PCR与Real-time PCR方法检测海产品创伤弧菌的比较
Real-time PCR与常规PCR在Q热立克体检测中的比较
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水产品中弧菌的PCR技术检测研究进展
水产品中弧菌的PCR技术检测研究进展作者：桑燕娇宁喜斌来源：《安徽农业科学》2014年第33期摘要水产品中副溶血性弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌均是食源性致病菌，对这些菌种灵敏、快速的检测方法对水产品安全以及保护人类健康极为重要。
主要综述了水产品中副溶血性弧菌、溶藻弧菌、创伤弧菌的分子生物学检测研究进展。
关键词副溶血性弧菌;溶藻弧菌;创伤弧菌;PCR技术中图分类号 S986.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）33-11871-04Research Progress of PCR Technology Detection of Vibrio in Aquatic ProductsSANG Yan-jiao， NING Xi-bin*（Shanghai Ocean University， Shanghai 201306）Abstract Vibrio parahaemolyticus， Vibrio alginolyticus， Vibrio vulnificus in aquatic products are foodborne pathogens. Sensitive， rapid detection methods for seafood safety and the protection of human health is extremely important. This paper summarizes that research progress of molecular biology detection of Vibrio parahaemolyticus， Vibrio alginolyticus， Vibrio vulnificus in aquatic products.Key words Vibrio parahaemolyticus; Vibrio alginolyticus; Vibrio vulnificus; PCR technology基金项目上海市科委工程中心建设项目（11DZ2280300）;上海市精品课程资助项目。
水产品中创伤弧菌检测方法的研究进展
食品科技水产品中创伤弧菌检测方法的研究进展彭钟琴，黄 璐（广东茂名农林科技职业学院，广东茂名 525000）摘 要：创伤弧菌引起的食物中毒多发生在6—10月，易受污染的食品主要是水产品。
水产品的微生物污染与食品安全有着密切的关系，为了较好地控制水产品的质量，确保消费者的饮食安全，水产品必须经过严格的微生物检验，达标后才能流进入市场。
本文简要综述了创伤弧菌的检测方法，为创伤弧菌感染的早期诊断和及时治疗提供参考。
关键词：创伤弧菌；检测方法；PCRResearch Progress on Detection Techniques of Vibrio Vulnificusin Aquatic ProductsPENG Zhongqin, HUANG Lu(Guangdong Maoming Agriculture & Forestry Technical College, Maoming 525000, China) Abstract: Food poisoning caused by Vibrio vulnificus mostly occurs in June to October, and the easily contaminated food is mainly aquatic products.Microbial pollution of aquatic products is closely related to food safety. In order to better control the quality of aquatic products and ensure the food safety of consumers, aquatic products must be strictly microbial tested to meet the standard before they can flow to the market.A brief review of the Vibrio vulnificus detection methods will provide references for the early diagnosis and timely treatment of Vibrio vulnificus infection.Keywords:Vibrio vulnificus; detection technology; polymerase chain reaction淡水和海水的水体中含有多种天然存在的微生物，水产品在捕获和加工过程中也会受到污染而携带致病菌。
在实验室检测核酸的方法
在实验室检测核酸的方法
实验室中常用的检测核酸的方法有以下几种：
1. PCR（聚合酶链式反应）：PCR是一种常用的核酸检测技术，主要用于扩增目标DNA序列。
通过PCR可以在短时间内扩增出大量目标DNA，使其能够被进一步分析和检测。
2. 实时荧光定量PCR（qPCR）：qPCR结合了PCR和荧光探针技术，可以在PCR的同时进行定量检测。
通过检测PCR反应过程中荧光信号的强度，可以实时监测并定量目标核酸的数量。
3. 等温扩增：等温扩增是一种在常温或接近常温下进行的核酸扩增方法。
常用的等温扩增方法包括LAMP（循环介导等温扩增）和RPA（递归螺旋扩增）等。
等温扩增技术具有快速、敏感、简便等特点。
4. 测序技术：测序技术是一种用于确定核酸序列的方法。
常用的核酸测序技术包括Sanger测序和新一代测序技术（如Illumina测序、Ion Torrent测序等）。
这些技术可以通过对目标核酸序列进行测序，实现对其序列信息的分析和检测。
5. Northern blot：Northern blot是一种利用电泳分离和检测RNA的方法。
通过将RNA样品经过电泳分离后，利用亲和性探针进行靶向检测，可以确定目标RNA在样品中的存在和相对数量。
这些方法在实验室中广泛应用于核酸的检测和分析，并且可以根据具体需求进行选择和组合使用。
定时定量PCR
实时定量PCR （Real-time quantitative PCR ）[ 文章来源： | 文章作者： | 发布时间：2007-09-14| 字体： [大 中 小]实时定量PCR （Real-time quantitative PCR ）Vs 普通PCR ，RT-PCR 的优势采用封闭的检测模式，因此扩增产物导致污染的可能性比普通PCR 要小得多 。
扩增产物的检测在PCR 扩增过程中同时进行，并且数据的采集、分析全部由仪器自动完成，因此整个检测所需的时间比普通PCR 要节省许多。
检测模式功能强大，具备定性、定量、突变、多项目等检测功能。
而普通PCR 要完成上述项目需采用不同的技术平台。
进行定量检测时，其定量线性范围（5-6 logs ）比普通PCR （2-3 logs ）要宽得多。
Real-time 定量PCR 仪是在普通PCR 仪的基础上再配备一个激发光源和荧光信号检测系统的装置。
通过PCR 反应的数学函数关系，加入标准品，可以对待测样品中的目标基因进行准确定量。
Real-Time PCR热循环仪（PCR 仪）荧光检测系统计算机及软件系统回顾：PCR基本原理PCR是在试管中进行DNA复制反应，基本原理与体内相似在模板、引物、4种dNTP和耐热DNA聚合酶等存在的条件下，特异扩增位于两段已知序列之间的DNA 区段的酶促合成反应。
基本步骤变性：加热使双链DNA变为单链退火：降温使引物和互补模板在局部形成杂交链延伸：耐热DNA聚合酶按5′→3′方向催化以引物为起始点的延伸反应示意图Real-time定量PCR仪是在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
在real-time Q-PCR中，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号，随着反应时间的进行，监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲线。
在PCR反应早期，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，为了便于对所检测样本进行比较，在real-time Q-PCR反应的指数期，首先需设定一定荧光信号的域值，一般这个域值(threshold)是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号，荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。
realtimePCR和RT-PCR详解及其区别要点
real-time PCR技术的原理及应用摘要：一、实时荧光定量PCR原理（一）定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
（二）实时原理 1、常规PCR技术：对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析无法对起始模板准一、实时荧光定量PCR原理（一）定义：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
（二）实时原理1、常规PCR技术：对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测。
2、实时定量PCR技术：利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析3、如何对起始模板定量？通过Ct值和标准曲线对起始模板进行定量分析.4、几个概念：（1）扩增曲线：（2）荧光阈值：（3）Ct值：CT值的重现性：5、定量原理：理想的PCR反应： X=X0*2n非理想的PCR反应： X=X0 (1+Ex)nn：扩增反应的循环次数X：第n次循环后的产物量X0：初始模板量Ex：扩增效率5、标准曲线6、绝对定量1）确定未知样品的 C(t)值2）通过标准曲线由未知样品的C(t)值推算出其初始量7、DNA的荧光标记：二、实时荧光定量PCR的几种方法介绍方法一：SYBR Green法（一）工作原理1、SYBR Green 能结合到双链DNA的小沟部位2、SYBR Green 只有和双链DNA结合后才发荧光3、变性时，DNA双链分开，无荧光4、复性和延伸时，形成双链DNA， SYBR Green 发荧光，在此阶段采集荧光信号。
PCR反应体系的建立及优化:1、SYBR Green 使用浓度:太高抑制Taq酶活性，太低，荧光信号太弱，不易检测2、Primer：引物的特异性高，否则扩增有杂带，定量不准3、MgCl2的浓度:可以降低到1.5mM,以减少非特异性产物4、反应Buffer 体系的优化5、反应温度和时间参数:由酶和引物决定6、其他与常规PCR相同（二）应用范围1、起始模板的测定；2、基因型的分析；3、融解曲线分析：可以优化PCR反应的条件，对常规PCR有指导意义，如对primer的评价；可以区分单一引物、引物二聚体、变异产物、多种产物。
重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌
重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是一种用于快速检测病原微生物的新型分子生物学方法。
它具有快速、高灵敏度、高特异性和简便操作的特点，因此在医学、环境监测、食品安全等领域得到了广泛的应用。
本文将重点介绍RPA技术在检测创伤弧菌中的应用。
创伤弧菌是一种常见的致病菌，它可以引起人类和动物的创伤性感染。
在海产品加工和贮藏过程中，创伤弧菌也可能引起食品安全问题。
对创伤弧菌的快速检测具有重要的意义。
传统的创伤弧菌检测方法主要包括细菌培养、PCR等，这些方法需要较长的时间和复杂的实验操作，限制了其在实际应用中的效果。
在RPA技术的检测过程中，选择合适的靶标基因至关重要。
通过文献调研和实验验证，发现创伤弧菌的16S rRNA基因是一种理想的靶标基因。
这一基因在不同菌株中具有高度的保守性，可以有效地区分创伤弧菌与其他细菌，在RPA技术中得到了广泛的应用。
在RPA技术中，关键的试剂是RPA核酸酶和RPA聚合酶。
RPA核酸酶能够在低温下识别和结合靶标DNA的特定区域，并在其3'-5'方向上具有核酸内切酶活性，用于切割DNA链。
RPA聚合酶则具有DNA合成酶的活性，能够在RPA核酸酶的辅助下完成对目标DNA的等温扩增。
这些试剂的优异性能使得RPA技术在创伤弧菌的快速检测中得到了成功的应用。
RPA技术还可以与便携式核酸检测设备结合，实现真正的快速检测。
这些设备体积小巧，操作简单，能够在不同的实验场景中实现对创伤弧菌的快速检测，尤其适合于海产品加工环节和食品安全监测等领域。
RPA技术在创伤弧菌的快速检测中具有重要的应用前景。
它能够快速、高效地实现对创伤弧菌的检测，具有较高的特异性和灵敏度。
随着RPA技术的不断发展和完善，相信它将在创伤弧菌的快速检测领域发挥出更大的作用，为食品安全和公共卫生做出更大的贡献。
【2000字】。
常规pcr与实时荧光定量pcr(qpcr)技术敏感性比较
50卷第1期Vol.50,No.1青海畜牧兽医杂志Chinese Qinghai Journal of Animal and Veterinary Sciences72/2020常规PCR与实时荧光定量PCR(qPCR)技术敏感性比较郭文涛1,徐爱玲彳，加洛'，冯建萍打米宝玉打周奎章I,李千打吴海生打栗冬梅2(1.青海省地方病预防控制所，西宁811602； 2.中国疾病预防控制中心传染病预防控制所感染性疾病诊治协同创新中心，北京102206)摘要:对70匹采自青海省海南藏族自治州兴海县和贵南县喜马拉雅旱獭体表寄生蚤2科3属3种,包括斧形盖蚤(Callopsylla dolabris)、谢氏山蚤(、人蚤(PuZe%ZrriEans)进行巴尔通体检测，并对11个阳性样品进行常规PCR和实时荧光定量PCR(qPCR)的敏感性比较。
通过常规PCR反应产物和qPCR反应产物琼脂糖凝胶电泳分析，发现qPCR检测敏感性高于常规PCR O此项技术的应用将对巴尔通体感染的早期快速诊断、监测和流行病学调査等研究提供有效方法。
关键词:实时荧光定量PCR(qPCR)；巴尔通体;蚤类;青海中图分类号:R282.7文献标识码:A文章编号：1003-7950(2020)01-0007-03 Comparing Sensitivity of Conventional PCR and Real一time Fluorescence Quantitative PCR(qPCR)GUO Wen-tao et al(Qinghai Institute of Endemic Disease Prevention and Control,Xining811602) Abstract：70Himalayanl marmot body parasitic fleas,belonging 2families,3genera and three species,including the hatchet cover fleas(Callopsylla dolabris),Xie Shishan fleas(Oropsylla silantiewi)and flea(Pulex ini-tans)were collected from Xinghai county,and Guinan county of Hainan Tibetan autonomous prefecture in Qinghai Province,and Bartonella test was performed,and the sensitivity of11positive samples was compared by conventional PCR and real-time fluorescence quantitative PCR(qPCR).Agarose gel electrophoresis was used to analyze the product of conventional PCR reaction and qPCR reaction.The results showed that the sensitivity of qPCR was higher than that of conventional PCR.The application of this technique will provide an effective method for the early diagnosis,surveillance and epidemiological investigation of bartonella infection.Key words:Real-time fluorescence quantitative PCR(qPCR)；Bartonite；Flea；Qinghai巴尔通体感染属于人兽共患的自然疫源性疾病，小型兽类是巴尔通体最主要的自然宿主之一，目前从啮齿动物中分离到的巴尔通体种类最多，可以说是这种细菌最大的储存宿主群。
实时定量PCR法快速检测水产品中的副溶血性弧菌
副溶血性弧菌又称肠炎弧菌ꎬ是一种广泛分 布在海洋和水产品中的嗜盐性革兰氏阴性菌ꎬ在 腌肉、咸菜等高盐制品中也可检出[１] ꎮ 若含有该
菌的水产品未煮熟或处理不当ꎬ食用后极容易引 起食物中毒[２] ꎮ 因此ꎬ快速高效地检测水产品中 的副溶血性弧菌[３] ꎬ对于及时诊断和降低此类风
收稿日期:２０１８￣１２￣０７ 基金项目:浙江省重大专项(２０１５Ｃ０２０３９ꎬ２０１５Ｃ０２０２２) ꎻ国家自然科学基金(３１６０６４４９ꎬ３１８７１７７５) ꎻ浙江省自然科学基金( ＬＹ１６Ｃ２００００２ꎬ ＬＱ１８Ｃ２００００４) 作者简介:陈琳(１９８５—) ꎬ女ꎬ黑龙江牡丹江人ꎬ博士研究生ꎬ研究方向为食品生物技术ꎮ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｃｈｅｎｌｉｎｌｕｃｋｙ＠ １６３. ｃｏｍ ∗通信作者ꎬ顾青ꎬＥ￣ｍａｉｌ: ｇｕｑｉｎｇ２００２＠ ｈｏｔｍａｉｌ. ｃｏｍ
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ ｉｎ ｓｅａｆｏｏｄ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ＰＣＲ ａｓｓａｙ
ＣＨＥＮ Ｌｉｎ１ꎬ ２ ꎬ ＺＨＯＵ Ｑｉｎｇｑｉｎｇ１ ꎬ ＧＵ Ｑｉｎｇ１ꎬ∗ ꎬ ＬＩ Ｐｉｎｇ１ (１. Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｆｏｒ Ｆｏｏｄ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｐｒｏｖｉｎｃｅꎬ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｇｏｎｇｓｈａｎｇ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００１８ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２. Ｈａｎｇｚｈｏｕ Ｗａｈａｈａ Ｇｒｏｕｐ Ｃｏ. ꎬ Ｌｔｄ. ꎬ Ｈａｎｇｚｈｏｕ ３１００１８ꎬ Ｃｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ ｉｓ ａ ｆｏｏｄ￣ｂｏｒｎｅ ｐａｔｈｏｇｅｎꎬ ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｅ ｆｏｏｄ ａｎｄ ｃａｕｓｅ ｓｅｒｉｏｕｓ ａｎｄ ａｃｕｔｅ ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｉｔｉｓ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｂｅｉｎｇｓ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ａ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ ( ＰＣＲ) ａｓｓａｙ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ ｉｎ ａｑｕａｔｉｃ ｐｒｏｄｕｃｔｓ. Ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡ ( ＲＡＰＤ) ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ ｔｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ ｓｐｅｃｉｅｓ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＤＮＡ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｏｆ Ｖ. ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓꎬ ａｎｄ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｉｍｅｒｓ ｗｅｒｅ ｄｅｓｉｇｎｅｄ. Ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ Ｖ. ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ ｉｎ ２０ ａｑｕａｔｉｃ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｎ ｓａｌｅ. Ｉｔ ｗａｓ ｓｈｏｗｎ ｔｈａｔ ６ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｕｔ ｏｆ ２０ ｗｅｒｅ ｃａｒｒｙｉｎｇ Ｖ. ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ. Ｔｈｅ ｍｉｎｉｍｕｍ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｗａｓ ５０ ｆｇ ＤＮＡ. Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄｓ ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ ｉｎ ｎａｔｉｏｎａｌ ｓｔａｎｄａｒｄꎬ ｔｈｅ ｐｒｏｐｏｓｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｗａｓ ｓｗｉｆｔｅｒ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ Ｖ. ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ ｉｎ ａｕｑａｔｉｃ ｐｒｏｄｕｃｔｓ. Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｖｉｂｒｉｏ ｐａｒａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓꎻ ｒａｎｄｏｍｌｙ ａｍｐｌｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｃ ＤＮＡꎻ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ
重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌
重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌创伤弧菌是一种致病菌，广泛存在于海洋和淡水环境中。
它是引起人类和动物创伤弧菌病的主要病原菌之一。
为了快速、准确地检测创伤弧菌的存在，科学家们开发了一种高效的检测技术，即重组酶聚合酶扩增技术（RPA）。
RPA是一种基于离子交换的等温扩增技术，能够在较低温度下（通常为37-42°C）进行特定DNA序列的快速扩增。
相较于传统的聚合酶链式反应（PCR），RPA不需要高温环境和复杂的设备，具有快速、高效、便携和易于操作等优点。
RPA技术在迅速诊断病原微生物方面具有广阔的应用前景。
在创伤弧菌的检测中，RPA技术首先需要合成与创伤弧菌特定DNA序列互补的引物和探针。
然后，将待检样品中的DNA与引物和探针一起加入反应体系中，通过核酸杂交作用，引物和探针与创伤弧菌DNA特定序列结合。
接下来，通过加入适当的酶，创伤弧菌的DNA序列可以被逆转录生成相应的RNA。
随后，重组酶将生成的RNA片段作为模板进行扩增，形成大量的特定DNA序列产物。
在反应过程中，RPA技术还可以通过荧光标记的引物和探针来实时监测扩增过程。
一旦创伤弧菌存在，就会产生特定的荧光信号，可以使用便携式荧光仪来检测。
还可以通过便携式离心机和便携式纯化系统快速纯化产物，便于进一步的分析和检测。
RPA技术的快速性和灵敏性使其成为创伤弧菌的理想检测方法。
与传统的培养和PCR方法相比，RPA技术可以在短时间内得到结果，且不受培养和PCR反应的限制。
RPA技术还具有高度的特异性和准确性，可以避免误诊和漏诊。
RPA技术在创伤弧菌的快速检测和流行病学调查中具有重要的应用价值。
重组酶聚合酶扩增技术（RPA）是一种基于离子交换的等温扩增技术，适用于快速、准确地检测创伤弧菌的存在。
该技术具有快速、高效、便携和易于操作等优点，可在短时间内获得结果。
RPA技术的应用将为创伤弧菌病的检测和流行病学调查提供有力支持。
重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌
重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是一种新型的核酸扩增技术，它具有快速、灵敏、简便、特异等优点，逐渐成为分子生物学研究和临床诊断的重要工具。
创伤弧菌是一种引起人类创伤性溃疡病的病原菌，其早期诊断对病情的治疗和控制至关重要。
本文将结合RPA技术的特点和创伤弧菌的检测需求，探讨RPA技术在创伤弧菌检测中的应用。
一、背景介绍创伤弧菌是一种革兰氏阴性厌氧菌，可引起创伤性溃疡病，其主要传播途径为接触海水或海产品。
创伤弧菌感染后症状严重，且容易发生败血症，对感染者的生命安全造成威胁。
在感染创伤弧菌后，早期的诊断和治疗是十分重要的。
传统的创伤弧菌检测方法主要包括培养法和PCR技术，但这些方法在时间、灵敏度和特异性上存在一定的局限性。
迫切需要一种新型的检测技术，能够快速、准确地检测创伤弧菌的存在。
二、RPA技术的原理及特点RPA技术是一种基于酶的核酸扩增技术，其原理类似于PCR技术，但具有更快速、更简便的优点。
RPA技术的主要特点包括以下几点：1. 快速：RPA技术可以在常温下完成核酸扩增过程，通常只需要15-30分钟即可得到扩增产物。
2. 灵敏：RPA技术对于目标序列的检测具有较高的灵敏度，可以检测到极低浓度的核酸。
3. 特异：RPA技术在温度和时间上都具有高度特异性，不易受到非特异性扩增的影响。
4. 简便：RPA技术不需要复杂的设备和条件，只需简单的反应体系即可完成扩增反应。
RPA技术具有快速、灵敏、特异和简便等优点，适合用于临床快速检测和野外应用。
三、RPA技术在创伤弧菌检测中的应用基于RPA技术的创伤弧菌检测方法可以分为两种：基因组DNA检测和mRNA检测。
1. 基因组DNA检测创伤弧菌的基因组DNA检测可以通过RPA技术快速、灵敏地实现。
具体步骤如下：(1) 样品预处理：将样品（如患者组织、粪便、水样等）进行简单的提取处理，获得其中的创伤弧菌DNA。
(2) 反应体系：将提取得到的DNA与RPA反应体系（包括引物、酶、缓冲液等）混合均匀，接入反应管中。
食品微生物快速检测常用方法-PCR技术对海产品保藏过程中的菌(精)
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谢 谢
PCR扩增 PCR特异性扩增的关键在于引物。 PCR参数的优化选择：退火温度、PC R的 特异性、dNTP、引物、Mg2+、DNA多聚酶等， 其中退火温度是很重要的因素。
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食品营养与检测专业教学资源库
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PCR 技 术 对 海 产 品 保 藏 过 程 中 的 菌 相 分 析
PCR扩增产物的检测 常用的PCR扩增产物检测方法为琼脂糖凝胶 电泳法。电泳完毕再经染色后，在紫外灯下观 察结果。DNA片段大小可通过与DNA分了量标 准对比而估计出。
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食品营养与检测专业教学资源库
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PCR 技 术 对 海 产 品 保 藏 过 程 中 的 菌 相 分 析
核酸的提取 从样品中浓集到目的微生物后，必须经过 适当处理，使其核酸暴露出来，才能用于PCR 扩增。 处理的方法有加热、反复冻融和化学试剂 裂解等。
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食品营养与检测专业教学资源库
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PCR 技 术 对 海 产 品 保 藏 过 程 中 的 菌 相 分 析
食品微生物快速检测常用方法PCR技术对海产品保藏过程中的菌相分析
食品营养与检测专业教 学资源库
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PCR技术检测海产品中 微生物的原理
PCR技术检测海产品中微生 物渡页
PCR技术检测海产品中微生物的原理
一
食品营养与检测专业教 学资源库
PCR扩增DNA，其选择性体现在引物上，因为引 物决定了扩增区域和扩增片段长度。从理论上说，在 细菌DNA高度保守区内设计引物，则所有细菌都可有 片段扩出；如果在细菌属特异性区域内设计引物，则 只有本属细菌能被扩增；如果在种特异性区域内设计 引物，就只有该种细菌有特定片段扩出。那么反过来 ，可以根据已知的细菌遗传信息，设计出某种特定引 物，进行PCR。如果有特定长度的扩增产物出现，则 说明扩增模板是这类细菌的DNA，亦即有这类细菌存 在，反之则无。
pcr在水产养殖中的应用
pcr在水产养殖中的应用PCR（Polymerase Chain Reaction）是一种在生物学领域中广泛应用的分子生物学技术，它的应用不仅局限于医学和生命科学领域，也在水产养殖中发挥着重要作用。
PCR技术是一种通过扩增DNA片段的方法，它可以在短时间内从少量DNA样本中产生大量的特定DNA片段。
在水产养殖中，PCR 技术可以用于鉴定、检测和监测水生生物的种群结构、遗传多样性以及疾病感染等方面。
PCR技术在水产养殖中的应用之一是鱼类种群遗传多样性的研究。
通过PCR技术，可以选择特定的遗传标记（如微卫星标记、SNP 等），对不同鱼类种群的遗传多样性进行分析。
这对于保护和管理鱼类资源、制定合理的养殖策略具有重要意义。
通过PCR技术，可以了解不同种群之间的遗传差异，评估鱼类种群的遗传多样性水平，从而为种群保护和遗传改良提供科学依据。
PCR技术还可以用于水生动物疾病的快速检测。
水产养殖中常常会遇到各种疾病，如细菌感染、病毒感染等。
传统的疾病检测方法往往需要较长的时间和较大的样本量，而PCR技术可以在短时间内快速、准确地检测出病原体的存在。
通过PCR技术，可以在早期发现病原体的感染，及时采取相应的防控措施，减少疾病对养殖产业的损害。
PCR技术还可以用于监测水产养殖环境中的病原体。
水产养殖环境中的水质、饲料等因素可能存在潜在的病原体，通过PCR技术可以对这些病原体进行快速检测和监测。
这对于及时发现和控制病原体的传播具有重要意义，可以减少疾病在养殖系统中的传播风险，提高养殖效益。
PCR技术还可以应用于水产养殖中的品种鉴定和基因组学研究。
通过PCR技术，可以检测和鉴定水产养殖中的不同品种，保证种苗的品质和纯度。
同时，PCR技术还可以用于研究水产养殖动物的基因组学特征，探索其基因调控机制和遗传变异等方面。
PCR技术在水产养殖中具有广泛的应用前景。
它可以用于鱼类种群遗传多样性研究、疾病的快速检测、环境病原体的监测以及品种鉴定和基因组学研究等方面。
PCR-微阵列法检测沿岸海水致病性创伤弧菌及危害评估
PCR-微阵列法检测沿岸海水致病性创伤弧菌及危害评估郑泽军;李永君;魏晓娜;朱琳;黄熙泰
【期刊名称】《海洋环境科学》
【年(卷),期】2009(28)2
【摘要】本研究建立了PCR和寡核苷酸探针阵列杂交技术,方便、快速、准确地检测了海水中创伤弧菌的存在状况。
本项检测针对创伤弧菌的两个重要毒性基因vvhA,viuB,其中viuB可以对普通环境株和致病株进行区分。
渤海湾沿岸6个采样点,共60个沿岸海水样本被用于这一方法的评估,得到了这些采样点所在区域创伤弧菌的分布,毒性株的存在状况的信息。
【总页数】4页(P211-214)
【关键词】创伤弧菌;海水;viuB;vvhA
【作者】郑泽军;李永君;魏晓娜;朱琳;黄熙泰
【作者单位】南开大学生命科学学院生化与分子生物学系;南开大学环境科学与工程学院
【正文语种】中文
【中图分类】P734.4
【相关文献】
1.Western斑点印迹法检测致病性副溶血弧菌 [J], 杨靖亚;张建;赵勇;陶妍;陆小凡;晁若瑜
2.多重实时荧光PCR法快速检测水体中致病性弧菌的研究 [J], 周冬根;孙大为;倪
敏君;王燕;张升;翟敏
3.PCR-荧光法与 PCR-膜杂交法在检测 HPV-DNA 中的比较分析 [J], 赵一琳;崔映红;黄少芝
4.PCR-核酸薄膜层析法检测创伤弧茵 [J], 石琰璟;王建广
5.建立PC-PCR法快速、半定量检测养殖环境和水产动物中的致病性副溶血弧菌[J], 马妍;李健;王群;何玉英;王斌
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重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌
重组酶聚合酶扩增技术(RPA)检测创伤弧菌重组酶聚合酶扩增技术(RPA)是一种用于分子生物学检测的快速、敏感和特异的方法。
本文将介绍RPA技术在创伤弧菌检测中的应用，并探讨其在临床和实验室诊断中的潜在作用。
创伤弧菌是一种常见的水生细菌，广泛分布于海水、淡水和土壤中。
它可以引起人类和动物的感染，导致创伤性溶血性水疱病和脓肿等疾病。
尤其在温暖的海洋环境中，创伤弧菌的感染率较高，给渔民、游泳者和海产品加工者带来了潜在的危险。
对创伤弧菌的快速、准确检测显得尤为重要。
传统的创伤弧菌检测方法主要包括培养和PCR技术。
这些方法存在一些限制，比如需要复杂的实验操作、长时间的分析过程和对设备和培养条件的严格要求。
为了更好地应对创伤弧菌感染的检测需求，研究人员开始探索新的检测方法，其中RPA技术便成为了备受关注的一种选择。
RPA技术是一种新型的核酸扩增技术，能够在较短的时间内快速放大细菌DNA，并具有高度的特异性和敏感性。
其操作步骤相对简单，无需复杂的温度循环装置，仅需要在一定的恒温条件下进行反应即可。
在RPA反应中还可以添加引物和探针，使得该技术更具多样性和灵活性。
利用RPA技术进行创伤弧菌的检测有许多优势。
RPA技术能够在短时间内迅速扩增创伤弧菌的DNA序列，从而提供快速的检测结果。
RPA技术对环境条件的要求较低，能够在简单的恒温设备下进行反应，适用于野外环境或简易实验室条件下的快速检测。
RPA技术具有高度的特异性和敏感性，能够准确鉴定创伤弧菌的存在，并且不易受到其他杂质的干扰。
除了以上的优势外，RPA技术在创伤弧菌检测中还具有一些潜在的应用价值。
RPA技术可以作为快速诊断创伤弧菌感染的辅助手段，在临床急救和医疗救护中起到关键作用。
RPA技术还可以用于海产品和水产养殖场的监测，帮助及时发现潜在的创伤弧菌污染，保障食品安全和养殖环境的卫生。
在实际的应用中，RPA技术也需要一定的配套设备和试剂。
目前市面上已经有不少公司推出了相关的RPA检测试剂盒和便携式检测设备，为RPA技术在创伤弧菌检测中的应用提供了便利的条件。
用PCR方法快速检测水产品中的副溶血弧菌
用PCR方法快速检测水产品中的副溶血弧菌
寇运同;马洪明;刘晨光
【期刊名称】《海洋科学》
【年(卷),期】2002(026)009
【摘要】建立了水产品中副溶血弧菌快速、敏感、特异的PCR检测方法.选择的引物具有良好的副溶血弧菌的种特异性.对人工污染在冷冻水产品中副溶血弧菌的检测低限是12～21CFU/10g,对其增菌液的检测低限是7600～9100CFU/ml,每PCR 反应体系的检测低限为91～109CFU.对400份自然污染样品的检测结果显示,PCR 方法的检测结果同常规培养法的结果完全相符.
【总页数】5页(P66-69,封三)
【作者】寇运同;马洪明;刘晨光
【作者单位】青岛出入境检验检疫局食品实验室,266002;青岛海洋大学,266003;青岛海洋大学,266003
【正文语种】中文
【中图分类】S9
【相关文献】
1.水产品中的副溶血弧菌和霍乱弧菌双重荧光定量PCR快速检测方法的建立 [J], 胡兴娟;王淑娜;周向阳;沈飚;贝文联;朱应伟
2.用FQ-PCR方法快速检测水产品中副溶血弧菌 [J], 焦红;王方金;程刚;翁文川;王伟毅;谢钧宪
3.利用环介导等温扩增技术快速检测水产品中的副溶血弧菌 [J], 徐芊;孙晓红;赵勇;
潘迎捷
4.食品中副溶血弧菌荧光定量PCR方法快速检测 [J], 翁文川;焦红;王方金;程刚;王伟毅;谢钧宪
5.一种快速检测副溶血弧菌的PCR方法 [J], 李志峰;聂军;陈义忠;戴迎春;李建栋;吴彩云
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反应 性 。
１１ 材 料 ．
鱼、 、 虾 贝类 等海 产 品 以及 创 伤 弧 菌标
准 阳性 菌株 ， 由北京 市 出入境检 验 检疫局 提 供 。 均 １２ 引 物 引 ｖ ｈ 基 因上 一 段 ５ ９ｂ ｖＡ １ ｐ的 序列 Ｐ Ｒ 引 物序 列 上 Ｃ
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中 国兽 医杂 志 ２ １ ０ ０年 （ ４ 第 ６卷 ） ８期 第
７ ３
Ｐ Ｒ 与 Ｒｅ ｌ ｉ Ｃ 方 法 Ｃ ａ— ｍｅＰ Ｒ ｔ 检 测 海 产 品创 伤 弧菌 的 比较
０ ５ｔ 超纯 水 ９ｔ 模 板 １ Ｌ， 行扩 增 。 ． Ｌ， ｔ Ｌ， ｔ 进 １ ６ 灵 敏 度 比较 取 两 份过 夜 培 养 的标 准 菌液 各 ． １ｍＬ， 别 以 １ ～ １ 梯 度稀 释 。一 份 采用 煮 沸 分 Ｏ Ｏ 法 提取 ＤＮＡ， 别 进 行 Ｐ Ｒ 和 Ｒ ａ ｔ Ｃ 检 分 Ｃ ｅｌｉ Ｐ Ｒ — ｍｅ 测， 以确 定检 测 限 。另 一份 做 相 应 的菌 落计 数 以定
徐素惠 ，曾 静 ，除 守 建 ，程 刚 ，赵 立 红
（ ． 国农 业 大 学 动 物 医学 院 ， 京 海 淀 １ ０ ９ ； ． 京 市 出 入境 检 验 检疫 局 朝 阳 分 局 ， 京 朝 阳 １ ０ ２ １中 北 ０ １３ ２ 北 北 ０ ０ ６）
中分 类 图号 ： ９ ７ １ ￥ ４ ． ２
１ ８ 待检 样 品 的检 测 分别 用 Ｐ Ｒ 和 Ｒ ａ ｔ ． Ｃ ｅｌ ｉ — ｍｅ Ｐ Ｒ对 １ ６ 待检 海产 品样 品 进 行检 查 ， Ｃ ９份 确定 其 实
用性 。
２ 结 果
２ １ 灵 敏 度 从 图 １和 图 ２可 知 ， Ｃ 的检 查 限 ． Ｐ Ｒ 为 １ 一 可 检 出 菌 落 数 为 ３ ５ Ｃ Ｕ／ Ｏ， ７ Ｆ ｍＬ， ａ— ｍｅ Ｒｅｌ ｉ ｔ Ｐ Ｒ检查 限达 １ ～， Ｃ Ｏ 可检 出菌 落数 为 ２ Ｆ ｍＬ １Ｃ Ｕ／ 。
Ｄ ＮＡ 为 模 板 进 行 扩 增 ， 应 体 系 为 ： ０×Ｂ ｆ ｒ 反 １ ｕｆ ｅ
２ ５Ｆ ｄ ． Ｌ；ＮＴＰ ２ Ｌ； 下 游 引 物 各 １ Ｌ； ａ 上 Ｔ ｑ酶 ０ １Ｆ 超 纯 水 １． ｔ； 板 １ Ｌ 反 应 条 件 ９ ． Ｉ ； ７ ４ｐ 模 Ｌ 。 ４℃ 预 变 性 ３ｍｉ，４℃ 变 性 ４ ，Ｏ℃ 退 火 ４ ， ２℃ ｎ９ ５Ｓ６ ５Ｓ ７
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游为 ： ｔ ｃａｇｃｇｔｇｇａｔ ｃ ｔ－ 荧 光探 针 ： ５ ｔ ｃ ｔ ａ ｃ ａ ｇｔ ３； ａ ａ ｇ
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文 献标 识码 ： Ｂ
文 章 编 号 ：５ ９６ ０ （ ０ ０ ０ — ０ ３０ ０ ２ — ０ ５ ２ １ ） ８０ ７ — ２
创伤 弧菌 自然 生存 于近 海和海 湾 的海水 和 海底 沉积 物 中 ， 其分 布 与海水 的温 度和盐 度 密切 相关 口 。 ］ 进食 被创 伤弧 菌污 染 的食 物后 ， 伤 弧菌 能 迅 速 通 创 过肠 黏膜 侵入 血 液 ， 起 原 发性 败 血 症 。据 报 道 美 引 国每 年有 ２ ￣４ ０ ０个 原发性 创 伤败 血症 病例 ， 死亡 率
食 品安 全具 有重 要意 义 。 １ 材 料 与 方 法
性样 品 和超纯 水 空 白对 照 ， 以及近 源菌 （ 与创 伤弧 菌 同属不 同种 ， 如副 溶 血 弧菌 、 乱 弧 菌 ） 远源 菌 （ 霍 、 与
创伤 弧 菌不 同属 ， 大肠 杆 菌 、 黄 色 葡 萄球 菌 ） 如 金 共 ６ Ｏ株进 行 Ｐ Ｒ和 Ｒｅｌ ｉ Ｃ Ｃ ａ ｔ Ｐ Ｒ反应 ， － ｍｅ 检测其 交叉
量， 比较 两 种 方 法 的敏 感 度 。
高达 ５ ， 佛罗 里达 创伤 弧菌 感 染 是 导致 食 源 性 ０ 在
死 亡 的 主 要 原 因口 ］ 我 国 近 年 来 也 有 相 关 报 。。
１ ７ 特 异性 试验 ．
对标 准 阳性 菌株 和阳性样 品 ， 阴
道［ ］ 因此加 强对 海产 品 中创伤 弧菌 的检查 对 保 证 ４，
。
１ ３ 样 品处 理 ．
分 别 将 标 准 菌株 和经 高 速 匀 浆 处
理 待检 海 产 品样 本 ， 碱 性 蛋 白胨 水 （ ｗ ） 在 ＡＰ 中增
殖 ，７℃ ， ６ １ ， 煮 沸 法 提 取 Ｄ ３ １ ～ ８ｈ 用 ＮＡ， ３０ ０ １ ０
ｒｍｉ ／ ｎ离心 ５ｍｉ ， 上 清液备 用 。 ｎ 取 １４ 细 菌 Ｄ ． ＮＡ 的 Ｐ Ｒ扩 增 以 提取 的创 伤 弧菌 Ｃ