微生物平板划线法【可编辑】
微生物平板划线法
3
细菌接种方法
常见的几种细菌的培养和基接种方法举例
平板划线接种 法 菌种 培养 基 葡萄球菌和大 肠杆菌的混合 菌液 普通琼脂平板
斜面培养基 接种法
液体培养基 接种法 大肠杆菌培养 物枯草杆菌培 养物 普通肉汤 培养基
2
培养基
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植 物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若 要研究其中某种细菌，就必须将各种细菌进行 分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当 细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养 基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌 需要不同的培养基进行培养。
培养基的种类
平板划线法——接种方法
（三）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液 的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试 管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中， 取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管 管口及试管塞再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管 塞，放至原来的位置。
平板划线法——接种方法
（一）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种 的菌名、接种者姓名、日期等。
平板划线法——接种方法
（二）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环 ，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接 种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延 至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然 后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随 后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接 种环移开火焰，待其冷却。
平板划线法——接种方法
（四）分离划线接种细菌（四区接种法） （1）左手手掌持琼脂平板培养基，大 拇指与中指轻轻将平皿盖子拿起，右手持接 种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌 薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线 时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以 腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。
菌种的分离纯化技术——平板划线法
划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线,
第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区) 是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区出现大量的 单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积 的分配应是D＞C＞B＞A。
实验目的
态结构等特征的子细胞的群落。
当样品被稀释到一定程度，与培养基混合，在一定培养条件下，每 个能够生长繁殖的细菌细胞都可以在平板上形成一个可见的菌落。
菌落总数就是指在一定条件下（如需氧情况、营养条件、pH、培养
温度和时间等）每克（每毫升）检样所生长出来的细菌菌落总数。
菌苔：细菌在固体培养基接种线上由母细胞繁 殖长成的一片密集的、具有一定形态结构特征 的细菌群落，是许多菌落连成一片形成的 细菌在斜面培养基接种线上长成的一片密集的 细菌群落，不同属种细菌的菌苔形态是不同的
了解平板划线分离纯种的原理，并熟练 掌握该操作法。
实验器材
Βιβλιοθήκη 菌悬液 牛肉膏蛋白胨培养基 无菌培养皿，水浴锅，接种环等。
实验步骤
1．融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水 浴中加热至融化。 2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操 作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。
实验原理平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞经培养后生长繁殖成单菌落通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种
平板划线技术
王伟青
名词的认识：
菌落：由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固 体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有一定形
平板划线法操作要点docx
平板划线法操作要点 .docx 平板划线法是一种常用的微生物分离纯化方法，用于将一个菌种的单个菌落进行分离、纯化和繁殖。
下面是平板划线法的操作要点：
1.准备所需材料：平皿、接种环、酒精灯、无菌棉签、镊子、培养基等。
2.将培养基倒入平皿中，用无菌棉签均匀涂布在培养基表面。
3.用镊子取出一块无菌滤纸，将其在酒精灯上灼烧后冷却，然后将其放置在培
养基表面。
4.用接种环取少量待分离的菌液，在滤纸上划线，注意不要将线划得过细或过
粗，以避免影响分离效果。
5.将平皿放置在适宜的温度下培养，观察菌落的生长情况。
如果需要，可以进
行第二次划线，以进一步纯化菌落。
6.当菌落长成后，用镊子将单个菌落取出，并将其接种到新的培养基上，以进
行下一步的实验或保存。
注意事项：
1.整个操作过程中，必须保证无菌操作，以避免污染。
2.在划线时，要注意力度和角度，以避免菌液过多或过少。
3.在培养过程中，要保持适宜的温度和湿度，以促进菌落的生长。
4.在取出单个菌落时，要用镊子轻轻夹住菌落，避免将其周围的培养基弄碎。
5.在进行下一步实验或保存之前，要对菌落进行最后的检查，以确保其纯度和
质量。
平板划线法是一种简单而有效的微生物分离纯化方法，但需要一定的操作技巧和经验。
通过不断实践和总结经验，可以逐步提高操作水平和实验效果。
微生物平板划线试验
在液体培养基中加入一定量凝固 剂，使其成为固体状态，琼脂含 量一般为1.5%-2.0%
按 物 理 状 态 不 同 划 分
固体培养基 半固体培养基
固体培养基常用来进行微生物的分 离、鉴定、活菌计数及菌种保藏
琼脂含量一般为0.2%-0.7%
观察微生物的运动特征、分类鉴 定及噬菌体效价滴定
液体培养基
不加任何凝固剂 大规模工业生产及在实验室进行 微生物的基础理论和应用方面的 研究
平板划线实验实习
一、相关基础理论－－细菌的培养
一般细菌均可用人工方法进行培养，使其生长繁殖， 以便进一步观察和研究他们的各种生物学特征。为 了获得良好的细菌培养物，在分离培养细菌时，除 采用适宜的培养基，并考虑到其他的培养条件之外， 掌握各种分离培养和接种的基本技术，也是重要环 节。
1、培养基
圆形、突起、边缘整齐、表面光滑、湿润、有光泽， 不透明菌落，直径1～2mm
4、平板划线接种法
图2-4 灭菌接种环
4、平板划线接种法
（3）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液的 试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试管塞， 将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。 将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中，取 一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管管口 再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管塞，放至原来 的位置。
2、液体培养基接种方法
步骤:（1）用记号笔在待接种培养基上写明标记。 （2）如斜面培养基的接种方法一样，握持菌种管及 接种的肉汤管。 （3）接种环灭菌冷却后，伸入菌种管取少量细菌再 伸入肉汤管内，在接近液面管壁处轻轻研磨， 蘸取少量肉汤调和，使菌混于肉汤中。塞好试 管塞后，摇动液体，使细菌在液体中均匀分布。 （4）接种完毕，将接种环灭菌后放回试管架上。肉 汤管放37℃温箱培养，18～24小时后观察生长 情况。
微生物接种方法划线法接种及注意事项平板划线接种.pptx
事
项
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种 法 及 注
2.工作过程与标准要求
（5）接种 左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，
划三至五条平行线，盖上皿盖（注意不要划破培养基）。
意
事
项
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种 法 及 注 意 事
项
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种
2.工作过程与标准要求
法 及 注 意
（1）制备平板 采用无菌操作，在准备好的无菌培养皿中倾入熔化培养基，将培养皿 放在桌面上轻轻前后左右晃动，静止冷凝成平板。
事
项
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划
• 三、平板划线接种
线 接 种 法 及 注 意
2.工作过程与标准要求
（2）取菌 ①手持试管，灼烧接种环
左手拿试管，斜面面向操作者。 右手拿接种环，在火焰上将环端灼烧灭菌，然后将有可能伸入试管的
其余部分均灼烧灭菌，重复灼烧2 ~ 3次。
事
项
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种 法 及
2.工作过程与标准要求
（2）拔取管塞 先用右手松动棉塞或塑料管盖，再用右手的小指和手掌边取下管塞。
意
板划线接种就常用此法。
事
项
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平板划线法接种
1.平板划线法定义 2.工作过程与标准要求
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平板划线接种法步骤
平板划线接种法步骤平板划线接种法是一种用于真菌、细菌等微生物的纯化和鉴定的一种常用方法。
它是通过将微生物的菌落传到平板上，然后用棉签或者铁环划线，将不同的菌落分离开来，以实现纯化和鉴定的目的。
下面将详细介绍平板划线接种法的步骤。
步骤一：准备工作1.打开洁净台，先用五氯酚消毒平板台面和其他实验用具，然后再用75%酒精擦洗。
确保实验室环境的洁净。
步骤二：取菌落1.找到需要接种的菌落，可以在菌液、菌片、菌种保存平板等上找到适合接种的菌落。
注意要选取状态良好、菌落独立、颜色明显的菌落。
2.使用无菌的铁环或棉签，在菌液、菌片、菌种保存平板等培养物上取菌。
取菌时要尽量避免将其他菌落混入。
步骤三：接种菌落1.将铁环或棉签放入需要接种的琼脂平板中，使用铁环主要是为了划线。
如果使用棉签，则可以先将棉签沾湿后再进行划线。
2.环绕铁环或棉签绕菌液、菌片等培养物附着的地方，注意不要刺破琼脂平板。
如果是用铁环进行划线，可以在琼脂平板上轻轻划动。
步骤四：连续纯化1.完成第一次接种后，在第一次接种的菌落周围进行第二次划线接种，接种方法同第一次。
2.每次划线时要注意将不同的菌落划到不同的区域，以确保菌落之间的纯化。
步骤五：培养和观察1.接种完成后，将平板盖子扣紧，将平板竖立放置，放在适当的温度下培养。
2.观察菌落的生长情况，可以根据菌落的形态、颜色、大小、透明度等性状进行鉴定，重复划线接种步骤，直到得到纯化的菌落。
以上就是平板划线接种法的步骤。
通过这种方法，可以有效地将不同的菌落分离开来，实现菌落的纯化和鉴定。
在操作过程中要注意无菌操作，尽量避免污染。
此外，根据不同的实验需求，还可以进行一系列的后续操作，如菌落转种、菌液接种等，以实现对微生物的进一步研究和应用。
微生物平板划线法实验报告
微生物平板划线法实验报告一、实验目的1. 熟悉常用微生物培养基的配置方法。
2. 学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。
3. 用平板划线法和稀释法分离微生物。
4. 认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。
二、实验原理土壤中有数量巨大、种类丰富的微生物，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。
从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。
常用的是平板分离法。
平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。
三、实验器材土样10g，牛肉膏蛋白胨培养平板20个，未知菌种平板，当天降雪；平皿，涂棒，接种环，无菌200ul, 1000ul吸头，记号笔，酒精灯，取液器:1000ul 、200ul各一支，培养箱；0.9% 无菌生理盐水，250ml三角瓶中装99ml生理盐水,每瓶加约20粒玻璃珠，250ml三角瓶中99ml生理盐水,作100倍稀释用。
四、实验步骤1. 配置培养基：取牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000ml 配置培养基，调pH至7.2，灭菌。
于讲课前倒板20块。
2. 采集野外样品：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~20cm深度的土壤数10g,装入烧杯,带回实验室;取校河水装入烧杯，带回实验室；取新积雪中间层转入烧瓶，带回实验室。
3. 制备土壤稀释液：称取土样1.0g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，用手振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。
用200ul的无菌吸头从中吸取0.1ml土壤悬液，注入事先分装有0.9ml无菌水的试管中，吹吸3次，摇匀（10-3）。
类推制得10-4、10-5的土壤悬液。
微生物接种方法划线法接种及注意事项平板划线接种.pptx
主讲：王娟
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划线法接种定义 试管斜面划线法接种
平板划线法接种
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划
• 一、划线接种法定义
线
接 种
定义：
法
及
将微生物的纯种或含菌材料用接种环或接种针挑取，然后在固
注
体培养基表面画直线或曲线，达到接种的作用。斜面接种和平
意
板划线接种就常用此法。
事
项
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平板划线法接种
1.平板划线法定义 2.工作过程与标准要求
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种
1.平板划线法接种定义
法 及 注 意 事
平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不 同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立 分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当 作待分离微生物的纯种。
注
意
事
项
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• 三、平板划线接种
线
接 种 法 及
2.工作过程与标准要求
（3）灼烧试管口 让试管口缓缓过火灭菌2~3次(切勿烧得过烫)。
注
意
事
项
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划
• 三、平板划线接种
线
接 种 法 及 注 意
2.工作过程与标准要求
（4）取菌 将灼烧过的接种环伸入试管，先使环接触管内壁，使其冷却。 将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。 将试管口通过火焰，并塞上棉塞。
微生物的纯培养 平板划线法
名词解释
1
平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细 胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单 个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生 物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分 离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作 “由点到线”稀释而达到分离目的的。
划三到五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。 ⑦ 灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划
线，重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的 划线与第一区相连。 ⑧ 将平板倒置放入培养箱中培养。
谢谢！
实验原理
分类
2
划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线 第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区） 是逐级稀释的过渡区，第四区（D区)，则是关键区，使该区出现大量的 单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落，平板上四区面积 的分配应是D>C>B>A
操作步骤
融化培养基
1
将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。
倒平板
2
待培养基冷却至50℃左右，按无菌操作法倒2只平板（每皿约 15mL），平置，待 凝固。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
步骤实施
① 将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红 ② 在火焰旁冷却接种环，并打开棉塞 ③ 将试管口通过火焰 ④ 将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环菌液 ⑤ 将试管通过火焰，并塞上棉花 ⑥ 左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，
微生物平板划线法
在培养基上划线，使菌种分散成多个单菌落。
划线：在培养基上划线，将菌种分离成单菌落
用接种环在培养基上划线，将菌种分 离成单菌落。
划线时要从培养基的一端开始，逐渐 向另一端划线，避免交叉。
培养：将培养皿放入恒温箱中培养
将培养皿放入恒温箱中，在适宜的温 度下培养一定时间。
观察并记录菌落生长情况，进行微生 物计数和鉴定。
培养温度和湿度控制
温度控制
培养温度应控制在适宜范围内，一般为37℃ 左右。
湿度控制
保持培养环境湿度适中，避免过湿或过干影 响微生物生长。
定期检查
定期检查培养温度和湿度，确保在适宜范围 内。
04
微生物平板划线法的优缺 点
优点：分离效果好，操作简单
分离效果好
平板划线法能够将混合菌种中的不同微生物逐一分离，获得单一纯种微生物，分离效果显著。
的菌种筛选和鉴定。
微生物平板划线法的历史与发展
历史
最早的微生物平板划线法由英国细菌学家弗莱明于1928年发明，用于分离纯化葡 萄球菌。随着技术的发展，平板划线法不断得到改进和完善，成为微生物学领域 的基本技术之一。
发展
近年来，随着基因组学和合成生物学等新兴领域的发展，微生物平板划线法在技 术和应用方面不断有新的突破。例如，通过改进培养基和划线技术，提高微生物 的分离效率和纯度，进一步推动微生物学研究和生物工程领域的发展。
微生物平板划线法
汇报人：
汇报时间：202X-01-05
目录
• 微生物平板划线法简介 • 微生物平板划线法操作步骤 • 微生物平板划线法注意事项
目录
• 微生物平板划线法的优缺点 • 微生物平板划线法实验结果分析
01
微生物平板划线法简介
菌种的分离纯化技术——平板划线法
实验器材
菌悬液 牛肉膏蛋白胨培养基 无菌培养皿，水浴锅，接种环等。
实验步骤
1．融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水 浴中加热至融化。
2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操 作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。
倒平板的方法
右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手 将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰； 然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可 将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。 如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞 则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打 开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养 皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面 上，待凝后即为平板。
(2)将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连 续划线(图)。划线完毕后，盖上皿盖，倒置温 室培养。
(3) 其他划线方法
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
实验结果及讨论
1．实验结果
检查每个平板划线分离的结果，并绘制菌苔、菌落分布草图。
2．讨论 针对实验原理、步骤、现象进行讨论。
划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线, 第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区) 是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区出现大量的 单菌落以供挑选纯种用。为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积 的分配应是D＞C＞B＞A。
实验目的
3.划线方法
⑴用接种环以无菌操作挑取悬液一环，先在平板培养基的一边作第 一次平行划线3-4条，再转动培养皿约70°角，并将接种环上剩 余物烧掉，待冷却后通过第一次划线部分作第二次平行划线，再 用同法通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次 平行划线部分作第四次平行划线A)。划线完毕后，盖上皿盖，倒 置于温室培养。
平板划线法
实验三菌种的分离纯化技术——平板划线法实验目的了解平板划线分离纯种的原理，并熟练掌握该操作法。
实验内容1．培养基平板的制备。
2．用平板划线分离法分离混菌。
实验原理平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。
有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种。
其原理是将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
划线的形式有多种，可将一个平板分成四个不同面积的小区进行划线,第一区(A区)面积最小，作为待分离菌的菌源区，第二和第三区(B、C区)是逐级稀释的过渡区，第四区(D区)，则是关键区，使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。
为了得到较多的典型单菌落,平板上四区面积的分配应是D＞C＞B＞A。
实验器材大肠杆菌、枯草芽孢杆菌混合菌悬液牛肉膏蛋白胨培养基无菌培养皿，水浴锅，接种环等。
实验步骤1．融化培养基：牛肉膏蛋白胨琼脂培养基放入水浴中加热至融化。
2．倒平板：待培养基冷却至50℃左右，按无菌操作法倒2只平板(每皿约15m1)，平置，待凝固。
倒平板的方法：右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰；然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。
如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞则不必夹在手中)。
左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即为平板。
3．作分区标记在皿底将整个平板划分成A、B、C、D四个面积不等的区域。
各区之间的交角应为120℃左右（平板转动一定角度约60℃），以便充分利用整个平板的面积，而且采用这种分区法可使D区与A区划出的线条相平行，并可避免此两区线条相接触。
菌种的分离纯化技术——平板划线法
置于温室培养。
(2)将挑取有样品的接种环在平板培养基上作连 续划线(图)。划线完毕后，盖上皿盖，倒置温 室培养。
(3) 其他划线方法
1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
实验结果及讨论
1．实验结果
检查每个平板划线分离的结果，并绘制菌苔、菌落分布草图。
2．讨论 针对实验原理、步骤、现象进行讨论。
倒平板的方法
右手持盛培养基的试管或三角瓶置火焰旁边，用左手 将试管塞或瓶塞轻轻地拨出，试管或瓶口保持对着火焰； 然后用右手手掌边缘或小指与无名指夹住管(瓶)塞(也可 将试管塞或瓶塞放在左手边缘或小指与无名指之间夹住。 如果试管内或三角瓶内的培养基一次用完，管塞或瓶塞 则不必夹在手中)。左手拿培养皿并将皿盖在火焰附近打 开一缝，迅速例入培养基约15m1，加盖后轻轻摇动培养 皿，使培养基均匀分布在培养皿底部，然后平置于桌面 上，待凝后即为平板。
实验原理平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞经培养后生长繁殖成单菌落通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种
平板划线技术
王伟青
名词的认识：
菌落：由单个细菌（或其他微生物）细胞或一堆同种细胞在适宜固 体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度；形成肉眼可见有一定形
通过本次实验你学到了什么技术?请
列举出来并把它的技术要点写出来.
讨论
培养皿为什么要倒置培养?
斜线划线为什么要在变换角度时灼烧接种环?
曲线划线为什么接上次划线的末端继续划?
实验原理
平板划线分离法是指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同 细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布 的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分 离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必 须反复分离多次才可得到纯种。其原理是将微生物样品在固体培养基表 面多次作“由点到线”稀释而达到分离目的的。
微生物的平板划线实施步骤
微生物的平板划线实施步骤简介微生物的平板划线是一种常见的实验技术，用于分离和培养微生物。
本文档将介绍微生物的平板划线的实施步骤，以帮助科研人员和实验室操作人员正确进行这项实验。
实施步骤1.准备实验室材料和试剂•平板培养基：根据实验需求选择适当的培养基。
•平板：使用无菌的平板，确保表面没有污染。
•微生物菌株：根据实验目的选择合适的微生物菌株。
•微量移液器和移液枪：用于准确地分配微生物样品。
•消毒液：用于消毒工作台和实验室用具。
2.操作准备•消毒工作台：使用消毒液擦拭工作台，确保无菌操作环境。
•打开无菌平板：将无菌平板打开并放置在工作台上，确保表面朝上。
•准备待划线的微生物样品：从保存的微生物培养物中取少量菌株，转移到无菌试管中。
3.划线操作•使用微量移液器或移液枪，将微生物样品滴入无菌平板上。
通常使用几种不同的浓度进行划线，以达到分离不同数量的微生物。
•选择合适的工具（如细胞划线棒），将微生物样品均匀地划线于平板表面。
可以选择直线或斜线方式进行划线。
•注意避免划线区域的交叉感染，每种微生物应有足够的空间进行生长。
•重复上述操作，直到所有的平板都完成划线。
4.平板培养•将划线完成的平板盖上密封膜，避免外界微生物污染。
•将密封膜上标记好实验信息，如时间、菌株名称等。
•将平板倒置放置于恒温培养箱中，根据菌株要求设定适当的温度和培养时间。
•培养结束后，观察平板上的菌落是否符合预期，记录相关数据。
5.清理工作•将使用过的实验器具进行合理的清理和消毒。
•处理好微生物废弃物，遵守实验室安全规范。
注意事项•实验操作中，严格遵循无菌操作的原则。
•在划线过程中，要保持手部清洁并定期更换手套，避免交叉感染。
•根据实验需要，合理选择划线方法和培养温度，以获取准确的实验结果。
•解读实验结果时，注意观察菌落形态和颜色的变化。
结论微生物的平板划线是一项常用的实验技术，用于分离和培养微生物。
本文档介绍了微生物的平板划线的实施步骤，涵盖了实验前的准备工作、划线操作、平板培养和清理工作等内容。
微生物中——平板接种的详解
微生物中一一平板接种的详解
平板接种即用接种环将菌种接至平板培养基上，或用移液管、滴管将一定体积的菌液移至平板培养基上的方法，然后培养。
平板接种的LI的是为了观察菌落形态，分离纯化菌种，活菌计数以及在平板上进行各种试验。
1、划线法，斜面接平板，无菌操作，自斜面用接种环直接取出少量菌体，或先制成菌悬液，接种在平板边缘的一处，烧去多余菌体，再从接种有菌的部位在平板培养基表面自左至右轻轻连续划线或分区划线，注意勿划破培养基。
经培养后在沿划线处长出菌落，以便观察或挑取单一菌落。
2、点种法，看了一般用于观察霉菌的菌落。
在无菌操作下，用接种针从斜面或抱子悬液中取少许抱子，轻轻点种于平板培养基上，一般以三点(..)的形式接种，霉菌的砲子易飞散，用抱子悬液点种效果好。
菌液
3、液体接平板，即用无菌移液管或者滴管吸取
一定体积的菌液移至平板培 养基上，然后用无菌玻璃涂棒将菌液均匀涂布
在整个平板上。
4、或者将菌液加人培养皿中，然后再倾人融化并冷至45"50C 的固体培养
基，轻轻摇勻，进行平置，凝固后倒置培养，分离菌种时常用。
5、平板接斜面，般是将在平板培养基上经分离培养得到的单菌落，在无菌 操作下分别接种到斜面培养基上，以便作进一步扩大培养或保存之用。
接种前先 选择好平板上的单菌落，并做好标记。
接种坏
6、左手拿平板，右手拿接种环，在火焰旁操作，灼烧接种环后将按种环在容白培养基处冷却，挑取菌落，在火焰旁稍等片刻，此时左手将平板放下，拿起斜面培养基，技斜面技种法按种。
你们要的平板接种步骤来啦！赶紧来学习
你们要的平板接种步骤来啦！赶紧来学习食品实验室服务平板划线平板划线的操作是为了将菌稀释从而获得纯培养的单菌落。
划线有多种方式。
1.三区平板划线。
三区划线中第一区所占的区域大约是平板面积的五分之一到四分之一。
第二区搭过第一区的面积使微生物数量得到“稀释”，第三区搭过第二区的面积使微生物数量进一步“稀释”，第三区不可与第一区有重叠的划线。
一般适用于可疑菌落的分离，或可疑菌落的二次平板分离。
通常划完三区后就可以出现单菌落。
三区划线如下图。
2.四区平板划线。
四区平板划线与上面的三区划线类似，只是每一区的划线面积相应减小，同样第三区不可与第一区相重叠，第四区不可与第二区和第一区相重叠，四区划线比三区划线多稀释一次，这样通过增加划线区域，有可能会分离到更多更纯的单菌落。
3.单次连续“之”字平板划线其实在微生物划线接种中，无论是试管斜面划线接种还是平板划线接种，都会用到“之”字划线。
“之”字划线的要领是：往复不间断划线，但是又不与划过的路线重复或重叠。
如果菌量比较大，就可以划得更为密集或者增加一块平板继续“之”字划线（即连续划两块板）。
“之”字划线一般适用于分离本身在此培养基上单一且黏性较大的菌类或可疑菌落的纯培养。
操作如下图所示。
4.网状平板划线网状平板花线，其实就是两次方向垂直的“之”字划线重叠在一起，一般用于纯培养，目的是通过增加更多的划线路径来获得更多的纯培养物，特别是针对一些生长较慢或菌落非常细小的菌类。
在以上的这些平板划线的方式中，三区平板划线最常用的是分区划线法，详细操作步骤见下图。
①将接种环放在火焰上灼烧，直到接种还环烧红。
②在火焰旁冷却接种换环，打开试管塞。
③将试管口通过火焰，旋转试管口并小幅度来回移动试管，切不可长时间让试管口停滞于火焰上加热。
④将已冷却的接种环伸入菌液中，挑取一环菌液。
⑤将试管口通过火焰几次后，塞上试管塞。
将试管放回试管架。
⑥左手拿起培养皿，将培养皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌液的接种环迅速深入平皿内。
平板划线法操作要点
平板划线法操作步骤1.操作前准备：将接种环2支，酒精灯2个，打火机2个，无菌平板两包，酒精棉球2瓶，镊子2个，洁净烧杯2个置于超净工作台，打开紫外灯，灭菌30分钟。
取待纯化菌种2支放入超净工作台。
操作者直立坐于操作台前，打开操作台玻璃，高度可供双手顺利出入即可。
2.擦拭：用镊子取酒精棉球擦拭双手，在超净工作台门口处，并将台面擦出与肩同宽的正方形区域，此区域即为操作区域。
将用毕的棉球放入烧杯中。
3.物品摆放：将酒精灯放于擦拭区域的中心，将接种环放于酒精灯的右侧，将菌种放于酒精灯的左侧，将无菌平板的包装除去，包装置于操作区外，无菌平板置于酒精灯左侧。
4.点燃酒精灯：打开酒精灯盖，将盖扣于离开操作区的台面上，点燃酒精灯，酒精灯周围3-5cm之内即为无菌区。
5.灼烧接种环：右手持接种环，将接种环的金属丝直立于酒精灯外焰处，灼烧至红透，然后略倾斜接种环，灼烧金属杆，注意灼烧时要将金属丝与金属杆的连接部分充分灼烧。
6.取菌种：左手持斜面的底部，将管口置于火焰的无菌区，右手小指打开试管塞，将接种环的接种丝放于外焰处再次灼烧至红透，然后将其深入试管内部，稍微凉一下，轻轻取一环，勿划破培养基，将接种环从试管中取出，注意取时勿碰触试管壁。
将试管塞灼烧一圈，塞于试管上。
因试管口一直在火焰的外焰处，故其温度较高，塞试管塞时注意勿烫手。
7.接种：左手取无菌平板一个，用拇指和食指控制皿盖，其余几指控制皿底，打开皿盖，使开口角小于30°，将接种环上的菌种按图示进行划线，一区法要求连续划线，且线的边缘应划至培养皿的内缘，线要紧密但不相连。
三区或四区法要求每划完一区，都应灼烧接种环，后一区要求与前一区首尾相连，但不得与其他区域搭在一起。
8.培养：将接种完毕的平板放于28℃恒温培养箱中倒置培养72小时。
9.整理台面：操作完毕后，将实验所需的物品放回原处，并将实验所产生的垃圾清理干净，带出超净台，放于垃圾桶中。
10.结果观察：72小时后，观察平板，应无杂菌污染，若菌种不在划线的线上则为杂菌；线应为直的，且每一线都接近平板边缘，平行的线和线之间要紧密，但不能搭在一起；要有较多的单菌落，至少应有10个以上的单菌落方为合格。
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养基、鉴别培养基
3
细菌接种方法
常见的几种细菌的培养和基接种方法举例
菌种
培养 基
平板划线接种 斜面培养基
法
接种法
液体培养基 接种法
葡萄球菌和大 肠杆菌的混合
菌液
大肠杆菌培养 物
大肠杆菌培养 物枯草杆菌培
养物
普通琼脂平板
琼脂斜面 培养基பைடு நூலகம்
普通肉汤 培养基
穿刺接种法
平板划线法——接种方法
（四）分离划线接种细菌（四区接种法） （1）左手手掌持琼脂平板培养基，大
拇指与中指轻轻将平皿盖子拿起，右手持接 种环在琼脂平板上端来回划线，涂成一细菌 薄膜（约占平板的1/10），视为一区。划线 时使接种环与接种平板面呈30~40度角，以 腕力在平板表面行轻而快地来回滑动动作。
Thank you !
平板划线法——接种方法
（2）旋转琼脂平板90度，烧灼接种环，以 杀灭环上的残留细菌，将接种环触及培养基表面 以使其冷却。灭菌接种环通过薄膜处作连续平行 划线（约占平板1/5），此视为二区。
平板划线法——接种方法
（3）旋转琼脂平板90度，灼烧接种环灭菌并 使之冷却。将灭菌接种环接二区连续平行划线（ 约占平板1/4），此为三区。
平板划线法——接种方法
（三）取菌种 左手持装有金黄色葡萄球菌或大肠杆菌菌液
的试管，用持有接种环的右手手掌及小指拔取试 管塞，将试管管口迅速通过火焰2~3次进行灭菌。
将已灭菌且已冷却的接种环伸入菌种管中， 取一接种环的菌液，然后退出菌种管，将菌种管 管口及试管塞再次通过火焰2~3次灭菌，塞好试管 塞，放至原来的位置。
2
培养基
在土壤、水、食品、空气以及人和动、植 物中，不同种类的细菌混杂地生活在一起。若 要研究其中某种细菌，就必须将各种细菌进行 分离，以得到只含有这一种细菌的纯培养。当 细菌分离成纯种后，常需要接种到有关的培养 基中，以测试其各种生物学性状，不同的细菌
需要不同的培养基进行培养。
培养基的种类
按其物理性状分为： 固体培养基 液体培养基 半固体培养基
变形杆菌培养 物痢疾杆菌培
养物 半固体琼脂
培养基
平板划线法
平板划线法主要是借划线而将细菌在琼脂 平板表面分散开，使单个细菌能固定在某一点， 生长繁殖后形成单个的菌落从而达到分离纯种 的目的。常用于分离单个菌落，也可用于观察 细菌的生长状况和观察某些生化反应。
平板划线法——接种方法
（一）标记 在培养皿底面，用记号笔注明接种
平板划线实验
1
细菌的培养
细菌的培养
细菌培养是一种用人工方法使细菌 生长繁殖的技术。细菌在自然界中分布 极广，数量大，种类多，它可以造福人 类，也可以成为致病的原因。大多数细 菌可用人工方法培养，即将其接种于培 养基上，使其生长繁殖。培养出来的细 菌用于研究、鉴定和应用。细菌培养是 一个复杂的技术。
（4）旋转琼脂平板90度，接种环不必再灭菌 ，接三区连续平行划线，划满平板其余部分，此 视为四区。
各区接种线间尽量互不交接，以达到细菌逐 渐稀释的目的。
平板划线法——接种方法
平板划线法——接种方法
（5）划线完毕，将琼脂平板放进皿盖，将培养 皿倒放，送进37℃温箱培养。
（6）培养18~24h后将培养皿取出。观察琼脂平 板表面生长的各种菌落，注意其大小、形状、边 缘、表面结构、透明度、颜色等性状。
的菌名、接种者姓名、日期等。
平板划线法——接种方法
（二）灭菌接种环 点燃酒精灯，右手以持笔式握持接种环
，并放置火焰中烧灼灭菌，先将接种环的接 种丝部分置于火焰中，待金属丝烧红并蔓延 至金属端，再直接烧灼金属环直至烧红，然 后由金属环至金属杆方向快速通过火焰，随 后再反方向通过火焰，如此2~3次。然后将接 种环移开火焰，待其冷却。