模块三 药物检查技术—薄层色谱法(修改)

3.橡皮膏
4.橡皮管
（2）硬板的制备
硬板：吸附剂加粘合剂制成的板 常用的粘合剂：煅石膏（Ｇ）
机械强度差，易脱落，但不易腐蚀源自羧甲基纤维素钠（CMC-Na）
机械强度好，不易脱落，但易腐蚀
a、倾注法： 硅胶G或氧化铝G，直接加水调成糊状
硅胶或氧化铝，加羧甲基纤维素钠水溶液调成糊状
倒在玻璃板上
均匀铺开、振荡、晾干、活化、置干燥器中备用。
（3）同系物中，分子量越大，极性越小，被吸附力越弱。
常见官能团极性顺序：
烷烃<烯烃<醚类<硝基化合物<酯类<酮类
<醛类<硫醇<胺类<醇类<酚类<羧酸类
（二）展开剂（流动相）的选择
选择原则： 被分离成分极性大，展开剂极性大 被分离成分极性小，展开剂极性小
硅胶、氧化铝薄层：展开剂的极性越大，其展开能力越强， 化合物在色谱中移动的速度就越快，表现为Rf 增大。
硅胶和氧化铝含水量越高，吸附活性越弱。 只要在110℃左右加热，这些“自由水” 就能被可逆性 地除去。利用这一原理可以对吸附剂进行活化（去水）和脱 活化（加水）处理，以控制吸附剂的活性。
被分离物质极性与吸附能力的关系 硅胶、氧化铝薄层：被分离物质极性越大，越易被吸附。
一般规律：
（1）官能团极性越大，整个分子极性越大，越易被吸附； （2）形成分子内H键时，被吸附力减弱；
样点直径：2-4mm 点间距离：1.5-2.0cm
2、点样
（3）点样方法： 划线、样品记号点、点样器
动作要轻， 毛细管或点样器不能混用， 斑点大小适当，可多次点样。 注：
平头50ul微量点样器 全自动点样仪
（三）展开
展开缸（色谱缸）
3、展开
（1）展开方式： a、近水平展开 特点：速度快、适用于软板的展开。
化铝CMC-Na板、硅胶GF<[254]> 、硅胶GF<[356]>
（二）点样
溶剂前沿
（展开距离）
8~15cm
原 点 起 始 线
≥5mm
≥8mm
1~1.5cm
(点样位置)
展 开 剂 液 面
（1）样品溶液的制备：
怎样选择溶剂？
水可以用吗？
（2）点样量： 与薄层板的关系 太多太少的影响
点样基线：距底边2.0cm
● 碱性氧化铝：适用于碳氢化合物、生物 碱以及其它碱性化合物的分离。 ● 中性氧化铝：应用最广，适用于醛、酮、 醌以及酯类化合物的分离。 ● 酸性氧化铝：适用于有机酸类的分离。
硅胶、氧化铝的含水量与活性级别
活性等级 氧化铝加水量 /% 硅胶加水量 /% I 0 0 II 3 5 III 6 15 IV 10 25 V 15 38
常用溶剂极性大小 石油醚＜环已烷＜四氯化碳＜苯＜甲苯 ＜乙醚＜三氯甲烷（ 氯仿）＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水
四、样品测定操作方法
(一) 薄层板的制作
薄层板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（纸浆、纤维素、硅胶、 中性氧化物、聚酰胺、多孔性玻璃粉，硅烷化键合硅胶等）均匀地涂在 在薄层板（玻璃板、金属板或弹性塑料板）上，干燥（110℃活化）后 即可使用。
二、比移值与相对比移值
（2）相对比移值Rs：为消除系统误差
原点到样品组分斑点中心的距离 Rs 原点到对照品斑点中心的距离
Rf<1, Rs不一定小于1。
三、薄层色谱中吸附剂与展开剂
（一）吸附剂（固定相）的选择
常用的吸附剂：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭和大孔吸 附树脂等。吸附剂的选择要合适，与流动相、被分离化合
3、展开
（1）展开方式： b、上行展开 过程：预饱和（滤纸贴于展开槽内侧）、展开、标记 溶剂前沿
（2）硬板的制备
b、平铺法：
过程：制板→振荡→晾干→活化→备用 优点：一次铺多块薄层板，简单易行。
1. 吸附剂薄层 2. 涂布器 4. 玻璃板 5. 玻璃夹板
3. 玻璃夹板
（2）硬板的制备
c、机械涂布法：
优点：简单方便、薄板厚度均匀、分离效果好。
手动涂布器
全自动涂布器
常用的薄层板：
软板：硅胶H板、氧化铝H板 硬板：常用的有硅胶G板、氧化铝G板、硅胶CMC-Na板、氧
特点：快速 灵敏（用量小） 高选择性（如同分异构体） 简便 显色方便 应用广泛：化合物的鉴别和少量化合物的分离 用于检测药品含量 药物合成中用于鉴别反应程度和监控反应历程 用于摸索高效液相的色谱条件
一、薄层色谱法的基本原理
一、吸附色谱分离原理
利用吸附剂对不同成分吸附力的大小及展开剂解吸附 作用的差异进行分离。 吸附牢的组分随展开剂移动慢，吸附弱的组分随展开 剂移动快，一段时后，组分被分离。
物不反应。
（1）硅胶：极性吸附剂，应用范围广
物理吸附为主，氢键吸附为辅
微酸性，不直接用于碱性成分的分离 机械强度好，适用于薄层色谱 吸附容量大，与羟基数目有关 常用硅胶的规格：硅胶H，硅胶G，硅胶GF254等
（2）氧化铝：a.极性吸附剂，较硅胶强。 b.物理吸附为主，氢键吸附为辅
c.微碱性，不直接用于酸类成分的分离
模块二
药物鉴别技术
——薄层色谱法
导入
薄层色谱法通常指以吸附剂为固定相的 一种液相色谱法。即将固定相在玻璃、金属 或塑料等光洁的表面上均匀地铺成薄层，试 样点在薄层的一端，流动相借毛细作用流经 固定相,使被分离的物质展开。
常用的薄层色谱法以吸附剂为固定相,属于吸附色 谱的范畴
2
薄层色谱是在平面上进行分离的一种方法，又叫平 面色谱法。通常将固定相(吸附剂)均匀地涂铺在表面洁 净的玻璃、塑料或金属板形成薄层，制成薄板，进行样品分离。
固定相:固体吸附剂
流动相:液体展开剂
二、比移值与相对比移值
（1）比移值Rf：
原点到斑点中心的距离 Rf 原点到溶剂前沿的距离
溶剂 前沿
Rf ( a )
a R c
f (b)
b c
起始线
a b
A B
c
Rf是薄层色谱法基本定性参数，一定条件时Rf为
定值，在0～1之间，可用范围Rf值在0.2～0.8之 间。组分极性越大，Rf越小,反之越大。
要求：玻璃板需光洁，否则吸附剂易脱落； 大小由需求决定。
13
1、薄层板的制备
薄层板分类和制法
软板的制备 硬板的制备 倾注法 平铺法 机械涂布法
（1）软板的制备
软板：直接将吸附剂铺在玻璃板上制成，不加粘合剂 要求：厚度→随分离要求而定，一般0.25～0.5mm 玻璃棒推动速度不宜过快、也不应停顿→影响厚度均一性 优点：方法简便、随用随铺、展开速度快。 缺点：吸附剂易脱落、只能用近水平展开，效果差。