化妆品致病菌检验方法_医药卫生_专业资料.ppt
(2024年)化妆品卫生规范微生物ppt课件
定期对生产车间空气、 设备表面、操作台面等 进行微生物检测，确保 生产环境符合卫生要求 。
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操作人员卫生管理
加强操作人员个人卫生 管理，如穿戴整洁的工 作服、定期洗手消毒等 ，减少人为因素对产品 微生物污染的风险。
设备清洗消毒
建立设备清洗消毒制度 ，定期对生产设备进行 彻底清洗和消毒处理， 确保设备清洁卫生。
度都会影响其生长。
pH值
不同微生物对pH值的适 应性不同，过酸或过碱 的环境会抑制其生长。
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营养物质
微生物生长需要碳源、 氮源、无机盐等营养物
质。
常见污染微生物及其危害
01
化妆品中常见的污染微 生物包括细菌、真菌和 病毒等。
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02
污染微生物会破坏化妆 品的成分和稳定性，降 低其使用效果。
方法差异
国内外化妆品微生物检测方法在具体操作和步骤上可能存 在差异，如培养基的选择、培养条件、计数方法等。
限量标准差异
国内外化妆品微生物限量标准也存在差异，如总菌落数、 致病菌的种类和限量等。
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05
化妆品卫生规范中微生物指标解读
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微生物指标设定原则及意义
保证产品质量安全
通过设定微生物指标，控制化妆品中的微生物污染，确保产品质量 安全。
维护消费者健康
微生物污染可能导致皮肤感染等健康问题，设定微生物指标有助于 维护消费者健康。
促进行业健康发展
规范的微生物指标有助于推动化妆品行业的健康发展，提高行业整体 水平。
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各类化妆品微生物指标要求
眼部化妆品
如眼影、眼线笔等，要求菌落总数不得超过1000CFU/g或 1000CFU/ml。
化妆品微生物标准检验方法
化妆品微生物标准检验方法一、总则General Principle1 范围本规范规定了化妆品微生物学检验总则。
本规范适用于化妆品样品的采集、保存、供检样品制备。
2 仪器和设备2.1 天平。
2.2 高压灭菌器。
2.3 振荡器。
2.4 三角瓶。
2.5 玻璃珠。
2.6 玻璃棒。
2.7 刻度吸管。
2.8 研钵。
2.9 均质器。
2.10 恒温水浴箱。
2.11 采样用具：不锈钢勺，剪刀，开罐器等。
3 培养基和试剂3.1 生理盐水成分：氯化钠8.5g蒸馏水加至1000 mL溶解后，分装到加玻璃珠的三角瓶内，每瓶90mL，103.43kPa(15 lb)20min高压灭菌。
3.2 SCDLP液体培养基成分：酪蛋白胨17g大豆蛋白胨 3g氯化钠5g磷酸氢二钾 2.5g葡萄糖 2.5g卵磷脂1g吐温80 7g蒸馏水1000mL制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其它成分混合，加热溶解，调pH为7.2～7.3，分装，103.43kPa(15lb)20min高压灭菌。
注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25℃左右使用。
注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。
3.3 灭菌液体石蜡。
3.4 灭菌吐温80。
4 样品的采集及注意事项4.1 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。
检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。
包装量小于20g的样品，采样量应适量增加，其总量应大于16g。
4.2 供检验样品，应严格保持原有的包装状态，进口产品应为市售包装。
容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。
4.3 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。
如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。
4.4 若只有一份样品而同时需做多种分析，如微生物、毒理、化学等，应先做微生物检验，再将剩余样品做其它分析。
4.5 在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用采样用具、器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。
化妆品细菌检测及计数法介绍
稀釋塗抹法 (spread plate)
步驟: (1) 準備好欲稀釋的菌液（即培養於液體培養基中的菌體）。
(2) 以玻璃吸管或微量吸管吸取混和均勻之菌液1mL。 (3) 取含有9mL 無菌水之試管，將試管口過火滅菌。 (4) 將1mL菌液加入含有9mL 無菌水之試管，此時試管為十倍稀釋，即10-1稀 釋液。 (5) 將10-1稀釋液之試管以試管振盪器混和均勻。 (6) 取1mL 10-1稀釋液，加入另一管新的含有9mL 無菌水之試管中，此為10-2 稀釋液。 (7) 依同法作一連串之10倍稀釋，直至所需要的稀釋濃度。 (8) 由適當之稀釋菌液中以玻璃吸管或微量吸管取出0.1 mL菌液，置於無菌瓊 脂平板中央處。 (9) 將三角玻璃棒浸於95﹪酒精中，取出後於酒精燈火焰上燃燒。（需注意勿 使燃燒中的酒精滴入酒精瓶中，引起燃燒。玻棒彎曲部分應朝下，避免酒精 沿玻棒燒傷手部。） (10) 待酒精燒盡，將略微冷卻的玻璃棒輕觸無菌瓊脂平板以冷卻。 (11) 將玻棒輕放於平板表面，以左手旋轉平板，右手將玻棒前後推動，使菌 液均勻塗佈於平板表面。 (12) 將玻棒浸於酒精中，再以火焰燃燒滅菌。 (13) 將平板倒置於恆溫培養箱中，隔天計算菌落數目，再依照稀釋倍數推算 出原菌液濃度。
化妆品的检验PPT课件
二、细菌总数测定 1.原理 2.仪器 3.培养基和试剂 4.测定步骤 5.菌落计数法 6.菌落计数及报告方法 • 表8－15
第15页/共18页
• 三、粪大肠菌群的检验
1.原理 2.仪器 3.培养基和试剂 4.操作步骤 5.结果表示
• 四、绿脓杆菌的检验方法
1.原理 2.仪器 3.培养基和试剂
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2．润肤乳液质量检验
• 指标：表8-4 （1）感官检验 （2）离心试验
3．洗面奶质量检验
• 指标： ：表8-5 （1）感官检验 （2）质量（容量）允差
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二、液体洗涤类化妆品
• 香波指标：表8-6 1．感官检验 2．表面活性剂类型的判断 3．泡沫力的测定 • 泡沫力的测定采用罗氏-米尔法。 4．表面活性剂含量的测定 • 乙醇溶解法
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• 五、金黄色葡萄球菌检验 1.方法原理 2.仪器 3.培养基和试剂 4.操作步骤 5.检验结果 • 六、霉菌和酵母菌的检验
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感谢您的观看！
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1．泄漏试验
2．内压力试验
3．喷出率试验
4．残留物试验参照
5．起喷次数试验
六、化妆品粉块的质量分析
• 指标：表8-9
1．涂擦性能
2．疏水性
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七、冷烫液的质量分析
• 指标：表8-10
1. 游离氨含量测定
• 测定步骤
• 计算 ρ（NH3）＝ （25×c1－V×c2）×17.03
2. 巯基乙酸铵含量的测定 V c 109.2
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三、指甲油的质量分析
• 指标：表8-7 1. 牢固度的检验 2. 干燥速度的检验 3. 抗水性遥检验 4. 不挥发物的测定
化妆品微生物检查-细菌、真菌总数检查
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14-09
Discussion
1.化妆品进行微生物总数检查的意义?
2.化妆品细菌、真菌总数检查的异同点?
3.化妆品细菌、真菌总数检查的流程?
4.化妆品细菌、真菌总数检查过程的注意事项?
5.化妆品细菌、真菌总数检查的结果判断？
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14-09Pictຫໍສະໝຸດ res10g/ml 供 试品
1.0ml
10-2
10-1
1.6 2.2
4
5 6 7
9
不可计
27 不可计 0
4650
11 305 0
513
5 12 0
-
513000
270 30500 <1*10
513000或5.1*105
270或2.7*102 31000或3.1*104
9.0ml
稀 释 液
9.0ml
36℃±1℃
倒置培养48h±1h
对照
卵磷脂、吐 温80营养肉汤琼 脂
对照
1.0ml
倒置培养72h±2h
28℃±2℃ 虎红琼脂
对照
对照
14-09-01 化妆品细菌、真菌总数检查流程
7
14-09 霉菌
20 16/ 4/3 0
8
14-09
Tables
164 295 271 20 46 60
14-09
化妆品微生物检 验技术
（ZY12076.0）
1
14-09
D’accord！
2
14-09
化妆品微生物检查细菌、真菌总数检查
3
14-09
Review
比较细菌内毒素和外毒素? 唇膏样品的制备?
4
化妆品微生物检验方法
化妆品微生物检验方法1.总大肠菌群检验法总大肠菌群检验法是一种常用的指示性检验方法。
它以大肠杆菌作为指示菌，通过检测大肠杆菌的数量来判断样品是否受到污染。
该方法根据不同化妆品的特点，选择适当的培养培养基，将样品在指定的培养条件下培养和孵育一段时间后，统计分析细菌的数量。
2.革兰氏染色法革兰氏染色法是一种常用的微生物鉴定方法。
它通过染色的方式将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，进而对细菌进行鉴定。
该方法可以直接观察细菌的形态和结构，从而判断样品中是否存在细菌污染。
3.真菌检验法真菌检验法用于检测样品中真菌的数量和种类。
常用的方法包括菌落计数法和荧光分离鉴定法。
菌落计数法是将样品在含有适当培养基的琼脂平板上均匀涂布，经过一段时间后，统计平板上真菌菌落的数量。
荧光分离鉴定法使用荧光染料染色，通过显微镜观察细菌形态和结构，从而确定真菌的种类。
4.抑制菌检验法抑制菌检验法用于检测样品中对细菌或真菌具有抑制作用的物质。
常用的方法包括抑菌圈法和最低抑菌浓度法。
抑菌圈法是将样品与含有细菌或真菌的琼脂平板接触，通过观察样品周围产生的抑菌圈直径来判断样品中的抑菌活性。
最低抑菌浓度法是通过连续稀释样品，将其与细菌或真菌接触，从而确定样品的最低抑菌浓度。
5.DNA分子检测法DNA分子检测法是一种高灵敏度和高特异性的微生物检测方法。
该方法通过提取样品中的DNA，利用PCR技术或基因芯片分析技术检测目标微生物的特异性基因序列，从而判断样品中是否存在目标微生物以及其数量。
总之，化妆品微生物检验方法的选择应该根据不同化妆品的特性和目的进行合理选择。
合理的微生物检验方法可有效确保化妆品的安全性和质量，保护消费者的健康。
化妆品微生物检验方法
8.5 化妆品微生物检验方法化妆品中，特别是一些高级的护肤膏等含有蛋白质、氨基酸、维生素以及各种植物的提取液等营养成分较高的物质，为霉菌、细菌等微生物的滋生、繁殖提供了良好的生长条件，影响化妆品的质量和并危害人体健康。
在国外，许多国家所制定的化妆品微生物控制标准相当严格。
欧美一些国家要求化妆品的杂菌数每克（或每毫升）控制在（100～1000）个，不允许有致病菌。
我国药品微生物检验法规定，乳剂或外用液体每克（或每毫升）含杂菌数按品种不同控制在（500～1000）个。
在此，主要讨论化妆品微生物检验时样品的采集，细菌总数测定，粪大肠菌群、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌的测定。
8.5.1 化妆品微生物标准检验方法总则化妆品微生物标准检验方法总则按国家标准（GB 7918.1-87）执行，该总则提供了样品的采集及注意事项，供检样品的制备，不同类型的样品的检样制备的统一标准。
1．样品的采集及注意事项（1）所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。
检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10 g或10 mL；包装量小的样品，取样量可酌减。
（2）供检样品，应严格保持原有的包装状态。
容器不应有破裂，在检验前不得启开，以防再污染。
（3）接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。
如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。
（4）若只有一个样品，而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品作细菌检验，再将剩余样品作其它分析。
（5）如检出粪大肠菌群或其它致病菌，自报告发出起该菌种及被检样品应保存一个月备查。
2．供检样品的制备（1）培养基和试剂1）生理盐水：称取8.5 g氯化钠溶解于1000 mL蒸馏水中，分装入加玻璃球的三角瓶中，每瓶90 mL，在0.1 MPa压强下高压灭菌20 min。
2）SCDLP液体培养基：配方如表8-14所示。
化妆品致病菌检验方法
42℃生长试验： 挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物，接种在普
通琼脂斜面培养基上，置于42℃±1℃培养箱 中，培养 24h—48h，铜绿假单胞菌能生长，为 阳性，而近似的荧光假单胞菌则不能生长。
5、检查结果报告
（1）被检样品经增菌分离培养后，经证实为 革兰氏阴性杆菌，氧化酶及绿脓菌素试验皆 为阳性者，即可报告被检样品中检出铜绿假 单胞菌； （2）被检样品经增菌分离培养后，经证实为 革兰氏阴性杆菌，氧化酶阳性，如绿脓菌素 试验阴性而液化明胶、硝酸盐还原产气和 42℃生长试验三者皆为阳性时，仍可报告被 检样品中检出铜绿假单胞菌。
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1、定义
金黄色葡萄球菌（Staphylococcus Aureus)为革兰氏阳性球菌，呈葡萄状排 列，无芽胞，无荚膜，能分解甘露醇， 血浆凝固酶阳性。
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2、检查意义
金黄色葡萄球菌在外界分布 较广，抵抗力也较强，能引起 人体局部化脏性病灶，严重时 可导致败血症，因此化妆品中 检验金黄色葡萄球菌有重要意 义。
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（1）增菌：SCDLP液体培养基/营养肉汤 /7.5%的氯化钠肉汤 （2）分离（鉴别）：Baird Parker 平板/血琼 脂培养基 （3）鉴别：甘露醇发酵培养基 （4）试剂：革兰氏染色液、液体石蜡、兔 （人）血浆
革兰氏染色镜检
Baird Parker平板
青蛙卵
血琼脂平板平板
血浆凝固酶试验： 吸取1:4新鲜血浆0.5mL，置于灭菌小试管
3
（1）增菌：双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基
（2）分离：伊红美兰（EMB）琼脂 （3）鉴别：蛋白胨水培养基 （4）试剂：革兰氏染色液、 靛基质试剂 （柯凡 克试剂）
气泡，培养基呈
双倍乳糖胆盐培养基
化妆品微生物检验方法
一、总则1.范围本规范规定了化妆品微生物检验的基本要求。
本规范适用于化妆品样品的采集、保存及供检样品制备。
2.仪器和设备2.1 天平。
2.2 高压灭菌器。
2.3 振荡器。
2.4 三角瓶，250mL。
2.5 玻璃珠。
2.6 琉璃棒。
2.7 刻度吸管，1mL、10mL。
2.8 研钵或均质器。
2.9 恒温水浴箱。
3.培养基和试剂3.1 生理盐水成分：氯化钠8.5g蒸馏水加至1000mL溶解后，分装到加玻璃珠的三角瓶内，每瓶90 mL，103.43kPa (121℃15 lb)20min高压灭菌。
3.2 SCDLP液体培养基成分：酪蛋白胨17g大豆蛋白胨3g氯化钠5g磷酸氢二钾 2.5g葡萄糖1g吐温80 7g蒸馏水1000mL制法：先将卵磷脂在少量蒸馏水中加温溶解后，再与其它成分混合，加热溶解，调pH为7.2～7.3分装，103.43 kPa (121℃15 lb)20min高压灭菌。
注意振荡，使沉淀于底层的吐温80充分混合，冷却至25℃左右使用。
注：如无酪蛋白胨和大豆蛋白胨，也可用多胨代替。
3.3 灭菌液体石蜡。
3.4 灭菌吐温80。
4.样品的采集及注意事项4.1 所采集的样品，应具有代表性，一般视每批化妆品数量大小，随机抽取相应数量的包装单位。
检验时，应分别从两个包装单位以上的样品中共取10g或10mL。
包装量小于20g的样品，采样量可适当增加样品包装数量。
4.2 供检验样品，应严格保持原有的包装状态。
容器不应有破裂，在检验前不得打开，防止样品被污染。
4.3 接到样品后，应立即登记，编写检验序号，并按检验要求尽快检验。
如不能及时检验，样品应放在室温阴凉干燥处，不要冷藏或冷冻。
4.4 若只有一个样品而同时需做多种分析，如细菌、毒理、化学等，则宜先取出部分样品做细菌检验，再将剩余样品做其它分析。
4.5 在检验过程中，从打开包装到全部检验操作结束，均须防止微生物的再污染和扩散，所用器皿及材料均应事先灭菌，全部操作应在无菌室内进行，或在相应条件下，按无菌操作规定进行。
略谈化妆品中的致病菌检验
略谈化妆品中的致病菌检验摘要：本文通过对化妆品实施致病指标菌检验能力的验证，对我国市场化妆品检测实验室的致病菌检测的宁里和水平进行相应的了解，对实验室中存在的差异进行识别，有效的帮助实验室发现存在的问题并实施相对的改善政策，从而使检测能力不断的得到提升。
文中采用包含设计方案、准备五种样品，包括了样品Ａ无菌样品、样品Ｂ金黄色葡萄球菌、样品Ｃ铜绿假单胞菌、样品D表皮葡萄球菌以及样品E金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等，对它们进行一致性和稳定性实验和结果评价等方式，对全国186家化妆品进行了实验，结果在对186实验室进行实验之后，有132家实验的结果被评为满意，占总比例的71%。
有54家实验室结果是不满意，占总比例的29%。
五种样品的误差分别是16.7%、2.15%、9.14%、3.76％、2.69％。
综合上述结果可以看出参加本次致病菌检验能力验证的大部分实验室都能够准确的检测出样品中的致病菌，其中样品Ａ的误判率最为准确，说明还是有大部分实验室的环境控制能力有必要做出提升。
关键词：化妆品；细菌；实验室能力验证我国对化妆品的明确规定是化妆品中致病菌验证的指标是金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌，在每克或每毫升化妆品样品中不能同时含有两种致病菌，通过针对这两种指标存在与否来确定化妆品中是不是含有致病菌。
由于这两种细菌是可能使人体局部化脓性病灶的细菌，它们入侵伤口后会引发化脓性炎症，情节严重的可能会出现败血症，所以检测机构能否准确检出化妆品中是不是含有的这两种致病菌是对产品进入市场的有力保障，评价检测机构化妆品中致病指标菌检测能力是相当重要，不可忽视的。
1 材料和方法1.1 材料和试剂仪器设备采用德国 CHＲIST 型实验室冷冻干燥机、日本三洋超低温冰箱（SANYO）、恒温培养箱、梅里埃浊度计、梅里埃 API 鉴定仪、搅拌器等。
试剂运用脱脂奶粉（英国 OXOID公司），梅里埃 API20E 生化鉴定试剂盒，SCDLP 液体培养基，十六烷基三甲基溴化铵琼脂平板（TSA），乙酰胺培养基，绿脓菌素培养基，7.5%氯化钠肉汤，Baird Parker平板、血琼脂培养基，甘露醇发酵培养基等。