小鼠抗双链DNA抗体天然DNA抗体(dsDNA)IgM酶联免疫分析(精)
抗双链脱氧核糖核酸抗体(dsDNA)
抗双链脱氧核糖核酸抗体(dsDNA)抗双链脱氧核糖核酸抗体(dsDNA)介绍:抗dsDNA抗体对SLE有很高的特异性诊断意义,这些抗dsDNA抗体沉积在各脏器的微血管基底膜与器官原位抗原型DNA发生反应,形成免疫复合物,激活炎症系统,导致组织损伤,如狼疮肾炎,自身免疫性肝炎等。
动物模型证实了大分子DNA参与了SLE的致病过程。
抗dsDNA抗体在SLE活动期病人血清中有很高的滴度,当疾病活动期得到控制时,抗dSDNA抗体滴度下降或消失。
抗双链脱氧核糖核酸抗体(dsDNA)正常值:血清呈阴性。
抗双链脱氧核糖核酸抗体(dsDNA)临床意义:异常结果:对系统性红斑狼疮(SLE)有较高的特异性,但敏感度稍差,抗dsDNA 抗体滴度的升降与SLE疾病的活动程度相关,因此可监测SLE的病情变化。
其他结缔组织病患者,dsDNA亦可阳性。
需要检查的人群:系统性红斑狼疮患者和其他结缔组织病患者均可检查。
抗双链脱氧核糖核酸抗体(dsDNA)注意事项:不合宜人群:无特殊要求。
检查前禁忌:一般是早晨空腹检查,禁忌餐饮后或食用辛辣食品后检查。
检查时要求:注意血清标本不被污染,造成假阳性,应及时送检。
抗双链脱氧核糖核酸抗体(dsDNA)检查过程:荧光免疫技术是以荧光物质标记的特异性抗体或抗原作为标准试剂,用于相应抗原或抗体的分析鉴定和定量测定。
荧光免疫技术包括荧光抗体染色技术和荧光免疫测定两大类。
荧光抗体染色技术是用荧光抗体对细胞、组织切片或其他标本中的抗原或抗体进行鉴定和定位检测,可在荧光显微镜下直接观察结果,称为荧光免疫显微技术,或是应用流式细胞仪进行自动分析检测,称为流式荧光免疫技术。
荧光免疫测定主要有时间分辨荧光免疫测定和荧光偏振免疫测定等。
小鼠抗双链DNA抗体天然DNA抗体(dsDNA)IgG酶联免疫分析
小鼠抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)IgG酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用产品编号:CSB-E11194m最低检测限:1 ng/ml特异性:本试剂盒可同时检测小鼠dsDNA (IgG),且与其他相关抗体无交叉反应。
有效期:6个月预期应用:ELISA法半定量测定小鼠血清、血浆或其它相关生物液体中dsDNA (IgG)含量。
说明1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理用dsDNA-BSA偶联物包被酶标板,制成固相载体。
向微孔中先加入待测样品进行反应,然后再加入辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG进行反应,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的dsDNA (IgG)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),评估样本中抗体的含量。
试剂盒组成及试剂配制1.酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
3.辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG稀释液(HRP-anti-mouse IgG Diluent):1×10ml/瓶。
4.辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgG(HRP-anti-mouse IgG):1×120μl/瓶(1:100)。
5.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
6.浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
7.终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
抗双链DNA抗体不同检测方法的比对分析
抗双链DNA抗体不同检测方法的比对分析张春雷;周小梅;张书楠;吕琪;陈桂冰;李庆宽【摘要】目的评价间接免疫荧光法(IIFA)、酶联免疫吸附测定法(ELISA)和免疫印迹法(IBT) 检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的特点及应用价值.方法采用IIFA、ELISA和IBT法对实验组(系统性红斑狼疮患者,n=70)及健康对照组(健康人,n=650)血清标本进行抗dsDNA抗体的检测.结果经IIFA、ELISA法及IBT法检测,实验组抗dsDNA抗体的阳性率分别为34.29%,54.29%和44.29%;健康对照组抗dsDNA抗体的阳性率分别为0.15%,4.46%和1.54%,ELISA和IBT检出阳性率与IIFA方法比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论在血清抗dsDNA抗体的检测上,IIFA法特异性高,敏感性较低;而ELISA和IBT法检测敏感性高,特异性较差.%Objective To evaluate the characteristics and application value of anti-double stranded DNA(dsDNA) antibody detection by indirect immunof1uorescent assay(IIFA), enzyme-linked immunosorbentassay(ELISA) and immunoblotting test(IBT).Methods IIFA, ELISA and IBT methods were employed to detect anti-dsDNA antibody in serum sample of experimental group(patients with systemic lupus erythematosus,n=70) and healthy control group(healthy people,n=650). Results Detection by IIFA,ELISA and IBT methods, positive rates of anti-dsDNA antibody in experimental group were 34.29 %, 54.29 % and 44.29 %, respectively, however, the positive rates of that in the healthy control group were0.15 %, 4.46 % and 1.54 %, respectively. Compared the positive rate detected by IIFA with which detected by ELISA or by IBT methods, there were statistically significant differences(P<0.05). Conclusion Detection ofserum anti-dsDNA antibody, IIFA has higher specificity and lower sensitivity, while ELISA and IBT have higher sensitivity and lower specificity.【期刊名称】《重庆医学》【年(卷),期】2011(040)017【总页数】2页(P1718-1719)【关键词】酶联免疫吸附测定;荧光免疫测定;免疫印迹法;红斑狼疮;系统性;抗dsDNA抗体【作者】张春雷;周小梅;张书楠;吕琪;陈桂冰;李庆宽【作者单位】深圳市中医院医学检验科,广东深圳,518020;深圳市中医院医学检验科,广东深圳,518020;深圳市中医院医学检验科,广东深圳,518020;深圳市中医院医学检验科,广东深圳,518020;深圳市中医院医学检验科,广东深圳,518020;中南大学湘雅医学院2005级医学检验系,湖南长沙,410078【正文语种】中文抗双链DNA(double stranded DNA,dsDNA)抗体是系统性红斑狼疮(system ic lupus ery thematosus,SLE)患者的特征性标志抗体[1-2],对于SLE的诊断和治疗有着非常重要的作用,美国风湿病学会已将其列为SLE诊断标准之一,其特异性达到了(95~100)%。
检测抗双链DNA抗体的三种方法比较
检测抗双链DNA抗体的三种方法比较文红明【期刊名称】《化工中间体》【年(卷),期】2015(011)007【摘要】目的:探讨免疫印迹法(IBT)和间接免疫荧光法(11FA)以及酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗dsDNA抗体的异同。
方法:收集常规自身免疫性疾病检测中IBT法检测抗dsDNA抗体阳性患者的血清标本或酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗dsDNA抗体阳性的血清标本共计81例,根据各病例的临床诊断,自身免疫性疾病组(A组,又细分成SLE及非SLE组),非自身免疫性疾病组(NA 组),分析两组患者临床特点;再补做IIFA法或另两种方法中的一种进行抗dsDNA抗体的检测,根据结果分为lBT+lFA+ELISA+(A组)、IBT+IFA+ELlSA_(B组)、IBT+IFA—ELISA+(C组)、lBT+lFA-ELlSA-(D组),分析三种方法的特异性。
结果:自身免疫性疾病组患者40例,非自身免疫性疾病组患者41例,自身免疫性疾病组患者较非自身免疫性疾病组平均年龄更小,女性比例更高,差异有统计学意义(P〈0.05);方法组IBT+IFA+ELlSA+的灵敏度比单独IBT法检测和IBT与IFA法或ELISA法两两结合检测灵敏度都高。
结论:IIFA法和ELISA法联合检测抗dsDNA抗体的特异性较单独用IBT法明显高,临床可采用联合检测的方法来提高检测SLE的灵敏度和特异度。
【总页数】3页(P235-237)【作者】文红明【作者单位】绥阳县人民医院贵州遵义232001【正文语种】中文【中图分类】S855.12【相关文献】1.3种抗双链DNA抗体检测方法比较及其联合检测对系统性红斑狼疮的诊断价值研究 [J], 杨育红;田卫花;张邦能;周思彤;邢福军;马文媛;杨邵华2.三种方法检测抗双链DNA抗体的比较及临床意义 [J], 张铭明;张锐;徐建华;王芬;徐胜前;刘爽;赵欣欣3.间接免疫荧光法和欧蒙印迹法检测抗双链DNA抗体的比较 [J], 张小莲;王乃群;罗立4.三种不同方法检测抗双链DNA抗体的比较分析 [J], 丁耀东;范雪丽;胡彦;陈华;谭立明;陈娟娟5.两种检测抗双链DNA抗体方法在系统性红斑狼疮诊断中的价值比较 [J], 宋月芹;张红斌;李雪莲因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
抗双链DNA抗体
抗双链DNA抗体抗双链DNA抗体介绍:抗双链DNA抗体(抗ds DNA)是抗DNA抗体中的一种。
其反应位点位于DNA脱氧核糖磷酸框架上。
抗ds DNA主要出现于SLE患者的血清中,对SLE患者的组织器官损伤有致病作用。
在SLE患者血循环中,大分子的DNA浓度显著高于正常人,DNA还可与多种器官的微血管结构包括肾小球基底膜上的硫酸乙酰肝素(heparansulfate)结合,抗dsDNA抗体可与这些循环中的和器官原位的DNA分子反应,形成抗原抗体复合物,激活炎症系统如补体活化途径,导致组织损伤。
也有人认为,致病性抗D NA抗体在肾脏中的沉积并非只取决于抗DNA抗体与DNA的结合,而是通过与基底膜上硫酸乙酰肝素、层粘连蛋白(laminin)、心磷脂等非DNA 抗原的交叉反应或静电引力作用固定于肾脏,诱导炎症反应。
抗DNA自身抗体中有的有致病性,有的没有致病性。
致病性的抗DNA抗体具有以下特性:亲和性高,能与补体结合,能结合dsDNA,带正电荷,多反应性,为IgG类。
近年来的研究发现,抗DNA抗体能穿入活的淋巴细胞,干扰细胞功能,引起细胞凋亡,抗dsDNA抗体也能进入肾小球膜细胞,引起肾小球细胞增殖,促细胞融合和蛋白尿形成。
这可能是致病性抗D NA抗体的另一特征。
抗双链DNA抗体正常值:健康人血清1∶10稀释为阴性(绿蝇短膜虫法)。
健康人结合率≤20%(放射免疫分析法Farr试验)。
一般以待测血清A值/阴性对照A值(P/N)≥2.1为阳性,正常人P/N值<2.1(ELISA法)。
正常人为阴性(NC膜上不出现着色点)(滴金免疫渗滤试验)。
抗双链DNA抗体临床意义:异常结果:抗dsDNA自身抗体是SLE的最重要的自身抗体,检出率4 0%~70%。
高滴度抗dsDNA的存在是SLE诊断的重要依据,也是疾病活动性特别是肾脏损伤的标志。
除用于SLE的诊断外,也可用于临床病程和治疗效果的监测,对判断预后也有一定价值。
抗双链DNA抗体(dsDNA抗体)检测及临床应用
抗双链DNA抗体(dsDNA抗体)检测及临床应用目的探讨抗双链DNA抗体(dsDNA抗体)检测在系统性红斑狼疮(SLE)诊断中的意义。
方法酶联免疫吸附法联合间接免疫荧光发检测抗双链DNA抗体(dsDNA抗体)。
结果SLE组、其他风湿病组和健康对照组抗双链DNA抗体水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。
抗双链DNA抗体(dsDNA抗体)ELISA方法检测灵敏度为88.5%,特异性为96.6%;抗双链DNA抗体(dsDNA 抗体)ELISA方法检测灵敏度为89.6%,特异性为97.7%。
结论两种实验方法检测抗双链DNA抗体,有利于诊断和治疗SLE。
标签:SLE dsDNA抗体系统性红斑狼疮(SLE):是一种自身免疫性疾病,它的发病与家族遗传、紫外线照射、体内雌激素水平、某些药物、食物及感染有关[2~10]。
我们分析96例SLE患者抗双链DNA抗体(dsDNA抗体)检测结果,以探讨抗双链DNA 抗体(dsDNA抗体)在SLE诊断治疗中的临床应用1资料与方法1.1一般资料我院2011年10月~2014年3月风湿免疫科门诊及病房SLE 患者96例(SLE组),SLE诊断标准符合美国风湿病学会SLE分类标准(2009年),年龄45~72岁,平均年龄(55±8)岁,其中男25例,女71例;其他风湿疾病对照组40例,年龄40~65岁,平均年龄(45±8)岁,其中男15例,女25例;健康对照组为100名健康体检者,年龄40~70岁,平均年龄(50±10)岁,其中男25例,女75例。
1.2方法和试剂采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测抗双链DNA抗体(dsDNA抗体),采用间接免疫荧光法检测抗双链DNA抗体(dsDNA抗体)。
试剂盒由欧蒙公司提供。
测定严格按试剂说明书操作。
酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测抗双链DNA抗体步骤:取5μl血清用1.0ml样本缓冲液稀释并混匀,1:201倍稀释。
抗核抗体组合(新3)检查内容
抗核抗体组合(新3)检查内容全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:抗核抗体组合(新3)检查是一种用于检测人体免疫系统中的抗核抗体水平的检测项目。
抗核抗体是一类针对细胞核内成分的抗体,其存在可以反映出人体免疫系统的异常情况。
这项检查主要用于辅助诊断自身免疫性疾病、风湿免疫性疾病、系统性红斑狼疮等疾病,并且可以帮助医生评估疾病的严重程度和预后。
本文将介绍抗核抗体组合(新3)检查的内容、意义、操作方法以及注意事项。
一、检查内容抗核抗体组合(新3)检查主要包括以下几个方面的内容:1. 抗核抗体(ANA)检测:ANA是一种特异性抗体,主要反应人体免疫系统对细胞核内成分的异常免疫反应。
阳性结果可能提示自身免疫性疾病的存在。
2. 抗双链DNA抗体(anti-dsDNA)检测:抗双链DNA抗体是一种特异性抗体,其阳性结果常见于系统性红斑狼疮等风湿免疫性疾病患者。
3. 抗核RNP抗体(anti-RNP)检测:抗核RNP抗体是一种特异性抗体,其阳性结果可能提示结缔组织病等自身免疫性疾病的存在。
二、检查意义抗核抗体组合(新3)检查的结果可以帮助医生进行以下方面的判断:1. 辅助诊断自身免疫性疾病:抗核抗体组合检查是自身免疫性疾病的辅助诊断手段之一,对于系统性红斑狼疮、风湿关节炎等疾病的诊断具有重要意义。
2. 评估疾病的严重程度:抗核抗体组合检查结果可以帮助医生评估疾病的活跃程度和严重程度,指导治疗方案的制定。
3. 预测疾病的预后:阳性的抗核抗体组合检查结果可能提示疾病的预后不佳,需要进行及时干预和治疗。
三、检查操作方法进行抗核抗体组合(新3)检查时,需要注意以下操作方法:1. 采血:医生将利用针头采集患者的静脉血进行检测。
2. 送检:采集的血样将被送往实验室进行检测,检测结果将在数天内出具。
3. 诊断:医生将根据实验室检测结果对患者进行诊断,制定相应的治疗计划。
四、注意事项进行抗核抗体组合(新3)检查时,需要注意以下事项:1. 遵医嘱:在进行检查前应咨询医生,根据医生的指导进行相关检查。
抗核抗体组合(新3)检查内容
抗核抗体组合(新3)检查内容全文共四篇示例,供读者参考第一篇示例:抗核抗体组合(新3)检查内容是一项用于检测患者体内是否存在抗核抗体的检测项目。
抗核抗体是人体免疫系统产生的一种特殊抗体,通常与自身免疫性疾病相关。
抗核抗体组合(新3)检查内容包括多项指标,通过分析这些指标可以帮助医生诊断患者的疾病状况,制定合理的治疗方案。
抗核抗体组合(新3)检查内容主要包括以下几个方面:1. 抗核抗体(ANA):ANA是最常见的自身抗体,通常与系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合征、类风湿关节炎等自身免疫疾病相关。
阳性结果可能提示存在自身免疫疾病风险,但不一定代表患病。
2. 抗双链DNA抗体(dsDNA):抗双链DNA抗体与系统性红斑狼疮(SLE)密切相关,是SLE的特异性抗体。
阳性结果提示SLE的可能性较大。
3. 抗磷脂抗体(aPL):抗磷脂抗体是一类与抗凝血机制相关的抗体,通常与抗磷脂抗体综合征(APS)相关。
阳性结果可能提示存在血栓形成和自身免疫疾病的危险。
4. 核小体抗体:核小体抗体是一种特异性抗体,通常与混合性结缔组织病(MCTD)相关。
阳性结果可能提示存在结缔组织病的可能性。
5. 非肌肉肝小体抗体:非肌肉肝小体抗体是与原发性胆汁性胆管炎(PBC)相关的抗体,阳性结果可能提示存在PBC的风险。
以上仅是抗核抗体组合(新3)检查内容的部分指标,实际检查中还包括其他抗体指标。
通过综合分析多项指标的结果,医生可以更准确地判断患者是否存在自身免疫性疾病的风险,为患者制定个性化的治疗方案提供参考。
在进行抗核抗体组合(新3)检查前,患者需要遵循一些准备事项,如避免食用含有动物蛋白的食物、避免紫外线暴晒等。
在检查过程中,医护人员将采集患者静脉血样本进行实验室检测,检查结果将在数天后出具。
需要注意的是,抗核抗体组合(新3)检查并非特异性诊断某种疾病的手段,阳性结果只是提示存在患某种自身免疫性疾病的风险,需要结合患者的临床表现、病史等综合信息进行判断。
抗核抗体指标
抗核抗体指标
抗核抗体指标是用来诊断自身免疫性疾病的重要指标之一。
抗核抗体是通过免疫系统产生的针对核部分或整个细胞核的抗体。
它们在各种自身免疫性疾病中有不同的表现和作用。
常用的抗核抗体指标包括:
1. ANA(抗核抗体):抗核抗体的最常用的指标是ANA,即
抗核抗体的总体阳性率。
它可以通过间接免疫荧光法(IIF)
或酶联免疫吸附实验(ELISA)等方法进行检测。
ANA阳性
常见于系统性红斑狼疮、系统性硬化症、多肌炎/皮肌炎等自
身免疫性疾病。
2. dsDNA(双链DNA)抗体:dsDNA抗体是系统性红斑狼疮
的特异性抗体,其阳性率与疾病活动度相关。
3. Sm抗体:Sm抗体是系统性红斑狼疮的特异性抗体,用于
确诊系统性红斑狼疮。
4. RNP抗体:RNP抗体是抗核抗体的亚型之一,与混合型结
缔组织病相关。
5. SS-A抗体和SS-B抗体:这些抗体用于诊断干燥综合征,其阳性率与干燥症状的程度相关。
这些抗核抗体指标的阳性率和临床意义会根据不同的疾病和个体而有所不同,因此需要结合患者的临床症状和其他实验室检查结果来进行综合判断和诊断。
抗双链dna抗体快速定量检测值101
抗双链dna抗体快速定量检测值101抗双链DNA抗体(anti-dsDNA antibody)是一种重要的自身抗体,它可以用于系统性红斑狼疮(SLE)的诊断和监测。
本文将针对抗双链DNA抗体的快速定量检测值为101进行详细介绍。
一、什么是抗双链DNA抗体?抗双链DNA抗体是一种针对双链DNA(dsDNA)分子的抗体,它与系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病密切相关。
在正常情况下,人体的免疫系统不会产生针对自身组织的抗体,但在某些情况下,免疫系统会出现异常,产生针对自身组织的抗体,即自身抗体。
抗双链DNA抗体是自身抗体中的一类,它可以与双链DNA结合形成免疫复合物,进而引发炎症反应,导致系统性红斑狼疮等疾病的发生和发展。
二、抗双链DNA抗体的检测方法抗双链DNA抗体的检测主要有间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay, IIFA)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)两种常用方法。
1. 间接免疫荧光法:间接免疫荧光法是一种常用的抗双链DNA抗体检测方法,它利用荧光染料标记的抗人IgG抗体与样本中的抗双链DNA抗体结合,然后通过荧光显微镜观察荧光信号的出现与强度来判断抗体的存在与水平。
这种方法的优点是灵敏度较高,可以对抗双链DNA抗体进行定性和半定量检测。
然而,由于操作技术较为繁琐,需要专业人员进行操作,因此不适用于大规模筛查。
2. 酶联免疫吸附试验:酶联免疫吸附试验是一种常用的抗双链DNA抗体定量检测方法,它利用特异性抗体与抗双链DNA抗体结合,然后通过酶标记的二抗与特异性抗体结合,最终通过底物的酶促反应来测定抗双链DNA 抗体的浓度。
这种方法的优点是操作简单,适用于大规模筛查和定量检测。
然而,由于其灵敏度较低,有时可能会出现假阴性结果,所以在临床上常常与其他检测方法相结合使用,以提高准确性。
三、抗双链DNA抗体的快速定量检测值101的意义抗双链DNA抗体的快速定量检测值为101可能意味着患者体内抗双链DNA抗体的水平较高。
红斑狼疮小鼠模型介绍
红斑狼疮小鼠模型介绍最早由Murphy 和 Roths 于1979 年建立。
由 LG/J、AKR/J、C3H / Di 及 C57BL /6 品系小鼠复杂交配产生,因 Fas 基因出现凋亡相关突变,即 lpr (lymphoproliferation,淋巴增殖基因)。
因此T 细胞、B 细胞和巨噬细胞出现凋亡缺陷,进而 T 细胞增生,全身淋巴结肿大,以及侵蚀性关节炎,抗DNA、抗 Sm、抗 Su、抗核苷 P 抗体,高滴度 ANA,高丙种球蛋白血症以及类风湿因子。
系统性红斑狼疮(SLE)是一种原因不明的自身免疫性疾病,其许多免疫学异常及组织病理变化均可在SLE小鼠模型中见到。
因此,建立红斑狼疮动物模型,便于更好地研究人类SLE的病因,发病机理及寻找新的治疗方法等诸多方面均有重要意义。
目前世界上两种最常用的自发红斑狼疮小鼠模型为MRL / MpJ-Fas lpr / J和NZBWF1 / J。
这些模型比其他小鼠品系概括了人类SLE 的更多临床特征,并已广泛用于临床前功效研究(Perry等,2011)。
红斑狼疮小鼠自身抗体简介抗核抗体抗核抗体(antinuclearantibody,ANA)是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称,主要是IgG,其次是IgM和IgA,无器官和种属特异性。
ANA在大多数自身免疫性疾病中均可呈阳性,正常老年人也可有低滴度的ANA。
ANA检测在临床自身免疫病诊断与鉴别诊断中是一个重要的筛查试验。
抗核抗体检查是自身免疫性疾病筛选试验。
抗核抗体在多种自身免疫病中均呈不同程度的阳性率,如系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、混合性结缔组织病、干燥综合征、系统性性硬皮病、慢性活动性肝炎、原发性胆汁性肝硬化等,但经皮质激素治疗后,阳性率可降低。
抗ds-DNA 抗体抗双链DNA抗体(抗dsDNA抗体)是抗DNA抗体中的一种,是系统性红斑狼疮(SLE)的血清学标志物,而且是临床上最常进行的一项实验室检测指标。
小鼠抗双链DNA抗体dsDNA酶联免疫分析
小鼠抗双链DNA抗体(dsDNA)酶联免疫分析试剂盒利用说明书第一部份 ELISA简介ELISA是酶联接免疫吸附剂测定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的简称。
自上世纪70年代初问世以来,进展十分迅速,目前已被普遍用于生物学和医学科学的许多领域。
ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。
结合在固相载体表面的抗原或抗体仍维持其免疫学活性,酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性,又保留酶的活性。
在测按时,受检标本(测定其中的抗体或抗原)与固相载体表面的抗原或抗体起反映。
用洗涤的方式使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。
再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反映而结合在固相载体上。
现在固相上的酶量与标本中受检物质的量呈必然的比例。
加入酶反映的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可依照呈色的深浅进行定性或定量分析。
由于酶的催化效率很高,间接地放大了免疫反映的结果,使测定方式达到很高的灵敏度。
第二部份 ELISA 的样本实验预备在搜集样本前都必需有一个完整的打算,必需清楚要检测的成份是不是足够稳固。
对搜集后当天就进行检测的样本,及时贮存在4℃备用。
关于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,最好-70℃冻存备用。
标本应幸免反复冻融。
液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培育上清等。
1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
认真搜集上清,保留进程中如显现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应依照标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
认真搜集上清,保留进程中如有沉淀形成,应该再次离心。
3.尿液:用无菌管搜集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
3种检测抗双链DNA抗体方法的结果比对分析
3种检测抗双链DNA抗体方法的结果比对分析陈熙;胡祎明;闫伯英;胡志东【摘要】目的评价ELISA、绿蝇短膜虫间接荧光法(CLIFT)和免疫印迹法(IBT)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体的结果差异.方法用三种方法分别检测85例SLE患者、60例非SLE的自身免疫病患者和200例体检健康者血清抗dsDNA抗体,以临床诊断为金标准,评价各法对SLE的诊断性能.结果 ELISA、CLIFT和IBT 3种方法诊断SLE的敏感性分别为76.47%、68.24%、61.18%,特异性分别为94.62%、98.85%、97.69%;Youden指数分别为0.710 9、0.670 9和0.588 7,差异无统计学意义(u=0.53、1.70和1.03,P>0.05).3种方法kappa值为0.65~ 0.71.结论 3种方法结果一致性较好,CLIFT法有较高的特异性而ELISA法有较高的敏感性.单独使用一种方法易漏检,可两法或三法联合应用.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2013(031)008【总页数】2页(P573-574)【关键词】系统性红斑狼疮;抗双链DNA抗体;间接免疫荧光;酶联免疫吸附试验;免疫印迹【作者】陈熙;胡祎明;闫伯英;胡志东【作者单位】天津医科大学总医院检验中心,天津300052;天津医科大学检验系,天津300070;天津医科大学总医院检验中心,天津300052;天津医科大学总医院检验中心,天津300052【正文语种】中文【中图分类】R446.6;R593.24+1抗双链DNA(dsDNA)抗体作为SLE的诊断标准之一,对疾病活动性的判断和疗效评估有很好的价值。
实验室检测抗dsDNA抗体的常规方法有ELISA、绿蝇短膜虫间接免疫荧光检测(CLIFT)和免疫印迹法(IBT),但美国风湿病学会(ACR)1997年修定的SLE分类诊断标准中并未对抗dsDNA抗体的检测方法进行限定[1]。
不同方法检测抗双链DNA抗体在系统性红斑狼疮诊断中的价值评估
不同方法检测抗双链DNA抗体在系统性红斑狼疮诊断中的价值评估李志艳;李丽娟;韩瑞林;侯艳峰;李晓宁;闫存玲;冯珍如【期刊名称】《标记免疫分析与临床》【年(卷),期】2022(29)7【摘要】目的评估流式荧光法(FFIA)、间接免疫荧光法(IIF)及酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗双链DNA(dsDNA)抗体用于系统性红斑狼疮(SLE)诊断的临床价值,为临床实践寻找适宜的检测策略。
方法选取我院就诊的SLE患者92例,非SLE自身免疫性疾病患者127例及50例健康体检者,分别采用FFIA、IIF和ELISA检测血清中抗dsDNA抗体,计算各方法检测灵敏度和特异性,采用Kappa检验评估结果一致性,采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)比较各方法用于区分SLE和非SLE自身免疫性疾病的效能。
结果用FFIA、IIF、ELISA检测抗dsDNA抗体,SLE组阳性率分别为44.6%、50.0%和62.0%,均高于疾病对照组和健康对照组(P<0.0001)。
IIF 与FFIA、ELISA具有高度的一致性,Kappa值分别为0.64和0.72。
FFIA与ELISA 检测结果具有中等的一致性,Kappa值为0.56。
以串联的方式FFIA-IIF或ELISA-IIF联合检测,可提高SLE诊断的灵敏度,分别达到59.8%和67.4%,其特异性分别为92.1%和89.3%,阴阳性与诊断符合率分别提高到81.0%和81.8%。
ROC曲线分析显示,FFIA的AUC最大,达到0.768,ELISA和IIF的AUC分别为0.748和0.711。
结论FFIA、ELISA和IIF检测抗dsDNA抗体具有较好的一致性,用于SLE诊断的准确性高。
ELISA-IIF或FFIA-IIF(串联)联合检测,可作为临床实践中适用于SLE诊断的抗dsDNA抗体检测模式。
【总页数】5页(P1179-1183)【作者】李志艳;李丽娟;韩瑞林;侯艳峰;李晓宁;闫存玲;冯珍如【作者单位】北京大学第一医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R593.24【相关文献】1.3种抗双链DNA抗体检测方法比较及其联合检测对系统性红斑狼疮的诊断价值研究2.两种检测抗双链DNA抗体方法在系统性红斑狼疮诊断中的价值比较3.抗细胞膜DNA抗体、抗核抗体及抗双链DNA抗体联合检测在系统性红斑狼疮诊断中的应用价值4.抗核抗体、抗双链DNA抗体与抗ENA抗体三联检测在系统性红斑狼疮诊断中的应用价值5.血清ANA、抗双链DNA抗体及抗ENA抗体检测在诊断系统性红斑狼疮中的应用价值因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
抗双链dna抗体igg型(iif)单位
抗双链dna抗体igg型(iif)单位抗双链DNA抗体IgG型(IIF)单位抗双链DNA抗体IgG型(IIF)单位是一种常用于检测系统性红斑狼疮(SLE)的抗体单位。
SLE是一种自身免疫性疾病,其特征之一就是机体产生了大量的自身抗体,其中抗双链DNA抗体是SLE的特异性抗体之一。
IIF是一种常用的实验方法,用于检测抗双链DNA抗体的水平和种类,其中抗双链DNA抗体IgG型是其中的一种。
抗双链DNA抗体IgG型(IIF)单位的检测通常采用间接免疫荧光法。
首先,将待检血清与双链DNA结合,然后加入荧光标记的抗人IgG抗体,使之与双链DNA上的抗体结合。
最后,通过荧光显微镜观察,检测荧光是否出现,从而判断抗双链DNA抗体IgG型的存在与水平。
抗双链DNA抗体IgG型(IIF)单位的检测结果可以帮助医生诊断系统性红斑狼疮。
在SLE患者中,抗双链DNA抗体IgG型的阳性率较高,且其水平与疾病活动性有一定的相关性。
因此,对于临床疑似SLE的患者,检测抗双链DNA抗体IgG型可以作为辅助诊断的重要指标之一。
抗双链DNA抗体IgG型(IIF)单位的检测结果还可以用于评估SLE 患者的疾病活动性和预后。
研究表明,抗双链DNA抗体IgG型的水平与SLE的疾病活动性密切相关,水平越高,疾病活动性越强。
此外,抗双链DNA抗体IgG型的阳性率与肾脏损害、关节炎等病变的发生也存在一定的相关性。
因此,定期监测抗双链DNA抗体IgG型的水平可以帮助医生及时评估患者的疾病活动性和制定个体化的治疗方案。
抗双链DNA抗体IgG型(IIF)单位的检测还可以用于SLE的鉴别诊断。
除了SLE,其他一些疾病也可能引起抗双链DNA抗体IgG型的升高,如药物性红斑狼疮、结缔组织病等。
因此,在进行抗双链DNA抗体IgG型的检测时,需要结合患者的临床症状、体征和其他实验室检查结果进行综合分析,以避免误诊。
在进行抗双链DNA抗体IgG型(IIF)单位的检测时,还需要注意一些技术细节。
抗核小体抗体、抗双链DNA抗体和抗超敏双链DNA抗体与系统性红斑狼疮的相关性研究
抗核小体抗体、抗双链DNA抗体和抗超敏双链DNA抗体与系统性红斑狼疮的相关性研究刘艳慧;王爱雪;孟新艳;雷鑫;李彩萍;武丽君【期刊名称】《临床内科杂志》【年(卷),期】2013(030)007【摘要】目的通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者血清中抗核小体抗体(AnuA)、抗双链DNA (dsDNA)抗体和抗超敏双链DNA (dsDNA-NcX)抗体的水平,分析其在SLE患者中的敏感性、特异性及与其他实验室指标的相关性.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测91例SLE患者、45例非SLE疾病对照和46例健康对照组血清中AnuA、抗dsDNA抗体和抗dsDNA-NcX抗体的水平,比较3种抗体对SLE诊断的敏感性和特异性,评价其与其他实验室指标的关系.结果 SLE患者AnuA、抗dsDNA抗体和抗dsDNA-NcX抗体的阳性率分别为49.45%、56.04%和61.54%;特异性分别为94.51%、94.51%和100.00%.AnuA、抗dsDNA抗体和抗dsDNA-NcX抗体均与SLEDAI评分呈正相关(r=0.50,P=0.00;r=0.49,P=0.00;r =0.42,P=0.00).ANA的滴度与AnuA的浓度呈正相关(r=0.30,P=0.00),与抗dsDNA抗体的滴度无相关性(r=0.19,P=0.08),与抗dsDNA-NcX抗体的浓度呈正相关(r=0.50,P=0.00).红细胞沉降率在抗dsDNA-NcX抗体、抗dsDNA抗体阴性和阳性组间比较差异无统计学意义(x2=0.76,P=0.38;x2=0.13,P=0.18),而在AnuA阴性与阳性组间比较差异有统计学意义(x2 =20.31,P=0.00).CRP及24小时尿蛋白定量在三者阴性与阳性组间比较差异无统计学意义.补体C3、C4在AnuA、抗dsDNA抗体和抗dsDNA-NcX抗体的阴性与阳性组间比较差异有统计学意义(x2=9.84,P=0.00;x2=16.53,P=0.00;x2 =10.33,P=0.00;x2 =11.61,P=0.00;x2 =12.69,P=0.00;x2=8.77,P=0.00).胱抑素在抗dsDNA抗体和AnuA的阴性与阳性组间比较差异无统计学意义,而在抗dsDNA-NcX抗体阴性与阳性组间比较差异有统计学意义(x2 =4.04,P=0.04).结论抗dsDNA-NcX抗体可作为SLE的特异性抗体之一,其敏感性和特异性均高于抗dsDNA抗体和AnuA,三者均与SLE的疾病活动相关,联合检测有助于评估病情.【总页数】3页(P453-455)【作者】刘艳慧;王爱雪;孟新艳;雷鑫;李彩萍;武丽君【作者单位】832002 新疆石河子大学医学院;832002 新疆石河子大学医学院;新疆维吾尔自治区人民医院;新疆维吾尔自治区人民医院;新疆石河子大学医学院第一附属医院;新疆维吾尔自治区人民医院【正文语种】中文【相关文献】1.抗SmD1、抗核小体抗体、抗双链DNA抗体在系统性红斑狼疮诊断中的意义[J], 陶洪群;李小龙;温怀凯;龚建光2.抗双链DNA抗体和抗核小体抗体定性检测对系统性红斑狼疮的诊断价值 [J], 李娜;孔宁;邹和建;万伟国3.抗核小体抗体、抗Sm抗体、抗双链DNA抗体在系统性红斑狼疮诊断中的临床意义 [J], 孙敏霞;吴纯;菅小红;董梅;匡铁吉4.抗双链DNA抗体、抗核小体抗体、抗dsDNA-NcX抗体在系统性红斑狼疮中的研究进展 [J], 刘艳慧;武丽君;李彩萍5.外周血中抗双链DNA抗体、抗核小体抗体在系统性红斑狼疮伴肾损害患者中的表达及对临床疗效的影响 [J], 王小杰;孔凌云因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
抗双链DNA抗体检测标准操作规程(胶体金法)
抗双链DNA抗体检测标准操作规程(胶体金法)1.目的:规范抗双链DNA抗体检测的操作标准,确保检测结果的准确性2. 原理:斑点反应板上的固相纯化ds-DNA抗原特异地与血清中抗ds-DNA抗体结合形成复合物,胶体金标记的抗人IgG 单抗或SPA 再与复合物结合,形成肉眼可见的红色圆斑3. 标本要求:(1)标本采集:静脉抽血3ml,不抗凝。
(2)标本保存:2-8℃可保存3天,不易反复冻融。
(3)特殊样本:溶血,高脂血等特殊样本在检测时会使背景偏深影响结果判断,可尝试用生理盐水稀释血清样本后检测。
4. 检验方法(1)将待测血清样本和试剂盒恢复室温;(2)取出反应板,与反应板中滴入试剂A二滴,静置,待试剂A完全吸入;(3)用吸管吸取待测血清样本,滴四滴(约150微升)于反应板孔中,静置,待血清完全吸入;(4)取下反应板上的蓝色耳盖,滴入试剂B三滴,静置,待试剂B完全吸入;(5)再滴入试剂A二滴,静置,待试剂A完全吸入,在5分钟内观察反应板孔中的现象;5. 结果判断(1)阳性:反应孔中显现清晰的红色质控线和红色圆斑的为阳性;(2)阴性:反应孔中只显现清晰的红色质控线为阴性;(3)无效:反应孔中未显现红色质控线,表示操作失误或试剂无效。
6. 检验结果的解释检验结果为阳性者即为抗双链DNA抗体检出阳性,阴性者即为抗双链DNA抗体未检出。
若检测为无效结果,则应进行重复检测,并及时与生产厂家联系。
7.注意事项(1)本品仅用于体外诊断。
(2)本品的检测结果仅可作为疾病的辅助诊断指标。
8. 临床意义:本法用于快速检查血清中的ds-DNA 抗体,适用于SLE 的诊断和病情监测以及其它自身免疫性疾病的鉴别诊断。
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小鼠抗双链DNA抗体/天然DNA抗体(dsDNA)IgM酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用
产品编号:CSB-E12911m
最低检测限:1 ng/ml
特异性:本试剂盒可同时检测小鼠dsDNA (IgM),且与其他相关抗体无交叉反应。
有效期:6个月
预期应用:ELISA法半定量测定小鼠血清、血浆或其它相关生物液体中dsDNA (IgM)含量。
说明
1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。
2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。
3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。
4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。
实验原理
用dsDNA-BSA偶联物包被酶标板,制成固相载体。
向微孔中先加入待测样品进行反应,然后再加入辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgM进行反应,经过彻底洗涤后用底物TMB显色。
TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的dsDNA (IgM)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),评估样本中抗体的含量。
试剂盒组成及试剂配制
1.酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。
2.样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
3.辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgM稀释液(HRP-anti-mouse IgM Diluent):1×10ml/瓶。
4.辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgM(HRP-anti-mouse IgM):1×120μl/瓶(1:100)。
5.底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
6.浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
7.终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
8.阴性质控品:1×800ul/瓶
需要而未提供的试剂和器材
1.标准规格酶标仪
2.高速离心机
3.电热恒温培养箱
4.干净的试管和Eppendof管
5.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等
标本的采集及保存
1.血清:全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000 x g离心20分钟,取上清即
可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心
15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
注:标本溶血会影响最后检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。
标本的稀释原则:
试验前用样本缓冲液按1:100的比例稀释病人样本。
所以使用2ul的样本+198ul样本稀释液加入聚苯乙烯试管中。
混合均匀。
阴性质控品已经准备好不需要稀释。
辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgM的稀释原则:
临用前以辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgM稀释液稀释,稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制(每孔100μl),实际配制时应多配制0.1-0.2ml。
如10μl辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgM加990μl辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgM稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制。
操作步骤
实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。
如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。
1.加样:分别设阴性孔、待测样品孔。
阴性孔加阴性质控品100μl,余孔加待测样品100μl,
注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应30分钟。
2.甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
3.每孔加辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgM工作液100μl(取1μl生物素标记抗体加99μl
生物素标记抗体稀释液的比例配制,轻轻混匀,在使用前一小时内配制),37℃,30分钟。
4.弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。
5.依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光显色10min。
6.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
终止液的加入顺序应尽量
与底物液的加入顺序相同。
为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
7.用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。
在加终止液后15分钟以内
进行检测。
注:
1. 用户在初次使用试剂盒时,应将各种试剂管离心数分钟,以便试剂集中到管底。
2. 每次实验留一孔作为空白调零孔,该孔不加任何试剂,只是最后加底物溶液及2N H2SO4。
测量时先用此孔调OD值至零。
3. 为防止样品蒸发,试验时将反应板放于铺有湿布的密闭盒内,酶标板加上盖或覆膜。
4. 未使用完的酶标板或者试剂,请于2-8℃保存。
辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgM工作液
请依据所需的量配置使用。
请勿重复使用已稀释过的辣根过氧化物酶标记抗小鼠IgM工作液。
5. 建议检测样品时均设双孔测定,以保证检测结果的准确性。
洗板方法
手工洗板方法:吸去(不可触及板壁)或甩掉酶标板内的液体;在实验台上铺垫几层吸水纸,酶标板朝下用力拍几次;将推荐的洗涤缓冲液至少0.3ml注入孔内,浸泡1-2分钟。
根据需要,重复此过程数次。
自动洗板:如果有自动洗板机,应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
计算
1.目测:在白色背景下观察各孔显色情况,有明显变蓝者为阳性,无色或蓝色不明显者为阴性
2.酶标仪检测:每孔加终止液50ul,酶标仪450nm,空白孔调零。
测定各孔OD值。
临界值=阴性对照x2.1
阳性大于等于临界值
阴性小于临界值
临界值注意事项
1. 当混合蛋白溶液时应尽量轻缓,避免起泡。
2. 洗涤过程非常重要,不充分的洗涤易造成假阳性。
3. 一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4. 如标本中待测物质含量过高,请先稀释后再测定,计算时请最后乘以稀释倍数。
5. 在配制检测溶液工作液时,请以相应的稀释液配制,不能混淆。
6. 底物请避光保存。
7. 不要用其它生产厂家的试剂替换试剂盒中的试剂。