1种快速检测小麦籽粒中脱落酸和生长素的方法
生长素和salkowski显色原理
生长素和salkowski显色原理生长素（Auxin）是一类植物激素，对于调控植物生长和发育具有重要作用。
在植物学研究和教学中，常常需要检测生长素的含量，Salkowski试剂显色法是一种常用的生长素定量检测方法。
一、Salkowski试剂显色原理：Salkowski试剂是由浓硫酸和碘化钾混合而成的，用于检测植物提取液中的生长素。
其显色原理基于生长素分子中的 Indole 结构与碘化物离子反应，形成紫色的化合物。
具体步骤如下：1. 生长素提取：首先，需要从植物组织中提取生长素。
通常采用丙酮或乙酸乙酯等有机溶剂对植物组织进行提取。
2. 加入Salkowski试剂：将提取液转移到含有Salkowski试剂的试管中。
在酸性条件下（通常使用浓硫酸作为酸化剂），生长素会与碘化物离子反应。
3. 显色反应：生长素中的 Indole 结构与碘化物离子结合后，会产生紫色的化合物，这种颜色变化可以用来定量分析生长素的含量。
4. 比色定量：使用分光光度计在特定波长（通常在520-530nm）下测量溶液的吸光度，吸光度与生长素的浓度成正比。
二、注意事项：反应条件：必须严格控制反应条件，特别是酸的浓度和反应时间，这直接影响到显色的效果和准确性。
安全操作：由于涉及浓硫酸等强酸，操作时应在通风柜中进行，并采取适当的安全措施。
仪器校准：使用分光光度计前，需要校准仪器，确保测量准确性。
标准曲线：进行生长素定量分析时，通常需要制备一系列已知浓度的生长素标准溶液，建立标准曲线，以便根据测量吸光度计算样品中的生长素含量。
Salkowski试剂显色法是一种经典且有效的生长素检测方法，但由于其操作复杂性和对实验条件要求较高，可能会限制其在某些实验室中的应用。
随着新技术的发展，如液相色谱-质谱联用（LC-MS）等技术，为生长素的定量分析提供了更为精确和方便的方法。
植物激素的测定方法
植物激素的测定方法植物激素是一类由植物自身合成并参与生长发育调控的活性物质，对植物的生长发育起着重要作用。
因此，准确测定植物激素的含量对于研究植物生长发育调控机制具有重要意义。
本文将介绍几种常用的植物激素测定方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是目前应用最广泛的植物激素测定方法之一。
该方法基于植物激素在高效液相色谱柱上的保留时间和峰面积，通过与已知浓度的标准品比较，可以计算出待测样品中植物激素的含量。
高效液相色谱法具有分离效果好、分析速度快、准确度高的优点，但需要专用的仪器设备，操作较为复杂。
二、气相色谱法（GC）气相色谱法是另一种常用的植物激素测定方法。
该方法通过将待测样品中的植物激素转化为易挥发的衍生物，然后在气相色谱柱上进行分离和定量分析。
气相色谱法具有测定灵敏度高、分离效果好的特点，但需要对样品进行预处理，并且对仪器的稳定性要求较高。
三、酶联免疫吸附法（ELISA）酶联免疫吸附法是一种常用的免疫学测定方法，也可以用于测定植物激素的含量。
该方法通过将植物激素与特异性抗体结合，然后再用酶标记的二抗进行检测，最后通过比色反应或发光反应来测定植物激素的含量。
酶联免疫吸附法具有操作简便、成本较低的优点，但需要特异性较好的抗体。
四、放射免疫测定法（RIA）放射免疫测定法是一种使用放射性同位素标记的植物激素进行测定的方法。
该方法通过将放射性同位素标记的植物激素与待测样品中的植物激素结合，然后通过放射性计数来测定植物激素的含量。
放射免疫测定法具有灵敏度高、测定范围广的特点，但需要使用放射性同位素，存在辐射危险。
五、质谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度的分析方法，可以用于测定微量的植物激素。
该方法通过将待测样品中的植物激素通过质谱仪进行分子质量分析，从而测定植物激素的含量。
质谱法具有高灵敏度、高分辨率的特点，但需要专用的仪器设备和较高的技术水平。
植物激素测定方法有高效液相色谱法、气相色谱法、酶联免疫吸附法、放射免疫测定法和质谱法等。
植物生理学考试练习题及答案1_2022_背题版
***************************************************************************************试题说明本套试题共包括1套试卷每题均显示答案和解析植物生理学考试练习题及答案1(500题)***************************************************************************************植物生理学考试练习题及答案11.[单选题]细胞色素氧化酶对氧的亲和能力( )。
A)强B)中等C)弱答案:A解析:2.[单选题]温度降低可使有机物在植物体内的运输速度降低的原因是( )A)光合作用减弱了B)呼吸速率降低了C)筛管粘度减弱了答案:B解析:3.[单选题]正常情况下，植物细胞内葡萄糖主要通过（）降解。
A)EMP-TCAB)PPPC.TCAC)乙醇酸氧化途径答案:A解析:4.[单选题]C3途径是由哪位植物生理学家发现的?( )A)Mitchell(米切尔)B)HillC)Calvin(卡尔文)答案:C解析:5.[单选题]无数原生质相互联系起来,形成一个连续的整体,是依靠A)微纤丝B)胞间连丝6.[单选题]引起植物发生红降现象的光是A)450nm的蓝光B)650nm的红光C)大于685nm的远红光答案:C解析:7.[单选题]下列物质中属于倍半萜的有( )A)法呢醇B)柠橡酸C)橡胶答案:A解析:8.[单选题]植物的水分临界期是指( )A)对水分缺乏最敏感的时期B)对水需求最多的时期C)对水利用率最高的时期答案:A解析:9.[单选题]细胞间有机物质运输的主要途径是A)质外体运输B)共质体运输C)简单扩散答案:B解析:10.[单选题]叶绿体色素中,属于作用中心色素的是A)少数特殊状态的叶绿素aB)叶绿素bC)类胡萝卜素答案:A解析:11.[单选题]植物体内乙烯生成量增多的原因可能是A)氧气浓度高B)缺氧12.[单选题](, )光合链最终的电子受体是（ ）A)二氧化碳B)水C)NADP+答案:C解析:13.[单选题]光合作用的产物主要以什么形式运出叶绿体?( )A)蔗糖B)淀粉C)磷酸丙糖答案:C解析:14.[单选题]适当降低温度和氧的浓度可以使果实成熟期（）。
大小麦种子生活力和发芽率快速测试方法
大小麦种子生活力和发芽率快速测试方法夏收期间，有些地区会遭受了梅雨、暴雨和特大暴雨袭击，这给夏熟大小麦选留种带来极大困难。
因此及时做好麦种速测，做到心中有数，尤为重要。
麦种发芽需经过一段休眠期，特别是大麦种子，休眠期长达三个月左右。
这主要是种子内脱落酸含量较高，只有当脱落酸含量降低时，麦种才能解除休眠。
一、红墨水快速测定法：
1、常用红墨水稀释1:500倍液，将需测定的大麦种子用刀片纵切，取带有种胚的一半漫于红墨水液中，浸泡半小时左右，用清水冲洗后逐粒检查，凡是有生活力的种胚处无红色反应，仍呈白色，其它部分都染成红色，而无生活力的种子无论胚或胚乳部分都被染红，依据种胚的着色与否判断麦种有无生活力。
2、在采用红墨水测定的过程中，将麦种预先用清水浸泡12小时，再纵切染色，可提高测定效果，浸泡染色时间仅需10分钟。
同时由于经过了预先浸泡，经红墨水染色测定后，该半粒种子可继续留下保湿培养，观察其发芽情况，3-4天后就可得出发芽率结果；而且这一方法测定发芽率还不易受霉菌污染。
二、赤霉素快速测定法：
用赤霉素打破种子休眠期，直接速测其发芽率。
将市售小包装赤霉素配成20ppm 的溶液(即20毫克赤霉素加水1000 毫升)，将备好的大小麦种子浸人药液内，并置于冰箱，在5°C条件下浸泡24小时后，取出按常规发芽方法，每个培养皿放麦种10粒并保湿，在25°C室温下经1-2天后胚根、胚芽萌动，3-4天内就能迅速确定麦种的发芽率。
大学植物生理学考试练习题及答案121
大学植物生理学考试练习题及答案11.[单选题]引起植物发生红降现象的光是A)450nm的蓝光B)650nm的红光C)大于685nm的远红光答案:C解析:2.[单选题]等渗溶液是指( )A)压力势相等但溶质成分可不同的溶液B)溶质势相等但溶质成分可不同的溶液C)溶质势相等且溶质成分一定要相同的溶液答案:B解析:3.[单选题]细胞间结冰的主要原因是A)原生质脱水B)膜伤害C)冰点以下低温答案:A解析:4.[单选题]交替氧化酶途径的 P/O 比值为A)1B)2C)3答案:A解析:5.[单选题]如果把植物从空气中转移到真空装置内,则呼吸速率将( )。
A)加快B)不变C)减慢答案:C解析:6.[单选题]如果呼吸底物为一些富含氢的物质,如脂肪和蛋白质,则呼吸商( )。
A)小于17.[单选题]细胞色素氧化酶对氧的亲和能力( )。
A)强B)中等C)弱答案:A解析:8.[单选题]水分经胞间连丝从一个细胞进入另一个细胞的流动途径是( )A)质外体途径B)共质体途径C)跨膜途径答案:B解析:9.[单选题]以12小时作为短日植物和长日植物的临界日长的假定是A)正确的B)可以的C)不正确的答案:C解析:10.[单选题]赤霉素可以诱导大麦种子糊粉层中形成A)果胶酶B)a-淀粉酶C)-淀粉酶答案:B解析:11.[单选题]小麦籽粒成熟时,脱落酸的含量是A)大大增加B)大大减少C)变化不大答案:A解析:12.[单选题]光合作用的光反应发生的部位是在A)叶绿体基粒13.[单选题]植物体中含P量大致上等于含镁量,都为其干重的( )A)10%B)20%C)0.2%答案:C解析:14.[单选题]种子吸胀后经低温处理，其开花反应被促进的现象称为（）。
A)去春化作用B)春化作用C)抗冷锻炼答案:B解析:15.[单选题]温度对同化物质的运输有影响,当气温高于土温时( )A)有利于同化物质向顶部运输B)有利于同化物质向根部运输C)只影响运输速率,对运输方向无影响答案:A解析:16.[单选题]用红光间断短日植物苍耳的暗期,则会A)促进开花B)抑制开花C)无影响答案:B解析:17.[单选题]膜上镶嵌在磷脂之间,甚至穿透膜的内外表面的蛋白质称( )A)整合蛋白B)周围蛋白C)外在蛋白答案:A解析:18.[单选题]作为细胞壁结构成分的金属元素是A)Ca19.[单选题]光合作用中释放的氧来源于A)CO2B)H2oC)RuBP答案:B解析:20.[单选题]植物组织衰老时,戊糖磷酸途径在呼吸代谢途径中所占比例A)上升B)下降C)维持一定水平答案:A解析:21.[单选题]能反映水稻叶片氮素营养水平的氨基酸是A)蛋氨酸B)天冬酸胺C)丙氨酸答案:B解析:22.[单选题]生长素在植物体内运输方式是A)只有极性运输B)只有非极性运输C)既有极性运输又有非极性运输答案:C解析:23.[单选题]植物体内有机物质运输的主要形式是A)葡萄糖B)果糖C)蔗糖答案:C解析:24.[单选题]C4途径的CO2的受体是A)PGA25.[单选题]水在绿色植物中是各组分中占比例最大的,对于生长旺盛的植物组织和细胞其水分含量大约占鲜重的( )A)50%~70%B)90%以上C)70%~90%答案:C解析:26.[单选题]植物根部吸收的离子向地上部运输时,主要靠通过( )A)质外体B)韧皮部C)共质体答案:A解析:27.[单选题]植物体内有机物运输速率一般是白天A)快于晚上B)慢于晚上C)与晚上相当答案:A解析:28.[单选题]根据科学实验的测定,一共有( )种元素存在于各种植物体中。
小麦生理参数测定方法
叶绿素含量测定原理叶绿素约占总干重的1%，含a、b、c、d四种，高等植物含a、b两种，光、温度、营养元素氧、水是叶绿素合成的重要环境因子。
叶绿素是双羧酸酯，不溶于水，通常用含少量水的有机溶剂如80%的丙酮或95%的乙醇来提取叶片中的叶绿素，这是因为叶绿素与蛋白质结合很牢固，需要经过水解作用才可被提取出来。
已知叶绿素a、b的95%乙醇提取液最大吸收峰的波长分别为665nm和649nm，用95％乙醇研磨法和浸泡法提取叶绿素，以提取试剂95％乙醇为对照,用分光光度计分别测定649nm、665nm处的吸光度并计算叶绿素浓度，计算公式为：Ca＝13.95D665－6.88D649；Cb＝24.96D649－7.32D665；C T＝Ca＋Cb(注：Ca：叶绿素a的含量；Cb：叶绿素b的含量；C T：总叶绿素的含量)仪器：研钵、25mL容量瓶、漏斗、剪刀、滤纸、722光栅分光光度计、具塞试管试剂：95%乙醇（AR）丙酮（AR）1:1、碳酸钙（AR）、石英砂（AR）实验方法称取小麦叶片0.2g剪碎置于研钵中，加少许CaCO3，石英砂、95%乙醇充分研磨，过滤，将滤液移入25mL容量瓶，用95%乙醇（AR）丙酮（AR）1:1反复洗涤残渣、滤纸至无绿色，合并滤液，定容。
取上述提取液1mL稀释至10mL，摇匀。
以95%乙醇为参照，在分光光度计665nm/649nm下测其光密度。
Chla含量（mg/g）=(13.95D665－6.88D649)V/(W1000)Chlb含量（mg/g）=（24.96D649－7.32D665）V/(W1000)式中：A--测定波长下的光密度值V--叶绿素提取液总体积（mL）（若用的稀释液，则应乘以稀释倍数）W—材料鲜重（g）含量：mg/g=（浓度*提取体积*稀释倍数）/样品鲜重（植物生理学实验指导李玲）参考文献《化学生态学实验指导书》-王晗光编写SOD的测定原理：SOD可催化下列反应：仪器：高速冷冻台式离心机；分光光度计；移液器；光照培养箱；指形管；研钵试剂：1.50mmol/L磷酸缓冲液(pH7．8)2.130mmol/L 甲硫氨酸(Met)溶液：称取1.9339gMet用磷酸缓冲液溶解定容至100mL3.750/L NBT（氮蓝四唑）溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液溶解定容至100mL，避光保存4.20L核黄素溶液：称取0．0750g核黄素用磷酸缓冲液溶解定容至l00mL，吸取1mL定容至100mL即可，随用随配，避光保存5.100mol/LEDTA-Na 2溶液：称取0．0372gEDTA-Na2·2H20，用磷酸缓冲液溶解并定容至100mL，吸取10mL定容至100mL即可。
植物激素脱落酸(ABA)快速检测试剂盒试剂盒使用说明书
植物激素脱落酸(ABA)快速检测试剂盒试剂盒使用说明书产品编号：CSB-E09159Pl检测范围：3.12 pmol/ml-200 pmol/ml最低检测限：0.78 pmol/ml特异性：本试剂盒可用于快速检测植物样本中ABA含量。
有效期：6个月预期应用：ELISA法定量测定植物组织样本中的ABA含量。
说明1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。
2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。
3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。
4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。
实验原理本试剂盒采用酶联免疫间接竞争法检测ABA。
微孔板上包被有ABA偶联物。
加入ABA抗体和ABA标准品或样品，游离ABA与微量反应板上的ABA结合物竞争结合抗ABA抗体，没有结合的抗体被洗去，再向微孔中加辣根过氧化物酶标记二抗，与结合在反应板上的抗体作用一定时间，洗去多余的辣根过氧化物酶标记二抗。
再向反应孔中加入相应反应底物TMB，作用一定时间后，结合的酶结合物将TMB转化为蓝色，转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的ABA 呈负相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。
试剂盒组成及试剂配制1.已包被ABA偶联物的酶联板(Assay plate )：一块（96孔）。
2.标准品（Standard）：2×250ul/瓶。
3.样品稀释液(Sample Diluent)：2×20ml/瓶。
4.ABA单克隆抗体：1×60μl/瓶（1：100）5.辣根过氧化物酶标记二抗（HRP-anti-antibody ）：1×120μl/瓶（1：100）6.底物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。
7.浓洗涤液（W ash Buffer）：1×20ml/瓶，使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。
植物激素检测方法
植物激素检测⽅法植物激素是植物体内合成的⽤于调控植物⽣成发育的⼩分⼦化合物。
⽬前，被公认的植物激素有6⼤类：细胞分裂素类（CK）、⾚霉素类（GAs）、⽣长素类（Auxins）、脱落酸类（ABA）、⼄烯和油菜素甾醇类（BRs）。
以下介绍⼏种常⽤的植物激素检测⽅法。
1. ⽣物检测法利⽤植物激素作⽤于植物组织或离体器官后产⽣的特异性反应，从⽽间接对植物激素的含量进⾏检测。
然⽽，不同结构的⾚霉素、⽣长素或激动素对不同⽣物检测法的响应有差异，因此有时可能⽆法测出。
由于⽣物检测法可以检测植物激素的活性，常⽤于植物激素的定性分析，也常与其他检测⽅法结合使⽤。
2. ⽓相⾊谱法通过与标准样品共⾊层分离来鉴定样品中植物激素的含量，但由于⽆法排除杂质与标准品的共⾊层分离，所以不能准确检测植物激素含量。
待测样品必须形成易挥发的甲基化和三甲基硅烷化衍⽣物才可以运⽤⽓相⾊谱法检测，所以在⼄烯的测定种，⽓相⾊谱法⽐较常⽤。
3. 酶联免疫法（ELISA法）将抗原或抗体与酶结合形成酶标抗原或抗体，加⼊酶反应的底物后，底物被酶催化⽣成有⾊产物，通过颜⾊反应的深浅来进⾏定性或定量分析。
酶联免疫吸附法的主要缺点在于抗体的制备复杂，且检测中难以排除交叉反应，⽆法保证植物激素检测的准确性。
4. ⾼效液相⾊谱法⾼效液相⾊谱法与不同检测器结合，能直接分析多种植物激素，是⽬前应⽤较⼴泛的植物激素检测⽅法之⼀。
除⼄烯外的其它植物激素均可以采⽤⾼效液相⾊谱法进⾏检测。
5. 质谱法液质联⽤（LC-MS）和⽓质联⽤（GC-MS）克服了⾼效液相⾊谱和⽓相⾊谱的在植物激素定性和定量⽅⾯的局限性，成为普遍接受和认可的植物激素检测⽅法。
GC-MS具有选择性好、专⼀性强、灵敏度⾼等特点，不⾜之处在于对样品的纯化要求很⾼，且样品需要衍⽣化处理。
不同于GC-MS，LC-MS不需要衍⽣化处理，简化了操作步骤，缩短了检测时间。
因此LC-MS更适⽤于植物激素的检测（除⼄烯外）。
植物激素的测定方法
植物激素的测定方法植物激素是一类在植物生长和发育过程中起调节作用的化合物。
它们能够通过调节细胞分裂、扩展和分化以及调控植物对环境的适应能力，从而影响植物的形态和功能。
为了研究和了解植物激素的作用机制，科学家们发展了多种测定植物激素的方法。
这些方法可以帮助我们准确地测定植物激素的浓度，并进一步揭示植物激素在植物生长和发育中的作用。
一种常用的测定植物激素的方法是高效液相色谱法（HPLC）。
HPLC 是一种基于植物激素在液相中的分离和检测原理的分析方法。
首先，样品中的植物激素会被提取出来，然后通过在柱子中的固定相上进行分离，最后利用紫外光谱仪或质谱仪等设备进行检测和定量。
这种方法具有高分离效果、高灵敏度和高准确性的优点，常用于测定植物激素如生长素、赤霉素、脱落酸等的浓度。
除了HPLC，放射免疫测定法（RIA）也是一种常用的测定植物激素的方法。
RIA利用植物激素与标记同位素结合的原理，通过测量放射性同位素的放射线强度来定量植物激素的浓度。
这种方法具有高灵敏度和高特异性的优点，可以测定植物激素如赤霉素、激动素、玉米素等的浓度。
酶联免疫吸附测定法（ELISA）也是一种常用的测定植物激素的方法。
ELISA利用植物激素与特异性抗体的结合反应，通过测量抗体与酶标记物质之间的酶活性来定量植物激素的浓度。
这种方法具有简单、快速和高灵敏度的优点，常用于测定植物激素如赤霉素、生长素、激动素等的浓度。
除了上述几种常用的测定方法，还有一些新兴的测定植物激素的方法也在不断发展中。
例如，质谱法（MS）是一种基于植物激素分子的质量和质荷比的分析方法，可以精确测定植物激素的结构和浓度。
另外，生物传感器和光谱法等新技术也被应用于植物激素的测定领域，为研究人员提供了更多的选择。
测定植物激素的方法多种多样，各有优劣。
科学家们根据研究目的和需求选择合适的方法来测定植物激素的浓度。
这些测定方法的发展和应用，不仅有助于我们深入了解植物激素的作用机制，还为植物生长和发育的调控提供了重要的理论和实践基础。
小麦籽粒成熟时脱落酸的含量
小麦籽粒成熟时脱落酸的含量引言小麦是世界上最重要的粮食作物之一，其籽粒的成熟过程涉及到多种生理和生化变化。
其中，脱落酸（abscisic acid，ABA）是一种重要的植物激素，对小麦籽粒成熟起着关键作用。
本文将探讨小麦籽粒成熟时脱落酸的含量变化，并深入分析其与小麦生长发育、品质形成等方面的关系。
小麦籽粒成熟过程中脱落酸的含量变化小麦籽粒在生长发育过程中，经历了多个阶段，包括灌浆期、乳熟期和完全成熟期。
在这些阶段中，脱落酸的含量也会有所变化。
灌浆期灌浆期是小麦籽粒生长发育的关键阶段之一。
在这个阶段，小麦籽粒逐渐充实，并且开始积累淀粉和其他有机物质。
研究表明，灌浆期的小麦籽粒中脱落酸的含量较低，这可能是因为脱落酸抑制了光合作用和碳代谢的活性，从而减少了有机物质的合成。
乳熟期乳熟期是小麦籽粒成熟的关键阶段之一。
在这个阶段，小麦籽粒继续充实，并且开始形成存储蛋白和油脂。
研究发现，在乳熟期，小麦籽粒中脱落酸的含量逐渐上升。
这可能是因为脱落酸在调节植物水分平衡、抗逆性和果实分裂等方面起着重要作用。
完全成熟期完全成熟期是小麦籽粒生长发育的最后阶段。
在这个阶段，小麦籽粒已经达到最大尺寸，并且形成了完整的种皮和胚乳。
研究表明，在完全成熟期，小麦籽粒中脱落酸的含量明显下降。
这可能是因为脱落酸在促进种子休眠和保护胚乳免受腐败的过程中发挥了作用。
小麦籽粒成熟时脱落酸的影响因素小麦籽粒成熟时脱落酸的含量受多种因素的影响，包括环境因素和内源调控。
环境因素•光照：光照是植物生长发育的重要环境因素之一。
研究表明，光照强度和光周期对小麦籽粒中脱落酸的含量有一定影响。
适宜的光照条件可以促进小麦籽粒成熟和提高脱落酸含量。
•温度：温度是植物生长发育的重要环境因素之一。
适宜的温度条件有助于促进小麦籽粒成熟和增加脱落酸含量。
•水分：水分是植物生长发育的关键因素之一。
适宜的水分条件可以促进小麦籽粒灌浆和乳熟过程中脱落酸的积累。
内源调控•激素调控：除了脱落酸本身外，其他植物激素如赤霉素、生长素和乙烯等也可以影响小麦籽粒成熟时脱落酸的含量。
小麦生理参数测定方法
叶绿素含量测定原理叶绿素约占总干重的1%，含a、b、c、d四种，高等植物含a、b两种，光、温度、营养元素氧、水是叶绿素合成的重要环境因子。
叶绿素是双羧酸酯，不溶于水，通常用含少量水的有机溶剂如80%的丙酮或95%的乙醇来提取叶片中的叶绿素，这是因为叶绿素与蛋白质结合很牢固，需要经过水解作用才可被提取出来。
已知叶绿素a、b的95%乙醇提取液最大吸收峰的波长分别为665nm和649nm，用95％乙醇研磨法和浸泡法提取叶绿素，以提取试剂95％乙醇为对照,用分光光度计分别测定649nm、665nm处的吸光度并计算叶绿素浓度，计算公式为：Ca＝13.95D665－6.88D649；Cb＝24.96D649－7.32D665；C T＝Ca＋Cb(注：Ca：叶绿素a的含量；Cb：叶绿素b的含量；C T：总叶绿素的含量)仪器：研钵、25mL容量瓶、漏斗、剪刀、滤纸、722光栅分光光度计、具塞试管试剂：95%乙醇（AR）丙酮（AR）1:1、碳酸钙（AR）、石英砂（AR）实验方法称取小麦叶片0.2g剪碎置于研钵中，加少许CaCO3，石英砂、95%乙醇充分研磨，过滤，将滤液移入25mL容量瓶，用95%乙醇（AR）丙酮（AR）1:1反复洗涤残渣、滤纸至无绿色，合并滤液，定容。
取上述提取液1mL稀释至10mL，摇匀。
以95%乙醇为参照，在分光光度计665nm/649nm下测其光密度。
Chla含量（mg/g）=(13.95D665－6.88D649)V/(W1000)Chlb含量（mg/g）=（24.96D649－7.32D665）V/(W1000)式中：A--测定波长下的光密度值V--叶绿素提取液总体积（mL）（若用的稀释液，则应乘以稀释倍数）W—材料鲜重（g）含量：mg/g=（浓度*提取体积*稀释倍数）/样品鲜重（植物生理学实验指导李玲）参考文献《化学生态学实验指导书》-王晗光编写SOD的测定原理：SOD可催化下列反应：仪器：高速冷冻台式离心机；分光光度计；移液器；光照培养箱；指形管；研钵试剂：1.50mmol/L磷酸缓冲液(pH7．8)2.130mmol/L 甲硫氨酸(Met)溶液：称取1.9339gMet用磷酸缓冲液溶解定容至100mL3.750/L NBT（氮蓝四唑）溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液溶解定容至100mL，避光保存4.20L核黄素溶液：称取0．0750g核黄素用磷酸缓冲液溶解定容至l00mL，吸取1mL定容至100mL即可，随用随配，避光保存5.100mol/LEDTA-Na 2溶液：称取0．0372gEDTA-Na2·2H20，用磷酸缓冲液溶解并定容至100mL，吸取10mL定容至100mL即可。
植物生理学(齐鲁师范学院)知到章节答案智慧树2023年
植物生理学（齐鲁师范学院）知到章节测试答案智慧树2023年最新绪论单元测试1.植物生理学是研究植物生命活动规律的科学参考答案:对2.植物生理学的发展大致可分为()时期参考答案:初级发展时期;迅猛发展时期;孕育时期;奠基和成长时期第一章测试1.风干种子的萌发吸水靠（）参考答案:吸涨作用2.在同温同压条件下，溶液中水的自由能与纯水相比（）参考答案:要低一些3.在气孔张开时，水蒸汽分子通过气孔的扩散速度（）参考答案:与气孔周长成正比4.蒸腾作用快慢，主要决定于（）参考答案:A．叶内外蒸汽压差大小5.植物的保卫细胞中的水势变化与下列无机离子有关：（）参考答案:Ca2+6.蒸腾作用与物理学上的蒸发不同，因为蒸腾过程还受植物结构和气孔行为的调节。
（）参考答案:错7.通过气孔扩散的水蒸气分子的扩散速率与气孔的面积成正比。
（）参考答案:对8.空气相对湿度增大，空气蒸汽压增大，蒸腾加强。
（）参考答案:错9.低浓度的C02促进气孔关闭，高浓度C02促进气孔迅速张开。
（）参考答案:错10.糖、苹果酸和K+ 、Cl-进入液泡，使保卫细胞压力势下降，吸水膨胀，气孔就张开。
（）参考答案:错第二章测试1.植物生长发育必需的矿质元素有：（）参考答案:16种2.高等植物的老叶先出现缺绿症，可能是缺乏（）参考答案:氮3.植物根部吸收离子较活跃的区域是：（）参考答案:根毛区4.影响植物根毛区主动吸收无机离子最重要的因素是（）参考答案:土壤中氧浓度5.养分临界期是指植物对养分需要量最大的时期。
（）参考答案:错6.作物体内养分缺乏都是由于土壤中养分不足。
（）参考答案:错7.矿质元素中，K可以参与植物组织组成。
（）参考答案:错8.生长在同一培养液中的不同植物，其灰分中各种元素的含量相同。
（）参考答案:错9.硝酸还原酶和亚硝酸还原酶都是诱导酶。
（）参考答案:对第三章测试1.药物作用的靶点可以是参考答案:酶、受体、核酸和离子通道2.属于生物大分子结构特征的是参考答案:多种单体的共聚物3.药物与靶点发生的相互作用力主要是参考答案:分子间的非共价键结合4.根据色素分子吸收光能后能量的转换过程，蓝光比红光的能量利用效率更高。
高考生物解题模型训练：(3)柱形图解类
高考生物解题模型训练(三)柱形图解类[模板概述]将相关实验数据以柱形图的形式直观化呈现，用于考查学生识图、提取信息和利用信息解题的能力。
完成两个信息转化是解题的关键：①图形→文字：将图形用生物学语言描述出来。
②柱形图→坐标图：若将柱形图中的“柱形”理解为“直线”，则可降低问题的难度，有利于分析自变量对因变量的影响。
其解题思维模板如下所示：1．(2022·贵州贵阳高三模拟)在一定范围内，胚芽鞘切段的伸长与生长素浓度呈正相关。
为探究萌发的小麦种子中生长素的含量，取胚芽鞘尖端下部的切段(4 mm)，分别浸入6种不同浓度的生长素溶液和萌发种子提取液(待测样液)中，在适宜条件下培养24小时后，测量切段长度，结果如图所示。
下列有关叙述错误的是()A. 由实验结果可知，生长素浓度为0.01 mg·L－1的溶液对切段的影响是促进生长B．由实验结果可知，促进小麦种子萌发的最适生长素浓度在0.1～10 mg·L－1之间C．为确定待测样液中的生长素浓度是0.1 mg·L－1还是10 mg·L－1，可将待测样液适当稀释，重复上述实验D．本实验中温度、处理时间等属于无关变量，应设置为相同且适宜2.下列对柱形图的相关含义的叙述中，不正确的是()A．若Y表示细胞中有机物的含量，a、b、c、d表示四种不同的物质，则b最有可能是蛋白质B．若Y表示组成活细胞的元素含量，则a、b、c、d依次是N、O、H、CC．若Y表示初始浓度相同的不同离子一段时间后在培养液中的浓度，则该培养液中培养的植物，其根细胞膜上a离子的载体少于c离子的载体D．若Y表示细胞液的浓度，a、b、c、d表示不同细胞，则在0.3 g/mL蔗糖溶液中，发生质壁分离的可能性大小为b＜d＜c＜a3．(2022·河北保定高三模拟)过氧化氢酶(CAT)是植物抗氧化系统的关键酶，衰老叶片中CAT 的活性明显下降。
研究者为探究施氮量和播种量对燕麦叶片衰老的影响，设置了60 kg·hm－2、180 kg·hm－2和300 kg·hm－2 3个播种量(分别用D1、D2、D3表示)，每个播种量设0 kg·hm－2、90 kg·hm－2和180 kg·hm－2 3个施氮量(分别用N0、N1、N2表示)，检测结果如图所示。
植物生长素的测定方法
植物生长素的测定方法一、植物生长素测定的重要性。
1.1 植物生长素就像植物生长的“魔法药水”，它对植物的生长发育起着超级关键的作用。
少了它，植物可能就会像没吃饱饭的孩子，长得病恹恹的。
所以准确测定植物生长素的含量是非常重要的事儿。
1.2 这就好比医生要知道病人身体里各种元素的含量来判断健康状况一样，我们要知道植物生长素的量，才能更好地照顾植物，让它们茁壮成长，结出丰硕的果实或者开出美丽的花朵。
二、生物鉴定法。
2.1 燕麦胚芽鞘弯曲试验。
这是一种很经典的方法呢。
把含有生长素的提取物放在燕麦胚芽鞘的一侧，就像在给胚芽鞘出一道“生长的选择题”。
如果胚芽鞘向着放提取物的一侧弯曲了，那就说明这里面有生长素在发挥作用。
这就像在黑暗中给植物指了一个生长的方向，它就会朝着生长素多的地方努力生长，就像人会朝着有希望的方向前进一样。
2.2 豌豆茎切段试验。
我们把豌豆茎切段，然后放在含有生长素的溶液里。
就像把小树苗种在肥沃的土壤里一样。
如果溶液里生长素合适，豌豆茎切段就会像被注入了活力，愉快地生长起来。
通过测量切段的生长长度等数据，就能大致判断出生长素的含量啦。
这有点像看孩子吃了多少营养食物就知道他会长多高一样。
三、化学测定法。
3.1 比色法。
这个方法就像是给生长素穿上一件有颜色的衣服，然后通过颜色的深浅来判断它的含量。
我们利用生长素和某些试剂发生化学反应后会产生颜色变化的原理。
这就好比是在一群人中，通过衣服颜色来区分不同的人一样。
不过这个方法有时候会受到其他物质的干扰，就像在一群穿着相似颜色衣服的人中，可能会认错人一样。
3.2 色谱法。
这可是个比较“高大上”的方法。
它就像一个非常精细的筛子，能够把生长素从众多的化合物中分离出来，然后准确地测定它的含量。
这个方法准确性比较高，就像神枪手打靶一样，很少会失手。
但是它的设备比较昂贵，操作也相对复杂，就像开豪车一样，虽然很厉害，但是不是谁都能轻松驾驭的。
四、物理测定法。
4.1 免疫测定法。
农业大学学生的实验报告
实验名称：植物生长素对小麦幼苗生长的影响实验目的：探究植物生长素对小麦幼苗生长的影响，分析不同浓度生长素处理对小麦幼苗生长指标的影响。
实验时间：2021年10月15日实验地点：农业大学园艺实验室一、实验背景植物生长素（Auxin）是植物生长发育过程中一种重要的激素，它能够调节植物的生长和发育。
近年来，随着农业生产的发展，人们对植物生长素的生理作用和调控机制进行了广泛的研究。
本实验旨在探究不同浓度植物生长素对小麦幼苗生长的影响，为农业生产中合理使用植物生长素提供理论依据。
二、实验材料与方法1. 实验材料小麦种子（品种：鲁麦15）、植物生长素（2,4-D）、蒸馏水、培养皿、移液器、电子天平、生长素溶液配制器等。
2. 实验方法（1）种子预处理：将小麦种子用70%的酒精消毒30秒，然后用无菌水清洗3次，置于培养皿中，在25℃恒温培养箱中发芽。
（2）生长素溶液配制：根据实验设计，配制不同浓度的生长素溶液（0.1mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L、2.0mg/L、4.0mg/L）。
（3）实验分组：将发芽的小麦幼苗随机分为5组，每组30株，分别用不同浓度的生长素溶液处理。
（4）处理方法：将生长素溶液均匀喷洒在小麦幼苗上，每株幼苗喷洒1mL，喷洒后置于培养皿中，置于恒温培养箱中培养。
（5）观察指标：在实验过程中，每隔3天观察小麦幼苗的生长状况，记录株高、叶片数、根系长度等指标。
（6）数据处理：采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析，采用单因素方差分析（ANOVA）比较不同浓度生长素处理对小麦幼苗生长指标的影响。
三、实验结果与分析1. 生长素对小麦幼苗株高的影响经过统计分析，不同浓度生长素处理对小麦幼苗株高的影响存在显著差异（P<0.05）。
随着生长素浓度的增加，小麦幼苗株高逐渐增加，其中2.0mg/L和4.0mg/L生长素处理组的株高显著高于对照组（P<0.05）。
2. 生长素对小麦幼苗叶片数的影响统计分析结果显示，不同浓度生长素处理对小麦幼苗叶片数的影响也存在显著差异（P<0.05）。
小麦籽粒成熟时脱落酸的含量
小麦籽粒成熟时脱落酸的含量小麦是世界上最重要的粮食作物之一，其成熟的籽粒是人类主要的食物来源之一。
在小麦的生长过程中，籽粒的发育是一个复杂的过程，其中含有丰富的营养物质和化合物。
而脱落酸就是其中一个重要的化合物，在小麦籽粒成熟时的含量也具有一定的研究价值。
脱落酸，又被称为植物雌激素酸，是一种天然存在于植物中的有机酸。
它在植物的生长发育过程中发挥着重要的调节作用。
脱落酸的主要作用是促进植物的生长和发育，特别是在果实的发育过程中起到重要的作用。
脱落酸的含量的变化与植物的生长发育密切相关，因此，研究小麦籽粒成熟时脱落酸的含量具有重要的意义。
小麦籽粒的发育是一个复杂的过程，其中涉及到许多生化反应和代谢途径。
在小麦的生长过程中，脱落酸的合成与降解是动态平衡的过程。
一方面，脱落酸的合成与发育过程中的基因表达和激素信号传导有关；另一方面，脱落酸的降解与酶的活性和底物的供应有关。
因此，小麦籽粒成熟时脱落酸的含量是受多种因素影响的。
研究表明，小麦籽粒成熟时脱落酸的含量受到光照和温度等环境因素的影响。
光照是植物生长发育的重要因素，它能够影响植物的光合作用和激素合成。
研究发现，适宜的光照条件可以提高小麦籽粒中脱落酸的含量，从而促进小麦的生长和发育。
另外，温度也是影响小麦籽粒成熟时脱落酸含量的重要因素。
适宜的温度条件有助于促进脱落酸的合成和稳定，从而提高小麦籽粒的品质和产量。
除了环境因素，小麦的品种和种植管理也会影响籽粒成熟时脱落酸的含量。
不同的小麦品种在脱落酸的合成和降解途径上存在差异，因此其脱落酸的含量也会有所不同。
种植管理措施，如施肥、灌溉和病虫害防治等，也会影响小麦的生长和发育过程，进而影响脱落酸的含量。
综上所述，小麦籽粒成熟时脱落酸的含量受到多种因素的影响。
光照、温度、品种和种植管理等因素都会对脱落酸的合成和降解过程产生影响，进而影响小麦籽粒的品质和产量。
因此，通过研究小麦籽粒成熟时脱落酸的含量，可以为小麦的种植和生产提供科学的依据，进而提高小麦的产量和品质。
植物脱落酸测定方法
植物脱落酸测定方法《植物脱落酸测定方法》引言：植物脱落酸（abscisic acid，ABA）是一种重要的植物生长调节物质，对抗逆境环境具有重要的作用。
因此，准确测定植物体内ABA的含量对于研究植物逆境响应机制及植物生理生态学具有重要意义。
本篇介绍了几种常见的植物脱落酸测定方法，以供研究者参考。
方法一：高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是测定植物脱落酸含量的常用方法之一。
首先，将待测植物材料研磨成粉末，并用乙酸乙酯提取脱落酸。
然后，将提取物经过洗脱、浓缩、过滤等处理步骤后注入高效液相色谱系统中进行分析。
通过在特定的流动相条件下，在色谱柱上分离和检测脱落酸的峰值，并根据标准曲线计算出样品中的脱落酸含量。
方法二：气相色谱质谱法（GC-MS）气相色谱质谱法是另一种常用的植物脱落酸测定方法。
该方法首先将待测植物材料进行研磨，并用甲酸提取脱落酸。
然后，用氮气吹扫将脱落酸转化为甲酯化产物，并将产物通过气相色谱柱分离。
最后，通过质谱检测和数据分析来定量脱落酸的含量。
方法三：酶联免疫吸附测定法（ELISA）酶联免疫吸附测定法是一种快速、灵敏且经济的测定植物脱落酸的方法。
首先，将待测植物材料研磨，并用适当的缓冲液提取脱落酸。
接下来，将提取物加入预先涂有特异性的抗体的微孔板中，并进行孵育。
经过洗涤后，加入与抗体结合的酶标记抗体，并进行二级孵育。
最后，通过加入底物并测定酶标记物的反应产物的吸光度来定量脱落酸的含量。
结论：以上介绍的三种方法都是测定植物脱落酸含量的常用方法，每种方法各有其优势和适用范围。
在选择测定方法时，需要考虑到实验条件、仪器设备和检测费用等因素。
因此，研究者可以根据自己的需要选择合适的方法来测定植物体内脱落酸的含量，以推动植物生理生态学领域的研究进展。
参考文献：1. Liu F, Xiang Y. (2015). Determination of abscisic acid in wheat using liquid chromatography-tandem mass spectrometry and the effect of baking. Food Chemistry, 15: 331-336.2. Parkyatnyuk E, et al. (2013). Enzyme-linked immunosorbent assay for abscisic acid: Modifications to eliminate maltose-dependent stimulation of antibody activity. Analytical Biochemistry, 435: 129-135.3. Steward FC, et al. (1967). Abscisic acid determinations in plant extracts by immunoassay. Plant Physiology, 42: 771-777.。
小麦种子纯度的室内快速检测技术
小麦种子纯度的室内快速检测技术小麦是世界上最重要的粮食作物之一，其种子纯度直接影响着农作物的产量和品质。
对小麦种子纯度进行快速准确的检测是非常重要的。
随着科技的不断发展，室内快速检测技术逐渐成为小麦种子纯度检测的重要手段。
本文将介绍小麦种子纯度的相关知识，并探讨室内快速检测技术在小麦种子纯度检测中的应用。
一、小麦种子纯度的意义小麦种子纯度是指种子中所含的杂质和其他品种的比例。
种子纯度的高低直接关系到农作物的生长发育和产量。
如果种子纯度低，种子中会含有大量的杂质和其他品种的种子，这样种子在播种后就会影响作物的正常生长，从而降低产量和品质。
保证种子的纯度是提高农作物产量和品质的重要前提。
二、传统小麦种子纯度检测方法传统的小麦种子纯度检测方法主要包括人工取样和目视鉴定两个步骤。
工作人员需要手工取样，然后通过目视鉴定的方法对种子中的杂质进行排除，最终得到种子的纯度。
这种方法存在取样不均匀、检测时间长、结果不够准确等问题，不能满足快速准确检测的需求。
三、室内快速检测技术在小麦种子纯度检测中的应用室内快速检测技术是利用仪器设备对种子中的杂质和其他品种进行快速准确的检测。
目前，主要包括光学显微镜观察、X射线检测、红外光谱分析等多种技术。
这些技术具有检测速度快、精度高、结果准确等特点，逐渐成为小麦种子纯度检测的重要手段。
1、光学显微镜观察光学显微镜是一种常见的显微镜，它可以放大种子样品中的微小结构和颗粒，从而通过观察细胞形态、颗粒尺寸等特征来判断种子的纯度。
这种方法操作简单、设备成本低廉，对种子中的杂质进行有效的排除，但需要有一定的专业知识和经验来进行观察和判断。
2、X射线检测X射线检测是利用X射线透射原理对种子中的杂质和其他品种进行检测。
通过X射线的透射情况可以清晰地看到种子内部的结构和组织，从而判断种子的纯度。
这种方法速度快、准确度高，但设备成本较高，需要专业人员来进行操作。
3、红外光谱分析红外光谱分析是利用物质吸收红外光的特性来对物质进行分析的一种方法。
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李㊀超ꎬ李㊀诚ꎬ李春艳.１种快速检测小麦籽粒中脱落酸和生长素的方法[Ｊ].江苏农业科学ꎬ２０１９ꎬ４７(２):１９４－１９６.ｄｏｉ:１０.１５８８９/ｊ.ｉｓｓｎ.１００２－１３０２.２０１９.０２.０４９１种快速检测小麦籽粒中脱落酸和生长素的方法李㊀超ꎬ李㊀诚ꎬ李春艳(石河子大学农学院/新疆生产建设兵团绿洲生态农业国家重点实验室培育基地ꎬ新疆石河子８３２０００)㊀㊀摘要:拟建立小麦籽粒中脱落酸㊁生长素的快速提取方法和高效液相色谱(ＨＰＬＣ)法检测２种激素的试验体系ꎮ经试验对比ꎬ采用异丙醇㊁水㊁浓盐酸体积比＝２ʒ１ʒ０.００２的混合溶液作为提取液ꎬ以二氯甲烷作为萃取溶剂ꎬ简化了提取过程ꎬ提高了提取效率ꎮＨＰＬＣ的分离采用ＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８(１５０ｍｍˑ４.６ｍｍꎬ５μｍ)反相色谱柱ꎬ柱温为２６ħꎬ检测器波长为２６２ｎｍꎬ流动相为甲醇㊁乙酸水溶液(乙酸的体积分数为０.２％)ꎬ其中甲醇㊁乙酸体积比＝３８ʒ６２ꎬ流速为１ｍＬ/ｍｉｎꎮ结果表明ꎬ小麦籽粒中２种激素的分离效果较好ꎬ加标回收率达９５.８％~９６.６％ꎬ标准偏差在１.１４％~１.５９％之间ꎮ由此可见ꎬ该提取方法和检测体系的建立为快速提取和检测小麦籽粒中的脱落酸和生长素提供了可靠的方法ꎮ㊀㊀关键词:小麦ꎻ脱落酸ꎻ生长素ꎻ高效液相色谱㊀㊀中图分类号:Ｓ５１２.１０１㊀㊀文献标志码:Ａ㊀㊀文章编号:１００２－１３０２(２０１９)０２－０１９４－０３收稿日期:２０１７－０９－１０基金项目:国家自然科学基金(编号:３１３６０２９２㊁３１５６０３８９㊁３１３６０３３４)ꎮ作者简介:李㊀超(１９９１ )ꎬ男ꎬ河南南阳人ꎬ硕士ꎬ研究方向为种子科学与技术ꎬＥ－ｍａｉｌ:３９０４０４５４６＠ｑｑ.ｃｏｍꎮ共同第一作者:李㊀诚(１９７９ )ꎬ男ꎬ新疆石河子人ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ研究方向为小麦遗传育种ꎬＥ－ｍａｉｌ:ｌｉｃｈｅａｎ＿７９＠ａｌｉｙｕｎ.ｃｏｍꎮ通信作者:李春艳ꎬ博士ꎬ副教授ꎬ研究方向为作物遗传育种㊁植物营养ꎮＥ－ｍａｉｌ:ｌｉｃｈｕｎｙａｎ８２＠ａｌｉｙｕｎ.ｃｏｍꎮ㊀㊀植物激素在植物生长发育及应对生物和非生物胁迫的反应中起着关键的作用[１－３]ꎮ小麦是我国重要的粮食作物ꎬ内源性激素对小麦灌浆期籽粒的发育影响很大ꎬ会直接影响小麦的产量和品质[４－５]ꎮ因此ꎬ研究小麦内源激素的变化ꎬ对于通过人工干预措施调控小麦生产具有重要的实践价值ꎮ现有的检测植物内源性激素的方法有生物鉴定法[６]㊁生物传感器法㊁酶联免疫法㊁光谱和色谱法ꎬ其中色谱法包括气相色谱法(ＧＣ)或与质谱联用(ＧＣ－ＭＳ)法㊁高效液相色谱法(ＨＰＬＣ)或与质谱联用(ＨＰＬＣ－ＭＳ)法㊁超高效液相色谱法等ꎮ生物鉴定法㊁光谱法和生物传感器法因其专一性和局限性限制在近年来鲜有报道ꎮ间接酶联免疫法因其使用方便㊁成本低㊁速度快而使其使用较为普遍ꎬ但灵敏度低ꎬ不能较好地满足实际检测需要[７]ꎮ气相色谱法因大部分植物激素含有极性基团ꎬ不易挥发ꎬ需要进行衍生化处理才能测定[８]ꎮ高效液相色谱法不需要对激素进行衍生化处理ꎬ可直接进行测定ꎬ且准确性㊁灵敏度和重现性都比较好ꎬ是目前最常见的测定植物内源性激素的方法ꎮ现阶段分析仪器已达到了较高的水平ꎬ相对于激素的检测来说ꎬ样品的前处理是整个检测过程中的关键ꎬ冗长而复杂的前处理常常会造成样品提取率低㊁杂质干扰太大ꎬ从而导致试验失败ꎮ近年来ꎬ有较多学者对植物内源性激素的提取做了研究ꎬ目前主要的提取方法是用８０％甲醇过夜浸提[９]ꎬ但是提取时间过长(需要１２ｈ以上)ꎬ后续纯化步骤过于繁琐且需要大量的溶剂ꎬ成本较高ꎮ因此ꎬ改良前处理方法对植物内源性激素的测定显得尤为重要ꎮ本研究拟对比２种提取脱落酸和生长素的方法ꎬ优化样品前处理过程ꎬ以期为小麦籽粒内源性激素的提取㊁测定提供一种简便㊁高效㊁可行的前处理方法ꎮ１ 材料与方法１.１㊀材料本研究选择新疆主栽冬小麦品种新冬２２号为试验材料ꎬ种子由石河子大学冬小麦课题组提供ꎮ试验于２０１６ ２０１７年在石河子大学农学院试验站(４４ʎ１７Ｎꎬ８６ʎ０３Ｅꎬ海拔４６１ｍ)进行ꎮ抽穗当天挂牌标记ꎬ开花当天选取同天开花㊁长势一致的麦穗挂牌标记ꎮ分别于小麦开花后１０㊁２０㊁３０ｄ取穗中上部籽粒ꎬ立即置于液氮中速冻５ｍｉｎꎬ再置于－８０ħ冰箱中保存备用ꎮ主要试验仪器:高效液相色谱仪(ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓꎬＡｇｉｌｅｎｔ１２６０ꎬＵＳＡ)ꎻ冷冻离心机(ＥｐｐｅｎｄｏｒｆꎬＣｅｎｔｒｉｆｕｇｅ５４２４ꎬＧｅｒｍａｎｙ)ꎻ氮吹仪(ＯｒｇａｎｏｍａｔｉｏｎꎬＮ－ＥＶＡＰ－４５ꎬＵＳＡ)ꎻ台式恒温摇床(ＮＥＷＢＲＵＮＳＷＩＣＫꎬＩｎｎｏｖａ４０ＲꎬＵＫ)ꎻ紫外分光光度计(ＨＩＴＡＣＨＩꎬＵ－５１００ꎬＪａｐａｎ)ꎻ电子天平(ＳａｒｔｏｒｉｕｓꎬＢＳ２１０ｓꎬＧｅｒｍａｎｙ)ꎮ生长素(ＩＡＡ)㊁脱落酸(ＡＢＡ)标准品ꎬ均购于Ｓｉｇｍａ公司ꎻ甲醇(流动相)为色谱纯ꎬ购于Ｆｉｓｈｅｒ公司(美国)ꎻ色谱纯冰乙酸ꎬ购于天津光复精细化工研究所ꎻ甲醇(提取液)㊁石油醚㊁乙酸乙酯为国产分析纯ꎻ超纯水为笔者所在实验室自制ꎮ１.２㊀激素提取方法的建立方法１:激素的提取参考Ｗｕ等的方法[１０]并作适当修改后进行:准确称取４ｇ用液氮研磨的小麦籽粒粉末ꎬ加入１６ｍＬ提取缓冲液(样品与提取缓冲液体积比保持１ʒ４ꎬ以体积比为２ʒ１ʒ０.００２的异丙醇㊁水㊁浓盐酸溶液为提取缓冲液ꎬ以０.００１ｍｏｌ/Ｌ丁基化羟基甲苯作为抗氧化剂)ꎬ于４ħ㊁２００ｒ/ｍｉｎ振荡３０ｍｉｎꎮ再加入３２ｍＬ(提取缓冲液体积的２倍)二氯甲烷ꎬ于４ħ㊁２００ｒ/ｍｉｎ振荡３０ｍｉｎꎮ之后于４ħ㊁４９１ 江苏农业科学㊀２０１９年第４７卷第２期１２０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎꎬ取下清液ꎬ在避光条件下用氮气吹干ꎬ加甲醇定容至２ｍＬꎬ过０.４５μｍ微孔滤膜ꎬ上ＨＰＬＣ分析ꎮ方法２:准确称取４ｇ用液氮研磨后的小麦籽粒粉末ꎬ加入１０ｍＬ预冷的８０％甲醇溶液ꎬ振荡摇匀后置于４ħ冰箱过夜ꎻ浸提过夜后于４ħ㊁８０００ｒ/ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ得上清液ꎬ将残渣加入１０ｍＬ８０％甲醇中浸提３ｈꎬ该步骤重复２次后合并上清液ꎮ将合并后的上清液用氮吹仪浓缩至原体积的１/３ꎬ加入３０ｍＬ石油醚萃取脱色３次ꎬ弃上清ꎮ再用２０ｍＬ乙酸乙酯对水相溶液萃取３次ꎬ合并酯相后用氮吹仪吹干ꎮ用ｐＨ值为３.５的乙酸水溶液溶解ꎬ溶液过预处理后的Ｓｅｐ－ＰａｋＣ１８小柱纯化ꎬ用甲醇洗脱(之后发现二氯甲烷的洗脱效率更高ꎬ遂改为二氯甲烷洗脱)ꎮ将洗脱液在避光条件下用氮气吹干ꎬ用甲醇定容至２ｍＬꎬ过０.４５μｍ微孔滤膜ꎬ上机分析[９]ꎮ１.３㊀色谱条件色谱柱为ＺＯＲＢＡＸＳＢ－Ｃ１８(１５０ｍｍˑ４.６ｎｍꎬ５μｍꎬＡｇｉｌｅｎｔ公司)ꎬ流动相Ａ为甲醇ꎬＢ为乙酸水溶液ꎮ流速为１ｍＬ/ｍｉｎꎬ柱温为２６ħꎬ检测器波长为２６２ｎｍꎬ进样量为１０μＬꎮ１.４㊀标准溶液的配制用甲醇(色谱纯)将生长素㊁脱落酸标准品配制成浓度为１ｍｇ/ｍＬ的母液ꎬ根据出峰情况逐级稀释作标准曲线ꎮ１.５㊀样品加标回收率的测定取小麦籽粒(花后２０ｄ)并用液氮研磨ꎬ将研磨后的小麦粉分为４份ꎬ每份４ｇꎻ取２份小麦籽粒样品ꎬ其中１份加入５０００ｎｇ标准样品ꎬ同时用第１.２节中的方法１进行激素的提取ꎻ对于剩余的２份样品按照第１.２节中的方法２进行样品的加标回收率测定ꎬ试验重复３次ꎮ２㊀结果与分析２.１㊀检测波长用紫外分光光度计对激素混合标准品溶液进行扫描ꎬ同时兼顾２种激素的分离效果ꎮ分析发现ꎬ溶液在２６２ｎｍ处有最大吸收波长ꎬ且２种激素在２６２ｎｍ检测波长下均有较好的峰形ꎬ故选择在２６２ｎｍ波长下对样品的标准品溶液进行测定ꎮ２.２㊀流动相配比参考前人以甲醇㊁水作为流动相进行的激素分离研究ꎬ分别以体积分数为６０％㊁５０％㊁４０％㊁３０％㊁２０％的甲醇作为流动相对标准品进行分析ꎮ结果发现ꎬ当甲醇含量为４０％㊁３０％时ꎬ２种激素能够与杂质分离ꎮ随即进行微调ꎬ发现当甲醇含量为３８％时ꎬ２种激素的分离效果显著ꎮ２.３㊀流动相ｐＨ值由于目标激素均为弱酸性样品ꎬ因此通过调节流动相ｐＨ值可以抑制样品的解离ꎬ以增加样品组分在固定相上的保留时间ꎬ改善峰形ꎮ分别在水相(总体积为１Ｌ)中加入０.５㊁１.０㊁１.５㊁２.０㊁２.５㊁３.０㊁５.０ｍＬ冰乙酸ꎬ发现当加入２ｍＬ冰乙酸时ꎬ２种激素峰形尖锐且各组分的分离效果较好ꎮ因此ꎬ采用体积分数为０.２％的乙酸水溶液作为流动相ꎮ２.４㊀流速和柱温分别检测不同流速(０.４㊁０.７㊁１.０㊁１.３㊁１.５㊁２.０ｍＬ/ｍｉｎ)下２种激素的分离效果ꎬ发现流速过大时ꎬ各激素峰分离差ꎬ容易出现肩峰ꎻ流速过小时ꎬ整个分离过程的时间大大增加ꎮ综合考虑ꎬ选用１.０ｍＬ/ｍｉｎ的流速ꎮ试验还发现ꎬ柱温对整个检测过程的影响较小ꎬ故选择室温为２６ħꎮ选择最优色谱条件ꎬ对２种激素的混合标样进行检测ꎮ从图１可以看出ꎬ２种激素的分离和检测结果良好ꎮ２.５㊀标准曲线及其线性范围在 １.３ 节的色谱条件下ꎬ以峰值面积为纵坐标㊁标品质量浓度为横坐标绘制标准曲线ꎬ计算各激素的回归方程㊁相关系数㊁线性范围ꎮ表１结果显示ꎬ激素标准品浓度与峰面积的线性相关性均达到极显著水平ꎮ表１㊀生长素和脱落酸的线性关系激素回归方程相关系数检测浓度范围(ｍｇ/Ｌ)ＩＡＡｙ＝１０６０４１ｘ＋１.１９１７０.９９８９∗∗∗０.４０~２０ＡＢＡｙ＝４５９７８ｘ＋５６.２７７０.９９８３∗∗∗０.２５~２０㊀㊀注: ∗∗∗ 代表在０.０１水平上显著相关ꎮ２.６㊀实际样品测定和样品加标回收率如表２所示ꎬ在样品加标回收率测定中ꎬ使用方法１提取得到的样品含量极显著高于方法２得到的样品含量ꎬ方法１的样品加标回收率也显著高于方法２的样品加标回收率ꎮ激素的提取通常使用的是相似相溶原理ꎬ现阶段常用的激素提取方法是用８０％甲醇于４ħ过夜浸提[１１－１３]ꎬ如简利茹等用乙腈和水按一定比例混合后提取菌液中的植物激素[１４]ꎬ刘同祥等用纯乙腈提取辣椒幼苗中的植物激素[１５]ꎬ马宏棋等用一定比例的甲醇㊁乙酸乙酯和甲酸提取草莓中的脱落酸[１６]ꎮ这些方法虽然能够从植物组织中有效地提取出植物激素ꎬ但是后续步骤过于繁琐ꎬ需要大量的时间和溶剂ꎬ且成本较高ꎮ本研究通过不断试验ꎬ以异丙醇㊁水㊁浓盐酸溶液(异丙醇㊁水㊁浓盐酸体积比为２ʒ１ʒ０.００２)作为提取液并加入丁基化羟基甲苯作为抗氧化剂防止激素氧化分解ꎬ经过短时间的振荡后用二氯甲烷萃取就可以得到目标激素ꎬ大大节省了时间和成本ꎮ通过２种提取方法的对比ꎬ本研究采用的方法在提取率上优于将８０％甲醇作为脱落酸和生长素的提取方法ꎬ此方法简化了后续处理步骤ꎬ大大减少了目标激素的损失ꎮ２.７㊀小麦籽粒不同发育时期的激素含量如图２所示ꎬ小麦籽粒中的２种激素得到良好的分离ꎬ与方法２相比ꎬ用方法１提取的样品杂质峰相对较少ꎮ采用方５９１江苏农业科学㊀２０１９年第４７卷第２期表２㊀不同提取方法下２种激素的加标回收率激素方法样品质量(ｇ)样品检出量(ｎｇ)加标量(ｎｇ)加标检出量(ｎｇ)加标回收率(％)相对标准偏差(％)ＩＡＡ１４１６４８∗５０００６３６７.２∗∗９５.８∗１.５９２４１５５６５０００６０９７.０９３.０１.１７ＡＢＡ１４３９６８∗５０００８６０９.２∗∗９６.６∗∗１.１４２４３７７２５０００８０３２.３９１.６１.１８㊀㊀注:∗和∗∗分别代表在０.０５和０.０１水平上差异显著ꎮ试验重复３次ꎮ法１建立的快速提取方法及第１.３节的色谱条件测定小麦花后１０㊁２０㊁３０ｄ籽粒中的激素含量ꎮ检测结果显示ꎬ花后１０㊁２０㊁３０ｄ籽粒中ＩＡＡ的鲜质量含量分别为１３８２㊁４１２㊁２６７ｎｇ/ｇꎬＡＢＡ的鲜质量含量分别为２８３㊁９２２㊁４７５ｎｇ/ｇꎮＩＡＡ是高等植物体内主要的细胞分裂素之一ꎬ花后１０ｄ左右是小麦胚乳细胞增殖时期ꎬ这个时期较高含量的ＩＡＡ有助于胚乳细胞快速增殖ꎬ以增加籽粒的库容量[１７]ꎻ花后２０ｄ是小麦籽粒灌浆的高峰时期ꎬ这个时期ＡＢＡ含量比较高ꎬ这是由于籽粒中的ＡＢＡ能够控制籽粒的成熟ꎬ提高籽粒灌浆速率[４ꎬ１８]ꎮ３㊀结论通过２种激素提取方法的比较ꎬ本研究建立了１种简单㊁快速㊁高效提取小麦籽粒中脱落酸㊁生长素的方法和ＨＰＬＣ检测条件ꎮ本研究建立的提取方法ꎬ能够满足对小麦籽粒中脱落酸和生长素定量分析的要求ꎬ为进一步研究脱落酸和生长素对小麦籽粒发育的影响提供了基础ꎬ也为其他植物样品激素的提取提供了参考ꎮ参考文献:[１]ＤａｖｉｅｓＰＪ.Ｔｈｅｐｌａｎｔｈｏｒｍｏｎｅｓ:ｔｈｅｉｒｎａｔｕｒｅꎬｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅꎬａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｓ[Ｍ]//Ｐｌａｎｔｈｏｒｍｏｎｅｓｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ＆ｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙ.Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ:Ｓｐｒｉｎｇｅｒꎬ１９９５:１－１１.[２]ＢａｒｉＲꎬＪｏｎｅｓＪＤ.Ｒｏｌｅｏｆｐｌａｎｔｈｏｒｍｏｎｅｓｉｎｐｌａｎｔｄｅｆｅｎｃｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓ[Ｊ].ＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙꎬ２００９ꎬ６９(４):４７３－４８８.[３]ＮｅｍｈａｕｓｅｒＪＬꎬＨｏｎｇＦＸꎬＣｈｏｒｙＪ.Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｐｌａｎｔｈｏｒｍｏｎｅｓｒｅｇｕｌａｔｅｓｉｍｉｌａｒｐｒｏｃｅｓｓｅｓｔｈｒｏｕｇｈｌａｒｇｅｌｙｎｏｎｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌｒｅｓｐｏｎｓｅｓ[Ｊ].Ｃｅｌｌꎬ２００６ꎬ１２６(３):４６７－４７５.[４]ＹａｎｇＪꎬＺｈａｎｇＪꎬＬｉｕＫꎬｅｔａｌ.Ａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄａｎｄｅｔｈｙｌｅｎｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｗｈｅａｔｇｒａｉｎｓｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｓｏｉｌｄｒｙｉｎｇｄｕｒｉｎｇｇｒａｉｎｆｉｌｌｉｎｇ[Ｊ].ＮｅｗＰｈｙｔｏｌｏｇｉｓｔꎬ２００６ꎬ１７１(２):２９３－３０３.[５]杨卫兵ꎬ王振林ꎬ尹燕枰ꎬ等.外源ＡＢＡ和ＧＡ对小麦籽粒内源激素含量及其灌浆进程的影响[Ｊ].中国农业科学ꎬ２０１１ꎬ４４(１３):２６７３－２６８２.[６]马建义.除草剂和植物生长调节剂的几种生物筛选方法的比较研究[Ｊ].世界农药ꎬ２００１ꎬ２３(１):４７－５０.[７]ＬａｉＹꎬＦｅｌｄｍａｎＫＬꎬＣｌａｒｋＲＳ.Ｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙｓ(ＥＬＩＳＡｓ)[Ｊ].ＣｒｉｔｉｃａｌＣａｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅꎬ２００５ꎬ３３(１２):４３３－４３４.㊀[８]金幼菊.气相色谱－质谱联用技术在植物激素分析中的应用[Ｊ].植物生理学报ꎬ１９９２(１):７２－７７.[９]张玉琼ꎬ仲延龙ꎬ高翠云ꎬ等.高效液相色谱法分离和测定小麦中的５种内源激素[Ｊ].色谱ꎬ２０１３ꎬ３１(８):８００－８０３.[１０]ＷｕＪＸꎬＸｕＺＬꎬＺｈａｎｇＹＪꎬｅｔａｌ.Ａｎｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅａｎｄｐｒｏｔｅｏｍｅｏｆｔｈｅｐｕｌｐｏｆａｓｐｏｎｔａｎｅｏｕｓｌａｔｅ－ｒｉｐｅｎｉｎｇｓｗｅｅｔｏｒａｎｇｅｍｕｔａｎｔａｎｄｉｔｓｗｉｌｄｔｙｐｅｉｍｐｒｏｖｅｓｏｕｒｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｆｒｕｉｔｒｉｐｅｎｉｎｇｉｎｃｉｔｒｕｓ[Ｊ].ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＢｏｔａｎｙꎬ２０１４ꎬ６５(６):１６５１－１６７１.[１１]王㊀斌ꎬ褚君强ꎬ史发猛ꎬ等.橡胶树胶乳中几种植物激素的提取及其高效液相色谱测定法[Ｊ].热带作物学报ꎬ２０１２ꎬ３３(１):１４８－１５２.[１２]黄㊀靖ꎬ刘艳芝ꎬ刘国伟ꎬ等.高效液相色谱法测定植物内源激素研究进展[Ｊ].山东农业科学ꎬ２０１１(８):１０１－１０３.[１３]张占畅ꎬ孙志红ꎬ郑小能ꎬ等.高效液相色谱法测定库尔勒香梨幼果中的４种内源激素[Ｊ].新疆农业科学ꎬ２０１７ꎬ５４(５):８８６－８９２.[１４]简利茹ꎬ李哲斐ꎬ韩青梅ꎬ等.固相萃取－ＨＰＬＣ测定外生菌根真菌产生植物激素ＩＡＡ和ＧＡ３[Ｊ].西北农业学报ꎬ２０１１ꎬ２０(９):１６５－１６８.[１５]刘同祥ꎬ张艳平.ＨＰＬＣ法测定辣椒苗中ＡＢＡ含量研究[Ｊ].广东农业科学ꎬ２０１０ꎬ３７(８):２４９－２５０.[１６]马宏棋ꎬ陈敏氡ꎬ朱海生ꎬ等.草莓ＡＢＡ的快速提取方法及超高效液相色谱分析[Ｊ].园艺学报ꎬ２０１４ꎬ４１(３):５７７－５８４.[１７]王瑞英ꎬ于振文ꎬ潘庆民ꎬ等.小麦籽粒发育过程中激素含量变化[Ｊ].作物学报ꎬ１９９９ꎬ２５(２):２２７－２３１.[１８]李向阳ꎬ马溶慧ꎬ朱云集ꎬ等.不同冠温特征小麦的籽粒灌浆特性及内源激素的变化[Ｊ].麦类作物学报ꎬ２００５ꎬ２５(５):３２－３７.６９１ 江苏农业科学㊀２０１９年第４７卷第２期。