液相色谱柱使用问题解析
液相色谱柱的操作使用 液相色谱常见问题解决方法
液相色谱柱的操作使用液相色谱常见问题解决方法色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。
但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同；另外，在做柱性能测试时是依照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是较佳条件），只有这样，测得的结果才有可比性。
1、样品的前处理：a、可以使用流动相溶解样品。
b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与柱填料产生不可逆吸附的杂质。
2、流动相的配制：液相色谱是样品组分在柱填料与流动相之间质量交换而达到分别的目的，因此要求流动相具备以下的特点：a、流动相对样品具有确定的溶解本领，保证样品组分不会沉淀在柱中（或长时间保留在柱中）。
b、流动相具有确定惰性，与样品不产生化学反应（特别情况除外）。
c、流动相的黏度要尽量小，以便在使用较长的分析柱时能得到好的分别效果；同时降低柱压降，延长液体泵的使用寿命（可运用提高温度的方法降低流动相的黏度）。
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。
如使用UV检测器，可以使用对紫外吸取较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则简单产生气泡，导致试验无法进行。
f、在流动相配制好后，确定要进行脱气。
除去溶解在流动相中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量氧与样品发生作用。
3、流动相流速的选择：因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。
对于一根特定的色谱柱，要努力探求较佳柱效，可以使用较佳流速。
对内径为4.6mm的色谱柱，流速一般选择1ml／min，对于内径为4.0mm柱，流速0.8ml／min为佳。
当选用较佳流速时，分析时间可能延长。
可接受更改流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间（如使用反相柱时，可适当加添甲醇或乙腈的含量）。
总结几个液相色谱柱的问题
总结几个液相色谱柱的问题液相色谱（Liquid Chromatography，LC）被广泛应用于在化学、医药、环保、食品安全等领域中的化合物分离与分析。
其中，色谱柱作为液相色谱系统中最关键的组成部分，扮演着至关重要的角色。
本文将总结几个常见的液相色谱柱的问题。
1. 样品损失在进行液相色谱分析时，由于样品与固定相之间的相互作用，有时会出现样品损失的情况。
事实上，样品在运动过程中会在一定程度上被固定相吸附，因此需要合理地选择固定相材料、样品溶剂和流动相条件等来减少样品损失。
2. 色谱柱寿命问题液相色谱柱的使用寿命是决定其经济性的重要指标。
而使液相色谱柱寿命缩短的主要原因有如下几个：•样品残留：样品中的一些化学物质对色谱柱产生腐蚀作用。
•pH值不适当：酸性和碱性的溶液都会使柱子寿命缩短。
•流量过大：过高的流速会使液相色谱柱内产生空洞，这种作用对于柱子内定相结构影响很大，会使得柱子寿命缩短。
•温度过高：温度过高同样会导致柱子寿命缩短。
•洗脱剂不适当：洗脱剂过于浓缩或浓缩程度过大，都会缩短柱子寿命。
3. 溶液的质量问题在液相色谱分析中，溶液的质量是十分关键的。
如果溶液存在问题，容易对液相色谱柱产生损害，从而影响分析结果。
例如，使用低纯度的溶液会对柱子表面产生氧化性反应，使液相色谱柱受损；使用过酸、过碱的溶液，会对柱子的环境造成影响，从而缩短液相色谱柱的寿命。
4. 流量问题流量是影响液相色谱分析的关键因素之一，如果流量不当会对分析结果产生巨大影响。
通常情况下，如果液相色谱柱内的固定相颗粒比较细，那么一般应该采用缓慢渗透的方法，控制柱子内部的液体流量。
如果液相色谱柱内的固定相颗粒比较粗，那么可以采取较快速的流速来进行分析，但是流速要适当，过高的流速容易导致柱子失效。
同时，流速与柱直径也有关系。
尽管使用更快的流速在某些情况下可以提高分析效率，但这通常需要考虑柱的长度和直径，以确定流速的可行性。
在实际使用时，要根据具体情况科学地选择液相色谱柱，合理安排分析方法和流量等操作，从而使液相色谱转化为一种效率高、精度高的分析工具。
液相柱常见问题及处理方法
液相色谱常见问题及处理方法HPLC灵敏度不够的主要原因及解决办法1、样品量不足，解决办法为增加样品量2、样品未从柱子中流出。
可根据样品的化学性质改变流动相或柱子3、样品与检测器不匹配。
根据样品化学性质调整波长或改换检测器4、检测器衰减太多。
调整衰减即可。
5、检测器时间常数太大。
解决办法为降低时间参数6、检测器池窗污染。
解决办法为清洗池窗。
7、检测池中有气泡。
解决办法为排气。
8、记录仪测压范围不当。
调整电压范围即可。
9、流动相流量不合适。
调整流速即可。
10、检测器与记录仪超出校正曲线。
解决办法为检查记录仪与检测器，重作校正曲线。
为什么HPLC柱柱压过高柱压过高是HPLC柱用户最常碰到的问题。
其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的问题，您可按下面步骤检查问题的起因。
1、拆去保护预柱，看柱压是否还高，否则是保护柱的问题，若柱压仍高，再检查；2、把色谱柱从仪器上取下，看压力是否下降，否则是管路堵塞，需清洗，若压力下降，再检查；3、将柱子的进出口反过来接在仪器上，用10倍柱体积的流动相冲洗柱子，（此时不要连接检测器，以防固体颗粒进入流动池）。
这时，如果柱压仍不下降，再检查；4、更换柱子入口筛板，若柱压下降，说明您的溶剂或样品含有颗粒杂质，正是这些杂质将筛板堵塞引起压力上升。
若柱压还高，请与厂商联系。
一般情况下，在进样器与保护柱之间接一个在线过滤器便可避免柱压过高的问题，SGE提供的Rheodyne 7315型过滤器就是解决这一问题的最佳选择。
液相色谱中峰出现拖尾或出现双峰的原因是什么？1、筛板堵塞或柱失效，解决办法是反向冲洗柱子，替换筛板或更换柱子。
2、存在干扰峰，解决办法为使用较长的柱子，改换流动相或更换选择性好的柱子如何解决HPLC进行分析时保留时间发生漂移或急速变化漂移现象1、温度控制不好，解决方法是采用恒温装置，保持柱温恒定2、流动相发生变化，解决办法是防止流动相发生蒸发、反应等3、柱子未平衡好，需对柱子进行更长时间的平衡快速变化现象1. 流速发生变化，解决办法是重新设定流速，使之保持稳定2、泵中有气泡，可通过排气等操作将气泡赶出。
高效液相色谱柱常见故障
3.塔板数下降
（1）超龄服役
（1）柱再生成换柱
（2）柱被污染
（2）清洗
二、根据色谱图的变化判断仪器故障
表2根据色谱图的变化判断仪器故障或方法失误
故障现象
可能的原因
排除方法
进样后不出峰
（1）检测器选择不当，样品无吸收
（1）正确选择检测器，如样品无紫外吸
收就不应选UV检测器，而应选其它
（1）延长平衡时间
替绰
（2）正相柱中流动相脱水不完全
（Байду номын сангаас）重新脱水
（3）柱温变化
（3）柱恒温
（4）缓冲液容量不够
（4）用较浓的缓冲液
（5）柱内条件变化
（5）稳定进样条件，调节流动相
（6）柱塌陷或形成短路通道
（6）更换色谱柱
出现无规则色谱峰
长期进样滞留在柱中的组分被洗脱
用强极性溶剂冲洗再用流动相平衡
平顶峰
（6）进样技术不佳
（6）提高进样技术
基线不能回零
（1）样品粘度大
（1）适当减小样品浓度，并采用低粘度
流动相溶剂
（2）进样量太大，柱超载
（2）减小进样量
（3）溶解样品的溶剂与流动相溶剂互溶
（3）尽量采用能互溶的溶剂来溶解试样
（4）柱效低，柱内空隙
（4）改用高效柱或重新装柱
（5）进样装置部分堵塞
（5）检修进样器并清洗之
，烘干
（3）色谱柱选择不当，试样与固定相
（3）更换色谱柱
间有作用
（4）进样技术差
（4）提高进样技术
（5）样品在流动中相中溶解度小
（5）选用对试样溶解能力强的溶剂作
为流动相
（6）进样量太大
液相色谱柱使用疑难问题解析
1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以。
反冲后是正者用，还是反着用。
具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等最好都有解释。
答：一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。
反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。
我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。
2、我在做方法开发的时候,用乙腈和水作为流动相,在调整梯度的时候发现,刚开始用60%乙腈, RT为2.5分钟,调到40%乙腈,RT没有变化,30%也没有变化,一直调到20%的时候,RT突然变到了约13分钟,请问这是什么原因"我用的是离子交换柱.答：离子交换柱的保留时间主要由洗脱液的离子强度和pH决定，你现在讲的比较简单，需要把你的方法说的详细一点才能做具体的分析。
譬如分析物是什么情况，其含有极性电离基团和非极性基团是什么性质？离子交换柱是聚合物基质还是硅胶基质？水相是什么缓冲盐？3、对于一根常用的c18柱，拿到一根新柱的时候应该怎样进行活化及维护？为什么要这样做？答：新柱活化，实际上是一个平衡的过程，除了用流动相平衡外，有时候还必须用所测样品对新柱进行平衡，特别是测定分子量比较高的多肽，尤其重要。
因为分子量高的物质分子，扩散速度慢，平衡所需时间也相应较长。
具体平衡方式也很简单，多进几次样品，直到峰面积和保留时间稳定，再进行正式进样测定。
如果要加快平衡时间，把前面用来平衡的进样样品浓度加大，或者不等洗脱完成，连续进样多针。
用待测物对新柱平衡，目的是将硅胶基质填料表面具有非特异性吸附的位点的吸附能力饱和掉。
4、测定多肽，一般采用什么柱子？流动相是乙腈和水，还有微量的TFA。
特别是像类似三肽的短肽，应该怎么选择柱子？答：分子量不高的多肽一般选用常规C18柱就能测定，也有用离子交换柱、水性C18柱和Hilic亲水作用柱的。
色谱柱常见问题讲解
高效液相色谱常见问题与解答1何谓反相柱、正相柱？答：“ 反相” 和“ 正相” 的概念是液相色谱法早期提出的概念，当时键合相色谱柱尚未出现，固定相被涂覆在载体表面，极易流失，为此科学家对流动相使用给出了合理的建议：流动相极性与固定液极性应具有较大差别，以减少固定液流失。
固定相极性弱于流动相时的液相色谱法被称为反相色谱法，固定相极性强于流动相时的液相色谱法被称为正相色谱法。
尽管目前键合相色谱柱已成为主流，但这一概念在色谱方法开发、预测出峰顺序等方面具有重要意义。
由上面的介绍可知具体的色谱方法、色谱柱属于正相还是反相不仅取决于固定相极性，同时还取决于流动相极性。
C18（硅胶键合十八烷基硅烷）、C8（硅胶键合辛基硅烷）、PH（硅胶键合苯基硅烷）等色谱柱，由于固定相极性极低，比目前已知的任何流动相的极性都要低，因而是标准的反相柱；Silica（硅胶）、NH2（硅胶键合氨丙基硅烷）具有较高的极性，主要用于分离带有极性基团的化合物，所用流动相的极性通常低于这些固定相，因而是标准的正相柱。
CN（硅胶键合腈丙基）的极性适中，当流动相极性超过CN 时，它属于反相柱，反之则是正相柱。
2色谱柱规格对分析结果会产生何种影响？答：色谱柱内径决定载样量，载样量与内径的平方成正比；色谱柱长度与塔板数成正比，与柱压成正比；粒径影响涡流扩散相，粒径越小涡流扩散相越小，柱效越高，粒径与柱效近似成反比；粒径越小，压力也越大，压力与粒径的平方成反比。
填料孔径对分析对象的分子量有限制，当孔径为分析物尺寸的 5 倍以上时，分析物才能顺利通过孔隙，孔径处于60~120Å 的色谱柱适用于相对分子量小于10000 的分析物，孔径为300 Å 的色谱柱可以满足分子量处于10000 以上的大分子化合物分析。
3液相色谱分析中如何才能提高分离度？答：下式为分离度计算公式N：柱效（Efficiency）反映色谱柱性能，柱效越高，分离度越好。
液相色谱柱使用疑难问题解析
液相色谱柱使用疑难问题解析内容提纲：一、液相色谱柱的安装、启用和维护中的重点注意事项1、柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配2、溶剂的匹配转换3、新柱使用前的平衡和老化4、pH使用范围5、色谱柱的保存二、柱压问题1、填料破碎和使用后，有填料粉末生成2、颗粒物堵塞引起柱压上升和对策1）预防措施2）故障排除3、化学污染物引起柱压上升和对策1）预防措施2）故障排除三、峰形问题1、峰后拖2、峰前延3、其他峰形问题四、保留时间问题1、保留时间的重现性2、保留时间漂移3、柱与柱之间的重现性4、批与批之间的重现性五、寿命问题六、其他疑难的色谱技术问题一.安装、启用和维护中重点注意事项色谱柱既是液相色谱仪的最核心部件，价格相对昂贵，请牢记它是高档仪器中的高档部件，给它以足够的尊重和关怀。
如避免强烈的碰撞和震动，尽管色谱柱从1米高的实验台掉落到水泥地上不至于100%会损坏，但50%的可能损坏你也承受不起。
另外不要让柱床变干，避免在严寒环境受冻等。
1. 柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多。
上图表明柱连接的6种不同方式（数字单位是英寸），如果两者类型不匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。
接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。
2. 溶剂的匹配转换色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。
特别是流动相含缓冲盐时，如保存溶剂是纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接入使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，最严重会将新柱永久不可逆地损坏。
正相柱保存溶剂一般为正己烷，如果要转换成HILIC柱模式使用，由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，转换中间需用二氯甲烷或乙酸乙酯过渡。
3. 新柱使用前的平衡和老化厂家出厂检验时一般都已进行过平衡，但色谱柱到最终用户时间不一，用户正式测定前最好对色谱柱再次平衡。
最好的平衡兼老化一起进行的方法是运行几次完整的分析程序（包括进样），直到观察到峰形、保留时间和峰面积稳定为止。
液相色谱柱使用注意事项
液相色谱柱使用注意事项在使用液相色谱柱时，需要注意以下事项以保证柱子的性能和使用寿命。
1.流动相流动相是液相色谱分离的基础，应选择与样品相容、纯度高、稳定性好的流动相。
在使用前，应进行过滤和脱气处理，以避免对柱子造成损害。
2.柱子选择根据不同的样品和分离要求，应选择合适的液相色谱柱。
选择时需要考虑柱子的类型、粒径、孔径、填料等参数。
对于复杂的样品，建议使用具有更强分离能力的反相柱。
3.柱子清洁在使用前，应对液相色谱柱进行清洁，以去除柱子内部的杂质和污染物。
清洁时应使用温和的清洁剂，如甲醇、乙醇等，并避免使用强烈的清洁剂或酸碱溶液。
4.操作温度液相色谱柱应在规定的操作温度下使用。
过高的温度可能导致柱子的性能下降或损坏，而过低的温度则可能导致样品分离效果不佳。
在使用过程中，应密切关注柱温的变化。
5.压力变化压力变化是液相色谱分离的关键参数之一。
在使用过程中，应密切关注压力的变化情况。
若出现压力波动或异常升高，应立即采取措施解决问题，以免对柱子造成损害。
6.流动相流速流动相流速是影响液相色谱分离效果的重要因素之一。
应根据分离要求和样品性质选择合适的流速。
过快的流速可能导致柱子的性能下降或损坏，而过慢的流速则可能导致样品分离效果不佳。
7.样品处理在进样前，应对样品进行处理，以去除杂质和干扰物质。
处理方法包括样品萃取、净化、浓缩等。
处理时应避免对样品造成污染或损失。
8.柱子储存在使用完毕后，应对液相色谱柱进行妥善的储存。
储存时应避免阳光直射、高温、潮湿等不利环境条件。
同时，应定期对柱子进行检查和维护，以保证其性能和使用寿命。
(完整版)色谱柱的使用及维护
前言液相色谱的分离原理是,在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用,由于作用力的大小、强弱不同,各种组分在固定相中滞留的时间也不同,因而先后从以固定相中流出而得到分离。
因此液相色谱分离的关键之一是色谱柱中的固定相。
柱效的好坏直接影响目标化合物的分析和检测。
但在液相色谱运行过程中,色谱柱极易发生问题,因此掌握正确使用和维护色谱柱的知识非常必要。
色谱柱使用过程中容易发生柱堵塞引起系统压力过高;柱效低引起峰拖尾、变宽;柱污染、损坏导致鬼峰等问题。
引起这些问题的内在原因有:(1) 硅羟基的死吸附。
色谱柱的基材硅胶粒子表面存在硅胶羟基。
任何物质在色谱柱中都存在双分配效应,即在流动相与固定相之间进行分配,又在流动相与硅羟基之间进行分配。
被分析物质被硅羟基吸附称为非特异性吸附,或称死吸附。
当硅羟基对被分析物质的吸附趋近于饱和状态时,色谱柱柱效下降,峰形出现拖尾、变宽。
(2) 重金属。
色谱柱的基材硅胶粒子无论纯度多高,无论怎样处理,都会有不少于5 ×10- 6 的重金属以金属氧化物的形式残存在硅胶粒子的表面,这些金属氧化物很容易与其它化合物形成螯合物,使其被氧化,产生不对称峰或拖尾峰。
例如儿茶素和大多数中药,因含有多酚结构,极易被金属氧化物氧化,影响其分离效果。
(3) 碳流失。
固定相经长期使用,会有部分碳链被流动相洗脱下来,随流动相一起流出色谱柱外, 造成碳流失。
(4) 缓冲液中盐的析出。
在做色谱分析时,有时流动相中会含有缓冲盐溶液。
分析结束后,如果没有先用含一定配比的水相流动相冲洗,而直接用纯有机相冲洗,瞬间柱子中的微环境是高有机相、低水相。
这时流动相中的缓冲盐溶液极易析出盐,将柱子堵塞,使柱压升高,柱效下降。
(5) 色谱柱变干。
如果对色谱柱保存不当,使色谱柱中的保存液全部挥发,柱子内部变干,造成色谱柱的损伤,影响分离效果。
2 色谱柱的使用新柱使用前应先检查产品包装、外观是否完好。
新液相色谱柱出峰异常
新液相色谱柱出峰异常新液相色谱柱出峰异常可能由多种原因导致。
以下是一些可能的原因和相应的解决方法：1.柱温变化：柱子温度的稳定对色谱分离效果至关重要。
如果柱温波动较大，会影响流动相的流速和组分的保留时间，导致峰形异常。
解决方法是使用恒温柱，并确保实验室环境的温度稳定。
2.等度与梯度间未能充分平衡：在改变流动相组成或比例时，如果没有充分平衡色谱柱，会导致峰形变化。
解决方法是至少用10倍柱体积的流动相平衡柱，以使色谱柱达到稳定状态。
3.缓冲液容量不够：如果缓冲液容量不足，会导致组分在色谱柱上的保留时间发生变化，进而影响峰形。
解决方法是使用足够容量的缓冲液，并确保其pH值在合适的范围内。
4.柱污染：新柱子在使用过程中可能会受到污染，导致峰形异常。
解决方法是每天冲洗柱子，以保持其清洁度，并避免使用含有杂质或沉淀物的流动相。
5.柱内条件变化：如果柱内填料的性质发生改变，如表面的化学基团脱落或损坏，会导致色谱分离效果下降，进而影响峰形。
解决方法是稳定进样条件，调节流动相，以避免对色谱柱造成损坏。
6.流动相组成变化：流动相的组成或比例发生变化，会导致组分的保留时间和峰形发生变化。
解决方法是防止流动相蒸发或沉淀，并确保其组成和比例的准确性。
7.温度增加：如果实验室温度升高，会导致流动相的粘度减小，进而影响色谱分离效果和峰形。
解决方法是使用恒温设备控制实验室温度，并确保其稳定。
8.流速增加：如果流速过高，会导致组分在色谱柱上的停留时间减少，峰形变窄。
解决方法是检查泵的流速设置，并重新设定合适的流速。
9.样品超载：如果样品浓度过高，超过了色谱柱的承受能力，会导致峰形异常。
解决方法是降低样品量或稀释样品，以使其适合色谱分析。
10.键合相流失：如果流动相的pH值过高或过低，会导致键合相的流失，进而影响峰形。
解决方法是检查流动相的pH值，并保持在适当的范围内（通常为3-7.5）。
如果以上方法都不能解决问题，可能是新液相色谱柱本身存在质量问题。
液相色谱柱的常见问题与解决方法及解决方案
液相色谱柱的常见问题与解决方法及解决方案液相色谱柱在使用过程中常见的问题有柱压上升、峰拖尾变宽、分别效果下降等。
一般情况下这些都是色谱柱使用时间过长引起的正常现象，只需对色谱柱进行清洗与再生便可解决。
但是假如柱压蓦地上升，则需要检查色谱柱是否显现问题。
可能的原因有以下几点：1.柱头的过滤筛板被污染解决方法：卸下柱头螺丝，将过滤筛板取下，放置在30%左右的稀硝酸中，然后用超声波清洗10分钟。
再将过滤筛板放入超纯水，超声清洗约10分钟，之后将过滤筛板重新装回色谱柱。
2.填料被污染解决方法：①卸下柱头螺丝，将前端被污染的填料用专用小匙挖出，然后重新填入相同的填料。
②选择合适的流动相，按色谱柱使用的方向冲洗，冲洗量须大于色谱柱体积的20倍，将污染物溶解并冲杰出谱柱，然后，依照色谱柱标明的箭头方向使用。
3.缓冲盐溶液碰到纯有机相析出盐结晶，堵塞色谱柱解决方法：先用冲洗色谱柱，将盐晶体溶解并冲杰出谱柱，然后换高浓度甲醇水溶液或其他有机溶剂作为流动相。
4.流动相的PH值偏差过大，造成固定相溶解或结构被破坏解决方法：此时很难将色谱柱修复通常需要直接更换色谱柱。
高效液相色谱仪常见问题及解决方法高效液相色谱仪作为一种高精密仪器，假如在使用过程中不依照正确操作的话，就简单导致一些问题。
其中常见的有柱压问题、漂移问题、峰型异常问题。
一、液相色谱仪压力过低压力过低的现象一般是由于系统泄漏，处理方法：找寻各个接口处，特别是色谱柱两端的接口，把泄漏的地方旋紧即可。
当然还有一个原因就是泵里进了空气，但此时表现的往往是压力不稳，忽高忽低，更严重一点会导致泵无法吸上液体。
处理方法：打开Purge阀，用3～5ml/min的流速冲洗，假如不行，则要用专用针筒在排空阀处借住外力将气泡吸出。
二、液相色谱仪柱压问题柱压问题是使用高效液相色谱过程中需要紧密注意的地方，柱压的稳定与色谱图峰形的好坏、柱效、分别效果及保留时间等紧密相关。
所谓柱压稳定并不是指压力值稳定于一个恒定值而是指压力波动范围在50PSI之间（在使用梯度洗脱时，柱压平稳缓慢的变化是允许的）。
常见色谱柱问题解析
1、网上对柱子是否可以反冲一直有争论，那什么样的柱子可以反冲，什么不可以。
反冲后是正者用，还是反着用。
具体到各型号柱子不仅是ODS柱，其他如正向柱、氨基柱、离子交换柱等最好都有解释。
答：一般的正相反相柱应该都能反冲，只有两端筛板孔径不对称的柱子不能反冲，不过目前这样的柱子已经比较少见了。
反冲是为了把柱头的污染物冲洗掉，反冲后还是正着用比较好，以免柱子的两头都被污染。
我们一直提倡的是：正向使用，反向冲洗。
2、色谱柱的技术都有哪些？比如封尾等，这些技术在应用时都体现在哪里？答：色谱柱技术包括填料技术和装柱技术，填料技术自不待言，填料的好坏对色谱柱分离性能和选择性有决定性影响。
装柱技术也没有想象中的这么简单，不同固定相、不同粒径、不同柱管内径和长度，装柱工艺都有所不同，要装出紧密、稳定、均一的柱床，更多是一门艺术，需要经验积累。
国内和国外想比，我认为色谱柱的差距在于：国内公司以前都不会自己开发填料，一般买国外现成填料装柱，买到的填料质量控制权不在自己手里。
另外因为装柱历史短，经验积累少，装柱工艺也没有完全达到国外水平。
另外，对色谱柱性能很关键的基础材料—裸硅胶，国产的还不过关，在纯度、粒径和孔径的均一性方面和国外产品相比，差距很大。
3、柱子在什么情况下可以清洗一下筛板呢？原来也讨论过这个问题，我也拆下来清洗过，但我看到柱前段的污染更甚，于是就用刀片刮了刮，然后把清洗好的筛板安装上去。
问题解决了，但使用寿命会不会减少呢？答：柱头污染了，就取出污染的，再装一些填料。
因为加入你刮了些填料，那么微观的塔板数就少了。
假入你刮得不多，仅表面，可能就是一些脏物，所以，问题解决。
但是今后还会有同样问题，再挂，那么不小心刮，影响柱效。
建议还是装一个预柱。
4、色谱柱的填装一般有3种情况：1.国外生产填料并填装完成成品卖到国内；2.国外生产填料，国内填装销售；3.国内生产填料，国内填装销售。
5、预柱或保护柱用还是不用的问题！我就想问：安装保护柱后会影响样品分析吗？我们做的大多是头孢类的抗生素。
液相色谱柱的十大常见故障及操作规程
液相色谱柱的十大常见故障及操作规程液相色谱柱是液相色谱的核心部件，它紧要起到了分别作用。
色谱柱同样也是一个消耗品，在流动相冲刷的过程和样品在分析的过程，填料损失和污染使得色谱柱的性能渐渐下降。
所以，对于液相色谱尤其是常用的C18柱，需要在确定时间内对其性能做一个评估，同样，新的色谱柱也要对色谱柱做一个有效的体检。
液相色谱柱的十大常见故障：1、若操作过程发觉压力很小，则可能管件连接有漏，注意检查。
当显现错误警告（各组件指示灯均为红色），一般为漏液，其中一个感应器中已有溶剂，漏液故障排出后，擦干，点击On line操作界面中的Instrument/System Off，然后再点击操作界面中的Instrument/System On即可。
2、连接柱子与管线时，应注意拧紧螺丝的力度，过度用力可导致连接螺丝断裂。
柱接头处易发生漏液，可能情况为接头Fittings 中心的管子未和接口处贴紧。
不同厂家的管线及色谱柱头结构有差异，不要混用，必要时可使用PEEK管及活动接头；3、操作过程若发觉压力特别高，则可能管路已堵，应先卸下色谱柱，然后用分段排出法检查，确定何处堵塞后解决。
若是保护柱或色谱柱堵塞，可用小流量流动相或以小流量异丙醇冲洗，还可接受小流量反冲的方法（新柱不提倡），若还是无法通畅，则需换柱；4、运行过程中自动停泵，可能为压力超过上限或流动相用完；5、样品瓶中样品较少，自动进样器进样针无法到达液面，可接受调低进样针进样高度的方法，注意设置时不要使进样针碰到瓶底，微量样品分析应使用微量样品瓶；6、自动进样器进样针未与样品瓶瓶口对按时，需重新定位。
7、泵压不稳或流量不准，可能为柱塞杆密封圈问题或seal wash垫圈问题，需更换；8、基线产生不规定噪声，可能起因于系统不稳定或没达到化学平衡（使其平衡，若用离子对试剂，在使用使需要充分的时间和溶剂体积，色谱柱才能达到充分的平衡），流动相被污染（更换流动相，清洗储液器、过滤器，冲洗并重新平衡系统），色谱柱被污染（为证明可能的原因更换系统的色谱柱或使用一根同类的被证明性能好的色谱柱），检测器不稳定；9、短期有规定的噪声，可能起因于泵压不稳或泵脉冲，调整溶剂不适当（如两种溶剂的互溶性问题），泵入口管路松或堵塞，泵太脏，泵柱塞磨损，检测器不稳定；10、长期有规定噪声，可能起因于室温不稳（未使用柱温箱）或使用柱温箱不当；液相色谱柱的使用和维护在液相色谱操作过程中，我们需要下面的问题，便利维护液相色谱柱。
高效液相色谱仪与色谱柱使用中应注意的事项
高效液相色谱仪与色谱柱使用中应注意的事项答案：色谱柱是高效液相色谱仪的心脏，在高效液相色谱仪的使用中，保持色谱柱的柱效、容量和渗透粉性，延长柱子的使用寿命非常重要。
因此对高效液相色谱仪色谱柱的维护是关键。
高效液相色谱仪色谱柱是消耗品，因此尽可能地仔细使用会延长色谱柱的寿命。
1、色谱柱使用前注意事项色谱柱的储存液无特殊说明均为评价报告所示的流动相。
在使用前一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
如胺基(NH2)氰基(CN)柱均为正相条件下评价，所以如果使用条件为反相条件时，请用一中介流动相(如异丙醇)。
先置换掉柱内的储存液，然后再应用反相条件对于C18固定相采用的是甲醇-水为评价流动相，若要使用含盐浓度较高的流动相，使用前请用超纯水或甲醇含量相对较低的甲醇-水顶替掉原来的评价流动相，否则会对色谱柱造成极大的伤害，将会明显地减少色谱柱使用寿命。
2、色谱的使用方向高效液相色谱仪色谱柱标签上的箭头所示方向是评价时流动相流动的方向，使用过程相流动的方向也按此方向。
3、流动相流动相中所用的各种有机溶剂要尽可能地使用色谱，或至是分析纯试剂配流动相水Z好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45或0.22m的滤膜过滤一次则更好，这一点对含盐的流动相尤为重要。
另外装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
总之，必须保证所使用的流动相和色谱系统是足够的清洁。
4、样品样品也要尽可能的清洁，同样可选用样品过滤器或样品预处理(SPE柱)对样品进行预处理;若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，如无特殊要求，所有的溶剂和样品应严格脱水。
5、PH值以常规硅胶为基质的键合相填料高效液相色谱柱通常的PH值适用范围是2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界(特别是在8.0≤PH≤10.0时)条件下使用高效液相色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于高效液相色谱仪色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并*置换掉原来所使用的流动相。
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理 液相色谱操作规程
液相色谱柱的使用注意事项流动相和样品处理液相色谱操作规程液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是液相色谱柱的使用注意事项：流动相和样品处理 1. 色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特别说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，确定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很简单析出，堵塞色谱柱。
2. 流动相：1）在进行样品检测前，至少使用20倍柱体积流动相使色谱柱充分平衡。
流动相确定要使用色谱级别的溶剂。
如使用水相的缓冲液应当天配制以保持新鲜避开细菌产生。
2）流动相使用前需用微孔滤膜过滤,除去流动相中颗粒对色谱系统和色谱柱的损坏。
缓冲液与其他流动相混合后应重新过滤避开溶解度变化造成产生新的沉淀。
不应使用纯水作为流动相冲洗C18色谱柱，以免柱性能损坏（添加5％的有机溶剂冲洗色谱柱，同时可以达到对缓冲盐清洗的作用。
还可以使色谱柱更简单平衡）。
3）流动相需脱气后使用，可避开因气泡导致的泵和检测器的工作不正常。
假如测试时使用的流动相与色谱柱保存使用的流动相有较大区分，应当使用过度分布的形式进行平衡。
避开由于流动相的蓦地变化造成柱压加添过大或流动相缓冲盐结晶造成对色谱柱和仪器系统的损坏。
正相色谱柱比反相色谱柱需要更长的平衡时间。
4）流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水*好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
假如将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应当定期清洗或更换。
5）以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0—8.0，BDSC18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0—10.0、当必需要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立刻用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
液相色谱柱的使用注意事项及再生
液相色谱柱的使用注意事项及再生1、色谱柱的使用说明：（1）、色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。
在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。
在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
（2）、流动相：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。
如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。
另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。
当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
（3）、样品：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。
在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
2、色谱柱的保存（1）、反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。
注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）、长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。
对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。
储存的温度最好是室温。
3、色谱柱的再生因为色谱柱是消耗品，随着使用时间或进样次数的增加，会出现色谱峰高降低，峰宽加大或出现肩峰的现象，一般来说可能是柱效下降。
液相色谱柱的使用注意事项及再生
液相色谱柱的使用注意事项及再生注意事项：1.柱子的贮存：液相色谱柱在非使用状态下应尽量避免暴露在空气中，空气中的灰尘和湿气会影响柱子的性能和寿命。
因此，柱子应存放在其原始包装中，并防止受潮。
2.近似与探头：在使用之前，必须对柱子和探头进行连接和融合。
在操作中，要确保柱子和探头之间无泄漏，否则会影响分析的准确性。
3.流速控制：流速是液相色谱分析中很关键的一点。
流速过高会导致柱子产生过高的压力，甚至超过其承载能力，从而导致柱子破裂。
因此，在进行液相色谱分析时必须要控制好流速。
4.保持温度稳定：液相色谱柱对温度敏感，温度的变化会影响分离效果。
因此，在液相色谱分析中必须保持柱子的温度稳定。
5.避免样品堵塞：柱子中的微孔会很容易受到样品的堵塞，导致柱子无法正常使用。
因此，必须确保样品中无固体杂质，并且在注射之前先过滤样品，以避免样品堵塞柱子。
柱子再生方法：1.水洗法：将柱子安装在逆相液相色谱系统中，用纯水进行洗脱，如果必要可以加入少量的乙酸、甲酸或其他有机溶剂进行洗脱。
该方法适用于非极性化合物的柱子。
2.有机溶剂洗脱法：将柱子连同柱底栓安装在逆相液相色谱系统中，用纯有机溶剂或者含有有机溶剂的溶液进行洗脱。
该方法适用于极性化合物的柱子。
3.极性液洗法：将柱子置于极性液相溶剂中，如醇类、酸类或含有酸性成分的有机溶剂中进行洗脱。
该方法适用于阴离子柱等需要去除离子物质的柱子。
4.特殊洗脱法：对于一些具有独特功能的柱子，如固体相萃取柱、色譜柱等，可以根据其特殊性质采用相应的洗脱方法。
除了以上的再生方法，还有一些更加复杂的再生方法，如使用酸碱溶液、有机溶剂进行再生等。
用户在使用液相色谱柱时，应根据柱子的具体情况及实际分析样品的特性选择合适的再生方法。
总之，液相色谱柱的正确使用和再生对于高效可靠地进行液相色谱分析具有重要影响。
使用者应严格按照操作规范进行操作，并根据不同柱子的特性进行合适的柱子再生方法，以延长柱子的使用寿命和保证分析的准确性。
液相色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法
液相色谱柱在使用过程中易出现的问题和解决办法
色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢増加，属于正常现象。
但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），可能的原因有如下几点：
(1)、色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；
(2)、色谱柱头的填料被样品污染；
(3)、色谱柱内缓冲湳中的盐遇到高浓虔的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶祈出；
(4)s流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。
解决办法如下：
(1)、如确定是色谱柱头的过滤筛扳被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10%的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。
(2)、如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头蜾丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
(3)、如确定定是盐结晶，用10%的甲自f/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
(4)、如果因PH值使用不当，很难恢复。
常用液相色谱柱使用与保养
1.3.5.4其他无机物填料柱
如氧化铝、石墨化碳、氧化锆、硅藻土等，主要作制备色谱用。
1.4液相色谱柱制备工艺简述
不同品牌色谱柱制备工艺各异，但都可归纳为如下流程 （以硅胶柱为例）：
硅烷化硅胶制备（四乙氧基硅烷脱乙基与聚合）→Si-OH 基暴露（ 脱乙基， 置换成H）→海绵状多孔硅胶构造（物理匀质过程）→官能团键合（各种官
属中等级性柱，普适性 好；保留适中，可用于 正相与反相。
适用于在ODS上无保留或分离 时间太长的组分的分离，以及样 CN（氰基） 品中同时含有亲水与疏水性化合 物而在ODS上色谱优化困难的 场合，也可用于氨基酸分析。
NH2（氨基）
主要用于分析单糖类、 烃类化合物
保留性弱；极性大，不 稳定，酸性条件下易水 解；亦可用于反相。
1.3.5.3聚合物基质柱（eg.聚苯乙烯柱）
单独的聚苯乙烯类填料柱主要用于分离蛋白质类等大分子化合物，多 用于GPC、GFC、MEC等；若与离子交换基团共键则形成离子交换柱，用 于分离酸性化合物（磺酸基团）、碱性合物（季铵基团）及药物代谢产物等。 特点：在1＜PH＜13的流动相中稳定；分离峰形较好，柱子寿命较长。
氢键作用、偶极作用和静电 基于NP原理 HILIC 作用等多种次级效应及相似 （亲水性色谱柱）相溶
氨基酸分析柱相似相溶 Nhomakorabea基于RP原理
2、常用液相色谱柱使用方法与维护保养
(1)认识色谱柱规范化使用与保养的必要性：延长色谱柱使用寿命， 降低色谱柱使用成本，逐步提高分析人员色谱柱使用与维护水平，确保 试验数据的准确性、可靠性和重现性，提升个人在色谱领域的竞争力。 (2)熟悉几个概念：
液相色谱柱：指用于液相色谱分离的柱形固定相，由柱管、压帽/卡套、 筛板（滤片）、填料、接头等组合而成，可用于液相色谱分析与制备。 色谱柱再生：指色谱柱在非正常情况下，针对异常现象及原因采取的一 系列修复补救措施，以提高色谱柱柱效和延长其使用寿命的处理过程。 运载溶剂（Shipping Solvent）：指色谱柱生产厂商在柱出厂测试合格 后饱和于色谱柱内的合适溶剂，以利于运输保存，多与保存溶剂相同。 保存条件（Storage Conditions）：指色谱柱生产厂商根据不同柱类型 及其色谱柱填料的制备、键合、装填、高压定型、净化干燥等工艺条件 的不同要求而特别制定的色谱柱保存前净化饱和的处理程序与储存条件， 包括净化程序、净化溶剂和保存溶剂、保存温度。 保存溶剂（Storage Solvent）：用于保存色谱柱并指定了溶剂组成与 比例的溶液。
常用液相色谱柱使用与维护保养
常用液相色谱柱使用与维护保养液相色谱柱是分离和分析中常用的仪器配件之一，它的使用和维护保养对于实验结果的准确性和可靠性有着至关重要的作用。
本文将介绍常用液相色谱柱的使用和维护保养方法。
一、液相色谱柱的使用方法1.准备工作：在使用前，需要对液相色谱柱进行准备工作。
首先，检查柱的外观是否完好无损，如果发现任何损坏或污染，应立即更换。
其次，检查柱装置是否牢固，连接是否紧密。
最后，将固定相和移动相装入柱中，确保固定相充分均匀地填充在柱内。
2.柱的条件调节：根据实验需要，调节液相色谱柱的柱温、流速和柱压等参数。
在调节柱温时，应注意避免温度过高或过低对柱的损害。
调节流速时，应根据样品性质和分离效果选择合适的流速。
控制柱压时，要确保柱内压力稳定在可接受范围内，避免超过柱的承压能力。
3.样品进样：将待测样品注入进样口或进样器中，注意避免空气进入柱，避免对柱的污染。
可以选择外部进样或直接进样的方法，具体方法根据实验要求和样品性质进行选择。
4.运行柱：在启动液相色谱仪前，先将柱进行预冲洗。
预洗液可以选择与移动相相同的溶剂。
启动液相色谱仪后，根据实验要求设定好运行条件，开始进行实验。
在实验过程中，要及时观察色谱图的变化，根据实验需要调节柱温、流速等参数。
5.柱的保存：在柱使用完毕后，将固定相充分冲洗干净，保证柱内固定相的干燥和保存。
然后，将柱装入保护柱架中，避免碰撞和损坏。
柱的保管环境要保持清洁、干燥、避光和稳定的温度。
二、液相色谱柱的维护保养方法1.柱的清洗：在使用液相色谱柱之前，需要先清洗柱以去除可能存在的污染物。
清洗方法包括预洗和后洗。
预洗可以选择与移动相相同的溶剂，将溶剂通过柱时，将固定相表面的杂质冲洗掉。
后洗可以选择与前一个样品不同的溶剂，将固定相和样品残留物进行清洗。
2.避免柱的干燥：柱在使用过程中，应尽量避免柱的干燥，因为柱的干燥会对固定相造成损害。
在柱停用时，应及时用溶剂进行冲洗并封存起来，以保持柱内的湿润状态。
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液相色谱柱使用问题解析液相色谱柱使用疑难问题解析就液相色谱柱的安装，使用和维护知识，以及各种柱压、峰形和色谱柱寿命等问题前来提问，也欢迎液相色谱方面的高手前来交流切磋。
内容提纲：一、液相色谱柱的安装、启用和维护中的重点注意事项1、柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配2、溶剂的匹配转换3、新柱使用前的平衡和老化4、pH使用范围5、色谱柱的保存二、柱压问题1、填料破碎和使用后，有填料粉末生成2、颗粒物堵塞引起柱压上升和对策1）预防措施2）故障排除3、化学污染物引起柱压上升和对策1）预防措施2）故障排除三、峰形问题1、峰后拖2、峰前延3、其他峰形问题四、保留时间问题1、保留时间的重现性2、保留时间漂移3、柱与柱之间的重现性4、批与批之间的重现性五、寿命问题六、其他疑难的色谱技术问题一.安装、启用和维护中重点注意事项色谱柱既是液相色谱仪的最核心部件，价格相对昂贵，请牢记它是高档仪器中的高档部件，给它以足够的尊重和关怀。
如避免强烈的碰撞和震动，尽管色谱柱从1米高的实验台掉落到水泥地上不至于100%会损坏，但50%的可能损坏你也承受不起。
另外不要让柱床变干，避免在严寒环境受冻等。
1. 柱头类型和不锈钢毛细管接头的匹配色谱柱是消耗品，不是仪器原配的情况很多。
上图表明柱连接的6种不同方式（数字单位是英寸），如果两者类型不匹配将会产生漏液或者死体积过大的现象。
接头比柱头深度长，不易拧紧而漏液；接头比柱头深度短，柱头内留有空隙而产生死体积，使谱带展宽和峰拖尾。
2. 溶剂的匹配转换色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。
特别是流动相含缓冲盐时，如保存溶剂是纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接入使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，最严重会将新柱永久不可逆地损坏。
正相柱保存溶剂一般为正己烷，如果要转换成HILIC柱模式使用，由于正己烷和甲醇乙腈的互溶性不好，转换中间需用二氯甲烷或乙酸乙酯过渡。
3. 新柱使用前的平衡和老化厂家出厂检验时一般都已进行过平衡，但色谱柱到最终用户时间不一，用户正式测定前最好对色谱柱再次平衡。
最好的平衡兼老化一起进行的方法是运行几次完整的分析程序（包括进样），直到观察到峰形、保留时间和峰面积稳定为止。
所谓“老化”是借用了气相的术语，目的是达到分析物在色谱柱以及整个液相系统流路中的吸附饱和。
对某些特定的待测物，如分子量大于1000的，因扩散速度慢，老化时间相应要长，可采取大浓度进样或在同一个洗脱周期内连续进样多针的方式加快老化。
4. pH使用范围一般认为硅胶基质柱子的pH使用范围是2-8，这是很粗略的。
硅胶类型、使用温度、硅胶表面所键合的固定相类型以及缓冲盐的不同，对此均有影响。
硅胶比孔容小、键合密度大的填料pH耐受范围要大一些，如月旭公司的Ultimate XB-C18色谱柱，选用的是高品质硅胶，加上高密度键合和双封尾，使pH耐受范围最大提高到10。
磷酸盐缓冲盐渗透力强，有加快硅胶溶解的副作用，它的存在会降低pH使用范围。
有机杂化硅胶以及硅胶表面涂覆杂化层的硅胶填料，有机质的存在使pH使用范围能到12以上，月旭公司的Xtimate系列产品即属此类。
5. 色谱柱保存短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流动相（不含缓冲盐）保存为佳，以尽量减少下次使用的平衡时间。
一般只建议在长期保存反相柱的时候用纯甲醇或乙腈，一方面纯有机相保存有最大限度减少键合相水解的作用，但纯甲醇（乙腈）又会将已水解而暂时吸附在柱内的键合相洗脱出去，使固定相流失进程加快，寿命缩短。
纯有机相保存还有易挥发使柱床变干的缺点，使用80%左右有机相保存也属好的选择，且足以避免长菌。
强烈建议在柱身上贴标签标明保存溶剂。
CN基柱在有机极性溶剂中柱床不稳定（会导致柱床结构坍塌），适合在水相中低温保存。
低温保存要确保不发生固定相冻结而损坏柱床。
离子交换柱和水性SEC柱等适合保存在水溶液中的色谱柱，可加0.0 5%叠氮化钠溶液防止长菌。
正相柱，无论是短期还是长期，都推荐保存在所用流动相中。
上面是基本色谱分离方程式，分离度R和柱效（N）、选择因子（?）以及容量因子k'相关，和柱压无关。
但柱压（P）仍不失为HPLC方法中的最重要参数之一，因为柱压反映了色谱柱的内部状况。
现今能承受400 bar压力的HPLC泵很常见，色谱柱如在远低于上限的压力下正常运行，不需要我们重点关注；当柱压升高接近上限或者柱压有异常升高，往往意味着色谱柱出状况了，需及时进行维护和补救，严重时色谱柱就已报废了。
本节将详细考察柱压问题并提出可行的解决方案。
柱压方程对填充色谱柱，柱压与黏度(η)、柱长(L)和流速(F)成正比，与填料粒径（d p）以及柱管半径（r）的平方成反比。
K0是比渗透性系数，对填充床，其值约为0.001。
通过此公式可近似计算出给定色谱条件下的理论柱压。
只有当新柱实际测得的柱压和理论柱压相差很大，才能说柱压存在问题。
黏度(η)取决于流动相溶剂的选择，为降低柱压，反相色谱中倾向于选择低黏度的乙腈，而不是高黏度的异丙醇。
当然选择时还需考虑溶剂强度、极性、分析物的溶解度以及和分析物兼容性等。
柱长（L）增加可以提高分离度（R），流速（F）提高能加快分离，但都会导致柱压上升，选择确定这些运行参数时，需综合平衡和折中。
填料粒径对柱压影响极大，d p降低一倍，柱压将增加4倍。
UHPLC中采用的sub-2 μm填料，柱压超过普通HPLC泵的400Bar上限很多。
提高柱温因可降低黏度η，相应降低柱压。
在梯度洗脱时，黏度随流动相组成的变化而改变，柱压也会处在不断变化中。
对水/甲醇流动相体系，在55：45时，黏度和柱压有个极大值。
内径的影响同样很大，根据线流速相同柱压相同的原则，4.6mm内径的色谱柱流速为1ml/min，约相当于在2.1mm内径色谱柱上的0.2ml/min流速，在10mm半制备色谱柱上的5ml/min，计算公式为v＝1.0m l/min x（内径r/4.6）2。
所以在换不同内径色谱柱时，请及时调整流速，以免因高柱压损伤色谱系统。
柱压下降是仪器系统的连接有泄漏，柱压不稳定一般认为是流路中有气泡或空穴，和色谱柱相关的柱压问题是柱压上升。
色谱柱结构:和柱压相关最大的是进口端筛板（inlet frit）以及其后面1-2cm长度的柱头填料。
筛板上有比填料粒径小的小孔，筛板上的小孔或柱头填料的间隙被部分堵塞，是柱压上升的主要原因。
有以下几类情况：1. 填料破碎和使用后有填料粉末生成填料破碎一般在装柱过程中发生，装柱压力过大或所选硅胶机械强度过低所至，设定柱压出厂标准可解决；流动相中高pH值缓冲盐使硅胶溶解并重新形成填料粉末，堵塞出口端筛板，这种情况下反冲不起作用，只有更换后筛板，不过打开承压的后筛板，对柱床会有不好影响。
2. 颗粒物堵塞引起柱压上升和对策可能堵塞进口端筛板（前筛板）和柱头填料间隙的颗粒物来源有：样品（制样时灰尘和滤纸等带入）、进样阀密封圈磨损、流动相（溶剂本身含有和配制过程进入）、液相仪器中泵阀密封圈的磨损、缓冲盐析出（一般在梯度运行和进样时盐的溶剂环境改变导致）。
水和缓冲盐流动相内生长的细菌，也是颗粒物来源的一种，可堵塞筛板和填料间隙。
应避免将这类流动相在室温下久放，可放入冰箱存放。
1) 预防措施样品（甚至标准品）和流动相过滤，既预防了筛板、柱头和毛细管堵塞，又能减少进样阀、活塞杆和截止阀等仪器关键部件的磨损。
普通用0.45um孔径滤膜过滤样品和流动相，对使用2um以下填料的超高压柱的，可用0.20um滤膜。
滤膜材质有再生纤维素、聚四氟乙烯、尼龙、硝酸纤维和醋酸纤维等，须根据和样品溶剂及分析物的适应性慎重选择。
使用保护柱或在线过滤器，具体安装位置见下图：在线过滤器内装有可更换的滤片，滤片孔径一般有2um和0.5um两种。
安装位置有两个可选择，在进样器和色谱柱之间时，对样品和流动相中的颗粒物都有效；在泵和进样器之间，则只对流动相有过滤作用。
保护柱是缩小版的色谱柱，内含带填料的可更换的柱芯，安装在进样阀和色谱柱之间，用于防止色谱柱的化学污染为主，也有过滤颗粒物的作用。
2) 故障排除反冲色谱柱：不连接检测器，直接将堵在前筛板上的颗粒物冲出排到废液瓶中。
开始时反冲压力可低于正常使用压力，待颗粒物有冲出后，逐步提高冲洗压力。
有时颗粒物已非常牢固嵌入到筛板内部，反冲不一定凑效，早反冲、勤反冲相对效果更好。
有的厂商为避免堵塞，使用了较大孔径（2-5um）的前筛板，这种情况反冲会将填料冲出。
换筛板：一般不建议这样做，因为换筛板会带走粘在筛板上的部分填料，使柱床的均一性受影响，导致柱效下降。
不过如果反冲不能解决问题，也只能不得已而为之，要不然就要把色谱柱报废了。
如果系统中不接色谱柱，柱压仍然高，说明泵出口到色谱柱之间的其它部位，包括进样器、在线过滤器和保护柱等有堵塞，可逐一排查。
为了减少死体积，毛细管都做得尽可能的细，也可能被堵。
3. 化学污染物引起柱压上升和对策来源同样是样品、流动相和系统，不过来源于样品的污染最普遍，特别是对复杂基体样品未经前处理或前处理不够的时候。
化学污染物主要有：分子量很大的化合物、盐类、脂质、蜡类、油脂、腐殖酸、蛋白质等其它生物来源的物质。
像盐类这样的保留能力极小的污染物会在死体积处很快从柱中洗脱出去，检测器一般对此类物质响应不大，有时表现为干扰峰、基线波动、斑点甚至负峰。
保留能力中等的污染物，会被慢慢洗出色谱柱，表现为宽峰、基线馒头形波动和基线缓慢漂移。
对强保留的污染物，一般流动相强度不足以将其从柱中洗出，会逐步在柱头累积。
有时，累积在柱头的污染物可作为新固定相对分析物起作用，引起保留时间改变、峰拖尾和峰分叉等。
污染物在柱头累积到一定程度，如果不采取措施，会堵塞填料间隙，引起柱压上升。
最好的办法是选用合适的溶剂冲洗溶解这些物质，同时又不对填料本身有损害。
如聚合物柱中累积的蛋白类污染物可用pH13-14的强碱溶液洗掉，但这种方法不适合硅胶基质色谱柱。
1）预防措施：a．制样时采用SPE固相萃取等方法，预先将色谱柱杀手类的污染物质清除掉；b．连接保护柱。
保护柱是分析柱的延伸，在填料类型和粒径上应于分析柱一致，才能最大限度起保护作用，又不影响色谱性能。
一个设计和装填良好的保护柱，还可增加分析柱的分离效率。
如果因某种原因需在保护柱中用不同的填料，也应选择比其所保护的分析柱保留能力弱的固定相，这时的保护柱完全用于截住强保留物质，类似于SPE小柱的功效。
当保护柱柱芯保护功能用尽时，也不能说不可再清洗后复用，但价格低不值得去花这个时间。
c．经常对分析柱进行冲洗维护：2)故障排除：已经累积很多污染物，用甲醇或乙腈简单冲洗不奏效，推荐使用下面方法清洗反相柱100％甲醇---100％乙晴---75％乙晴/25％异丙醇---100％异丙醇---100％二氯甲烷---100％正己烷用每种溶剂冲洗至少10个柱体积，对于250mm×4.6mm的分析柱，合适的冲洗流速是1～2ml/min。