药品无菌检查

药品无菌检查法
• 供试品的无菌检查
检验数量：一次试验所用供试品最小包装容器的数量 出厂产品按表1，上市产品监督检验按表2 最少检验数量不包括阳性对照用的。
检验量：按表3，采用薄膜过滤法时，只要供试品特性允 许，应将所有容器内的全部内容物过滤。
药品无菌检查法
• 1、薄膜过滤法 • 封闭式薄膜过滤器 • 只要供试品性状允许，应采用薄膜过滤 • 抗生素样品选用低吸附的滤膜 • 水溶性供试品过滤前先将少量冲洗液过滤
以润湿滤膜
• 油类供试品的滤膜和滤器在使用前应充分 干燥
• 冲洗量一次一般为100ml，总冲洗量不得超 过1000ml，以免膜上的微生物受损。总冲
药品无菌检查法
• 水溶性的液体-----直接过滤或混合至含不少 于100ml适宜稀释液的无菌容器中，混匀， 立即过滤，如供试品有抑菌作用，须冲洗 一般不少于三次。
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• 混悬液等非澄清水溶液供试品 取规定量， 等量接种至各管培养基中
• 固体供试品 取规定量，直接等量接种至各 管培养基中，或加入适宜的溶剂溶解，或 按标签说明复溶后，取规定量等量接种至 各管培养基中。
• 非水溶性供试品 加入适量的乳化剂及稀释 剂使其乳化再接种，或直接接种至含乳化 剂的培养基中
• 水溶性的固体----溶取规定量，加适宜的稀 释液溶解或按标签复溶。
• 非水溶性供试品-----直接过滤，或乳化后 （加吐温80等）立即过滤，用含0.1-1%吐温 80的冲洗液冲洗，培养基中可加入吐温80
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2、直接接种法 • 培养基的用量符合接种的供试品体积不得
大于培养基体积的10%，同时，流乙醇酸盐 每管装量不少于15ml，TSB不少于10ml • 适用于无法用薄膜过滤法进行无菌检查的。
2、直接接种
药品无菌检查法
• 薄膜过滤法 • 试验组：取每种培养基规定接种的供试品
总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一 次冲洗液中加入小于100cfu的试验菌，过滤。 将培养基加至滤筒内。
• 对照组：另取一装有同体积培养基的容器， 加入等量试验菌，培养时间不得超过5天。
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• 直接接种法
物理变化？化学变化？生物学变化？ • 培养14天，逐日观察并记录，注意和阳性、
阴性对比，培养14天后依然无法从外观上 判断有无微生物生长，可取该培养液转种 至同种新鲜培养基，培养3天，观察是否再 次出现浑浊。
“克林霉素磷酸酯葡萄糖注射液”引起了 11人死亡，93人感染，企业倒闭，总经理 自杀。未按批准的工艺参数灭菌，降低灭 菌温度、缩短灭菌时间，增加灭菌柜装载 量，影响了灭菌效果，经中检所检验，发 现无菌不合格。 • 2012年10月，美国新英格兰合成制药中心
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• 特点
• 无菌检验结论为一次性，药典规定为不 得复试，为什么不得复试，菌落的分布 具有不均匀性，检验过程是破坏性的， 不具有重复性。---------------对操作过程的 要求非常高。
• 敷料供试品 以无菌操作拆开每个包装，于
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阳性对照 无抑菌作用及抗革兰氏阳性菌为主的----金
葡 抗革兰氏阴性菌为主的------大肠 抗厌氧菌的------生孢梭 抗真菌的-----白念 阳性对照72小时内生长良好
阴性对照
相应的溶剂、稀释液、冲洗液同法操
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• 培养及观察 • 液体培养基浑浊
药品无菌检查
主要内容
1、药品无菌检查法基础 2、2015年版药典无菌检查法的变动 3、洁净实验室微生物的监测和控制 4、菌种的管理 5、二级生物安全实验室
药品无菌检查法
• 定义及特点 • 培养基、冲洗液 • 方法学验证 • 供试品的无菌检查 • 无菌检查的要点
药品无菌检查法
• 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药 品、生物制品、医疗器具、原料、辅料、 及其他品种是否无菌的一种方法。
流乙醇酸盐流体：供试品接种前，培养基氧化层不 超过深度的1/5，否则100℃水浴加热至粉红色消 失（不超过20分钟），只能加热一次，培养结束 后氧化层不超过1/2
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药品无菌检查法
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• 培养基适用性检查
• 无菌性—每批次培养基取不少于5瓶（支），培养14天， 应无菌生长。
• 灵敏度 6种菌（<100cfu） 金、铜绿、生孢---------流乙醇酸盐流体 7支，12ml/支，每种菌接种2支，阴性一支， 枯草、白念、黑曲----------胰酪大豆胨液体 7支，每种菌接 种2支，9ml/ 支，一支阴性 流乙醇酸盐流体培养3天，胰酪大豆胨液体 5天， 空白对 照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判断该 培养基的灵敏度符合规定
• 若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了 供试品在该检验条件下未发现微生物污染。 也并不表示所有的产品都是无菌的。
• 反之，当供试品中检出微生物污染，则可 以认为批产品的微生物污染风险相当高。
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• 无菌制剂比非无菌制剂存在更高的风险 • 一系列的药品不良事件 • 2006年的“欣弗事件”---安徽华源生产的
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• 冲洗液 • 0.1%蛋白胨水溶液 • pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 • 可选用其他经验证过的适宜的溶液
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• 方法适用性试验 证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。
若检验程序或产品发生变化可能影响检验 结果时，应重新进行方法适用性试验。 菌种：金葡、大肠、枯草、生孢、白念、黑 曲 方法：1、薄膜过滤
• 过程的控制----------1、环境控制；2、操 作影响，人员、物流是否引入外源性污
过程控制
环境保证
培养基保证
无菌性检查 灵敏度检查
SOP操作
有效的方法
方法学验证
有效的结果 可靠的结论
结果判断
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• 培养基
配制后采用验证合格的灭菌程序灭菌。
什么是验证合格的？
保存条件：2-25℃、避光，非密闭容器在3周内使用， 密闭容器一般在1年内使用。
取流乙醇酸盐流体培养基（不少于15ml）6管， 分别加入金葡、大肠、生孢各2管，其中一管 接入供试品，另一管作为对照，TSB（不少于 10ml）6管，分别加入枯草、白念、黑曲各2 管，其中一管加入供试品，另一管作为对照， 培养时间不得超过5天。
结果判断：
与对照管比较，试验组的试验菌生长良好， 则说明供试品的该检验量在该检验条件下