黄芪杂交种RAPD指纹图谱及其亲缘关系分析
DNA指纹技术的原理与应用
DNA指纹技术的原理与应用生物技术1001班，谢晓梅，0306100209摘要：随着分子生物学和遗传性的迅速发展，遗传多态性的研究已经从形态水平深入到分子水平。
DNA指纹技术是分子生物学中一种新技术，它是从分子水平区别不同种类生物之间以及同种生物之间差异的重要手段，为DNA多态性的研究提供了便利的技术手段，同时在法医学、医学、遗传育种、物种进化等方面得到广泛应用。
本文综述了DNA多态性研究与DNA指纹技术的基本原理、具体分析技术、应用以及前景等。
关键词：DNA多态性；DNA指纹图谱；原理；技术；应用1.DNA指纹技术的原理1.1.DNA的多态性多态性是指在一个生物群体中，同时和经常存在两种或者多种不连续的变异型或基因型或等位基因，也称之为遗传多态性。
每一个个体在遗传上的不同不仅表现在基因产物上，其本质是DNA水平上的差异。
一般是由于DNA分子中不编码蛋白质的区域和没有重要调节功能的区域发生了中立突变，这些突变构成的DNA变异，在群体中如果大于10%，则称为DNA分子水平的遗传多态性，简称DNA多态性。
1.1.1DNA多态性的发现1980年，Wyman和White在人DNA文库中的随机片段中分离到一个可揭示DNA多态性的高变重复序列。
随后，1985年，Jeffrey 等用人肌红蛋白基因内含子中33bp的核心序列的高变重复序列片段做探针，获得了好像人的指纹一样具有高度特异的DNA“指纹图”，并首次用于亲子鉴定中，为DNA多态性应用与法医学等领域开辟了新纪元，也促进了DNA多态性的更广泛更深入的研究。
1.1.2 DNA多态性的分类DNA多态性包括DNA片段长度多态性、DNA重复序列多态性和单核苷酸多态性。
1.1.2.1DNA片段长度多态性（FLP）DNA片段长度多态性，即由于单个碱基的缺失、重复和插入所引起限制性内切酶位点的变化，而导致DNA酶切片段长度的变化，又称为限制性片段长度多态性，这是一类比较普遍的多态性。
中药指纹图谱的原理与应用
气相色谱(GC)以气体为流动相，对于含挥发性 成分中药的鉴别具有一定优势。由于裂解气相 色谱具有操作简便、样品无须化学前处理、提 供信息量大等优点而格外引人注目。该方法将 样品故人裂解器内，在一定的条件下将样品加 热使其瞬间裂解，生成可挥发性的小分子物质， 立即被载气带人气相色谱系统的分析柱上，分 离后得到具有指纹性质的裂解气相色谱图。如 果将气相色谱与质谱、傅立叶变换红外光谱联 用，则不但可以知道不同中药中挥发性成分的 差别，而且可以对这些成分进行鉴定。
高速逆流色谱指纹图谱(HSCCC fingerprintspectrum， 即调整逆流色谱法) HSCCC利用动态液-液分配原理分 离样品，其分离度和重现性与HPLC类似，但样品前处 理简单。具体地说它是一种基于液-液多级逆流萃取建 立的色谱体系，以轻巧的聚四氟乙烯螺旋管作分离柱，
在行星式运动中连续地完成整个分配、传递、分离过
中药指纹图谱，即中药身份证，主要指中 药化学指纹图谱，实际上是一种保证中药质量 的措施，是指对某种中药材或中成药等运用现 代分离分析科学的手段，得到能够标示该中药 的色谱或光谱的图谱，最终用来对中药质量评 价的科学性方式。它有两个显著特点，一是通 过指纹图谱的特征性，能有效鉴别样品的真伪 或产地。二是通过指纹图谱主要特征峰的面积 或比例的制定，能有效控制产品的质量，确保 产品质量的相对一致。
对这种中药材的分子遗传标记的研究，找到具有该种高度特异性
的片段，便可以此为基础，制备出对该种高度特异性的寡核苷酸 探针，再经分子杂交进行指纹分析，即可达到鉴别目的。DNA指 纹图具有高度的个体特异性。DNA指纹图谱技术包括AP-PCR(arb itrary primer PCR，任意引物聚合酶链式反应)和RAPD(随机扩增 多态性DNA，randomly amplified polymorphic DNA)两种指纹图谱 技术。RFLP (限制性[内切酶]片段长度多态性，restriction fragment length polymorphism)是最常用的构建DNA指纹图的方法，但该法 费时费力，使应用受到限制。随机扩增多态DNA(RAPD)标记，可 以在特异DNA序列尚不清楚的情况下，检测DNA的多态性，这是
生物资源的分子标记
生物资源的分子标记生物资源是指具有生物学和经济价值的所有生物因素，包括动植物、微生物、遗传资源及其生态系统等。
生物资源是人类生存和发展的重要支撑，随着人类社会的发展和工业化的推进，生物资源的保护和有效利用面临着越来越严峻的挑战。
在这个背景下，分子生物学技术的不断发展为生物资源的研究和保护带来了重大的帮助，其中分子标记技术是其中的一项重要研究方法。
一、分子标记技术的概念和种类分子标记技术是指利用分子生物学方法获得的特定DNA片段或序列，经过特殊处理后用于鉴别和区分不同生物体的基因型。
分子标记技术一般包括：DNA指纹图谱技术、RAPD技术、AFLP 技术、SSR技术和SNP技术等。
1、DNA指纹图谱技术DNA指纹图谱技术是指通过多态性DNA片段在不同个体间表达差异来进行个体区分的技术。
DNA指纹图谱技术具有分辨率高、灵敏度高、重复性好等优点，因此在种质资源的鉴定和分类、亲缘关系分析等方面得到了广泛应用。
2、RAPD技术RAPD技术是指利用随机引物扩增多态片段的PCR方法。
RAPD技术具有简便、快速、高效等优点，因此在基因组学、种质资源的筛选和鉴定等方面，也得到了广泛应用。
3、AFLP技术AFLP技术是指利用限制性内切酶和引物扩增多态性片段的PCR方法。
AFLP技术具有高度的多态性、灵敏度和重复性等优点，因此在遗传多样性研究、种质资源的筛选和鉴定等方面，也得到了广泛应用。
4、SSR技术SSR技术是指利用特异性引物扩增可重复序列的PCR方法。
SSR技术具有高度的多态性、稳定性、重复性等优点，因此在种质资源分型、亲缘关系分析等方面，也得到了广泛应用。
5、SNP技术SNP技术是指利用单个核苷酸多态性变异在不同个体间表达差异来进行个体区分的技术。
SNP技术具有分辨率高、灵敏度高、多样性高等优点，因此在种质资源筛选和鉴定、基因组学研究等方面，也得到了广泛应用。
二、分子标记技术在生物资源研究中的应用分子标记技术在生物资源的研究和保护中具有广泛应用，主要包括以下几个方面：1、遗传多样性的鉴定和评估遗传多样性是生物资源保护的重要内容，而分子标记技术可以通过对种质资源中的基因型进行分析，确定物种的多样性水平和遗传结构，为种质资源的合理保护和利用提供依据。
DNA条形码等分子鉴定技术与动植物类中药材的鉴定
·综述·ＤＮＡ条形码等分子鉴定技术与动植物类中药材的鉴定张国林 ，邢以文，薛满苏州市药品检验检测研究中心，江苏 苏州 ２１５０００［摘要］ 中药材鉴定是控制中药质量、确保用药安全与效果的首要环节。
ＤＮＡ分子鉴定是从基因层面上进行中药材鉴别的手段，准确率高。
ＤＮＡ分子鉴定包括电泳技术、免疫技术、随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）、限制性内切酶片段长度多态性（ＲＦＬＰ）、扩增片段长度多态性（ＡＦＬＰ）、简单重复序列（ＩＳＳＲ）及ＤＮＡ条形码等，以ＤＮＡ条形码应用最为广泛。
ＤＮＡ条形码是基因组中相对较短的、可用于物种鉴定的特异性基因片段。
植物类中药材的条形码多选用核基因和叶绿体基因ＤＮＡ片段，如叶绿体ｐｓｂＡ ｔｒｎＨ基因、内转录间隔区（ＩＴＳ）、叶绿体核酮糖 １，５ 二磷酸羧化酶大亚基（ｒｂｃＬ）和ＲＮＡ转录体Ⅱ型内含子剪切酶基因（ｍａｔＫ）等；动物类中药材的条形码多来自核基因和线粒体基因ＤＮＡ，主要有线粒体细胞色素Ｃ氧化酶亚基１（ＣＯⅠ）、核糖体ＲＮＡ（ｒＲＮＡ）和线粒体细胞色素ｂ基因（ＣｙｔＢ）等。
综述动植物类中药材ＤＮＡ分子标记与鉴定技术应用进展，并探讨ＤＮＡ条形码在药用动植物类中药材鉴定中存在的局限性及发展前景，为中药质量控制提供参考。
［关键词］ 条形码；核基因；叶绿体基因；线粒体基因；微条形码；复合条形码［中图分类号］ Ｒ２８２ ５ ［文献标识码］ Ａ ［文章编号］ １６７３ ４８９０（２０２１）０２ ０３８１ ０８ｄｏｉ：１０ １３３１３／ｊ ｉｓｓｎ １６７３ ４８９０ ２０２００２１６００１ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡＢａｒｃｏｄｉｎｇａｎｄＯｔｈｅｒＭｏｌｅｃｕｌａｒＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓｉｎＩｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＡｎｉｍａｌａｎｄＰｌａｎｔＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＺＨＡＮＧＧｕｏ ｌｉｎ ，ＸＩＮＧＹｉ ｗｅｎ，ＸＵＥＭａｎＳｕｚｈｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｓｕｚｈｏｕ２１５０００，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ ＴｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ（ＴＣＭ）ｉｓｔｈｅｆｉｒｓｔｓｔｅｐｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ ＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ，ｉｓａｍｅｔｈｏｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙＴＣＭｆｒｏｍｔｈｅｇｅｎｅｌｅｖｅｌｂｙｄｉｒｅｃｔｌｙａｎａｌｙｚｉｎｇｔｈｅｇｅｎｅｔｉｃｍａｔｅｒｉａｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ Ｉｔｈａｓｈｉｇｈａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｉｓｎｏｔｅａｓｙａｆｆｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓｔａｇｅ，ｔｉｓｓｕｅｐｏｓｉｔｉｏｎ，ｓａｍｐｌｅｓｈａｐｅａｎｄｅｘｔｅｒｎａｌｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌｆａｃｔｏｒｓ ＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｉｎｃｌｕｄｅｓｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ，ｒａｎｄｏｍａｍｐｌｉｆｉｅｄｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃＤＮＡ（ＲＡＰＤ），ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｄｏｎｕｃｌｅａｓｅｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＲＦＬＰ），ａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｌｅｎｇｔｈｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＡＦＬＰ），ｓｉｍｐｌｅｒｅｐｅａｔｓｅｑｕｅｎｃｅ（ＩＳＳＲ）ａｎｄＤＮＡｂａｒｃｏｄｅ，ａｍｏｎｇｗｈｉｃｈＤＮＡｂａｒｃｏｄｅｉｓｍｏｓｔｗｉｄｅｌｙａｄｏｐｔｅｄ ＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｇｉｓａｒｅｌａｔｉｖｅｌｙｓｈｏｒｔｓｐｅｃｉｆｉｃｇｅｎｅｓｅｇｍｅｎｔｉｎｇｅｎｏｍｅ，ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｓｐｅｃｉｅｓｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ＩｎｔｈｅｂａｒｃｏｄｅｏｆｐｌａｎｔｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｎｕｃｌｅａｒｇｅｎｅａｎｄｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｇｅｎｅＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｓａｒｅｍｏｓｔｌｙｓｅｌｅｃｔｅｄ，ｓｕｃｈａｓｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｐｓｂＡ ｔｒｎＨｇｅｎｅ，ｉｎｔｅｒｎａｌｔｒａｎｓｃｒｉｂｉｎｇｓｐａｃｅｒ（ＩＴＳ），ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｒｉｂｏｋｅｔｏｓｅ １，５ ｄｉｐｈｏｓｐｈａｔｅｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅｌａｒｇｅｓｕｂｕｎｉｔ（ｒｂｃＬ）ａｎｄＲＮＡｔｒａｎｓｃｒｉｂｅｒｔｙｐｅⅡｉｎｔｒｏｎｓｈｅａｒｅｎｚｙｍｅｇｅｎｅ（ｍａｔＫ） ＩｎａｎｉｍａｌｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｔｈｅｂａｒｃｏｄｅｍｏｓｔｌｙｃｏｍｅｓｆｒｏｍｎｕｃｌｅａｒｇｅｎｅａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｇｅｎｅＤＮＡ，ｍａｉｎｌｙｉｎｃｌｕｄｉｎｇｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌＤＮＡＣｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣｏｘｉｄａｓｅｓｕｂｕｎｉｔ１（ＣＯⅠ），ｒｉｂｏｓｏｍａｌＲＮＡ（ｒＲＮＡ）ａｎｄｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅｂｇｅｎｅ（ＣｙｔＢ） ＤＮＡｂａｒｃｏｄｉｎｇｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｓｏｎｅｏｆｔｈｅｆａｓｔｅｓｔｄｅｖｅｌｏｐｉｎｇｍｅｔｈｏｄｓｉｎＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ｗｈｉｃｈｐｌａｙｓａｎｉｎｃｒｅａｓｉｎｇｌｙｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｎｉｍａｌａｎｄｐｌａｎｔＴＣＭ Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｈｅａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＤＮＡｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｒｋｅｒａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙｉｎａｎｉｍａｌａｎｄｐｌａｎｔｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｉｓｒｅｖｉｅｗｅｄ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｂａｒｃｏｄｉｎｇ；ｎｕｃｌｅａｒｇｅｎｅ；ｃｈｌｏｒｏｐｌａｓｔｇｅｎｅ；ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌｇｅｎｅ；ｍｉｃｒｏ ｂａｒｃｏｄｉｎｇ；ｃｏｍｐｏｕｎｄｂａｒｃｏｄｉｎｇ［通信作者］ 张国林，副主任药师，研究方向：药品检验及质量控制；Ｔｅｌ：（０５１２）６６０９０２２９，Ｅ ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｇｕｏｌｉｎ２００６＠１６３ ｃｏｍ由于中药材种类繁多、来源复杂及市场利益的驱使，中药材品种混淆、掺伪现象时有发生。
生物指纹图谱调研报告
中药生物指纹图谱调研报告一、中药生物指纹图谱简介中药生物指纹图谱（biological fingerprint of TCM）是利用基因组学和蛋白组学技术研究药材基因型特征和中药作用于特定生物细胞后引起基因和蛋白的表达的变化规律和作用机制，从分子水平上揭示中药、中药与生物的细胞作用后的基因与蛋白的表达特征，研究解决化学成分和药理作用、药效活性的相关性，是中药指纹图谱研究的一个重要方面和最高级阶段。
主要包括中药基因组学指纹图谱、中药蛋白组学指纹图谱和中药材DNA 指纹图谱[1]。
目前，由于宏观上中药作用靶点和作用机制的多样性及对基因作用的多样性，中药基因组学指纹图谱和蛋白质组学指纹图谱可反映中药制剂作用于某特定细胞或动物后所引起的基因或蛋白的特定构象的复杂变化情况。
这两种指纹图谱可称为生物活性指纹图谱。
这种指纹图谱不但包含了化学信息，也体现了和此相关的药效、临床疗效等生物医药信息，通过比较不同蛋白质、基因指纹图谱体现的不同药效结果，就可确定何种物质基础(化学成分群)是该中药制剂的最佳方式，而且为解决中药研究中缺乏标准品的难题提供了一条可行之路[1]。
目前，中药基因组学和蛋白质组学有关指纹图谱的研究工作正在开展。
中药蛋白质组学及基因组学指纹图谱可从分子水平上丰富整个中药指纹图谱研究体系。
无论是中成药二次开发，还是中药新药研究，都有一个关键问题需要解决--逐步在分子水平上研究解决化学成分(物质基础)和药理作用、药效活性的相关性。
而其中，通过蛋白质组学的研究得到的蛋白质组学指纹图谱又具有很高的说服力。
中药材DNA指纹图谱多运用聚合酶链反应( PCR) 从不同生物样品中人工合成DNA 片段, 这种DNA片段的大小、数目因不同生物而异, 因而称之为DNA 指纹图谱。
由于DNA分子标记技术直接分析的是生物遗传因子而非表现型, 所以结果可不受环境因素、样品状态和材料来源等外界条件的影响, 因此为中药品种鉴别中极为可靠的手段。
RAPD技术在玉米自交系亲缘关系鉴定中的应用
离 心 １ ｎ 小 心 取 出上 清 液 于 １ ｎ离 心 管 ５ｍｉ， ５ｍｉ
中， 加入 ０ ３ｍＬ的 １ ｌ ＮＨ ＯＡＣ， 匀 后加 ． ０ｍｏ 的 混
入等 体 积 的 异 丙 醇 轻 柔 地 倒 转 几 次 ， 出 絮 状 勾
Ｄ ＮＡ沉 淀 ； 絮状 沉 淀 放 入到 另 一 个 １ 将 ５ｍＬ离心 管 中 ， 入 ４ ｍＬ Ｅ使 之 溶 解 ； ＮＡ 溶 解 后 加 入 加 Ｔ Ｄ ５ Ｌ 的 Ｒ ｓＡ （ ０ ｍｇ ｍＩ；ＤＮａｅ ｆｅ） 在 Ｎａｅ １ ／ ｓ ｒｅ ３ ｃ下 温 育 ３ ｎ 然 后 加入 ０ ４ｍＩ的 Ｎａ ７。 ０ｍｉ； ． ＯＡＣ 和 ４ｍＩＴｒ 一 和 酚 ： ｉ饱 ｓ 氯仿 ： 戊 醇 （ ５： ４： ） 异 ２ ２ １ 混 匀 后 于 １ ２ ０× ｇ （ ｉ ｃＣ ２ ｇ —ｐ ｅ ０ ｈｍａ Ｒ２ Ｇ Ｈｉｈｓ ｅｄ
１２ １ ． ． ＤＮＡ 提 取
采 用 ＤＮＡ 尿 素 提 取 方 法
课题． 准确划 分 玉米 自交 系 亲缘 关 系 类 群 ， 立 相 建
应 的 杂交优 势 利 用 模 式 ， 的 放 矢 地 选 配 杂 交 组 有
（ ｍａｌ ｃｌ ＵｒａＤ ｘｒｃｉｎＰ ｏｏｏ）提 取 Ｓ ｌＳ ａ ｅ ＮＡ Ｅ ｔ ｔ ｒｔｃ１ ｅ ａ ｏ
ｒｆ ｇｒｔ ｅｔｉ ｇ ， ｔｒＲ ０ ） 心 １ ｎ小 ｅ ｉ ａｅ ｃｎｒｕ ｅ ｒ ｏ ： ２ Ａ２ 离 ｒｅ ｄ ｆ ｏ ０ｍｉ，
自交 系的类 群进 行划 分 ， 玉 米育 种 、 势类 群 的 为 优 划分 提供 分子证 据 ．
育 阶段 的影 响 ， 已广 泛 应 用 于 遗传 学 各 个 方 面． 国
内一 些 研 究 者 如 彭 泽 斌 ， 新 芝 等 都 曾对 利 用 刘 Ｒ Ｄ技 术来 划分 玉米 自交 系 类群 作 过 有 益 的 研 ＡＰ
RAPD技术在中药材鉴定中的应用
综述
广 东 药 学 院学 报
A CAD EM IC JO U RN AL O F GU A N GD ON G CO LLEGE OF PHAR M ACY
Vol. 17 No. 1
M ar. 2001
RAPD 技术在中药材鉴定中的应用
王阳顺* 综述 罗集鹏 审校 ( 广东药学院术是一种 DNA 分子标记技术, 自 90 年代问世以来, 人们即把它试用于 中药材的 鉴定, 并 在该领域 取得可喜的 研 究进展。本文就 RAPD 技术的基本原理以及它应当用于中药格鉴定的优缺点、注意事项、目前国内外研究动态、可能 发展前景等 方 面作了较详细的阐述。 关键词 RAPD 技术; 中药材; 鉴定 中图号 R282. 5 文章编号: 1006-8783( 2001) 01- 0019- 03 文献标识码: A
RA PD 即 随 机 扩 增 的 多 态 性 DNA ( R andom amplified polymorphic DNA ) , 是美 国的 Williams 与 Welsh 两 个研 究小 组 于 1990 年同时提出的一种 DN A 分子标记 技术。Williams 等[ 1] 称之 为 RA PD, Welsh 等[ 2] 称 之 为 A p- PCR ( Arbitarily primed PCR) 。RAPD 技 术建立在 PCR( poly merase chain r eaction) 技术 基础上, 它是 以任 意 顺序 列的 寡 核苷 酸 单链 ( 通 常为 10 个 碱 基,A p- PCR 则为 20~ 30 个碱 基。) 为 引物, 对 所 研究 的基 因组 DNA 进行 随机扩增。RA PD 所用的一系列 引物的 DN A 序列各 不相同, 但对于任一引物, 它同基因组 DNA 序列有 特定的 结合 位点。这些特定的结合 位点 在基 因组某 些区 域 内的 分布 如符 合 PCR 扩增的反应条件, 即在一 定范围内 模板 DNA 上有 与引 物互补的反相 重复 序 列时, 就 可 扩 增出 此 范围 的 DNA 片 段。 在不同物种基 因组 DNA 中, 这 种反相 重复 序列 的数 目和 间隔 的长短不同, 就可导致这些特定的 结合位 点分布发 生相应 的变 化, 而使 P CR 扩 增产物增加、减少 或发生 分子量 的变化。 通过 对 P CR 产物的检 测( 扩 增产 物以 琼脂 糖凝 胶电 泳分 离, EB 染 色,紫 外灯下 测 视, 拍 照。) 和 比 较, 即 可识 别 这 些物 种 基因 组 DNA 的扩增多态性片段。Williams[ 1] 等已用实验证明这 种短的 随机引物可用于扩增从低等到高等各种生物的基因组 DNA, 并 已证明这种多态性是按孟德尔方式遗 传的, 因而可 以用此 作遗 传标记, 研究物种的亲缘关系。
中药指纹图谱综述
中药指纹图谱综述编辑整理：尊敬的读者朋友们：这里是精品文档编辑中心，本文档内容是由我和我的同事精心编辑整理后发布的，发布之前我们对文中内容进行仔细校对，但是难免会有疏漏的地方，但是任然希望（中药指纹图谱综述）的内容能够给您的工作和学习带来便利。
同时也真诚的希望收到您的建议和反馈，这将是我们进步的源泉，前进的动力。
本文可编辑可修改，如果觉得对您有帮助请收藏以便随时查阅，最后祝您生活愉快业绩进步，以下为中药指纹图谱综述的全部内容。
中药指纹图谱摘要: 实现中药现代化首先要解决的是中药的现代化质量标准问题,其关键就要建立合乎现代科学要求的“中药指纹图谱”。
正如国家药品监督管理局任德权副局长指出，“中药指纹图谱的建立已是牵动行业全面进步的关键技术，其应用研究，对保证中成药功效,提高中药工业整体水平，带动中药产业现代化,推进中药走向世界，具有非常重要的意义。
"关键词：中药指纹图谱、测定、DNA、化学特征中药指纹图谱借用DNA指纹图谱发展而来,广义的中药指纹图谱包括中药材DNA指纹图谱和中药材化学（成分）指纹图谱，狭义的中药指纹图谱仅指后者，是表达中药代谢产物化学特征的指纹图,包括光谱、波谱和色谱指纹图.色谱指纹图谱发展最早，也是迄今为止最为重要的指纹图谱。
按谢培山先生的定义〔，中药色谱指纹图谱是一种综合的、可量化的鉴别手段，是当前符合中药特色的评价中药真实性、稳定性和一致性的质量控制模式之一。
整体性和模糊性是它的基本属性。
色谱指纹图谱应满足专一性(或称唯一性)、重现性和实用性的技术要求[1］。
中药生产的原材料,因土壤、气候等环境因素及采收加工的不同，实际使用时不能保证药材质量的稳定,经加工提取得到的中间体，每个批次在成分含量、成分组成及各成分比例方面都不能保持一致[2]。
因此对中药原材料、中间体及成方制剂的质量控制在中药的应用上占据着很主要的位置。
中药指纹图谱借用了法医学上指纹鉴定的概念，对中药的化学信息以现代分析技术给予表征并加以描述,全面反映中药内在化学成分的种类与数量，对判断中药真伪优劣,控制中药原材料、中间体及成品的质量，减少批间差异，并最终控制成品的质量起到了极其重要的作用。
黄芪化学成分
1 黄芪的化学成分黄芪的化学成分众多, 主要含皂苷类、黄酮类、多糖类及氨基酸类等, 另外还含有蔗糖、黏液质、苦味素、胆碱、甜菜碱、叶酸等。
屠鹏飞等[ 2]对黄芪进行了较系统的化学成分研究, 到目前为止已分离得到32种化合物, 鉴定了其中的14种化合物, 包括4种异黄酮[芒柄花素( X-64)、芒柄花素-7-O--D葡萄糖苷( K-12-1)、毛蕊异黄酮( X-100-21)和毛蕊异黄酮-7-O-?-D葡萄糖苷], 2种异黄烷[ ( 3R) -8, 2"-二羟基- 7, 4*-二甲氧基异黄烷( X-66)、2", 3" 4"-三甲氧基异黄烷-7-O-?-D-葡萄糖苷], 1种紫檀烷[ ( 6aR, 11aR) 9, 10- 二甲氧基紫檀烷-3-O-?-D-葡萄糖苷( X-186) ], 1种皂苷[黄芪甲苷( h-29) ], 6种其它类成分[ ?-谷甾醇( E-191)、5-甲基- 呋喃甲醛( X-30)、5?甲氧基?2?吡咯甲醛( X-67)、1, 3, 5-三烯-1, 6-己二醇( E-32-10-17)、2, 4-二烯- 己二酸( E-32-19-14)和尿嘧啶核苷( h-33-7) ]。
其他化合物正在鉴定中。
图1 黄芪的HPLC-APCI-MS（A）和HPLC-DAD（B）色谱指纹图谱Fig. 1 Chromatographic fingerprints of Astragali Radix by HPLC-APCI-MS (A) and byHPLC-DAD (B)表1 黄芪HPLC-DAD-MS 指纹图谱中各色谱峰的保留时间、质谱和紫外光谱数据峰号t/min λmax/nm 质谱(m/z) 化合物1 17.336 258, 288 447, 285 calycosin-7-O-β-D-glycoside2 20.730 280, 325 2173 22.752 280, 325 2244 26.642 280, 325 489, 2855 30.390 250, 300 431, 269 ononin6 34.898 248, 288 285 calycosin7 40.733 230, 282 3018 44.394 250, 300 269 formononetin9 44.394 280 303 (3R)-7,2′-dihydroxy,4-dimethoxyisoflavone10 53.372 230 295, 293, 34811 55.662 –295, 227, 31112 61.692 –24513 62.250 –313, 295, 27714 64.555 –27915 65.001 –297, 279, 31516 65.483 –27917 65.884 –297, 279, 31518 66.585 –437, 455, 419 astragaloside IV19 67.312 –29320 67.562 280 361, 27721 68.126 230 27722 69.266 –35323 70.505 280 295, 29624 71.616 280 29525 74.030 230 2791 黄芪多糖蒙古黄芪的多糖研究已取得一定进展, 其多糖含量处于中上水平。
黄芪种质资源遗传多样性研究进展
黄芪种质资源遗传多样性研究进展一、研究背景随着全球气候变化和人类活动对生态环境的破坏，生物多样性丧失已成为当今世界面临的重大挑战之一。
黄芪(Astragalus membranaceus)作为中药材和重要的药用植物资源，具有很高的经济价值和生态价值。
然而由于长期的过度开发利用和环境污染，黄芪种质资源的遗传多样性受到了严重威胁。
因此研究黄芪种质资源的遗传多样性对于保护生物多样性、维护生态系统稳定和促进可持续发展具有重要意义。
近年来国内外学者对黄芪种质资源遗传多样性的研究取得了一系列重要成果。
这些研究成果不仅揭示了黄芪种质资源遗传多样性的丰富性和复杂性，还为黄芪种质资源的保护和利用提供了科学依据。
然而目前对黄芪种质资源遗传多样性的研究仍存在一些不足之处，如遗传多样性水平的评估方法尚不完善，遗传多样性与黄芪种质资源质量之间的关系尚未明确等。
因此有必要进一步深入研究黄芪种质资源遗传多样性，以期为黄芪种质资源的保护和利用提供更有效的理论指导。
1. 黄芪的概述和历史渊源黄芪(Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.)是一种常见的中药材，具有很高的药用价值。
黄芪属植物主要分布在中国、蒙古、俄罗斯等国家和地区，其中以中国黄芪资源最为丰富。
黄芪的历史悠久，早在2000多年前的《神农本草经》中就有关于黄芪的记载。
黄芪作为中医药的四大补益之一，被广泛应用于治疗各种疾病，如脾胃虚弱、气血不足、久病体虚等。
随着现代科技的发展，对黄芪种质资源遗传多样性的研究也日益受到重视，为黄芪的资源保护、品种改良和产业发展提供了有力支持。
2. 黄芪种质资源的重要性和应用价值黄芪(Astragalus membranaceus)是一种具有悠久历史的传统中药材，其药用价值已被广泛认可。
黄芪种质资源的遗传多样性研究对于提高黄芪药材的质量、产量和抗性具有重要意义。
随着生物技术的发展，黄芪种质资源的遗传多样性研究在现代中药产业中的地位日益凸显。
中药现代化技术-中药指纹图谱技术
紫外光谱指纹图谱 紫外光谱是由分子中价电子 的跃迁而产生的一种光谱，它依靠图谱上吸收峰 的位置和吸收光谱的吸收强度来分析鉴别样品， 具有实用性强、可靠灵敏、无污染、重现性好等 特点。
彭文进等研究了紫外指纹图谱技术在长生露口 服液鉴别及质量控制中的应用，建立了长生露口 服液的质量控制紫外光谱指纹图谱。
刘向华等分别从药材蛇胆的胆衣和胆汁、原动 物棕黑锦蛇的肌肉和胆汁中提取DNA，经PCR扩 增得到400bp的12srRNA基因片段，并对该基因 片段进行测序研究，结果表明同一动物的胆衣和 胆汁、肌肉和胆汁的碱基序列完全一致，所以可 依次用于鉴别中药材蛇胆和胆汁。
展望
中药指纹图谱技术在中药质量控制领域以及药 效学研究方面有着不可或缺的作用，中药指纹图 谱技术是中药现代化发展必不可少的手段。
核磁共振指纹图谱 核磁共振指纹图谱主要用于 纯化合物的结构鉴定，可以反映出有机分子中氢 或碳的类型。中药材及其制剂的核磁共振谱是多 种化合物核磁共振的叠加。
江洪波采用1 H － NMＲ 建立了不同产地麦冬 甲醇提取物的指纹图谱，并对不同品种、产地的 样品进行分析，结果表明不同麦冬品种、不同产
地 1 H － NMＲ指纹图谱有较大的差异，可以 此区分，故1 H － NMＲ指纹图谱不但可以鉴 定不同麦冬品种，还可以区分不同产地的麦冬 。
图谱
中
核磁共振波谱法 气相色谱法
药
电化学法
毛细管电泳法
指
纹
图
谱
中药生物指纹 图谱
基因组学指纹图谱 蛋白质组学指纹图谱
DNA 指纹图谱
测定方法及运用
红外光谱指纹图谱 主要是利用红外光谱仪分析 、测定中药材及其制剂而得到的光谱图。通过比 较光谱中各吸收峰的位置及强度来鉴定中药材及 其制剂的真伪。
黄芪药材指纹图谱的研究进展
时珍 国 医 国药 ２ ０ 第 ｌ 第 １ 期 ０７年 ８卷 １
表 １ 回 收 率考 察 数 据
ＬＳ ＩＨ ＮＭ ＤＣＮ Ｎ Ａ Ｅ Ｉ Ｅ ＩＡＲ Ｓ Ａ Ｃ ０７Ｖ Ｌ １ Ｎ ．１ ＩＨＺ Ｅ Ｅ ＩＩＥＡ ＤＭ Ｔ ＲＡ Ｍ ＤＣ Ｅ Ｅ Ｒ Ｈ２０ Ｏ ．８ Ｏ １ 下 的 展 开剂 ， 过 多次 调 整 ， 展 开 剂 中 的水 换成 浓 氨 试 液 ， 展 经 把 即 开剂为苯 一醋酸 乙酯 一 丙醇 一甲醇 一浓氨试液 （ ：３ ． ： 异 ６ ：１５ １５ ． ） ． ：０ ５ 效果较好 ， 结果 较稳 定。 流动相 的选择 “ 黄连颗 粒” 双 项下… 黄 芩苷含量 测定 的流 动相 ， 试验结果发现黄芩苷达不到基线 ， 保留时间较短 ， 经调整将 甲醇比例增大些 ， 醋酸 比例缩 小 ， 则达 到基线分 离 、 留时间合 保 适， 故流动相选用 甲醇 一 一冰醋酸 （５ ：４ ：０５ ）。 水 ５ ５ ．
◇文献综述◇
黄 芪 药 材 指 纹 图谱 的研 究 进 展
王 ３ （． １天津中医药大学， 天津 ３０９ ； 陈 涛 李 ０１ 洋 ， ，
进
３０９ ） ０ １３
２天 津 中医药 大学第 一附 属医 院 ， ． 天津
摘要 ： 黄芪是常用中药， 制定科学可靠的质量标准意义重大。文章简要概述了黄芪药材指 纹图谱的研究方法为黄芪药
３ 讨 论
在黄柏 的薄层色谱鉴别实验 中， 黄柏鉴别项 下… 的展开剂 ，
参考 文献 ：
１］ 国家药典 委员 会． 中国 药典 ， 部 ［ ］ 北 京 ： 学工 业 出版社 ， 一 ｓ． 化 醋酸乙酯 一 丁酮 一甲酸 一水 （１ ：６ ：１）进行实验 ， ０ ：１ 结果分 ［ ２ ０ ５ １ ３， １ ４ ０ ５： ２， ７ ３ ６， ４． 离效果不好 ， ｆ Ｒ 值较小 ， 相邻斑 点分不开 。后来选用黄 连鉴 别项
中药质量控制方法
中药质量控制方法一、中药指纹图谱技术：1、色谱指纹图谱：它包括薄层色谱(TLC)、气相色谱(GC)、高效液相色谱(HPLC)和高效毛细管电泳色谱(HPCE)等指纹图谱。
目前，色谱指纹图谱在中药研究领域中应用广泛。
例如，吕美红等采用GC 技术建立了苍术的指纹图谱，在14批样品测定的基础上，初步总结出不同产地苍术指纹图谱的共性，为苍术质量控制标准的建立提供了参考依据。
张胜娜等采用水蒸气蒸馏法提取鲜肿节风挥发油，首次采用GC技术建立鲜肿节风挥发油的共有指纹图谱。
随着科学技术的迅速发展，HPCE 指纹图谱日益广泛地应用于中药化学成分的分离、鉴别和含量测定。
李峰等建立土鳖虫药材的高效毛细管电泳指纹图谱鉴别方法，通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统，确定6 个共有峰构成土鳖虫药材指纹图谱的特征峰，为药材品种鉴定与质量控制提供了依据。
，色谱技术已成为获取中药指纹图谱的主要手段之一。
米莉莉等对不同虫草样品建立荧光淬灭薄层色谱指纹图谱，得到的荧光淬灭薄层色谱指纹图谱，能为人工虫草和天然虫草提供直接的指纹鉴别，方法快速简便、重现性好。
Rana Ajay等使用C12反相色谱柱，采用一种快速、简便、灵敏的H PLC-DAD法对茶黄素进行了分析与含量测定。
Aviv Am irav等采用一种新型的气相色谱- 质谱联用技术半在线地监控反应的最佳化回收率、阐明其反应机理，并且获得反应产物特性及纯度。
Gu M ing等采用高速逆流色谱法（H SCCC）分析丹参药材中12 种成分并获取指纹图谱，根据其相对保留时间、相对峰面积、相对保留时间的相对标准偏差值、相对峰面积的相对标准偏差值、差异率及特征指纹图谱建立数字化色谱，结果表明高速逆流色谱- 数字化指纹图谱（H SCCC-DCFS）是一种能够定量、直观的获取丹参药材指纹图谱的方法。
基于RAPD技术探讨黄精属部分药用植物系统位置
竹属植物 宝铎草 （ ｉ ｏｕ ｅ ｉ Ｄｓ ｒｍ ｓｓｌ Ｄ．Ｄ ｎ 为外类群 ， 百合科 黄精属 ｌ ｐ ｓｅ ｏ） 对 ９批 （ ６种 ） 药用植物进 行基 因组 Ｄ Ａ的 多 Ｎ 态性分析 ， 通过 聚类分析探 讨黄精 种属间亲缘关 系。结果 ： 筛选 出 ７条 随机 ５物 ， ｌ 聚类结 果表 明 ， 黄精 属植物在 属 级分类上特征 明显 ， 但属 内分类有交叉。结论 ： Ａ Ｄ技术可 以为黄精属 的分类和种 的鉴别提供一定 的理论依据 。 Ｒ Ｐ 关键词 黄精属 ； Ａ Ｄ； Ｒ Ｐ 聚类分析 ； 系统位 置 文献标识码 ： Ａ 文章编 号 ：０６— ６ ０ ２ １ ）６一 ０４—０ １０ ９ ９ （０ １０ ｏ ３ ４ 中图分类号 ：２ ４ １ Ｒ ８ ．
通讯作者 ： 张朝 凤 ， ｍａ ： ｊｈｏ ｎ ＠１６ ｃｍ； 民坚 ， Ｅ— ｒ ｎｃａｆ ｇ ２ ．ｏ 秦 ｌ ｅ Ｅ—ｍ ｉ： ｉ ｉ ｑ ＠ １３ ｏ ａｌ ｍｎ ａ ｉ ６ ．ｃｒ ｊｎ ｎ ｎ
．．．— —
３ ．— ４ ． ． —
第 ６期
朱
艳， ： 于ＲＰ 等 基 Ａ Ｄ技术探讨黄精属部分药用植物系统位置
分析 ， 支持将 黄 精 属 分 成 两 组 的观 点 ； 世 安 等 ［ 吴 ６ 对 黄精 属植 物 ｔ ｋ基 因和 ｒ／６基 因进行 进行 Ｐ Ｒ、 ｒ ｎ ｐ１ Ｃ ＲＬ Ｆ Ｐ分析 ， 为互 生 叶种 类 组 成 了一单 系 ， 轮 生 认 而 叶 和对 生叶种 类 为多 系关 系 ， 构成 一个 单 系 ； 年 不 近 来， 多篇 文献 报 道 利用 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ技 术 鉴定 玉竹 类 药材 ， 哗等 对 黄 精属 部分 药 用植 物 亲缘 关 系进 周 行 探 讨 ， 现不 同产地 的玉竹 、 玉竹 和多 花黄 精 出 发 小 现一 定 的 变 异 。本 文 在 前 人 研 究 的 基 础 上 ， 过 通 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ技 术 对黄精 属 部分 药用 植 物 的亲 缘 关 系进 行 分析 ， 首次 报道 了狭 叶 黄精 ， 长梗 黄精 、 湖北 黄 精 在 此 系统 树 中 的位 置 ， 用 Ｒ Ｐ 利 Ａ Ｄ技 术对 黄精 属 药 用
DNA指纹图谱分析
DNA指纹图谱分析一、实验目的1. 掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程2. 学习DNA的限制性酶切的基本技术3. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术，学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度，并能对实验结果进行分析。
二. 实验原理1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的人源小卫星DNA用作基因探针，同人体核DNA的酶切片段杂交，获得了由多个位点上的等位基因组成的长度不等的杂交带图纹，这种图纹极少有两个人完全相同，故称为"DNA指纹"，意思是它同人的指纹一样是每个人所特有的。
DNA指纹的图像在X光胶片中呈一系列条纹，很像商品上的条形码。
DNA指纹图谱，开创了检测DNA多态性（生物的不同个体或不同种群在DNA结构上存在着差异）的多种多样的手段，如RFLP（限制性内切酶酶切片段长度多态性）分析、串联重复序列分析、RAPD（随机扩增多态性DNA）分析等等。
各种分析方法均以DNA的多态性为基础，产生具有高度个体特异性的DNA指纹图谱，由于DNA指纹图谱具有高度的变异性和稳定的遗传性，且仍按简单的孟德尔方式遗传，成为目前最具吸引力的遗传标记。
DNA指纹具有下述特点：1．高度的特异性：研究表明，两个随机个体具有相同DNA图形的概率仅3×10－11；如果同时用两种探针进行比较，两个个体完全相同的概率小于5×10－19。
全世界人口约50亿，即5×109。
因此，除非是同卵双生子女，否则几乎不可能有两个人的DNA指纹的图形完全相同。
2．稳定的遗传性：DNA是人的遗传物质，其特征是由父母遗传的。
分析发现，DNA•指纹图谱中几乎每一条带纹都能在其双亲之一的图谱中找到，这种带纹符合经典的孟德尔遗传规律，即双方的特征平均传递50％给子代。
3．体细胞稳定性：即同一个人的不同组织如血液、•肌肉、毛发、精液等产生的DNA指纹图形完全一致。
食用菌DNA分子标记研究的十年历程回顾
了遗传多样性研究。为香菇的亲缘关系分析和菌株鉴定提供了依据。徐学锋、林芳灿嗍测定了中国的５９个
野生香菇菌株ｒＤＮＡ的ＩＴＳ区域序列，发现自然群体不同菌株的ＩＴＳ序列存在相当程度的变异，可以根据
ｌ佟序列差异将不同菌株划分为不同的谱系。认为ＩｆＩＳ序列分析是研究香菇的系统发育和生物地理学的有
效手段。詹才新等ｆ，对来源于不同地区双孢蘑菇菌株的ＲＡＰＤ分析发现它们的遗传变异不丰富，认为可能
ＤＮＡ（ｒＤＮＡ）线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）和基因组总ＤＮＡ的进行了研究，供试菌株分为四大类。为草菇的育种提
供了科学依据。
２４卷
边银丙等：中国食用菌ＤＮＡ分子标记研究的十年历程回顾
１７
５分子标记在食用菌线粒体遗传研究中的应用
黄芪的高效液相色谱指纹图谱及主成分含量测定
的相似度 进 行 了 计 算 " 数 据 处 理 用 ^ G F ? B E, G F F ? J 相似度软件计算 ! 采用的原理是夹角余 弦法 " 1 G F 9 I 以共有峰的峰面积计算相似 度 ! % &个样品的相似度 均大于 " $a " 符 合 中 药 注 射 剂 指 纹 图 谱 技 术 指 南 要求 & ’ ! 结果见表 &" $ D "$% D $ 分别取黄芪对 % 3 ( 3 4 ! 相似度 的 精 密 度 与 重 现 性 # 照药材样品溶液 ! 连续进样 / 次 ! 测定指纹图谱相似 度的日内精密度 ! 各共有峰的峰面积与对照品相比 相似 度 & 分别为" a’ ( D " /! " # D # !! " " D % *! 4 2 Tj 分别在 $! 测定指纹图谱相似度 % D # &a $ %! & 天进样 ! 的日间精密度 ! 各共 有 峰 的 峰 面 积 与 对 照 品 相 比 相 似度 & a ’分 别 为 " " D " "! " ! D " /! " " D % *! 4 2 Tj $ 分别取岷县梅川镇杏林村黄芪 份 ! 按供试 % D $ (a / 品溶液制备方法制 备 样 品 溶 液 ! 测定指纹图谱相似 度的重复性 ! 共有 峰 的 峰 面 积 与 对 照 品 相 比 相 似 度 & a ’分 别 为 " ’ D $ # ’! " ’ D $ / %! " ’ D / % "!4 2 Tj " $ D % * /a ! ! 主成分含量测定 ! 3 %! 黄 芪 中 黄 芪 甲 苷 的 含 量 测 定 ! 色 谱 条 件 为 c B = @ G E H :3 T 2 ) %色谱柱& ( @! ’ D * @@k& ( $ @@’ ) & 天津琛航科学仪器有限公司 ’ ! c B = @ G E H :3 T 2 保护 柱& ! 乙腈 水& 洗 脱! ( @! ’ D * @@k% $ @@’ ) * !f / /’ ) 进样量 % ! 流速为% ( 检测波长为& $) : D $@ : @ H J! $ / 柱温 # J @! & (b " 黄 芪 甲 苷 的 回 归 方 程 和 相 关 系 数 ’ ’ 为# ! 线性范 Xj’ D ( &k% $ . ) & D % %k% $ B j$ D " " " /! 围为 # " 样品处理 方 法 同 % 结 % D % & ($* D $ ! ( D ’ D %! L ) 果见表 ’" 色谱图见图 &% 图 /"
中药黄芪指纹图谱分析研究概况
中药黄芪指纹图谱分析研究概况
王二丽;刘巧;陈丹;包国荣
【期刊名称】《福建分析测试》
【年(卷),期】2005(014)004
【摘要】本文通过对中药黄芪指纹图谱分析应用的综述,阐述了中药指纹图谱分析的概念和特点,介绍了各种有关类型指纹图谱的研究,并指出黄芪及其制剂指纹图谱的分析还应进一步全面深入研究.
【总页数】3页(P2329-2331)
【作者】王二丽;刘巧;陈丹;包国荣
【作者单位】福建中医学院药学系,福建,福州,350003;福建省福州市疾病预防控制中心,福建,福州,350004;福建中医学院药学系,福建,福州,350003;福建中医学院药学系,福建,福州,350003
【正文语种】中文
【中图分类】R2
【相关文献】
1.膜荚黄芪和蒙古黄芪的RAPD指纹图谱分析研究 [J], 吴松权;朴炫春;吴基日;全雪丽
2.山西省不同产地中药材黄芪HPLC指纹图谱研究 [J], 石玉娟;解军;李桂兰
3.中药黄芪指纹图谱的研究进展 [J], 汪海斌;石岩;李芳;王德胜;魏锋;马双成
4.如何利用FTIR指纹图谱研究中药材黄芪 [J], 徐星平
5.如何利用FTIR指纹图谱研究中药材黄芪 [J], 徐星平
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于位点特异性PCR的黄芪与红芪鉴别方法研究
基于位点特异性PCR的黄芪与红芪鉴别方法研究研究黄芪与红芪药材之间的DNA分子鉴别方法。
采集不同产地的黄芪药材30份、红芪28份，所有样品进行总DNA的提取，通过对黄芪及红芪药材trn L-trn F片段进行扩增、测序，进行同源比对后根据其变异位点设计特异性鉴别引物。
并对位点特异性PCR方法进行条件优化。
通过使用特异性引物对所有样品进行PCR扩增，发现黄芪可扩增出136 bp 片段，红芪可以扩增出323 bp片段。
黄芪中掺入10% 以上红芪可以扩增出红芪特异鉴别条带。
通过位点特异性PCR的方法实现了黄芪与红芪药材的快速、准确鉴别。
标签：黄芪；位点特异性PCR；分子鉴定黄芪药材鉴别的方法较多，鉴定手段也从原植物鉴别、性状鉴别、显微鉴定发展到应用色谱、光谱技术[4-6]。
而对于黄芪与红芪的鉴别方法，有显微和色谱的方法曾被报道过[4，7]。
目前市面上销售的黄芪多为加工过的药材，而加工过的红芪药材或其伪品的表面性状、显微特征等与黄芪药材都较为相似[4-5，8]，在实际运用中要进行准确鉴别存在一定难度。
同时应用形态学和组织学等方法来鉴定黄芪存在主观性较大、特异性不强、通用性差、对观察者经验的要求高等缺陷，不利于规范化、标准化方法的建立及普及。
而DNA分子遗传标记技术具有快速、微量、特异性强的特点，近几年分子生物学中该技术的研究则为解决药材的鉴别问题提供了客观而有效的手段。
对于黄芪分子鉴别方面，张曦等对中药材黄芪进行了DNA指纹图谱鉴别研究[9]，而前期课题组已经通过ITS序列差异分析对黄芪及其红芪等混伪品的遗传关系作初步的研究[10]，为了寻找更快速、准确、稳定的分子鉴别方法，对位点特异性PCR方法进行了研究。
目前位点特异性PCR方法已成功用于中药材鉴定等方面的研究，如金银花、人参、陈皮等中药材的真伪鉴别[11-13]，因此本研究通过位点特异性PCR方法对黄芪及其混伪品红芪进行研究，为准确进行黄芪与其混伪品的鉴别提供科学的客观依据。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
高
霞 等： 黄芪杂交种 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ指纹图谱及其亲缘关 系分析
黄芪杂交种 Ｒ Ｐ Ａ Ｄ指 纹 图 谱 及 其 亲 缘 关 系 分 析
高 霞 赵 景峰 何为 平。 马 金 星’ 伊风 艳 ， ， ， ，
Hale Waihona Puke （． １ 内蒙古 农业 大 学生 态环 境学 院 ， 呼和浩 特 ０ ０ １ １ ０ ９； ２ 内蒙 古 自治 区草原 工 作站 ， 呼和浩 特 ０ ０ ２ ； ３ 全 国畜牧 总站 ， 北 京 １ ０ ２ ） ． １０ ０ ． ００６
３ Ｎ ｔ ｎ ｌ ｒｚ ｇＨ ａ ｑ ａ ｅ ， ｅ ｉｇ１０ ２ ， ｈｎ ） ． ａｉ ａ Ｇ ａｉ ｅｄ ｕ ｒ ｒ Ｂ ｉｎ ０ ６ Ｃ ｉａ ｏ ｎ ｔ ｊ ０
Ａ ｂ ｔ ａｃ ： ｎ ｔ ｓ ｓｕｄ ｔ ｇ ｎ ｔｃ ｒ ｌ ｔ ｎ ｈ ｐ ｂ ｔ ｅ ｈ ｓ ｒ ｔ Ｉ ｈｉ ｔ ｙ，ｈｅ ｅ ｅｉ ｅａ ｉ ｓ ｉ ｅｗｅ ｎ ｔ ｅ Ａ．ｍ ｅ ｂ ａ ａ ｅ ｓ ｏ ｍ ｒ ｎ ｃ ｕ Ｂｕ ｇ Ａ．ａ ｓ ｒ ｎ ｌ． ｎ ｎ ｅ， ｄ ｕｇｅ ｓ Ｐａ１ ａ ｄ ｈ ｂ ｄ ｒ ｎ ｌｚ ｄ ｂ ｓｎ ｙ ｒ ｓｗｅ ｅ ａ ａｙ ｅ ｙ ｕ ｉ ｇ ＲＡＰＤ ｎ ｅ ｐ ｉ ｓ ａ ｄ ｃ ｅｆｃ ｅ ｔｏ ｅ ｅｉ ｉ ｌｒｔ ｒ ｌｏ ｓｕｄ ｅ Ｔｈ ｉ ｉ ｆ ｇ ｒ ｒｎｔ ， ｎ ｏ ｆｉ ｉｎ ｆｇ ｎ ｔｃ ｓｍｉａ ｉ ｗｅ ｅ ａｓ ｔ ｉｄ． ｅ ｙ
Ａｎ ｌ ｓｓ ｏ ａ ｙ ｉ ｎ ＲＡＰＤ ｎ ｅ ｐ ｉ ｔ ｎ ｎ ｔ ｌ ｔｏ ｓ ｉ ｆＡｓｒ ｇ ｌ ｓ Ｈｙ ｒｄ Ｆｉ ｇ ｒ ｒｎ ｓ ａ ｄ Ｇｅ ｅ ｉ Ｒｅ ａ ｉ ｎ ｈ ｐ ｏ ｔａ ａ ｕ ｂ ｉ ｃ
ＧＡＯ ａ ，ＺＨＡＯ ｉｇ ｆｎ ，Ｈ Ｅ Ｗ ｅ－ｉ ｇ ，Ｍ Ａ ｉ — ｉｇ ，ＹＩＦ ｎ －ａ Ｘｉ Ｊｎ －ｌ ｅ ｉｐｎ Ｊｎ ｘ ｎ ｅ ｇｙ ｎ
ｍａ ｒａ ｐ ｒｎ ． ｄｕｇ ｎ ａ１）ｈｄｎ ｐ ｃｆ ａ ｄ ． ｒ ｒ ｏｌ ｒｄ ｃ ｐ ｃ ｃｂ ｎ ａ ｏ ｔ ｔ ｎ ｌ ａｅｔ（ ａ ｓｒｅｓＰ ｌ ｅ ． ａ ｏｓｅｉｃｂ ｎ ｓＰ ｍｅ ｃｕｄ ｐｏ ｕ ｅａｓ ｅｉ ａ ｄ（ ｂ ｕ ｉ ｉ ４ ｉ ｆ
７ ０ｂ ）ｔ Ａ ｍ ｍｂａ ａｅｓＢ ｎ ｅ ｂ ｔ ｈ ｔｅ ａ ｒ ｌ ｈ ｄ ｎ ｐ ｃ ｃｂ ｎ ． ｕｔｅｍ ｒ Ａ ｔ ｇ ｌ ３ ｐ ｏ ． ｅ ｒｎ ｃｕ ｕ ｇ ， ｕ ｔｅ ｏ ｒ ｍ ｔ ａｓ ａ ｏｓｅｉ ａ ｄ Ｆ ｒ ｒ ｏｅ ｓ ａ ａｕ ｈ ５ ｅ ｉ ｉ ｆ ｈ ｒ ｓ
ｆ ｍ ｔｅ ｓ ａ ａｕ ｈ ｂ ｄ ｂ ｒ ｒ３ａ ｄ５ Ｗ ｈ ｅｔｅｐ ｔｒａ ｐ ｒｎ Ａ ｍ ｍｂａ ａｅｓＢ ｎ ｅ ａｄ ｔｅ ｒ ｔ ｇ ｌ ｙ ｒ ｙｐｉ ｎ ． ｉ ａ ｎ ｌ ａｅ ｔ（ ． ｅ ｒｎ ｃｕ ｕ ｇ ） ｎ ｈ ｏ ｈ Ａ ｒ ｓ ｉ ｍｅ ｌ ｈ ｅ
（ ． ｏｌ ｅｏ ｃｌｇ ｎ ｎ ｉ ｎ ｅ ｔ ｃｅｃ ， １ Ｃ ｌ ｇ ｆ ｏ ｙａｄ Ｅ ｖ ｏ ｍ ｎａ Ｓ ｉ ｅ ｅ Ｅ ｏ ｒ ｌ ｎ
Ｉ ｅ ｏ ｇ ｌａ Ａｇ ｉｕ ｔ ｒ ｌＵｎ ｖ ｒｉｙ， ｈ ｏ ０ ９， ｉ ａ； ｎｎ ｒ Ｍ ｎ ｏｉ ｒｃ ｌｕ ａ ｉｅ ｓｔ Ｈｏ ｈ ｔ０１ ０１ Ｃｈ ｎ ２． ｎ ｅ ｏ ｏ ｉ ａ ｓａ ｄ Ｓ ａ ｉｎ， ｈ ｏ ０ ０， ｉ ａ； Ｉ ｎ ｒ Ｍ ｎｇ ｌａ Ｇｒ ｓ ｌｎ ｔ ｔｏ Ｈｏ ｈ ｔ０１ ０２ Ｃｈ ｎ
ｈ ｂ ｉ ａ ｍａｌｇ ｎｅｉ ｉ ｌｒｔ ｏ ｉ ａ ｈ ｒ， ｉｅ ｈ ｄ ａｂｉ ｎ ｏ ｉ ｔ ｒ Ｓ ｈ ｅ ｅ ｉ ｈ ｒ ｃ ｅ ｓｏ ｙ ｒｄ ｈ ｄ ａｓ ｌ ｅ ｔｃ ｓｍｉ ｉ ｙ ｔ ｔ ｆ ｔ ｅ ｗｈ ｌ ａ ｇｏ ｅ ｔ ｔ ｍｏｈｅ ． ｏ ｔ ｅ ｇ ｎ ｔ ｃ ａ ａ ｔｒ ｆ ａ ｓ ｓ ｃ
摘要 ： 对膜 荚 黄 芪和 斜 茎黄 芪及 其 杂 交 种 （ 芪苹 ） 利 用 Ｒ Ｐ 黄 ， Ａ Ｄ标 记 进 行 了指 纹 图谱 及 遗 传 相 似 系数 分 析 。 结 果 表 明 ， 黄 芪草 在 引物 Ｐ３和 Ｐ ５的扩 增 图 谱 中分 别 具 有 １条 和 ２条特 异 带 （ ３６ ０ Ｐ －８ 、 ５８０ ， 父本 膜 荚 黄 芪 与 母 本 斜 Ｐ －７ 、 ５ ０ Ｐ －７ ） 而 ６ 茎 黄 芪 无 此 特 异 带 ； 引物 Ｐ４的扩 增 下 膜 荚 黄 芪具 有 一 条 ７ ０ｂ 在 ３ ｐ左 右 的 特 异 带 ， 其 余 ５份 材 料 均 未 出现 该 特 异 带 ； 而
黄 芪草 与 其 父本 膜 荚 黄 芪 遗 传 相 似 系数 较 小 ， 与 母 本 斜 茎 黄 芪 遗 传 相 似 系数 较 大 ， 遗 传 偏 向母 本 。 而 其
关 键 词 ： 膜 荚 黄芪 ； 茎 黄 芪 ；Ｒ Ｐ 指 纹 图谱 ；杂 交 种 斜 ＡＤ
中 图 分 类 号 ： Ｓ５７ ２ ６ ． 文献标志码 ： Ａ 文 章 编 号 ： １０ ４ ０ （０ １ ０ －０ ７０ ０ １— ７５ ２ １ ） １ ２ —４ ０
ｒｓｌ ｎ ｉ ｔ ａ ａｓｅｉｃｂ ｎ Ｐ３６ ０ ｎ ｐｃｆ ａ ｄ Ｐ５６ ０ Ｐ５８ ０ ｏ ｌ ｂ ｍ ｌ ｅ ｅｕｔ ｉｄｃ ｅ ｔ ｔ ｐ ｃ ａ ｄ（ －７ ）ａ ｄ２ ｓｅｉｃｂ ｎ ｓ（ －８ ， －７ ）ｃ ｕｄ ｅａ ｐｉ ｄ ｓ ａｄｈ ｉ ｆ ｉ ｉ ｆ