白血病细胞和正常细胞生成树突状细胞的比较研究
树突状细胞的特性及应用
树突状细胞的特性及应用172河北医药2004年2月第26卷第—HebeiMedicalJo—urnal,Feb2004,—V ol26—,No.2树突状细胞的特性及应用张庆九李春晖焦保华树突状细胞(Dendriticcell,I)C)是机体免疫系统中最强有力的一种专职的抗原呈递细胞(APC),在免疫应答的启动,调控上起着关键的作用LII.现代抗肿瘤免疫疗法利用Dc负载肿瘤相关抗原(T从)制成的肿瘤疫苗(瘤苗),在转移性前列腺癌,恶性黑色素瘤,多发性骨髓瘤和慢性髓性白血病(CML)等几种恶性肿瘤的治疗上已取得喜人的效果.现对树突状细胞的生物特性,来源,抗瘤机制,肿瘤疫苗疗法等进行综述1Dc生物学特性IX;最初是Steirmlan和Cohn等1973年从小鼠脾组织中分离发现的,因其形态具有树突样或伪足样突起而命名.目前一致认为,凡具有典型的树突状形态,膜表面高表达MttCⅡ类分子,能移行至淋巴器官和刺激初始型T细胞增殖活化,并具有一些相对特异性表面标志的一类细胞,方能称之为DE,DE广泛分布于全身各脏器,数量极微,约占外周血白细胞总数的1%,DC的前体细胞由骨髓进入外周血,再分布到全身各组织.13t2主要分为髓系D(=(myeloiddrivedDC)和淋巴系DC(1ymphoidrelatedoc)两大类.成熟的DC表现出6个主要特征:(1)细胞形态不规则,表面有许多膜样或树突佯突起;(2)细胞表面具有丰富的有助于抗原提呈的分子,如持续,高水平的表达MItCI类,Ⅱ类分子,共刺激分子cD帅(.)和cD86(13,:),细胞粘附分子CD(LFAI),CDm,C(ICA),C(ICAM.),co,8(LFA])和CD.∞(ICAM2),以及淋巴细胞功能相关抗原LFA1,LFA1等.人血中的I)C前体开始表达c.:,但随着成熟渐渐失去表达,而粘附分子,共刺激分子,MHC抗原随着成熟而表达增加J.活化后,特别是cD柏L活化后,c,c上调.在成熟中,cD86出现早,而cD町出现晚,血中DC前体几乎不能检测到..(3)在混合淋巴细胞反应中,既能激活MHC相同的自身反应性T细胞,又能激活MHC不同的同种反应性T细胞,而其最大特点是能够显着刺激初始型T细胞(NaiveTcel1)增殖并建立初级免疫应答.(4)具有向局部淋巴细胞T细胞区迁移的能力.(5)DC激发T细胞增殖及抗原提呈能力是巨噬细胞和B细胞的100～1000倍b1.(6)新近发现的D(:SIGN(DCslx~cificICAM3grabbingnoninten)分子在启动静息T细胞免疫反应中的作用引起人们的注意,Dc SIGN是DC特异表达的,第一个被鉴定的DC限制性分子,介导Dc与静息T细胞的强烈粘附从而发挥I)C诱导的T细胞增殖作用.另外,在体内外,J)C具有与其他APC不同的功能特征,可递呈抗原给静息T细胞的能力是I)(:最重要的功能之一. 其能力是其他APc的10—100倍.正是由于DC的上述特征使作者单位:050000~aI_lgN科大学第二医院神经外科其成为体内抗原提呈能力最强的AP【=,也是唯一一类可直接活化静息T细胞的APE.2树突状细胞的来源近几年来,随着人们在DC的起源,分类,摄取和加工处理抗原的机制以及引起DC迁移和成熟的信号传导等领域研究的深入,有关人DC大量培养和扩增的方法日益成熟.目前,树突状细胞有三个来源:骨髓,外周血和新生儿脐带血.从骨髓中分离获得树突状细胞的CD互的祖系细胞,或从外周血或新生儿脐带血于体外经14d培养分化(在GMCSF和TNFa存在的情况下)成为成熟的CD,C跽,HIADR的树突状细胞;或者用外周血纯化的CD;单核细胞或粘附单核细胞在二种细胞因子(GMCSF和IL4或ILl3)的培养刺激下成为CD,c聪的未成熟树突状细胞,再经TNFa或(和)CL刺激形成成熟的树突状细胞.3树突状细胞抗肿瘤的分子机制研究证明J,树突状细胞与肿瘤的发生,发展具有以下密切关系.(1)以肿瘤抗原体外专一性地冲击致敏,激活功能最强的APC树突状细胞,可保证肿瘤抗原被有效摄取.(2)树突状细胞通过细胞表面高水平的MHCI,Ⅱ类分子呈递了丰富的肿瘤抗原肽,使相应的T细胞受体(TCR)被充分占据;同时,树突状细胞提供高水平的协同刺激分子B7..(cD),B7.:(cD86),cD的分子等,使T细胞被充分激活.(3)树突状细胞与T细胞结合后,可以大量分泌:,激发T细胞增殖,诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)生成,主导了TH,型的免疫应答,有利于肿瘤细胞的清除.(4)树突状细胞还能分泌趋化因子(DCCCK),专一性地趋化初始型T细胞,通过促进T细胞聚集,增强对T细胞的激发.另外,肿瘤病人可以在中枢神经系统检测到T淋巴细胞和主要组织相容性抗原.采用细胞因子修饰的肿瘤细胞瘤苗能够产生抗中枢神经肿瘤的免疫反应,因此免疫反应可以介入中枢神经系统疾病.4关于各种类型的树突状细胞疫苗'目前已研究了各种形式肿瘤抗原体外冲击致敏树突状细胞制备的疫苗.(1)细胞性肿瘤抗原:经放射线照射灭活的肿瘤细胞,肿瘤细胞反复冻融上清或肿瘤细胞冻融后膜碎片或超声破碎方法制备肿瘤细胞的蛋白提取物直接体内免疫后都只产生极弱的抗肿瘤免疫效应,已极少作为肿瘤疫苗单独用于临床.(2)肿瘤抗原多肽:应用经弱酸洗脱肿瘤细胞表面的MHCI类抗原多肽冲击树突状细胞,其靶向性更好,肿瘤抗原浓度更高,可产生"冲击致敏"的效应,促进T细胞有效激活.(3)肿瘤抗原基因:将肿瘤抗原基因转移进树突状细胞,体内诱发特异性抗肿瘤免疫功能.其方式有多种:用脂质体介导单纯疱疹病毒(Hsv)蛋白抗原编码基因冲击树突状细胞,或脂质体介导河北医2004年2月第26卷第2期HebeiMedicalJournal一,Feb2004,V ol26,No.2 酪氨酸酶基因转移入树突状细胞;用肿瘤细胞的RNA作为抗原冲击树突状细胞,或用低免疫原性肿瘤的RNA(总RNA或polyA+RNA)冲击树突状细胞,免疫接种后可诱导出强烈抗肿瘤免疫力;用腺病毒载体介导肿瘤抗原基因对成熟树突状细胞的转染;用黑色素瘤抗原基因质粒通过基因枪技术转染体外培养的树突状细胞等.(4)抗独特型抗体:抗独特型抗体是肿瘤抗原的内影像,可模拟肿瘤抗原被机体识别,激发针对肿瘤细胞的免疫功能.临床首例应用树突状细胞治疗肿瘤就是应用抗独特型抗体致敏树突状细胞来做为瘤苗.(5)与细胞因子联合使用:是体内介导TH.型应答的细胞因子,与抗原冲击的树突状细胞瘤苗联合应用于肿瘤治疗,收到更佳的抗癌效果.某些情况下甚至逆转由树突状细咆诱导的耐受.(6)肿瘤相关抗原和肿瘤特异性抗原:粒细胞,巨噬细胞集落刺激因子(GMCSF)可以促进树突状细胞的成熟,维持树突状细胞的存活.将GMCSF基因经腺病毒载体介导转入树突状细胞,具有更强的体内激发肿瘤特异性CTL的能力.用腺病毒将I基因转染树突状细胞,也可协同增强T细胞功能,促进机体的抗肿瘤效应.Fms样酪氨酸激酶Ⅲ(肿,酪氨酸激酶受体家族Ⅲ成员之一)配体(n凡L)也是一种细胞因子,能与树突状细胞或B细胞表面的受体结合,促进树突状细胞的成熟,故也有人应用肿L联合树突状细胞瘤苗增强抗肿瘤疗效".此外,曹雪涛等还将重组腺病毒介导的GMCSF基因转染的树突状细胞经肿瘤抗原冲击致敏后,与肿瘤细胞融合制备出免疫原性更强的新型瘤苗,他们还报道了肿瘤抗原多肽致敏的,淋巴细胞趋化因子基因修饰的树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫应答的实验结果.法国与意大利合作小组"发现,肿瘤抗原冲击的树突状细胞胞浆内形成许多包含抗原多肽的小体(exoc~omes或dexosomes).实际上,树突状细胞除了细胞间直接接触和通过分泌细胞因子起作用外,人和小鼠的树突状细胞均能分泌或外排exo~ome.s,这种小体中不含凋亡小体,胞浆膜或内质网组组等,表达MHCI,Ⅱ类分子和cDIi6,具抗原呈递能力,能在体外刺激抗原特异性cT细胞的增殖,因而有诱导T细胞免疫反应的功能.从树突状细胞上清分离和纯化这些小体给荷瘤小鼠皮下注射(5/*gexo—sor-麟)也诱导了极强的抗肿瘤效应,在体内诱导出高水平的cT1J,并能治愈荷瘤小鼠,提示作为无细胞体系诱导体内免疫功能的应用途径,eXOC~OIIIeS也可以说是一种新型的亚细胞成分的树突状细胞瘤苗.(7)直接应用Dc:将Dc在体外进行扩增后再回输体内,以求获得更多的CTL,这本身就是一种过继性免疫治疗,而且大多数肿瘤组织内浸润Dc的数量与肿瘤患者的预后直接相关,浸润DC多则预后好.5DC的输注途径和剂量输注途径早期D(=的输注途径多采用静脉注射.近年来,采用皮下,皮内,淋巴管内,瘤体内注射的方法得到了广泛的应用.目前,多数学者认为,皮内,瘤体内注射可能更有利于DC发挥其生物学功能.DC发挥其抗肿瘤免疫效应的基础是D(=负载肿瘤抗原后,能够迁移至T淋巴细胞富集的二级淋巴器官,从而激活抗肿瘤免疫反应.因此,DC的输注途径与其能否更好地发挥生物学功能密切相关.(1)静脉及淋巴管内注射:l73Mackensen等对七HC的静脉及淋巴管内注射进行了比较,作者用转移性恶性黑色素瘤患者外周血cD五造血干细胞来源的DC 经放射性标记后,静脉或淋巴管内注射,丫照相机全身拍照观察.发现DC经静脉注射后在肺内作短暂停留,最后定位于脾和肝脏7d以上:DC注入足背淋巴管内后,可迅速迁移至引流淋巴结并停留24h以上,实验说明淋巴管内注射与静脉注射相比,更有利于DC发挥其抗肿瘤作用.(2)真皮内注射:Thomas等则比较了多种DC的输注形式后,发现真皮内注射DC后,10min内就可见标记的DC迁移入引流淋巴结,4h后引流淋巴结显象最明显,证实真皮内注射可以使DC快速迁移至引流淋巴结且可以滞留较长时间,说明真皮内注射可能是DC疫苗抗肿瘤治疗的另一较佳输注途径.(3)瘤体内注射:目前,I)C疫苗抗肿瘤治疗临床试验,大都采用肿瘤细胞抗原肽,肿瘤细胞溶解物或凋亡的肿瘤细胞先体外致敏DE,然后回输体内.6树突细胞瘤苗的剂量和用法一般用的方案是:致敏树突状细胞制成1×1个细胞/0.5n1l,注射用细胞悬液,每次剂量为1×1个细胞,每周1次,连续用4周,然后间隔2周,再次接种以增强免疫,总接种量为5×1个树突状细胞.研究认为DC注射的细胞数量与肿瘤缓解的时间成正比.但是否细胞数量越高,治疗效果越好,有无平台效应,细胞数量多少为最佳尚需进一步研究.7展望树突状细胞加肿瘤抗原将会成为有效的肿瘤免疫基因治疗手段.由于DC疫苗能促进同种异体T细胞增殖的特性及其强大的抗原提呈功能,不仅能将抗原提呈给M/-ICⅡ类分子促进cDT细胞增殖,又能提呈给MHCI类分子促进c聪T细胞增殖,诱发机体强烈的细胞免疫应答;同时研究还发现,DC在体液免疫中也发挥重要作用,可直接参与调节B细胞的成熟和分化,刺激B细胞增殖产生大量的IsA和IgM,全面调动机体的抗肿瘤免疫力,在机体抵御恶性肿瘤中发挥重要作用.DC疫苗的初步临床试用也显示出了良好的疗效.该疗法可望成为肿瘤生物治疗的又一新兴手段.参考文献】gl,En~emanEG.Dendriticcellsincancerimmunotherapy.AnnReviro—munol,2000,18:245—273.●2TakamizawaM,RivasA,FagnoniF,eta1.Dendriticcellsthatprocessandpr一~-,entnominalantigenstonaiveTlymphoeytesalederivedfromCD2pre—cursol~.Jlnmaunol,1997,158:2134-2142.3ShortmanK.|]umetoration:dendriticcells:multiplesubLypes,multipleori—gins,multiplefunctic~ns.1nmaunolCellBoil,2000,78:161—165.4BarmhemauJ,BriereJ,CauxC,etaI.Immunologyofdendn'ticcells.A/lnul~.evlnrnunol,2OO0,18:767.8l1.5LevinD,ConstantS,PasqualiniT,eta】.Roleofdendriticcellsinthepriming ofCITlymphocytestopeptideantigeninvivo.Jlmmund,1993.151:6742.6St~rmtan.DC—SIGN:Aguidetos0fT1emysteriesofdentin'ticceils.Cells.2000,100:491494.7GeijtenbeekTBH,TorensmaR,V anVlletSJ,eta1.IdentificatonofDC.SIGN, anoveldendriticcellspecificICAMsreceptorthatsupportsprimaryimmuneres.Cell,2000,100:575-585.8ChenSR,AkSMF.TanimotoK,eta1.AbsenceofCPositivematureand activateddendriticcellsatc锄cernodulesfrompatients山bepatocellular carcinomarelevancetohepatocarcinogenesis.CancerLe~em,2000,148:49.174河~t,lN药2004年2月第26趁第—2lt~J—Hebe—iMedicalJo—urnal,Feb2004,V ol26,No.2,.9曹雪涛.树突状细胞基础与临床研究新进展.中国免疫学杂志,1998,14:161—167.1O孙劲旅,张锦.树突状细胞与肿瘤免疫研究进展.tf1国肿瘤I临床与康复,1998,5:80—82.11叶闻斐,秦慧莲,何球藻.兀与FI-1]及其在体外诱导树突状细胞增殖的作用.闷外医学免疫学分册,1998,21:74-76.12曹雪涛,叶天星.树突状细胞研究在免疫学中的意义及发展趋势.困外医学免疫学分册,1998,21:281,285.13QuahB,O'NeillliC.Review:the)p】ieationofdendriticcell—derivedexo—s(m1esintumourimmunotherapy.CancerBiotherRadiopharm,21300,159 185,194.14M~tckensenA.KrauseT,BlumU,eta1.Homingofintravenouslyandinira—lymphatica]lyinjectedhumandendriticcellsgeneratedinvitroncoilhe—matopoieticprogenitorcells.Cancerlmmunollmmunother,lI9,48:1l8一l】2.15l!aonmsR,ChambersM,BoytarR,eta1.Metastaticlesionsinthejoint一elatedthacuteinflammatoryarthritisafterdendriticcellimmunotherapyfor metastaticmelanoma.MelanomaRes.l999.9:474.481.树突状细胞在脑胶质瘤治疗中的应用李春晖张庆九焦保华胶质瘤的主动免疫治疗(activeimmtmotherapy)一直是胶质瘤治疗研究的热点,然而有关肿瘤的免疫逃避,肿瘤特异性抗原以及肿瘤治疗中免疫的合适方法,路径等都是研究者必须妥善解决的问题.树突状细胞(dendriticce]ls,DEs)是摄取,加工,递呈抗原的最重要的专职抗原递呈细胞(antigenpresentingcell, APC),它递呈抗原的能力最强.1DEs的获得1.1DEs的来源Ronani描述了将从化疗病人骨髓抑制期间的外周血中获取的单核细胞进行培养,得到大量的树突状细胞.从这种状态下获取的单核细胞其造血干细胞的比例较稳定状态下获取的单核细胞造血干细胞的比例高.Koch等…发现培养从外周血中纯化的人CD;造血干细胞可诱导细胞表型和功能特异性DEs,是DEs个体发育和成熟理论的主要突破.Caux等的报道与此有明显争议(是否DEs直接生成于早期造血干细胞或衍生于血单核细胞?)他们阐述了DCs两种不同的发展途径.当CD;造血=F细胞(来自于人脐带血)在GMCSF+TNF-a中培养5～7d后,:两种DEs前体出现:第一种前体由表达CD..和CD.缺失而确认,将成熟为DCs,并带有表皮郎罕氏细胞的特点(表达Birbeck颗粒滞后抗原和粘滞素).第二种前体,CD..一CD将成熟为CD+DEs(缺乏Birbeck颗粒滞后抗原和B粘滞素).而cD前体代表双潜能细胞,在有巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)诱导时可有不同的反应,成为类巨噬细胞.1.2D【的培养实验中应用的DEs主要通过培养骨髓细胞获得.骨髓细胞自股骨,胫骨中获得,在GM.CSF+II厂4或GM, CSF+a中培养,在第8天可见到大量具有DCs形态学特点的细胞集合体增生.每只小鼠培养DCs的产量大约为10×1 (GM—CSF+IL广4),6×1(GM—CSF+TNF—a)和5×lo'(GM—CSF). 流式细胞技术评价这些DEs的抗原表达,包括c,C,CD.(Mac一1),CDt8,cD-Io,cD8【】(B7),cI(B7.2),并指细胞抗原NLIX;.45和MT1C—I型,U型抗原.在GM—CSF+IIJ_4中培养的细作者单位:O5OOOO河北医科大学第二医院神经外科胞MHC,Ⅱ类分子和共刺激分子(costimulatorymolecules)岛_l,岛.2 的水平最高,而且是更加有效的同基因混合淋巴细胞反应刺激物.人DCs主要将从外周血中分离的单核细胞进行培养,其DEs培养结果与上述相同.2DEs的功能DCs是最有效的同种异体混合淋巴细胞反应刺激物.DEs可传递抗原给T,B淋巴细胞,DEs对外生抗原有吞饮作用.在细胞内,抗原被加工成短肽,递呈到DEs细胞表面的MHC分子上.作为初级淋巴细胞基本要求的共刺激分子在DEs上有高水平表达,这些共刺激分子包括cD町(.)cD龉(岛.)和cD舶….在共刺激分子存在的条件下,已致敏的淋巴细胞被递呈给免疫系统,这提供了一种对抗自身免疫的保护作用.侵入抗原被摄取后,可能在TNF-ct的影响下,DCs转变为成熟树突状细胞,迁移到局部淋巴结,将抗原递呈给T淋巴细胞.DEs再成熟前摄取,加工抗原的能力较强,抗原递呈功能较弱,而成熟后抗原递呈功能较强,摄取,加工抗原的能力较弱.3DEs在脑胶质瘤中的应用中枢神经系统很长时间内被认为免疫豁免区,免疫活性在颅内受限制的机制还不能被完全理解,但好象包括明显解剖学特点,如淋巴引流的缺如,血脑屏障的存在,并且在主要组织相容性复合体存在的情况下,小胶质细胞和星形细胞可递呈抗原.但中枢神经系统的免疫豁免不是绝对的,Esther等将小鼠脑组织与GM-CSF共同培养,得到了具有良好抗原递呈功能的DCs,Stao发现小鼠的垂体问质细胞中主要成分为DEs.在实验性过敏性脑脊髓炎中,对髓磷脂基础蛋白的外周免疫引出的特异性抗原诱导了细胞毒性T淋巴细胞(CTL)介导的脱髓鞘作用,暗示中枢神经系统特异性免疫反应来自于合适的靶抗原的递呈和有效的诱导免疫反应….4DEs疫苗的制备多种应用DEs诱导免疫反应的方法已得到研究:提取肿瘤细胞蛋白或肽致敏DEs,将转录肿瘤相关抗原的基因转导入DEs,DEs与肿瘤细胞共同培养,DEs与肿瘤细胞融合等.。
CD40-CD40L
CD40-CD40L靶向树突状细胞抗肿瘤免疫的研究进展机体的免疫反应首先是由抗原递呈细胞(APC)捕获抗原，经过加工和处理后将抗原信息递呈给T、B淋巴细胞，继而引发一系列的特异性免疫应答。
树突状细胞(DC)是目前认为体内功能最强的APC，其最大的特点是能够刺激初始型T细胞（Naive T cells）的增殖和活化，是启动、调控并维持特异性免疫应答的中心环节［1］。
在机体抗肿瘤免疫中，由T细胞介导的细胞免疫发挥着重要作用。
诱导T细胞肿瘤特异性免疫杀伤反应是目前肿瘤免疫研究中的重点。
大量研究表明，CD40-CD40L介导的信号能够诱导APC的活化。
后者在激活肿瘤特异性免疫杀伤T 细胞中发挥着重要作用：提供抗原刺激信号和第二信号，两者协同作用启动免疫级联反应，发挥肿瘤免疫功能。
本文就近年来这一方面的现状作一概述。
1DC的生物学特性1．1 DC的来源及分类DC主要起源于骨髓中的CD34+造血祖细胞（CD34+ hematopoietic progenitor cell,CD34 + HPC），它经过4 个阶段即髓系DC前体、未成熟期DC、迁移期DC及成熟期DC。
DC的第二个来源是外周血液中CD14+单核细胞，在GM-CSF和IL-4作用下，CD14+的单核细胞首先分化成不成熟DC，然后在TNF-α、IL-1、LPS等炎性介质作用下，发育成成熟DC［2］。
DC按其来源可分为髓样DC（myeloid dendritic cell , MDC）和淋巴样DC（lymphoid dendritic, cell ,LDC），它们均起源于多能造血干细胞。
淋巴样DC主要分布于淋巴结、脾脏、黏膜相关组织中的淋巴滤泡生发中心，主要与B淋巴细胞功能有关、具有一定的吞噬、摄取、加工抗原的能力，但抗原呈递能力低；髓样DC主要先分布在外周非淋巴组织中，吞噬抗原后向淋巴结、脾脏等淋巴器官的T细胞区移动，并在此过程中趋于成熟，故与T细胞功能有关，专职抗原呈递［3］。
树突状细胞、细胞因子诱导的杀伤细胞用于急性白血病治疗的研究
抗肿瘤联合
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树突状细胞对细胞因子诱导的杀伤细胞增殖和抗白血病作用影响的研究
及抗 白血病细胞作用的影响。方法
胞单独培养为对照。用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数 ， ｑ Ｍ Ｔ法测定杀伤活性 ， 流式 细胞 术分析免疫表型 ， ＬＳ Ｅ ＩＡ 双抗体夹心法检测分泌干扰素一（Ｆ 一） 白细胞介 素一２ Ｉ－２ 的水 平。结果 ７ ＩＮ７ 、 １（Ｌ１ ） 细胞 （ Ｐ＜００ ） Ｄ 、 Ｉ ．５ ； Ｃ ＣＫ细胞共培养后 ，Ｄ Ｃ ８ Ｃ ３ Ｄ ６ Ｃ ３ Ｄ 、 Ｄ Ｃ ５ 双 阳性细胞 比率较 同条件下 ＣＫ细胞组显著 增多 （ Ｉ Ｐ ＜００ ）共培养 ３ ， Ｃ ＣＫ细胞上清液 中 Ｉ－２ ＩＦ７ 泌量均 比 ＣＫ细胞 单独培养 的分 泌量高（ ．５ ； ｄＤ —Ｉ Ｌ １、Ｎ － 分 Ｉ Ｐ＜００ ， ．１Ｐ＜００ ） ． ； ５
ｆ ｍ ｈ ａｔｙ ｈ ａ ｅｉ ｈ ｒｌｂｏ ｄ ｍｏ ｏ ｕ ｌａ ｅ ｓ Ｔ ｅ ｒ ｏ ｃ ｌ ｒ ｄ Ｃ Ｋ ｃ ｌ ｅ ｕｔｒ ｄ ａｏ ｅ ａ ｏ ｔ ．ｎ ｒ ａｅ ｒ ｅ ｌ ｕ ｎ ｐ ｒ ｅａ ｌ ｎ ｎ ｃｅ ｃ ｌ ． ｈ ｙ ｗｅｅ ｃ － ｕｔ ｅ ． Ｉ ｅ ｓ ｗ ｒ ｃ ｕｅ ｎ ｃ ｎｍ１ Ｉ ｃ ｓｄ ｏ ｈ ｍ ｐ ｏ ｒ ｕ ｌ ｅ ｌ ｌ ｓ ｅ
miRNA文献综述
m i R N A文献综述------------------------------------------作者xxxx------------------------------------------日期xxxxmiRNA研究综述摘要：miRNA是近年来在真核生物和病毒中发现的一类内源性染色体上的非编码单链RNA。
miRNA调节细胞生长，组织分化，最近的研究表明miRNA参与各种各样的调节途径，包括发育、病毒防御、造血过程、器官形成、细胞增殖和凋亡、脂肪代谢等等。
本文主要从miRNA的生物学特征、生成、功能、miRNA与癌症、miRNA与免疫、miRNA鉴定、miRNA靶基因鉴定等方面作一概述。
关键词：miRNA、癌症、免疫、功能、靶基因miRNA简介：MicroRNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子,由具有发夹结构的约70-90个碱基大小的单链RNA前体经过Dicer酶加工后生成，它们在动植物中参与转录后基因表达调控。
miRNA能够通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对,引起靶mRNA降解或者抑制其翻译,从而对基因进行转录后的表达调控。
miRNA的组织特异性和时序性，决定组织和细胞的功能特异性，miRNA在细胞生长和发育过程的调节过程中起多种作用。
到目前为止,在动植物以及病毒中已经发现有4361个miRNA分子。
第一个被确认的miRNA是在线虫中首次发现的lin-4 和let-7，随后多个研究小组在包括人类、果蝇、植物等多种生物物种中鉴别出数百个miRNA。
miRNA生物学功能：miRNA分子有以下几个明显特征：[1]广泛存在于真核生物中，是一组不编码蛋白质的短序列RNA，它不具有开放阅读框架( ORF) 。
[2]miRNA的长度一般为20-24个nt，但在3’端可以有1-2个碱基的长度变化。
[3]成熟miRNA的5’端有一磷酸基团，3’端为羟基，这一特点使它与大多数寡核苷酸和功能RNA的降解片段区别开来。
CD40配体诱导急性髓系白血病源性树突状细胞及其功能研究
等 为 以色 列 Ｐｐｏｅｈ公 司产 品 ，鼠抗 人 Ｃ ｌ — Ｅ、 Ｄ ０ ｅ ｒＴｅ Ｄ ａ Ｐ Ｃ Ｓ一
树突状细胞（ Ｃ 是 目 已知体 内功能最强 的抗 原递呈细 Ｄ） 前
胞 。它通过摄取 、 加工处理和递呈内外源性抗 原以及 上调共刺 激分子而有效激活初始型 Ｔ细胞 ， 促进 Ｃ ； Ｄ 细胞毒性 Ｔ细胞及 Ｃ 黼 助性 Ｔ细胞 的生成 ， Ｄ 从而 产生 特异 性抗肿瘤效应嘲 ， 被称 为肿瘤疫苗 。 Ｃ可从造血干细胞或外周血单核细胞培养获得 。 Ｄ 近年研究表明 ， 白血病细胞 自身 可在体外诱 导分化为成熟 Ｄ ， Ｃ 为 白血病细胞免疫治疗提供了一条全新途径 。目前 ， 常用 的 Ｄ Ｃ 培养因子有粒一 单集落刺激因子 （ Ｍ Ｃ Ｆ 、 Ｇ — Ｓ ） 白介素 ４Ｉ ）肿 （Ｌ 、 瘤坏死 因子 ｄ Ｔ Ｆ ） Ｃ ４ （ Ｎ 等。 Ｄ ０配体（ Ｄ ０ ） Ｆｔ Ｃ ４Ｌ 和 ｌ ３配体近来 也被认为可能是诱导 Ｄ Ｃ的新 的生长 因子翻 Ｄ ０ 。Ｃ ４ Ｌ是相 对分
１ 材料和方法
１１ 研 究对象 ．
别加入终浓 度 ｏ ｏ ｍ 、． ．ｍ 、￣ ／ｌ ｒＣ ４Ｌ ． ｅ ｌ１ ０／ｌ３ ｇ 的 ｈ Ｄ ０ ，在 同样 ５ｄ ５ｇ ｍ
子质量为 ３ ０ Ｉ型跨膜糖蛋 白 ， 于 Ｔ Ｆ ９００的 Ｉ 属 Ｎ 家族成员 ， 而
Ｃ４ Ｄ ０分子属于 Ｔ Ｆ受体超家族成员１ Ｄ ０分子的胞 外段有 Ｎ ３ ］ 。Ｃ ４ ４个富含半胱氨酸的氨基酸重 复序列 （ Ｒ ， Ｃ ４ Ｌ结合 的 Ｃ Ｄ）与 Ｄ ０ 区域主要是 Ｃ Ｄ Ｒ ２和 Ｃ Ｄ ； Ｒ 虽然不直接与 Ｃ ４ Ｌ结 合 ， Ｒ ３ Ｃ ＤＩ Ｄ０ 但却是 Ｃ ４ Ｄ ０配基化所必需 的。Ｃ ４ Ｄ ０分子胞浆段虽短 ， 但可与
白血病疫苗的研究进展
第34卷第3期吉林医药学院学报V01．34N o．32013年06月Journa l of J i li n M edi c M C ol l e ge J un．2013文章编号：1673-2995(2013)03-0208-05白血病疫苗的研究进展R es e ar ch pr ogr e s s on t he l eukem i a va cc i ne综述宋晓晖1，陈洪锁1，孙雅楠1，张云鸽1，和芳1，陈婧1，赵嘉银2，李洪2综述，赵臣3’审校(吉林医药学院：1．2011级临床医学专升本班，2．2010级临床医学本科班甲班，3．血液检验教研室，吉林吉林132013)摘要：白血病疫苗能激活机体产生针对白血病细胞的免疫反应，消除体内的微小残留白血病，达到治疗目的，以延长化疗后病人的无病生存期，具有很好的应用前景。
目前已经研制出的白血病疫苗有白血病细胞疫苗、白血病相关多肽疫苗、树突状细胞疫苗和D N A疫苗。
部分疫苗现已进入了I／I I期临床试验阶段，并已取得一定成果。
关键词：白血病；免疫治疗；疫苗；微小残留白血病；核酸疫苗中图分类号：R733．7文献标识码：A白血病是一类造血干细胞的克隆性恶性疾病。
其克隆中的白血病细胞因不能进一步分化成熟而停滞在血细胞发育的不同阶段，使正常的造血功能受到抑制引起血细胞减少。
临床上出现不同程度的贫血、感染、发热、出血和肝、脾、淋巴结肿大等症状。
最新的流行病学研究显示，我国白血病发病率为5．17／10万，儿童及35岁以下成人的死亡率位居恶性肿瘤死亡率的第一位，可见白血病是危害人类主要的恶性肿瘤之一。
传统的放疗或化疗具有一定的治疗作用，也是目前临床采用的主要治疗方法。
但其在杀死白血病细胞的同时，也杀死了体内的正常细胞。
中性粒细胞数目的减少易导致感染而严重影响白血病的治疗效果。
如果能让白血病病人体内的免疫系统识别肿瘤细胞继而抑制其繁殖，那么肿瘤细胞就无法逃脱免疫系统的监控，从而使高危的急性白血病(acut e l eukem i a，A L)患者产生针对肿瘤细胞的特异性免疫反应，提高其长期生存率。
各类型白血病概述(二)
各类型白血病概述（二）慢性淋巴细胞性白血病概述慢性淋巴细胞性白血病CLL是西方国家最常见的白血病类型，可占全部白血病例的1/3.亚洲国家发生率较低，我国CLL约占白血病总数的3%以下。
90%以上的CLL发病年龄在50岁以上，男性发病率高于女性，男:女=2:1。
慢性淋巴细胞性白血病CLL病因不详，目前尚无证据说明逆转录病毒、电离辐射可引起该类型白血病；但发现几种因素与该病密切相关：遗传性（种族和家庭性）及性别。
慢性淋巴细胞性白血病症状和体征往往较血象发生明显改变晚些出现，这是一种中年以上人的疾病，约90％的患者年龄超过50岁，平均年龄为65岁。
许多病人是偶然发现淋巴细胞增多。
最早出现的症状常常是乏力、疲倦、体力活动时气促。
浅表淋巴结特别是颈部淋巴结肿大，常首先引起病人的注意，晚期成串成堆，直径可达2～3cm，无压痛、质硬、可移动。
肠系膜或腹膜后淋巴结可引起腹部或泌尿系统症状。
脾轻至中度肿大，肝亦可肿大，但不如慢性粒细胞显著。
稍晚出现食欲减退、消瘦、低热、盗汗、贫血等症状。
约10％或以上病人可发生自体免疫性溶血性贫血，此时贫血常较严重，并可出现黄疸。
晚期可有皮肤紫癜和出血倾向，易感染，尤其是呼吸道感染。
这与正常免疫球蛋白的产生减少有关，可能成为死亡的直接原因。
另外胃肠道、骨骼系统可出现不同程度的损害。
有些病人有皮肤瘙痒。
偶见白血病性皮肤浸润，表现为紫红色或棕红色结节或皮肤增厚。
全身皮肤对以发红、扁桃体、唾液腺或泪腺也可肿大。
淋巴细胞白血病症状概述慢性淋巴细胞性白血病症状和体征往往较血象发生明显改变晚些出现。
慢淋是一种中年以上人的疾病，约90％的患者年龄超过50岁，平均年龄为65岁。
许多病人是偶然发现淋巴细胞增多。
最早出现的症状常常是乏力、疲倦、体力活动时气促。
浅表淋巴结特别是颈部淋巴结肿大，常首先引起病人的注意，晚期成串成堆，直径可达2～3cm，无压痛、质硬、可移动。
肠系膜或腹膜后淋巴结可引起腹部或泌尿系统症状。
高中生物人教版2019选修1习题答案第4章免疫调节第4章章末测评卷
第4章章末测评卷(时间：75分钟满分：100分)一、选择题：本题共20小题，每小题2分，共40分。
每小题只有一个选项是符合题目要求的。
1.树突状细胞是功能强大的免疫细胞，它可启动T细胞增殖分化(如图)。
下列有关叙述错误的是()A.据图推测树突状细胞内溶酶体酶的活性较低B.树突状细胞具有一定的防御、自稳和监视功能C.树突状细胞有强大的吞噬、呈递抗原功能D.树突状细胞和T细胞都起源于骨髓中的造血干细胞2.(2021河北沧州高二期末)下列有关免疫系统的组成和功能的叙述，正确的是()A.溶菌酶是免疫活性物质，只能由免疫细胞产生B.胃液和体液中的杀菌物质构成人体的第二道防线C.当免疫防御功能较强时，机体容易被病原体感染D.免疫系统识别并清除癌变细胞体现了免疫监视功能3.(2021山东师范大学附中高二期中)癌症免疫疗法表明：T细胞上具有终止细胞免疫反应的CTLA-4和PD-1两种蛋白质，通过抑制这两种蛋白质的功能，可以激活T细胞的免疫能力，从而杀灭更多肿瘤细胞。
下列有关分析错误的是()A.自身免疫系统攻击肿瘤细胞的能力，属于免疫系统的免疫监视功能B.T细胞上的CTLA-4和PD-1蛋白具有避免机体免疫功能过强的生理意义C.T细胞上的CTLA-4和PD-1蛋白可以终止细胞免疫，对体液免疫没有影响D.利用相应抗体，可解除CTLA-4和PD-1的抑制功能从而激活T细胞的免疫能力4.(2021山东济宁高三期末)研究发现滤泡性辅助T细胞(简称TFH细胞)参与了机体免疫，对维持机体免疫平衡起重要作用。
B细胞必须接受TFH细胞的辅助，才能活化、增殖、分化并产生抗体；没有TFH细胞的辅助，B细胞就会凋亡。
下列叙述正确的是()A.TFH细胞参与体液免疫，不参与细胞免疫B.TFH细胞、B细胞和树突状细胞均属于淋巴细胞C.同一个体内的TFH细胞和细胞毒性T细胞的核遗传信息不同D.TFH细胞与B细胞间存在信息传递，与B细胞细胞膜表面的糖蛋白有关5.(2021广东高三月考)HIV是引起灵长类动物细胞病变的逆转录病毒之一，它对热敏感，在56℃的温度条件下30min即可灭活，亦对消毒剂和去污剂敏感。
白血病和造血干细胞的研究进展和治疗策略的探究
白血病和造血干细胞的研究进展和治疗策略的探究近些年来，白血病的诊断和治疗水平不断提高，离不开造血干细胞的研究进展和治疗策略的不断探索和完善。
造血干细胞是指一类能够自我更新和分化为不同的血细胞的细胞。
在成体组织中，造血干细胞数量相对较少，通常存在于骨髓、脐带血、外周血等组织中，而且对环境和生长因素的要求极高。
由于其独特的特性和巨大的潜力，造血干细胞被广泛应用于各种血液疾病的治疗中，尤其是白血病的治疗中。
白血病（Leukemia）是一种造血系统恶性克隆性疾病，由于骨髓干细胞失去调节随意分化、克隆扩增和丧失分化成熟能力，导致大量异常细胞充斥于血液和骨髓中，从而导致血液功能障碍。
目前，白血病的发病原因还不完全清楚，而它的早期症状也和许多其他疾病的症状相似，例如乏力、发热、贫血等，这使得白血病的早期诊断变得十分困难。
近年来，随着医学技术的不断提高，越来越多的人能够在白血病早期及时发现和诊断，从而给予更加有效的治疗。
目前，白血病的治疗包括化疗、放疗、造血干细胞移植等多种方式，并且这些治疗方式都在不断更新和改进。
化疗是目前最常用的白血病治疗方法之一。
它通过使用化学药物干扰白血病细胞的DNA复制、RNA转录和细胞分裂，从而抑制和消灭恶性白血病细胞。
化疗可以通过口服、静脉注射等多种方式进行。
但是，化疗同时也会破坏正常细胞，导致一系列的副作用，例如恶心、呕吐、脱发、口腔炎等。
另一种常用的白血病治疗方法是放疗，它利用高能量射线杀死恶性白血病细胞。
放疗通常使用X射线或伽马射线等灭活射线进行，可以通过外照射或内照射的方式进行。
放疗具有优良的治疗效果，但是也会对正常细胞造成损害，从而导致一系列的副作用，例如放射性皮炎、口腔干燥、食管炎等。
与化疗和放疗不同，造血干细胞移植无需使用化学药物或射线，而是通过将捐献者的健康干细胞移植到患者体内，使其能够重新恢复正常的造血功能。
造血干细胞移植是一种高复杂度的治疗方式，通常需要使用大量的干细胞、免疫抑制剂等，在医疗技术和医疗设备方面的要求也十分高。
2020-2021学年济宁市实验中学高三生物期中考试试卷及参考答案
2020-2021学年济宁市实验中学高三生物期中考试试卷及参考答案一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。
每小题只有一个选项符合题目要求。
1. 下列4种育种方法中，原理相同的是①用玉米花药离体培养得到单倍体植株①用秋水仙素处理西瓜幼苗得到多倍体植株①通过杂交育种获得抗病抗倒伏小麦品种①用X射线处理青霉菌得到高产菌株A．①① B．①① C．①① D．①①2. 下列与细胞结构和功能有关的叙述，错误的是（）A.真核生物的细胞核是遗传信息库，控制细胞的代谢和遗传B.蓝藻没有核糖体，不能合成自身所需的蛋白质C.人体内不同细胞中所含线粒体的数量可能有差异D.有的生物膜上除了含有蛋白质和脂质，还含有色素3. 如图表示机体由T1环境进入T2环境的过程中产热量和散热量的变化，下列叙述正确的是（）A.根据图示信息可知T2>T1B.曲线A表示产热量，曲线B表示散热量C.a～b过程中机体通过皮肤毛细血管舒张，汗腺分泌增加等方式增加散热D.T2环境中由于产热量和散热量均高于T1环境，机体表现为体温升高4. 如图为血红蛋白β肽链基因表达的过程（①①表示不同生理过程）。
图中方框处碱基对T-A替换为A-T，会导致β链肽链中第6位的谷氨酸变为缬氨酸（密码子为GUG），从而使人患镰刀状细胞贫血症。
下列有关叙述错误的是（）A.①过程以a链为模板，由RNA聚合酶催化完成B.①过程核糖体沿mRNA移动并读取遗传密码子C.图中方框处碱基对T-A替换为A-T属于染色体变异D.基因突变可能导致终止密码子提前出现而使肽链缩短5. 科学工作者运用不同的研究方法研究生命的奥秘。
下列科学研究过程与主要研究方法对应错误的是（）A.达尔文依据大量的事例得出进化论——完全归纳法B.巴甫洛夫研究条件反射的建立——实验法C.列文虎克利用显微镜首先发现活细胞——观察法D.用3D打印技术制作细胞结构模型——模型建构法6. 下列有关变异及进化的叙述，正确的是（）A. 生物因受环境的影响而产生的变异都是不能遗传的B. 乳酸菌内染色体复制时，可其进化提供选择材料C. 自然界中，某些染色体数目减半的生物具有可育性D. 生物体细胞发生的染色体变异属于不可遗传的变异7. 生命活动离不开细胞，下列相关叙述错误的是（）A.单细胞生物依靠单个细胞就能完成各项生命活动B.多细胞生物要依赖各种分化的细胞密切合作，共同完成一系列复杂的生命活动C.所有生物均由细胞构成D.细胞是生物体结构和功能的基本单位8. 下图为绿色植物某细胞内发生的两个生理过程。
flow cytometry流式细胞术原理及树突状细胞的检测 苏州大学
Single cells sorted into test tubes
信号
荧光信号 FL1，FL2，FL3， FL4 线性，对数
散射光信号 前向散射光(FS)： 细胞大小 侧向散射光(SS)： 结构复杂程度
直方图(HISTOGRAM)与 点图(DOT PLOT)
FL2 COUNT
FL
只允许某些波长的光通过
630 nm BandPass Filter
White Light Source
Transmitted Light
620 -640 nm Light
二向色性滤片 DICHROIC FILTER
一定波长以上通过，该波长以下折射
Dichroic Filter/Mirror at 45 deg
HISTOGRAM
பைடு நூலகம்FL1
DOT PLOT
GATE设门
界定分析区域：REGION
十字门：QUA
矩形门：REC
A
自由门：AMO
线性门：LIN
A
A
建立直方图之间的关系
方案PROTOCOL
选定参数 构建直方图 区域，GATE， 停止，存储，打印 放大倍数，阈值，流速。。。。
免疫荧光(IMMUNOPHENITYPING) 单标记
常用荧光染料的特性
荧光染料 激发波长 (nm) 发射波长(nm) 用途
颜色
FITC
488
525
免疫荧光 绿色
PE(RD1) 488
575
免疫荧光 橙色
ECD
488
620
免疫荧光 橙红
PeCy5
488
675
免疫荧光 深红
PI
干扰素α对慢性粒细胞白血病患者体内髓样树突状细胞影响的研究
（ Ｂ ）并用含 １ ％胎牛血清 的 Ｒ ＭＩ６ ０培养液 ， 整细胞 Ｐ Ｍｃ ， ０ Ｐ １４ 调 浓度 至 ｌ ｌｑｍ ， 悬液 １０ 每管 ， 入抗 Ｂ Ｃ － ＩＣ单 ｘ Ｏ ｌ取 ０ 加 Ｄ ＡＩＦＴ 克隆抗体 １ 直接染 色 ，混匀后置 室温下暗室反应 １ ０ ５分钟 ， 加 Ｐ Ｓ液 １ ０ Ｂ ０转份 离心 ５分钟 。 ０ 离心洗涤后 ， １ 以 ％多聚 甲醛
固定 ， 作流式细胞 （Ｃ 检测 ， Ｆ Ｍ） 每份样本检测 ｌｌ４ ｘ０ 个细胞 ， 用
Ｃ ｌＱ ｅｔ ｅｌ ｕ ｓ软件计算 阳性细胞 （ Ｄ ＡＩ ） Ｂ Ｃ ＋ 比率。
１４ 统计学分析 ． 所得数据采用 Ｓ Ｓ １． Ｐ Ｓ ０软件分析 。 １
２ 结 果 ２１ 外 周 血 中 ｍＤＣ 数 量 的检 测 结幂 ． ｓ
结论 Ｃ ＭＬ患者体 内 ｍ Ｃ Ｄ ｓ的数量 降低 ， Ｎ 有效 治疗 Ｃ Ｌ可能与恢复 ｍ Ｃ 的数量有关。 Ｉ 一 Ｆ Ｍ Ｄ ｓ 关键词 ： 慢性粒细胞 白血病 ； 干扰素 ｄ 髓样树 突状 细胞 ； 中图分类号 ： ５７ Ｒ ５ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ：６ １ １４ 【０ ９ ０— １４－ １７ — ２ ６２ ０ ）９ ０ ３ － ３ － ０
生 物 制 剂应 用 于癌 症 的 治疗 已有 很 长 时间 ，干扰 素 Ｏ ｒ ．
期 ， 例进入 急变期 ） １ 。另外 １ ０例健康志愿者作为正常对照组 ，
男、 女各 ５ 平均年龄 （２ ￣ ．） 。 ， ４． ９ 岁 ７ ９
１２ ． ｉ要 试 剂 及仪 器
（Ｆ — 【 ＩＮ ｏ） 是第—个被广泛研究 的人类细胞因子ｆ ｌ 】 。自２ 世纪 ８ Ｏ Ｏ 年代 以来 ， ＩＮ 为基础 的治疗成为不能接受异基 因干 细胞 以 Ｆ吨 移植（ｌ －ｃ ） ａｌ Ｓ Ｔ 的慢性粒细胞 白血病（ ＭＬ 慢性期 （ Ｐ 患者 的 ｏ ｃ ） ｃ）
参附注射液对人慢性髓性白血病细胞来源的树突状细胞诱导生成的影响
ｐ ｅ ｓｐ ｅ ｏｙ ｅ ｏ ｎ ｉｅ — ｒ ｓ ｎ ｉ ｇｃ ｌ ｎ ａ ｅｔ ｅ ｓｍｉ ｒｉ ｒ ｓ ｈ ｎ ｔｐ ｆａ ｔ ｎ ｐ ｅ ｅ ｔ ｅｌ ａ ｄ ｈ ｖ ｈ ｉ ｌ ｇ ｎ ｓ ａ ｍｍｕ ｅｆ ｎ ｔ ｎ ｗｉ ｏ ｍａ ｓ ｕ ｅｓ ｒ ｃ ｒ ｅ ｓ ｎ ｃｉ ｔ ｎ ｒ ｌ ｕ ｏ ｈ ＤＣ ，ｂ ｔ ｈ ｕｆ ｅ ｍａ ｋ ｒ ｔ ａ
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ｂ ｎ ｄ ｗ ｔ ｉ ｅ ｅ ｔｃ ｎ ｅ ｔ ｔ ｎ ｆＳ Ｉ ｅ ｐ ｃｉｅ ｙ ｉｅ ｉ ｄｆ ｒ ｎ ｏ ｃ ｎｒ ｉ ｓｏ Ｆ ，ｒｓ ｅ ｔ ｌ ．Ｒｅ ｕ ｔ Ｉ ｉ ｏ ｈ ｆ ａｏ ｖ ｓｌ ｓ ｎ ｖｔ ，ＤＣ ｏ ｌ ｏ ｅ ｄ ｒ ｅ ｏ Ｋ一 ６ ｅ ｌ ｃ ｌ ｒ ｓｃ ｕｄ ｎ ｔｂ ｅ ｖ ｄ ｆ ｍ ５ ２ ｃ ｌ ｕ — ｉ ｒ ｓ ｔ ｒ ｄ ｗｉ ｉ ｅｅ ｔｃ ｎ ｅ ｔ ｔ ｎ ｆＳ Ｉ Ｗｈ ｌ ｓ ｄ ｒ ｅ ｒ ｍ Ｋ－ ６ ｅｌ ｃ — ｕ ｕ ｅ ｔ ｕ ｅ ｔ ｄ ｆ ｒ ｎ ｏ ｃ ｎｒ ｉ ｓ ｏ Ｆ ． ｈ ｆ ａｏ ｉ ＤＣ ｅ ｖ ｄ ｆｏ ５ ２ ｃ ｌ ｏ ｃ ｈ ｒ ｄ ｗｉ ＧＭ— Ｓ ／ Ｌ ４ ｃ ｕ ｄ ｅ — ｅ ｉ ｓ ｈ Ｃ Ｆ Ｉ － ｏ ｌ ｘ
辽宁省大连市2022-2023学年高三上学期12月期末双基测试生物试题及答案
2023 年大连市高三双基测试卷生物学注意事项：1.答卷前，考生务必将自己的姓名、准考证号填写在答题卡上。
2.答选择题时，选出每一小题答案后，用铅笔把答题卡对应题目的答案标号涂黑。
如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其他答案标号。
回答非选择题时，将答案写在答题卡上。
写在本试卷上无效。
3.考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。
4.本试卷满分 100 分，答卷时间 75 分钟。
第 I 卷一、选择题：本题共15 小题，每小题 2 分，共30 分。
在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的。
1.钙在骨骼生长和肌肉收缩等过程中发挥重要作用。
下列叙述错误的是A.骨骼肌细胞中有以无机离子形式存在的钙B.人体血液中Ca 2+含量太高会出现抽搐等症状C.维生素D 可以有效促进人和动物肠道对钙的吸收D.参与Ca 2+主动运输的载体蛋白能催化ATP 水解2.支原体肺炎的病原体是一种被称为肺炎支原体的单细胞生物，示意图如下。
青霉素杀菌的原理是阻碍细菌细胞壁的合成。
下列叙述错误的是A.支原体没有核膜包围的细胞核B.支原体在核糖体上合成蛋白质C.支原体可以发生基因突变D.青霉素可用于支原体肺炎的治疗3.白血病是由骨髓造血干细胞恶性增殖而引起的疾病。
患者血液和骨髓中的白细胞及其前体细胞出现异常增殖和分化障碍，成为白血病细胞。
研究表明，Rg1（人参皂苷的重要单体）能够抑制白血病细胞增殖并诱导其向成熟红细胞方向分化。
下列叙述正确的是A.造血干细胞中抑癌基因突变成原癌基因，从而形成白血病细胞B.Rg1 诱导人白血病细胞向成熟红细胞分化体现了细胞具有全能性C.由白血病细胞分化的成熟红细胞衰老后控制其凋亡的基因开始表达D.用Rg1 处理但不杀伤白血病细胞，可作为未来治疗白血病的策略之一4.下图是某种生物细胞在减数分裂过程中的几个特定时期的显微照片。
下列叙述正确的是A.甲、乙中，细胞的染色体行为均可以导致基因重组B.乙、丁中，细胞的染色体数与核DNA 数之比均为1:1C.丙中，细胞的染色体正在复制D.丁中，细胞的同源染色体正在分离5.下图是遗传信息表达的某过程示意图。
以树突状细胞为基础的血液恶性肿瘤免疫治疗研究进展
功能最强 的专职 Ａ Ｃ． Ｐ 能够摄取 抗原 ， 还 肿瘤 免疫 、 临床 免疫 的基础 ， 目前 主要有 展 ． 治疗效果不 断提 高 ． 解率 也随之 其 缓
可 以摄 取 和转运 抗 原 的特殊 膜 受体 ， 同 两 种方 法 诱 导 Ｄ Ｃ．一种 是 通过 分 离骨 提 高 ．但 影响 白血病 复发 的根源—— 白 时能高效 摄取低 浓度抗 原 ，是促进 Ｔ Ｂ 髓 、 、 脐带血 、 周血 中的 Ｄ ３ 外 Ｃ ４前体细胞 ， 血病 细胞微小 残 留病 （ Ｄ） ＭＲ 的问题 一直
白血病作为血
细胞和 Ｂ细胞 。 引发 一系列 的免疫反 应。 ２ ＤＣ 的诱 导 和体 外 培 养 树 突状 细胞 （ｅｔｔ ｅ 。 Ｃ） 已知 的 ｄｎｒｉ ｃｌ Ｄ 是 ｉｃ ｌ
液系统 主要 的恶性肿 瘤 ，随着近 年来大
Ｄ Ｃ的诱 导 和体 外 培养 是其 应 用 于 剂 量 化 疗 和 造 血 干 细 胞 移植 技 术 的发
维普资讯
实用 医学杂 志 ２０ ０ ７年第 ２ ３卷 第 ２ ２期
肿瘤放射治疗学试题及答案
肿瘤放射治疗学试题及答案1、恶性肿瘤:是在人类正常细胞基础上，在多种致癌因素作用下，逐渐形成的、不断增殖的、个体形态变异或缺失的、具有迁徙和浸润行为的细胞群。
临床上常表现为一定体积的肿物。
2、我国目前肿瘤放疗事故（恶性肿瘤最新发病率）为：10万人口每年280例。
3、肿瘤放疗：放射治疗就是用射线杀灭肿瘤细胞的一种局部治疗技术。
4、放疗时常用的射线：射线分两大类：一类是光子射线，如X、γ线，是电磁波；一类是粒子，如电子、质子、中子。
5、放疗的四大支柱：放射物理学、放射生物学、放射技术和临床肿瘤学。
6、肿瘤细胞放射损伤关键靶点：DNA。
7、射线的直接作用：（另一种答案：破坏单键或双键）。
任何射线在被生物物质所吸收时，是直接和细胞的靶点起作用，启动一系列事件导致生物改变。
如：电离、光电、康普顿。
8、射线的间接作用：（另一种答案：电解水-OH，自由基破坏）。
射线在细胞内可能和另一个分子或原子作用产生自由基，它们扩散一定距离，达到一个关键的靶并产生损伤。
9、B-T定律：细胞的放射敏感性与它们的增殖能力成正比。
与它们的分化程度成反比。
10、影响肿瘤组织放射敏感性的因素:组织类型、分化程度、临床因素。
肿瘤自身敏感性：肿瘤负荷、肿瘤分型、分期；肿瘤来源和分化程度；肿瘤部位和血供；照射剂量；2、化学修饰与肿瘤放射效应：放射增敏剂：氧气、多种药物；放射保护剂：低氧、谷胱甘肽加温与放疗；430C加温自身即可杀灭肿瘤细胞；能使S期细胞、乏氧细胞变的敏感；热休克蛋白，42-4450C, 2/周；3、放疗与同步化疗：空间协作：放射控制原发，化疗控制转移；毒性依赖：必须注意两者叠加问题；互相增敏：联合应用，疗效1＋1＞2，机制不详；保护正常组织：缩小病灶，减少剂量；11、放射野设计四原则：1、靶区剂量均匀：治疗的肿瘤区域内吸收剂量要均匀，剂量梯度部超5％，90％剂量线包整个靶区。
（野对称性）；2、准确的靶区和剂量：即CTV准确，考虑到肿瘤类型和生物学行为（不同胶质瘤外扩大不一样），剂量要认真计算和精确测量。
免疫细胞-树突状细胞PPT课件
受体 （FcRIII） CD56（又称Leu19或NKH-1抗原） CD57（HNK-1、Leu-7） CD2（OKT-11、Leu-5）、CD8-、P58、P70、P30等。 24
3. NK细胞的活化受体和抑制受体
MHC抗原 MHCI(所有T细胞)、MHCII(活化T细胞)
分化抗原
CD3、CD4、CD8、- CD25、CD28、CD45等
9
3. T细胞亚群
❖ TCR双肽链的构成不同：TCR、 TCR
❖ CD分子表达情况不同：CD4+（MHCII ）、 CD8+
（MHCI）
❖ TCR+T细胞的功能不同：调节性T细胞(Th、Ts)
(1ymphokine activated killer cell， LAK)
其主要特征为：
具有LGL的形态特征；
能杀伤对NK细胞不敏感的实体瘤细胞，具有广泛的杀瘤谱；
仅能被IL—2等细胞因子诱导而产生；
LAK细胞前体及效应细胞均为非黏附细胞；
对放射线敏感。
-
29
目前尚未发现LAK细胞特有的表面标志。许多实验表 明，LAK细胞的前体细胞主要是NK细胞。
一、淋巴细胞
-
4
（一）T淋巴细胞(thymus-dependent lymphocyte)
1. T细胞的分化发育
多能造血干细胞
Three phase
CD4-CD8-(DN) CD4+CD8+(DP) CD4+/CD8+(SP)
淋巴样干细胞 胸腺外
前T 胸腺
成熟T
回输自体来源的树突状细胞治疗慢性粒细胞白血病的临床研究——附3例报告
Ｄ ｌｙｄｔ ｅｈｐ ｒ ｎｉｖ ｙ （ Ｔ ｅ ｅ ｙ ｙ ｅ ｅｓ ｉｔ Ｄ Ｈ） ａｄｃａｇｓｉ ｔｅｐｒｅｔｇ ｆ Ｉ ａ ｐ ｓ ｔｉ ｎ ｈｎｅ ｅｃｎ ｅｏ Ｍ ，Ｃ ８ ａ ｄＣ ３ Ｔｃｌ ｅ ｒ ａｄａｔ — ｆｓ ｎ ｎｈ ａ Ｃ Ｄ ｎ Ｄ ｅ ｓｂｆ ｅ ｎ ｆ ｒ ｅｉ ｕｉ ｌ ｏ ｅｒ ｎ ｏ
［ ｂ ｔａｔ Ａ ｓｒｃ］ Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｔｄ ｈ ｆｃｃ ，ｓｆｙａ ｄｉｐ ｃ ｏ ｍｕ ｅｆｎｔ ｎｏ — ｆｓ ｎ ｏ ａ ｔ ｏｕ ｕ ｅ ｄ ｔ ｊｃ ｖ ： ｏｓ ｙｔｅｅｉａｙ ａ ｔ ｎ ａｔ ｎｉ ｎ ｃｉ ｆ ｅｉ ｕｉ ｆ ｕｏ ｇｏｓｄｎ ｒｉ ｉ ｕ ｆ ｅ ｍ ｍ ｕ ｏ ｒ ｎ ｏ ｌ ｉｃ
Ｈ ｉ ｎ Ｌ ， ｔ １ ｈ ｅａｔ ｎ ｏ ｅ ａ ｉ ， ｅＦｒ ｏ ｉ ｌ Ｊ ｉ Ｕ ｉ ｒ ｔ，Ｃ ａ ｇｈ ｎ １０ ２ ， Ｃ ｉａ ａｙ ， ｉ ｎ ｅ ａ．Ｔ ｅ ｐ ｒ ｔｆＧｒ ｔｃ Ｔ ｉｔ ｓ ｔ ｉｎ ｎ ｅ ｉ ａ Ｑ Ｄ ｍｅ ｉｒｓ ｈ ｓ Ｈ ｐ ａ ｏ ｌ ｖ ｓｙ ｈ ｎｃｕ ， ３０ １ ｈｎ ｆ
后 的 ３个 月，白细胞基本在 正 常值 范 围 内，骨髓 象为慢 粒缓 解期 。Ｐ ｈ染 色体 阳性 的 细胞数 有下 降趋 势 ，
Ｂ Ｒ Ａ Ｌ融合基 因阳性细胞所 占比率有所 下降。结 论 ：回输 自体来源 Ｄ Ｃ —Ｂ Ｃ激活 了机体抗肿 瘤免 疫反 应 ，可
低温保存对白血病源性树突状细胞的影响(1)
低温保存对白血病源性树突状细胞的影响(1)】本研究观察低温保存对白血病源性树突状细胞(L DCs)的生物学特性和功能的影响。
取急性、慢性髓系白血病骨髓细胞，将其一部分细胞立即检测，一部分细胞立即培养，一部分细胞加入细胞保护剂低温保存一定时间复温后培养。
细胞培养时，在细胞培养体系内加入组合细胞因子并培养12天，然后分别检测3组细胞的细胞形态、细胞免疫表型、混合淋巴细胞反应及细胞毒T淋巴细胞(CTL)效应，并对结果进行相互比较分析。
结果表明：在细胞形态学方面，急性、慢性髓系白血病患者骨髓细胞在不染色或在瑞氏染色下仅见白血病细胞，而未观察到"树突状"细胞，但经组合的细胞因子培养后，均出现了"树突状"形态的细胞，低温保存前、后二者比较，无明显差异；在细胞表面免疫标志表达方面，经组合细胞因子培养的细胞与未培养的细胞相比，细胞表面表达的CD80、CD54、HLA DR、CD1a、CD83、CD86明显上调，而CD14表达则明显下调，低温保存前、后的细胞在上述几种细胞表面免疫表达指标方面相比较无明显差异；低温保存后的白血病细胞经培养后，不仅有明显的混合淋巴细胞反应，而且在与T细胞作用后T细胞表面抗原CD8和CD25免疫标记细胞明显增多，明显地表现了CTL杀伤自体白血病细胞的效应。
结论：髓系白血病细胞在组合细胞因子培养条件下，可诱生为L DC；L DC的诱生在生物学特性方面不受低温保存的影响。
【关键词】白血病细胞Influence of Cryopreservation on Leukemic Dendritic Cells Derived from Leukemia PatientsAbstractThis study was aimed to investigate the influence of cryopreservation on biological properties and function of leukemic dendritic cells(L DCs) derived from patients withacute or chronic leukemia. Some fresh leukemic cells were detected immediately; some were cultured immediately; some were cryopreserved in 80℃ with 5% DMSO-6% HES as cryopreservor. After being thawed ,they were cultured. The combination of rhGM CSF, rhIL4, rhTNFα and other cytokines were added into the culture system. 12 days later, L DCs were assayed for morphology, immunophenotype, mixed lymphocytic reaction (MLR) and CTL cytotoxicity on autologousleukemic cells. The results showed that both fresh and cryopreserved leukemic cells obtained from patients with acute or chronic leukemia revealed typical DC morphologically by means of using combinations of cytokines in culture, but there was no significant difference between pre or post cryopreservations. L DCs also upregulated the expression of CD80, CD54, HLA DR，CD1a, CD83 and CD86, and downregulated the expression of CD14, but there was also no difference as compared with L DCs befor cryopreservation. L DCs derived from leukemic cells were also capable of stimulating MLR and inducing CTL which could kill autologous leukemic cells obviously. It is concluded that leukemic cells, regardless of fresh or frozen,can induce L DCs after culture with cytokine combination. The LDCs can induce CTL targeting autologous leukemic cells, and may be used to treat MRD as immunotherapy. The induction and biological properties of L DCs are not influenced by cryopreservation.Key wordsleukemic cell; dendritic cell; cryopreservation白血病化疗后的复发率高达90％以上，即使造血干细胞移植后也有一定比例的复发，复发原因是因为存在微小残留病（MRD）。
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２的培
养箱中培养，３～４天半量换液及添加细胞因子，并 用倒置显微镜进行形态学观察并摄片。于培养的第 ７天，加入ＴＮＦ—ａ
５０
Ｕ／ｍｌ，第１０天收集细胞作为
实验组。相同数量的白血病ＭＮＣ除培养液外不添 加细胞因子培养相同时间作为对照组。正常细胞同 样设实验组和对照组。采用台盼蓝拒染试验进行细
方法分离初诊２４例急性髓细胞性白血病和１０例慢性髓细胞性白血病患者的骨髓单个核细胞以及５例正常人 外周血的单个核细胞，用ｒｈＧＭ—ＣＳＦ
１ ｏｏｏ
Ｕ／ｍ１、ｒｈＩＬ一４ ５００ Ｕ／ｍ１和ＴＮＦ—ａ ５０ Ｕ／ｍｌ联合培养１０天；形态学
（Ｗ“ｇｈｔ染色、倒置显微镜、透射电镜）、免疫学（ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤｌａ、ＨＬＡ—ＤＲ）鉴定，ＲＴ—ＰＣＲ检测白血病克 隆以及混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）检测抗原递呈功能。结果细胞因子诱导后，正常细胞和白血病细胞均出现典型 形态的树突状细胞，ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤｌａ的表达明显上调（正常和ＣＭＬ—ＤＣ的ＨＬＡ—ＤＲ也明显上调），急性和 慢性髓细胞性白血病以及正常细胞来源的树突状细胞具有不同程度的刺激异基因Ｔ淋巴细胞增殖的能力。结论 无论是急性和慢性白血病细胞均能诱导分化成ＤＣ，并且特征完全相似；白血病与正常骨髓的ＤＣ在形态和免疫学 表达方面相似，但功能较弱。
５００ １ ０００
主要试剂
ＲＰＭＩ一１６４０培养基为ＧＩＢＣＯ—
ＢＲＬ公司产品，按说明书配制，４℃保存；特级胎牛 血清为杭州四季青生物制品公司产品，使用前５６℃ 水浴３０分钟灭活补体后分装，一２０℃保存；３一（４，５一
收稿日期：２００３一０２—１９ 基金项目：浙江省科技厅科研基金（２００４Ｃ３０００８），浙江 省中医药管理局科研基金（２００３Ｃ０７３）及浙江大学医学院科 研项目启动基金资助 作者简介：童向民（１９７０一），男，浙江富阳人，浙江大学医 学院附属第一医院主治医师，硕士，从事血液细胞形态学及 白血病免疫治疗研究．
万方数据
万方数据
万方数据
万方数据
１．３
功能有元区别？白血病一ＤＣ与正常一ＤＣ又有何差异？
对这些问题，国内尚未见报道，本实验对此进行了研 究，报道如下。
Ｄｃ的培养ＤＣ的培养参考国内文献口］。无
１材料与方法
１．１
菌采集ＡＭＬ和ＣＭＩ。患者骨髓５ ｍｌ，肝素抗凝，经 淋巴细胞分离液梯度离心后，取界面层的单个核细 胞（ＭＮＣｓ），用无钙镁的ＰＢＳ洗涤３次，加入含 １０％小牛血清的ＲＰＭＩ一１６４０培养液，调整细胞浓度 为２×１０６个／ｍｌ，并分成实验组和对照组；实验组加 入６孔板，分别向每孔中加入ｒｈＧＭ—ＣＳＦ ｍｌ和ｒｈＩＩ。一４
５一ｄｉｐｈｅｎｙｌｔｅｔｒａ—ｚｏｌｉｕｍ
ｂｒｏｍｉｄｅ（ＭＴＴ）为Ｓｉｇｍａ公司产品；ＤＭＳｏ购自上 海华美生物工程公司；ｒｈＧＭ—ＣＳＦ、ｒｈＩＩ。一４和ＴＮＦ— ａ购于Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ公司；ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ８３、ＣＤｌａ 和ＨＩ。Ａ—ＤＲ单抗购于Ｃａｌｔａｇ公司；ＢＣＲ／ＡＢＩ。和 ＰＭＩ。一ＲＡＲａ的引物由上海生工公司合成。
实用肿瘤杂志２００５年第２０卷第ｌ期
・４９・
白血病细胞和正常细胞生成树突状细胞的比较研究
童向民１，金洁１，李敏伟２，符哲海１，孟海涛１
（１．浙江大学医学院附属第一医院血液科，浙江杭州３１０００３；２．浙江大学传染病研究所，浙江杭州３１０００３）
摘要：目的
体外诱导髓系白血病原代细胞分化生成树突状细胞（ｄｅｎｄ“ｔｉｃ ｃｅｌｌ，Ｄｃ），并与正常的Ｄｃ比较。
１．２标本收集２４例初发的急性髓细胞性白血病
（ＡＭＬ）患者骨髓５ ｍｌ，其中Ｍ。１例，Ｍ。３例，Ｍｚ。５ 例，Ｍ２ｂ ２例，Ｍ。５例，Ｍ。２例，Ｍ５ ５例，Ｍ６ １例；１３ 例慢性髓细胞性白血病（ＣＭＩ。）慢性期患者骨髓５ ｍ１，诊断和分期依据血液学诊断标准［１］。正常献血员 外周血标本５例，每例２００ ｍ１。
关键词：白血病，髓样；树突细胞；免疫学；抗原
中图分类号：Ｒ７３３．７ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００１—１６９２（２００５）０１一００４９—０４
树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ ｃｅＵ，ＤＣ）是目前功能最 强，也是惟一可直接活化初始型Ｔ细胞的抗原递呈 细胞（ａｎｔｉｇｅｎ
ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ
ｄｉｍｅｔｈｙｌｔｈｉａｚｏｌ一２一ｙ１）一２，
ｃｅＵ，ＡＰＣ）。将白血病细胞
诱导分化成具有抗原递呈功能的ＤＣ，由于其来源 于白血病细胞，由此分化而来的ＤＣ也必然携带有 白血病抗原；同时，该类细胞来自患者本身，不会发 生排斥反应，这样就可能提供了一条前景乐观的抗 白血病途径。国内外对此已经有了较多的研究。但 是在同等条件下，慢性髓细胞白血病和急性白血病 细胞诱导分化成ＤＣ，两者之间的形态、免疫标记和