩增法检测了85株金黄色葡菌球菌和80株凝固酶阴性葡萄球菌中的M R SA和M R C N S，其阳性检测结果见表1．结果显示，三种方法检出M R S A的阳性率并无差别；而P C R扩增法检出M R C N S的阳性率低于其他两种方法，两种表型法检测M RC N S的阳性率无差别，但阳性率明显低于PC R扩增法．第3期陈烨，等：耐甲氧西林葡萄球菌临床检测方法评价281表1M R SA和M R C N S的阳性检出率苯唑西林琼脂稀释法与PC R扩增法相比，检测M RSA的检出率分别为93．．75％、95．24％、94．12％；检测M R C N S的检出率分别为95．35％、54．05％、77．25％．实验结果见表2．此种方法检测M R SA的灵敏性和特异性较高；检测M R CN S的敏感性较高，但特异性较低．3．2琼脂稀释法与PC R扩增法比较M R SA和M R C N S的m ec A基因扩增产物一致，即在分子量为310bp处出现D N A条带，如图1．’I■。

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三种筛查方法比较

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌三种筛查方法比较目的: 以PCR检测的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的mecA基因为金标准，比较耐甲氧西林金葡菌快速胶乳凝聚检测法、头孢西丁纸片法、苯唑西林纸片法三种检验方法在MRSA筛查中的特异性和敏感性。

方法：采用NCCLS 推荐的30 μg头孢西丁纸片法和苯唑西林纸片法，以及快速乳胶法检测。

结果：苯唑西林纸片法检测MRSA阳性47株，阴性36株，敏感性94%，特异性94.7%。

头孢西丁纸片法检测MRSA阳性49株，阴性38株，敏感性98%，特异性100%。

快速胶乳检测法检测MRSA阳性49株，阴性37株，敏感性98.0%，特异性97.4%。

结论：头孢西丁纸片法、快速胶乳检测法与PCR法这个金标准有很高的一致性。

标签：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）；头孢西丁纸片法；快速乳胶检测法；苯唑西林纸片法；筛查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA) 的临床院感率不断上升，在世界各地医院都有感染流行，甚至发生暴发流行，几乎在所有使用抗生素的地方都有MRSA 存在，已引起全球范围内的广泛关注[1]。

PCR法检测MRSA特异的青霉素结合蛋白2α（PBP2α）的mecA 基因，是国际公认的金标准，但因为设备、试剂费用高，实验要求严格等因素临床实验室难以常规开展。

本实验通过检测已经经过PCR法检测过的菌株88例，探讨苯唑西林纸片法、头孢西丁纸片法、快速乳胶检测法三种方法的敏感性、特异性和临床实用性。

现报道如下：1 材料与方法1.1 实验材料和试剂1.1.1 菌株来源实验菌株为2003年5月来本院微生物实验室从临床标本分离出的金黄色葡萄球菌88株，标准参考菌株ATCC 25923来自军事医学科学院微生物流行病研究所。

1.1.2 材料和试剂MRSA快速胶乳检测试剂由英国Oxoid公司生产。

头孢西丁纸片（30 μg）、苯唑西林纸片（1 μg）购自北京天坛药物生物技术公司。

水解酪蛋白（M-H）琼脂为杭州天和微生物试剂有限公司产品。

牛乳源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测与耐药性分析

牛乳源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的
检测与耐药性分析
姜慧娇，苏艳，韦海娜，黄莹
８３００５２）（新疆农业大学动物医学学院，乌鲁木齐摘
要：从新疆昌吉、伊犁、石河子３个地区奶牛养殖场乳腺炎奶样中共分离１３４株金黄色葡萄球菌，对其中
呈现多重耐药现象。
关键词：牛乳腺炎；金黄色葡萄球菌；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；ｒｎｅｃＡ基因；耐药性
中图分类号：￥８５１．６１１文献标识码：Ａ
ＡｎａｌｙｓｉｓｏｎＤｅｃｔｅｃｔｉｏｎｏｆＭｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ — ＲｅｓｉｓｔａｎｔＪＳｆｐＺＤｃＤｃｃａｕｒｅｕｓ
新疆农业大学学报
２０１３，３６（１）：１６～２０
ＪｏｕｒｎａｌｏｆＸｉｎｊｉａｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ
文章编号：１００７ — ８６１４（２０１３）０１－００１６ — ０５
ＩｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＢｏｖｉｎｅＭｉｌｋａｎｄＩｔｓＲｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏＤｒｕｇｓ
ＪＩＡＮＧＨｕｉ — ｊｉａｏ，ＳＵＹａｎ，ＷＥＩＨａｉ — ｎａ，ＨＵＡＮＧＹｉｎｇ

三种鉴定葡萄球菌凝固酶方法的比较

三种鉴定葡萄球菌凝固酶方法的比较目的评价3种鉴定葡萄球菌凝固酶方法的敏感性和特异性。

方法临床分离的110株葡萄球菌，经过革兰染色，显色培养基显色培养，触酶试验，VITEK32鉴定后，用试管法、玻片法、商品乳胶血凝法（slidex staph-kit），鉴定葡萄球菌和评价凝固酶试验方法。

3种方法结果不一致的菌株进行重复试验。

用兔血浆试管法作为标准，比较其它凝固酶方法的敏感性、特异性。

结果兔血浆试管法检测到65株阳性菌株，以此为标准，兔血浆玻片法有3株假阳性，人血浆玻片法和乳胶血凝法的假阳性分别为8株和2株。

人血浆试管法的鉴定符合率为100%，其余各种方法的敏感性均为100%，而特异性（兔血浆和人血浆玻片法，乳胶凝集试验）分别为95.6%，88%，和98.5%。

结论人血浆凝固酶试管法敏感性特异性均较高，是鉴定葡萄球菌凝固酶试验的好方法，适合于各基层临床实验室对葡萄球菌的鉴定。

标签：金黄色葡萄球菌；血浆凝固酶；乳胶试剂耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是医院内感染的重要病原菌，然而临床标本中金黄色葡萄球菌鉴定中往往困扰者广大检验工作者，血浆凝固酶试验是鉴定金黄色葡萄球菌的重要方法之一。

鉴定的准确性直接关系到进一步上机鉴定及药敏试验判断及MRS纸片法筛选判断。

凝固酶分为两种：游离性凝固酶，结合型凝固酶，游离型凝固酶常用试管法鉴定，结合型凝固酶常用玻片法鉴定。

随着现代微生物技术的不断发展，许多医院开始选用法国梅里埃公司生产的葡萄球菌乳胶凝集试剂作为检出金黄色葡萄球菌的常规筛选试验试剂，虽然乳胶试剂盒简便，快速，但是易出现假阳性且价格昂贵。

为寻找一种适合广大基层医院实验室对葡萄球菌鉴定经济，简便的鉴定方法。

本文以兔血浆试管法为标准[1]，对110株临床分离的葡萄球菌凝固酶分别进行兔血浆，人血浆凝固酶试验和乳胶凝集试验。

评价其敏感性，特异性。

1 材料与方法1.1材料1.1.1菌株来源110株葡萄球菌均来自于我院2011年12月～2013年9月临床分离菌株，保存于-20℃低温冰箱，实验前接种于5%羊血基础平板，取对数生长期菌落进行试验。

不同方法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌结果比较

不同方法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌结果比较【摘要】目的:比较不同方法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检出阳性率。

方法:对我院分离的100株金黄色葡萄球菌同时采用苯唑西林纸片法、普通M-H 平板纸片扩散法和PBP2a乳胶凝集法进行检测,比较三种方法对MRSA的检出率。

结果:苯唑西林纸片法与普通M-H平板纸片扩散法相比具有显著性差异(P<0.05),且苯唑西林纸片法与PBP2a乳胶凝集法相比也具有显著性差异(P<0.05)。

结论:M-H平板纸片扩散法和PBP2a乳胶凝集法两种方法均可得到较满意结果,可作为检测MRSA的可靠方法。

【关键词】耐甲氧西林;金黄色葡萄球菌;检测金黄色葡萄球菌是临床上常见的毒性较强的细菌,1961年英国学者Jevons就首次发现了耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA),MRSA从发现至今感染几乎遍及全球,且MRSA对所有的β-内酰胺类抗生素都耐药,而且对其他种类的抗生素也经常表现为交叉耐药,由MRSA引起的感染已成为临床抗感染治疗的难题之一[1]。

本文对MRSA的三种不同检测方法结果比较,为控制金黄色葡萄球菌感染,指导临床治疗提供参考。

1 资料与方法1.1 实验材料与试剂:本研究所用到的实验菌株为2009年3月来本院临床标本分离出的金黄色葡萄球菌100株, 标准菌株为金黄色葡萄球菌ATCC 25923、ATCC 43300,购自卫生部临床检验中心。

抗菌药物:1μɡ/片苯唑西林药敏片购自北京天坛生物制品有限公司,苯唑西林标准品购自重庆药友制药有限公司。

MRSA 琼脂筛选培养基:配置M-H琼脂平板时加入4%NaCl,经高压灭菌,冷却至50℃时加入苯唑西林,使最终浓度为6μɡ/ml倾注平板。

1.2 方法:①苯唑西林纸片法(A):苯唑西林含量为1μg/片,平皿中M-H琼脂厚度为4 mm,菌液调至0.5麦氏单位涂布于含40 g/L NaCl的M-H平板上,贴上苯唑西林纸片,在35℃环境下孵育24 h。

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用检测ｍｃｅＡ基因的ＰＲ扩增法、Ｃ苯唑西林纸片扩散法、头孢西丁纸片扩散法对临床分离的８４株金黄色葡萄球菌进行检测并作比较。结果：苯唑西林纸片扩散法的敏感性、特异性分别为９，％、５３ｍｃ７６９，％，ｅＡ基因的ＰＲ扩增Ｃ
ｓｅｉｃｔｆＰｍｐｉａｉｎｏｍｅＡｇｎｎｆｘｔｉｋｄｆｓｏｔｏｅｅａｌ１００．ＣｏｃｕｉｎＰｐｃｆｉｏＣＲａｌｔｔｃｅｅａｄＣｅｉｎｄｓｉｕｉｎｍｅｈｄｗｒｌ０．％ｉｙｃｏ ’ ｏｉｆｎｌｓｏｓＣＲａｌａｉｎｏｃｅｅｉｈｒｃｅｓｉｆａｔｅｓｔｅａｄｓｅｉ１Ｄｉｋｄｆｓｏｔｏｓｓｌｎｎｘｅｓｖ，ｍｐｉｔｆｍｅＡｇｎｓｃａａｔｒｔｏｓ，ｓｎｉｖｎｐｃａ．ｓｉｕｉｎｍｅｈｄｉｉｅａｄｉｅｐｎｉｅｃｏｉｃｆｉｆｍｐＣｆｘｔｉｋｄｆｓｎｍｅｈｄｉｍｏｅｓｎｉｖｎｐｃａｈｎＯｘｃｌｎｄｓｉｕｉｎｔｏｅｉｎｄｓｉｕｉｔｏｓｏｉｏｒｅｓｔｅａｄｓｅｉｌａａｉｉｉｋｄｆｓｏｓｍｅｈｄ，ｗｈｃｓｓｉｂｅｆｒｉｔｌｆｉｈｉｕｔｌａｏｗｄｐｌａｉｎｉｅｃｉｉａａｏａｏｅ．ｉｅａｐｉｔｎｔｌｃｌｂｒｔｒｓｃｏｈｎｌｉ
ｍｅｈｄｗｔａｉｉｎｆｘｔｒｅｆｒｄｔｎｌｚ４ｃｉｉａｓｌｔｓｏｔｐｙｏｏｃｓａｒｕ．ＲｅｕｔＴｅｔｏｉＯｘｃｌｎａｄＣｅｉｎｗｅｅｐｒｍｅｏａａｙｅ８ｌｃ ¨ ｏａｅｆａｈｌｃｃｕｕｅｓｈｌｏｉｏｎＳｓｌｓｈ
维普资讯
８２３
实用医学杂志２００８年第２４卷第５期
Hale Waihona Puke ・检验与临床・
三种检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌方法的比较
王
摘
敏
范
婧
李先平
唐爱国
要目的：对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Ｓ３种检测方法的可靠性和临床实用性进行评价方法：ＭＲＡ）
，
ｌｇＩｉ－ｉ，ＴＮＧＡｉｏＤｐｒｅｔｌｉｌａｏａｒ，ｔｅＳｃｎｉｇａＨｏｉｌｌ，ＬａｐｎｎＸｎｇＡ一＿ｅａｔｎＣｉｃｂｒｏｙｈｅｏｄＸａｙｓｔ厂ＣｎｅＳｕｈｍｆｏｎａＬｔｎｐａｅｔｏｔｒ
ＥｖｌａｏｆｔｒｅｔｃｎｑｅｏｅｅｔｎｏｔｉｉｉｅｉｔｎｔｐｙｏｏｃｓａｒｕＷＡＮＧＭｉ，ＦａｕｔｎｏｈｅｅｈｉｕｓｆｒｄｔｃｏｆｍｅｈｃＨｎｒｓｓａｔＳｉｉａｈｌｃｃｕｕｅｓｎＡＮ
法和头孢西丁纸片扩散法的敏感性、异性均为１００特０．％。结论：ＣＰＲ技术检测ＭＲＡ具有快速、感和特异的特Ｓ敏点，一种非常有效的鉴别方法。片扩散法简便易行，是纸成本低廉，尤其是头孢西丁纸片扩散法的敏感性和特异性
较苯唑西林纸片扩散法更高．值得在临床实验室中推广应用关键词葡萄球菌，金黄色甲氧西林抗药性苯唑西林头孢西丁ｍｃｅＡ基因
ｓｎｉｖｔｎｐｃｆｉｆＯｘｃｌｎｄｓｉｕｉｎｍｅｈｄｗｅｅ９６ａｄ９．％．ｒｓｅｔｅｙＴｅｓｎｉｖｔｎｅｓｔｉａｄｓｅｉｃｔｏａｉｉｉｋｄｆｓｔｏｒ７．％ｎ５３ｅｐｃｉｌ．ｈｅｓｔｉａｄｉｙｉｙｌｆｏｖｉｙ
ＵｎｖｒｉＣｈｎｓａ４０１，Ｃｉａｉｅｓｔｙ，ａｇｈ１０１ｈｎ
【ｂｔｃ】ＯｊｃｖＴａａｅｌｉｌｅａｉｙｎｐｃｔｎｆｈｒｅｏｓｏｄｔｔｎｏＡｓａｔｒｂｔｔｅｏｅｌｔｔｉｃｌｂｉｄｐｌａｏｅｈｅｔｄｒｅｃｏｆｅｉｖｕｅｈｃｎａｒｉｌａａｉｉｏｔｔｅｍｈｆｅｉｔ
ｍｅｉｉｉｓｔｎｓｐｙｏｏｃｓｕｅｓ（Ｓ．ＭｅｏｓＰＲａｌｃｔｎｏｅｍｃｅｅｄｓｉｕｉｎｔｃｌｒｉａｔｔｈｌｃｃｕｒｕｈｌｎｅｓａａＭＲＡ）ｈｔｄＣｍｐｉａｏｆｈｅＡｇｎ，ｉｄｆｓｓｉｆｉｔｋｆｏ

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