一级菌种制作技术.

湖北三峡职业技术学院《食用菌生产技术》课程组
【2-2】 一级菌种制作技术
三、一级菌种培养基的灭菌
常压灭菌
间歇灭菌
持续灭菌
第一次蒸，100℃保持1 h 28～37℃下培养24 h 第二 次蒸，100℃，保持1 h 培 养24 h 第三次蒸，100℃， 保持1 h。 不常用的原因： 灭菌一锅需要3～4天时间，且 冬天需要保温。
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【2-2】 一级菌种制作技术
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三、一级菌种培养基的灭菌
湿热灭菌
高压灭菌
常压灭菌
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【2-2】 一级菌种制作技术
三、一级菌种培养基的灭菌
高压灭菌
手提式高压灭菌锅
用于一级菌种 培养基灭菌
卧式或立式高压灭菌锅
用于二、三级 菌种培养基灭菌
融化琼脂
滤液沸时加入，融后加余料
调节pH值
1%NaOH或HCl
分装试管
勿污管口，控制装量
包扎成捆
准备灭菌
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【2-2】 一级菌种制作技术
三、一级菌种培养基的灭菌
三、一级菌种培养基的灭菌
（一）灭菌与消毒的概念 灭菌：是应用物理和化学方法杀灭
物品表面和内部所有的微生物，是一种 彻底的灭菌方法。
【2-2】 一级菌种制作技术
三、一级菌种培养基的灭菌
培养料消毒
熟石灰拌料 杀菌剂拌料 （0.1%~0.2%的多菌灵） 巴氏消毒（发酵）
2. 常用的消毒方法
三、一级菌种培养基的灭菌
常用的消毒方法
空间消毒 培养料消毒
器具消毒 分离材料消毒
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【2-2】 一级菌种制作技术
三、一级菌种培养基的灭菌
空间消毒
药液喷雾
药剂薰蒸 紫外线照射
0.25%的新洁尔灭， 5%的石碳酸， 0.25%的多菌灵等。 用量不小于30ml/m3； 雾粒越细越好；适时更 换药液(防止抗药性)。
消毒：是应用物理和化学方法使欲 消毒的物品表面和孔隙内绝大部分微生 物致死，是一种不彻底的灭菌方法。
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【2-2】 一级菌种制作技术
（二）灭菌与消毒的方法 1. 常用的灭菌方法
三、一级菌种培养基的灭菌
常用的灭菌方法
干热灭菌
湿热灭菌
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【2-2】 一级菌种制作技术
一、一级菌种制作流程
一、一级菌种制作流程
一级菌种是第一次用孢子分离法、组 织分离法或基内菌丝分离法获得的纯菌丝 体及其经过转管扩大后的菌丝体。
一级菌种是菌种生产的基础，一级菌 种质量的优劣，直接关系到二级菌种和三 级菌种的质量，对食用菌生产产生根本的 影响。
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《食用菌生产技术》
【模块2】食用菌菌种制作技术
【单元2】一级菌种制作技术
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【模块2】食用菌菌种制作技术
【单元2】一级菌种制作技术
1 一级菌种的制作流程
2 一级菌种培养基的配制
3 一级菌种培养基的灭菌
4
菌种分离及纯化
5
出菇试验（鉴定）
6
转管及培养
7
菌种保藏
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➢ 营养：必须全面且易于吸收 ➢ 容 器 ： 玻 璃 试 管 （ 18mm×180mm 或
20mm×200mm） ➢ 斜面：平整光滑，既利于观察菌丝生长情况，
又便于检查有无杂菌生长。 ➢ 用途：主要用于一级菌种的分离、培养、提纯
和保藏菌种等。 ➢ 也可用培养皿或三角瓶作容器，制成玻璃平板
培养基，主要用于菌种的分离、培养和提纯等。
【2-2】 一级菌种制作技术
制种流程
一、一级菌种制作流程
配制培养基
(原始母种)
灭菌 菌种分离 纯化(提纯) 出菇试验(鉴定)
转管扩大 培养
一级菌种
菌种保藏
扩制原种
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【2-2】 一级菌种制作技术
二、一级菌种培养基的配制
二、一级菌种培养基的配制
1.一级菌种培养基基本要求
蒸，100℃保持12～14 h (方法：攻头，控中间，保尾)。 普遍采用，特别用于大规模塑 料袋制种和塑料栽培筒的灭菌。 注意：常压灭菌锅要设计合理， 主要是灭菌彻底与否、燃料费 用、周转速度、劳动强度、污 染率高低，直接影响经济效益。
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【2-2】 一级菌种制作技术
10～20ml的 甲醛+5～8g的 高锰酸钾/ m3； 气雾消毒盒， 2～6g/ m3。
照30min后， 再过30min 开照明灯。
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【2-2】 一级菌种制作技术
三、一级菌种培养基的灭菌
器具消毒
药液浸泡
煮沸消毒
75%的酒精 药物揩擦
煮沸20min以上
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【2-2】 一级菌种制作技术
三、一级菌种培养基的灭菌
干热灭菌
火焰灭菌
干燥箱灭菌
用于金属器具， 火焰灼烧至红 （在火焰2/3处烧）
用于玻璃器皿(培养皿、试管、三 角瓶、吸管)等。洗净→晾干→包 装→放入干燥箱→升温→160～ 170℃，保持1～2h →关闭电源， 自然降温→ 60℃以下打开干燥箱
→取出灭菌物品，尽快使用。
【2-2】 一级菌种制作技术
条状 粉状
二、一级菌种培养基的配制
特性
属天然植物多糖 融点96℃以上 凝点40 ℃以下 性能稳定 不被微生物分解利用 透明度好、粘着力强 用量1.8%～2.3%
【2-2】 一级菌种制作技术
二、一级菌种培养基的配制
3.一级菌种培养基的配制过程
制马铃薯滤液 煮沸20min，取定量滤液
自然
PSA培养基
马铃薯(去皮 ) 200g
蔗糖
20g
琼脂
20g
水
1000ml
pH
自然
PDA培养基和PSA培养基是一级菌种最常用的培养 基，适用于大部分食用菌菌种的分离、培养和保藏，既 是一种广泛培养基，也是一种基础培养基。
注：一级菌种培养基配方众多，可参考课本或其他 专业书籍。
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【2-2】 一级菌种制作技术
二、一级菌种培养基的配制
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【2-2】 一级菌种制作技术
二、一级菌种培养基的配制
2.一级菌种培养基常用配方
PDA培养基
马铃薯(去皮 ) 200g
葡萄糖
20g
琼脂
20g
水
1000ml
pH