高效液相色谱法测定毛竹种子萌发过程中GA_3含量的变化
高效液相色谱法测定欧李果中γ-氨基丁酸的含量
HPLC法测定欧李果实中γ-氨基丁酸的含量蔡愈杭，王小曼，戴文君上海东锦食品集团有限公司摘要欧李果实含有丰富的γ-氨基丁酸，采用超声波提取，结合邻苯二甲醛柱前衍生高效液相色谱法对欧李果实中γ-氨基丁酸的含量进行测定。
在对欧李果实提取液柱前衍生后，利用ZORBAX Elipse AAA C18色谱柱，以40 mmol/L的磷酸氢二钠(pH 7.8)及甲醇-乙腈-水(45 : 45 : 10, V/V/V)为流动相进行梯度洗脱。
以γ-氨基丁酸质量浓度X(μg/mL)对峰面积Y(mAU · min)进行线性回归，得回归方程Y=10.689 1X+6.130 2，相关系数为0.9996。
γ-氨基丁酸平均加标回收率为101.1%，RSD为1.60 %。
结果证明，该方法具有高效、结果准确、重复性好的特点。
通过本法测得欧李果实中γ-氨基丁酸的含量为14.0 mg/100g。
关键词高效液相色谱法；欧李；γ-氨基丁酸；邻苯二甲醛HPLC Determination of γ-amino butyric acid Contentin the fruit of Cerasus humilisAbstract The fruit of Cerasus humilis is rich in γ-amino butyric acid (GABA). Combined with ultrasonic extraction, high performance liquid chromatography with o-phthaldialdelhyde (OPA) pre-colomn derivatization are used to measure GABA content in the fruit of Cerasus humilis. After pre-colomn derivatzation of the extract from Cerasus humilis, separation of GABA is carried out on ZORBAX Elipse AAA C18column with the gradient elution of 40 mmol/L Na2HPO4 (pH 7.8) and methanol - acetonitrile - water (45 : 45 : 10, V/V/V). While concentrations of GABA X (μg/mL) on the peak area Y (mAU · min) liner regression, the regression equation was Y = 10.689 1X+6.130 2, with the correlation coefficient of 0.999 6. The average recovery with standard addition was 101.1%, while RSD was 1.60%. The results showed that the method was efficient, accurate and reproducible. By this method, the content of GABA in the fruit of Cerasus humilis was 14.0 mg/100g.Keywords HPLC; Cerasus humilis; GABA; OPA欧李(Cerasus humilis)，为蔷薇科(Rosaceae)樱桃属(Ceraras)，是生长在我国北方贫瘠沙化环境中的特有野生树种[1]。
高效液相色谱法测定制剂中维生素D3粉的含量
高效液相色谱法测定制剂中维生素D3粉的含量摘要用高效液相色谱法测定VD3粉中VD3的含量。
采用菲罗门氨基键合硅胶柱（250mm×4.6mm，5μm），以正己烷-异丙醇（99：1）为流动相，流速为1.5ml/min，检测波长为265nm，柱温为25℃。
在此色谱条件下，维生素D3浓度在18.86μg/ml时进样量在10μl～100μl范围内呈良好的线性关系，r=1.0000，平均回收率为99.46%，RSD（n=6）为0.90%。
结论：本方法操作简便易行，系统使用性良好，适用于VD3粉中VD3的含量测定。
关键词：维生素D3粉；维生素D3；复方制剂；高效液相色谱法维生素D3（胆钙化醇；英文名：Vitamin D3）是一种脂溶性维生素，被看作是一种作用于钙、磷代谢的激素前体，帮助肠道内钙和磷的吸收，促进骨钙沉积，增加肾脏对钙、磷的重吸收，提高血钙、磷的浓度，有利于骨的矿化作用。
上市的补钙和补维生素的复方制剂中大多都含有VD3，由于VD3在复方制剂中含量极低，对光、热不稳定，在空气中易氧化和光解成前维生素D3、反式维生素D3、光甾醇和速甾醇等多种产物，在品种开发时多选取制成包合物的VD3粉为原料，以便提高产品的稳定性。
DSM生产的VD3粉加入维生素E、大豆油、明胶制成包合物的形式提高了稳定性。
但包合物的形式造成测定时VD3提取难度增大，有文献报到采用皂化后提取测定，此方法操作繁琐，而且提取中有损失影响结果。
另有采用稀释剂（DMSO-水10：2，0.2%BHT）溶解后，正己烷提取浓缩的方法，以达到液相测定浓度的要求，此方法操作时间长，提取浓缩过程中人为误差较大。
维生素D3粉进口注册标准JX2008006[7]中提取采用的是回流、萃取、旋蒸、充氮、溶解等方法，操作时间长、操作步骤繁琐，误差大。
本文参考相关文献[1] [2] [3] [8]并经验证，证明采用方法准确可靠，且操作简便、快速。
1仪器与试药高效液相色谱仪（赛默飞U3000、岛津SPD-M20A）；分析天平（奥豪斯AUW120D）；VD3对照品（批号：100061-201208，含量：99.8%，中国食品药品检定研究院）；VD3粉（10万单位/g，瑞士DSM Nutritional Products Ltd）；正己烷、异丙醇和甲醇为色谱纯；二甲基亚砜、二氯甲烷为分析纯。
精品解析：2023年新高考6月浙江生物高考真题解析(参考版)
A．H2O2分解生成O2导致压强改变B．从甲中溶液与乙中溶液混合时开始计时C．250s时I组和Ⅲ组反应已结束而Ⅲ组仍在进行D．实验结果说明酶的催化作用具有高效性8．群落演替是一个缓慢、持续的动态过程，短时间的观察难以发现这个过程，但是有些现象的出现，可以一窥其演替进行的状态。
下列事实的出现，可以用来推断群落演替正在进行着的是（）A．毛竹林中的竹笋明显长高B．在浮叶根生植物群落中出现了挺水植物C．荷塘中荷花盛开、荷叶逐渐覆盖了整片水面D．在常绿阔叶林中马尾松的部分个体因感染松材线虫死亡9．浙江浦江县上山村发现了距今1万年的稻作遗址，证明我国先民在1万年前就开始了野生稻驯化。
经过长期驯化和改良，现代稻产量不断提高。
尤其是袁隆平院士团队培育成的超级杂交稻品种，创造水稻高产新记录，为我国粮食安全作出杰出贡献。
下列叙述正确的是（）A．自然选择在水稻驯化过程中起主导作用B．现代稻的基因库与野生稻的基因库完全相同C．驯化形成的现代稻保留了野生稻的各种性状D．超级杂交稻品种的培育主要利用基因重组原理10．为筛选观察有丝分裂的合适材料，某研究小组选用不同植物的根尖，制作并观察根尖细胞的临时装片。
下列关于选材依据的叙述，不合理．．．的是（）A．选用易获取且易大量生根的材料B．选用染色体数目少易观察的材料C．选用解离时间短分散性好的材料D．选用分裂间期细胞占比高的材料阅读下列材料，完成下面小题。
小曲白酒清香纯正，以大米、大麦、小麦等为原料，以小曲为发酵剂酿造而成。
小曲中所含的微生物主要有好氧型微生物霉菌、兼性厌氧型微生物酵母菌，还有乳酸菌、醋酸菌等细菌。
酿酒的原理主要是酵母菌在无氧条件下利用葡萄糖发酵产生酒精。
传统酿造工艺流程如图所示。
11．小曲白酒的酿造过程中，酵母菌进行了有氧呼吸和无氧呼吸。
关于酵母菌的呼吸作用，下列叙述正确的是（）A．有氧呼吸产生的[H]与O2结合，无氧呼吸产生的[H]不与O2结合B．有氧呼吸在线粒体中进行，无氧呼吸在细胞质基质中进行C．有氧呼吸有热能的释放，无氧呼吸没有热能的释放D．有氧呼吸需要酶催化，无氧呼吸不需要酶催化12．关于小曲白酒的酿造过程，下列叙述错误．．的是（）A．糖化主要是利用霉菌将淀粉水解为葡萄糖B．发酵液样品的蒸馏产物有无酒精，可用酸性重铬酸钾溶液检测C．若酿造过程中酒变酸，则发酵坛密封不严D．蒸熟并摊晾的原料加入糟醅，立即密封可高效进行酒精发酵13．植物组织培养过程中，培养基中常添加蔗糖，植物细胞利用蔗糖的方式如图所示。
高效液相色谱法测定发芽麦粒中γ-氨基丁酸GABA含量
高效液相色谱法测定发芽麦粒中γ-氨基丁酸GABA含量张志清;徐杰;丛军;任飞【摘要】建立了一种测定发芽麦粒中γ-氨基丁酸(GABA)含量的HPLC方法,并对四川10个小麦品种中GABA含量差异及其发芽培养期间变化规律进行了分析.采用FDNB(2,4-二硝基氟苯)为柱前衍生剂,色谱条件为:色谱柱Luna C18(2)(150 mm×4.60 mm,5μm),乙腈-0.02 mmol/L乙酸铵混合溶液为流动相(V: V=15: 85),柱温30℃,流速1.0 mL/min,测定波长320 nm.结果表明,在0.025 5～0.127 6μg 范围内,呈良好的线性关系,最低检出限1.081×10-5 μg/mL,方法的平均加标回收率为97％.采用建立的方法测定不同小麦品种在萌发12 h后的GABA含量在0.238～5.26 mg/100 g之间,不同品种间GABA的含量差异显著,在萌发的0～12h内,GABA含量呈现先上升后下降的趋势,在8h时含量达到最高.【期刊名称】《中国粮油学报》【年(卷),期】2015(030)011【总页数】5页(P135-139)【关键词】发芽麦粒;γ-氨基丁酸(GABA);高效液相色谱法【作者】张志清;徐杰;丛军;任飞【作者单位】四川农业大学食品学院,雅安625014;四川农业大学食品学院,雅安625014;四川农业大学食品学院,雅安625014;四川农业大学食品学院,雅安625014【正文语种】中文【中图分类】TS210γ－氨基丁酸（GABA）是一种非蛋白质氨基酸和重要的神经递质［1］，广泛存在于植物和动物体内，具有抗焦虑［2］，抗氧化［3］和生殖生理作用［4］。
GABA的制备主要有化学法、微生物法和植物富集法。
然而前2种方法各有欠缺，化学法条件苛刻，耗能大，且有化学物质的残留；微生物法效率较高，但高产菌株难以获得。
有学者报道可通过基因工程的办法来重组高产的大肠埃希氏菌富集GABA，但其能力仍不及通过植物富集的方法［6］。
植物生长调节剂2,4-DCPTA的高效液相色谱分析
５０ 标 准 溶 液 于 ５个 １ｍｌ 量 瓶 中 ， 加 入 ．ｍｌ ０ 容 各
为 １０１ １１８ ０． ０． ％。 本法 操作 简单 、 速 ， 快 结果 准确 ， 不但适 合产 品
的分析， 而且可以监测生产过程中其它组分的情况。 （ 方法 的精密度 准 确称取三个不 同含量的 三） 表 １ ４ Ｃ Ｔ ２ － Ｐ Ａ含量分析结果 ，Ｄ
参
考
文
献
Ｉｓｔｅ Ｃ ｅｉｌ ｕｒ Ｎａｎｇ ５００ ｎｔ ｔ ｉ ｕ ｈｍｃ Ｉｄｓｙ， ｎｉ ， ３０１ ａ ｎ ｔ ｎ
Ａ／ ｓ ｉ 趋于稳定。进样量在０１ ０８ Ａ ． ．ｌ间较合适。
（ 线性相 关性和应 用 四） 有机酸 与 内标 以 ｍ／ ｉ
ｍ 对Ａｉ ｓ Ａ作线性回归， 方程和相关系数分别为邻 苯二甲酸ｙ ．２ ．７ ，＝０９４。丁二酸 ｙ ＝０８＋１３ｘ ．９４ ＝ ０８ ＋３２ｘ ＝０９８ 顺 烯二酸 ｙ ．９＋ ．３ ．３， ．９３ ＝０３ ２７ｘ ．９ ，＝０９７。有机酸与内标的色谱图见图２ ．９３ 。 以上结果表明可用于定量分析， 这对于以顺丁烯二
ｃｌ ｎ ｓ ｄ ｄＴ ｅ ａｉａｉ ｃｎ ｉ ｅ ｅ ｏ ｍ ｗ ｓ ｉ ． ｈ ｏｇｎ ｃ ｓ ｂ ｎ ｃ ｄ ｕ ａ ｔ ｅ ｕ ｒ ｃ ａ ｅ ｔ ｄ ｊ ｄ ｅｔ ｂｃｕｅ ｙ ｍ ｄ ｉ ａｈ ｄｉ ｓ ｔｅ ｉｃｙ ａｓ ｔ ｆ ｅ ａ ｄ ｙｒ ｅ ｉ ｈ ｒ ｌ ｅ ｈ ｏ ｅ ｒ ｃ ｎ ｄ ｎ ｉｅｔ ｂ ｄｈ ｄａｏ．Ａ／ ｓ －ｈ ａｃ ａｄ ｎ ｃ ｒ ｅｙｒｔｎ ｉ ｏ ｏ ｔ ｌ ａｄ ｊ ｏ ｙ ｉ Ａ ｆ ｈ ｉ ｃ ｎ ｐ ｉ ｍ ｌｃ ｉ ｂｃｍ ｓ ｂ ａ ｔｅ ｍ ｅ ｔ ｅ ａ ｉ ａ ｄ ａ ｅ ａｌ ｓ ｔ ｐｒ ｕ ｏ ｅ ｃ ｅ ｔ ｅ ｈ ｅ ａ ｒ ｆ ｉ ｅ ｏ ｅｃｅｅ ２０ ａｄ ｔ ｕｃ ｉａ ｄ ｒ ｎ ｃ ｒ ｅｄｄ ｊｔ ｘ ０ ｎ ｔａ ｏ ｓｃｎ ｃ ｏｅ ｈ ｆ ｉｃ ｖ ｉ ３０ ． Ｔ ｅ ａｎ ｌ ｅ ｏ ｓ ｔｎｒ ｐ ａ ｗ ｓ ０ ｈ ｃ ｔ ｇ ｌ ｔ ｉ ａｙ ｓ ａ ｏｉ ｅ ｖ ｆ ｏ ａ ｈ ｅ
高效液相色谱法测定高三尖杉酯碱含量
高效液相色谱法测定高三尖杉酯碱含量高效液相色谱法测定高三尖杉酯碱含量摘要：目的：建立高效液相色谱方法测定高三尖杉酯碱（homoharringtonine，HHT）含量。
方法：采用Thermo – C18（4.6×150mm 5m）色谱柱。
以乙腈—0.2%醋酸溶液（用0.5%三乙胺溶液调节pH至6.5±0.2）（24：76）为流动相，流速1.0 ml/min，柱温25℃，检测波长288 nm。
结果：当高三尖杉酯碱的浓度在80.84 g/ml至120.48g /ml即为常规检测量的80%至120%内时，其峰面积与浓度的线性关系良好，r2=0.9998。
平均回收率为100.46%，RSD=0.18%。
结论：本方法测定结果准确，操作简便，分析快速。
适用于HHT原料药的含量测定。
关键词：高三尖杉酯碱高效液相色谱法含量高三尖杉酯碱（Homoharringtonine，HHT）是我国特有的三尖杉属植物中分离出的抗肿瘤生物碱之一，用药剂量少，其作用原理比较独特，与常用的抗白血病药物无交叉耐药性，在我国已经广泛应用于临床。
目前治疗非淋巴细胞白血病常用的HOAP，HOP方案等均以此为主要成分[1，2]。
虽然国内外有关HHT测定的报道很多，但应用HPLC 检测的却很少。
中国药典2000版本虽然收集有此药物，对其原料及注射液采用紫外分光光度法测定含量，该法专属性不强，当样品放置较长而产生降解时，因无法分离其降解产物而使含量偏高。
建立高效液相色谱法[3]能有效地分离降解产物，从而准确地测得高三尖杉酯碱的实际含量。
该方法简单，可靠，灵敏度高，可作为HHT原料药的含量测定方法。
1.、仪器与试药Agilent-1100色谱仪及工作站；AG135电子分析天平；高三尖杉酯碱工作标准品（批号：040601 含量：100%）；三尖杉碱工作标准品（批号：040701 含量：100%）；检验用样品（由公司连续生产的三批原料药样品，批号：050401、050402、050403）；纯化水；三乙胺（分析纯）；冰醋酸（分析纯）。
52其它植物激素(学生版)高二生物讲义(人教版2019选择性必修1)
A.为使马铃薯块茎提早发芽，可以外施脱落酸
B.为延长马铃薯块茎的贮藏时间，可以外施赤霉素
C.外施赤霉素后，马铃薯块茎从开始发芽到最大发芽率所需的时间更短
D.对照组马铃薯块茎中赤霉素含量与脱落酸含量的比值，第5周时大于实验开始时
A.外源脱落酸可以诱导乙烯生成
B.脱落酸合成抑制剂可以抑制乙烯的生物合成
C.使用脱落酸合成抑制剂可延长番茄的储存时间
D.采摘后番茄果实内乙烯的生成需要外源脱落酸的诱导
6.下列关于植物激素的说法错误的是（）
A.生长素与植物顶端优势有关B.赤霉素可以打破种子休眠
C.脱落酸可以抑制种子萌发D.乙烯可以促进果实发育
2.图甲为豌豆苗茎节段赤霉素（GA）合成途径末端图（其中GA1有生物活性，其他无活性），图乙为外源添加生长素（IAA）对离体豌豆苗茎节段GA含量影响图。下列叙述正确的是（）
A.与去除顶芽的豌豆苗相比，保留顶芽的茎节段中GA8的含量较低
B.给离体豌豆苗茎节段添加IAA，能促进GA20至GA29的合成
C.若用乙烯处理豌豆苗，茎节段中的GA1含量上升
4.如图为生长素（IAA）对豌豆幼苗茎内赤霉素生物合成影响的示意图。图中GA1、GA8、GA20、GA29是四种不同的赤霉素，只有GA1能促进豌豆茎的伸长。若图中酶1或酶2的基因发生突变，会导致相应的生化反应受阻。据图分析，下列叙述正确的是（ ）
A.酶2基因突变的豌豆，其植株较正常植株矮
B.对酶1基因突变的豌豆幼苗施用GA20，该植株可恢复正常植株高度
D.若去除顶芽后，豌豆苗茎节段伸长，侧芽萌发
3.下列关于植物激素的叙述，错误的是（ ）
《肥料中植物生长调节剂的测定高效液相色谱法》标准解读
《肥料中植物生长调节剂的测定高效液相色谱法》标准解读近日，国家市场监督管理总局、国家标准化管理委员会批准发布了多项植保农资类国家标准，其中GB/T37500-2019《肥料中植物生长调节剂的测定高效液相色谱法》标准的发布，让监管在肥料里添加植物生长调节剂的违法行为有了技术支撑。
该标准适用于水溶性肥料、复合肥料、复混肥料、掺混肥料等肥料中复硝酚钠、2.4-D、脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑、吲哚-3-乙酸、吲哚丁酸等植物生长调节剂含量的测定。
标准中各目标物的方法检出限和定量限分别为：复硝酚钠3mg/kg和10mg/kg；2.4-D5mg/kg和10mg/kg；脱落酸、萘乙酸、氯吡脲、烯效唑3mg/kg和10mg/kg；吲哚-3-乙酸、吲哚丁酸5mg/kg和10mg/kg。
如何理解？以复硝酚钠为例，当肥料中添加复硝酚钠3mg/kg以上时，就可以通过高效液相色谱法测定出来；当肥料中添加复硝酚钠10mg/kg以上时，可以通过该方法测出具体的复硝酚钠含量。
据了解，目前市场上存在不少添加植物生长调节剂的肥料，扰乱市场秩序，危害农作物安全。
植物生长调节剂是一类与植物激素具有相似生理和生物学效应的物质。
现已发现具有调控植物生长和发育功能化合物有胺鲜酯（DA-6）、氯吡脲、复硝酚钠、赤霉素、乙烯利、芸苔素内酯和多效唑等。
植物生长调节剂属于农药，使用时需按照登记批准标签上标明的使用剂量、时期和方法。
使用植物生长调节剂对人体健康一般不会产生危害。
但如果使用上出现不规范，可能会使作物过快增长，或者使生长受到抑制，甚至死亡。
对农产品的品质会有一定影响，并且对人体健康产生危害。
根据《农药管理条例》，只要肥料里面添加了农药，该产品就属于农药，应该按照农药进行登记、生产、经营、使用和监管。
未办理农药登记证的，即属于未依法取得农药登记证而生产的农药，或者农药所含有效成分种类与农药的标签、说明书标注的有效成分不符，确定为假农药。
对生产和经营假农药，《农药管理条例》也有明确规定，未取得农药生产许可证生产农药或者生产假农药的，由县级以上地方人民政府农业主管部门责令停止生产，没收违法所得、违法生产的产品和用于违法生产的工具、设备、原材料等，违法生产的产品货值金额不足1万元的，并处5万元以上10万元以下罚款，货值金额1万元以上的，并处货值金额10倍以上20倍以下罚款，由发证机关吊销农药生产许可证和相应的农药登记证；构成犯罪的，依法追究刑事责任。
豆芽中三种常见激素的高效液相色谱检测法
第 2期 彭 姝等 :豆芽中三种常见激素的高效液相色谱检测法
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钠溶液 (0101 mol/L )作为提取剂 。将 2, 4 - D 转 化为钠盐 ,溶于水中 ,高速离心分离 ,上清液用磷 酸调 pH至 215,将钠盐还原成弱酸 2, 4 - D ,此时 2, 4 - D 从水相中析出 。有报道称可利用二氯甲 烷液 - 液萃取 ,但实际操作中发现该法乳化现象 比较严重 ,回收率不高 。故考虑先用蛋白沉淀剂 处理 ,后再通过液 - 液萃取提取 2, 4 - D ,提取度 比较高 ,但是多次萃取操作繁琐 、试剂消耗量大 。 而用 ODS - C18 SPE柱萃取 ,用水淋洗后再用流 动相洗脱 ,不仅具有较理想的净化效果和回收率 , 而且试剂消耗少 ,操作简单 、快捷 。2, 4 - D 为有 机弱酸 ,所以流动相体系应为酸性 ,以 pH 310为 佳 ,试用了冰乙酸和磷酸 ,结果冰乙酸对基线影响 较大 ,噪声较多 ,而磷酸较理想 。
酸化甲醇溶液 :每 100 m l甲醇 +水 ( 60 + 40, V /V )中加入乙酸 50μl,混匀 。
固相萃取小柱 : ODS - C18 SPE柱 ,用时先经 10 m l甲醇洗脱活化 ,再用 10 m l水洗去残留甲 醇 ,保持萃取柱湿润状态待用 。 21212 色谱条件 检测器 :紫外检测器 ;色谱柱 : kromasil C18 ( 25010 mm ×416 mm ×5 μm ) ; 柱 温 : 35℃;检测波长 : 267 nm;流动相 :甲醇 + 115% 磷酸溶液 (40 + 60) ;流速 : 110 m l/m in;进样量 : 10 μl。 21213 样品前处理方法 称取捣碎混匀的豆芽
高效液相色谱法测定肥料中吲哚-3-乙酸和吲哚丁酸含量
Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｍａｓｓ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｉｎｄｏｌｅ￣３￣ａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｉｎｄｏｌｅ ｂｕｔｙｒｉｃ ａｃｉｄ ａｒｅ
ｌｉｎｅａｒｌｙ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅｉｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｐｅａｋ ａｒｅａｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｒａｎｇｅ ｏｆ １ ０ ~ １００ ０ ｍｇ / Ｌ. Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
ＺＨＡＮＧ Ｊｕａｎ １ ꎬ ＺＨＵ Ｈａｉｒｏｎｇ １ ꎬ ＤＯＮＧ Ｑｉａｎ ２ ꎬ ＬＩＵ Ｓｈｕａｎｇ １ ꎬ ＺＯＵ Ｈｕｉｌｉｎｇ １ ꎬ
ＺＨＡＮＧ Ｋａｉｌｉａｎｇ １ ꎬ ＳＵ Ｂｅｎｙｕ １
(１.Ｓｈａｎｄｏｎｇ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｆｏｒ Ｐｒｏｄｕｃｔ Ｑｕａｌｉｔｙ Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎꎬ Ｊｉｎａｎꎬ Ｓｈａｎｄｏｎｇ ２５０１００ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ
ｌｉｍｉｔ ｉｓ ５ ｍｇ / ｋｇ ａｎｄ ｔｈｅ ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｌｉｍｉｔ ｉｓ １０ ｍｇ / ｋｇꎻ ｔｈｅ ｓａｍｐｌｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ ｉｓ ９１ ４６％ ~
１０４ ５％ꎬ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｖｅ ｓｔａｎｄａｒｄ ｄｅｖｉａｔｉｏｎ ｉｓ ２ ０％ ~ ４ ７％. Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｈａｓ ａｃｃｕｒａｔｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ａｎｄ
文章编号:２０９６￣ ７０４７(２０２０)０５￣ ００６７￣ ０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｉｎｄｏｌｅ￣３￣Ａｃｅｔｉｃ Ａｃｉｄ ａｎｄ Ｉｎｄｏｌｅ Ｂｕｔｙｒｉｃ Ａｃｉｄ ｉｎ
Ｆｅｒｔｉｌｉｚｅｒｓ ｂｙ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
２０２０ 年 １０ 月
高效液相色谱法测定酶转化液中胞苷三磷酸及其相关物质_肖明芳
2005年9月Sep t e m ber 2005色谱Chi n ese Journa l of Chro m atographyVo.l 23N o .5564收稿日期:2004-08-03作者简介:肖明芳,女,硕士研究生,E -m ail :m i ngfang1981@sina .co m.通讯联系人:应汉杰,男,教授,Tel :(025)83587329,E -m ail :y i nghanjie @n j u.t edu .cn.基金项目:教育部跨世纪优秀人才培养基金和江苏省新世纪学科带头人培养基金资助项目.高效液相色谱法测定酶转化液中胞苷三磷酸及其相关物质肖明芳, 何明芳, 吕 浩, 应汉杰(南京工业大学制药与生命科学学院,江苏南京210009)关键词:高效液相色谱法(h i gh per f or m ance li qui d chr o m a tography );胞苷三磷酸(cy tidi ne tr i phosphate );胞苷二磷酸(cy ti d i nedi phospha te );胞苷一磷酸(cyti dine m onophosphate );酶转化液(liqu i d of enzym ati ca l reacti on )中图分类号:O 658 文献标识码:B 文章编号:1000-8713(2005)05-0564-01微生物多酶系统转化法[1]是在胞苷三磷酸(CTP )的制备方法中比较有产业化前景的技术,即由胞嘧啶核苷酸(即胞苷一磷酸,CMP )经微生物(如啤酒酵母)转化而得到CTP ,但在其产物中可能还存在中间产物胞苷二磷酸(CDP )。
有关核苷酸物质的高效液相色谱检测方法国外已有报道[2,3],我们在此基础上简化了色谱条件,开发出一套适用于对酶转化液中CM P ,CDP 和CTP 精确定量的方法。
1 实验部分1.1 仪器与试剂 125/166/845高效液相色谱仪及色谱工作站(B eckm an 公司)。
高效液相色谱与质谱联用分析测定川芎中有效成分阿魏酸与藁本内酯
高效液相色谱与质谱联用分析测定川芎中有效成分阿魏酸与藁本内酯孔 亮 于志远 邹汉法3 孙乃昌 吴丽华 倪坚毅(中国科学院大连化学物理研究所国家色谱研究分析中心,大连116011)摘 要 采用HPLC 2MS 系统地研究了中药川芎有效成分阿魏酸(f erulic acid )和藁本内酯(ligustilide )的定量分析方法。
利用制备色谱制备了藁本内酯对照品,并对其进行了紫外光谱、质谱、红外光谱等结构鉴定。
分别考察了水、甲醇、乙醇、95%乙醇4种溶剂以及提取时间对川芎中阿魏酸和藁本内酯提取量的影响。
结果表明:水是阿魏酸的最佳提取溶剂,提取时间45min 为宜;乙醇是适合提取藁本内酯的溶剂,提取时间75min 为宜。
以外标法对市售川芎中的阿魏酸与藁本内酯进行了定量分析,二者含量分别是0.15%(m/m )和0.82%(m/m )。
关键词 高效液相色谱与质谱联用,川芎,质量控制,阿魏酸,藁本内酯 2003210231收稿;2004202212接受本文系国家自然科学基金资助项目(No.90209056)1 引 言川芎(Rhizom a Chuanxiong )为伞形科植物川芎(L igusticum chuanxiong Hort.)的干燥根茎,具有行气活血、祛风止痛之功效,为活血化瘀常用中药。
据报道其含有内酯类、生物碱、有机酸类或酚类以及中性油类等多种有效成分[1,2]。
中药作为天然产物,有效成分含量易受产地、气候、加工工艺等因素的影响,因此,中药质量控制是保证其药效稳定的重要技术课题[3,4]。
由于阿魏酸(f erulic aci d )与藁本内酯(ligustili de )是川芎的主要活性成分(其分析结构见图1),因此,对二者或其中之一的定量分析应用于质量控制的研究较多,如:薄层色谱法(TLC )、分光光度法、高效液相色谱法(HPLC )、气/液质联用 图1 阿魏酸(a )和藁本内酯(b )的分子结构式Fig.1 Molecular structure of ferulic acid (a )and ligustilide (b )(GC/LC 2MS )、毛细管电泳(CE )及指纹图谱(FPS )等[5～11]。
厚竹孕笋成竹期竹鞭系统内源激素动态变化
厚竹孕笋成竹期竹鞭系统内源激素动态变化范慧慧;申展;黎祖尧;张艳华;李应兰;李苑;孙娅东【摘要】为了揭示厚竹孕笋成竹过程中竹鞭系统内源激素的分布特征和动态变化规律,探索内源激素间的协同和拮抗作用对厚竹孕笋成竹的调控作用.采集厚竹笋芽萌动期、竹笋速生期和新竹长成期竹鞭的鞭节间、鞭节、鞭根和鞭芽,采用酶联免疫吸附法(ELISA),测定吲哚-3-乙酸(IAA)、赤霉素(GA)、玉米素核苷(ZR)和脱落酸(ABA)质量分数,分析4种内源激素的分布特征、动态变化及各种激素间的比值.结果表明:厚竹在孕笋成竹过程中,竹鞭系统4个器官中各个时期均是IAA和ABA质量分数显著高于GA和ZR,新竹长成期鞭根中IAA质量分数显著高于ABA,鞭节中ABA质量分数显著高于IAA.同一发育期仅竹笋快速生长期鞭节间的GA质量分数显著高于鞭根;同一器官中各种内源激素的绝对质量分数排序在不同发育期不同.随着竹林系统生长中心的转移,竹鞭系统中内源激素质量分数会发生相应变化,但不同内源激素的动态变化趋势和变化幅度不同.相同发育期内不同器官中各种内源激素所占的质量份数差异较小,但同一器官中相同的内源激素比值在不同发育期之间却差异较大.从孕笋到成竹,4种器官中ZR/GA值均逐渐增大且差异显著,笋芽膨大期鞭芽中ZR/IAA值显著偏低,鞭节间、鞭根和鞭芽中GA/IAA值显著高于新竹长成期.综合分析得知:不同的内源激素对厚竹生长发育的影响和调控作用不同,内源激素间的协同和拮抗作用较大,其中ZR和GA间的协同或拮抗作用影响显著.【期刊名称】《中南林业科技大学学报》【年(卷),期】2018(038)012【总页数】7页(P108-114)【关键词】厚竹;竹鞭;内源激素;分布特征;动态变化【作者】范慧慧;申展;黎祖尧;张艳华;李应兰;李苑;孙娅东【作者单位】江西农业大学林学院,江西南昌330045;江西农业大学林学院,江西南昌330045;江西农业大学林学院,江西南昌330045;江西省竹子种质资源与利用重点实验室,江西南昌330045;南京林业大学林学院,江苏南京210037;江西农业大学林学院,江西南昌330045;江西农业大学林学院,江西南昌330045;江西农业大学林学院,江西南昌330045【正文语种】中文【中图分类】S795.9厚竹Phyllostachys edulis ‘Pachyloen’因其秆壁厚度是等径毛竹的1.8～2.0倍且性状稳定而得名[1]，且竹笋营养成分[2]、氮代谢和利用水平[3-4]、CO2和光能利用率[5-7]、抗寒性[8]等均高于毛竹，并且跨区域引种不会降低其经济性状[9-11]，是江西省特有的毛竹变异新品种，2017年被审定为国家级优良品种，作为笋用和笋材兼用竹种推广前景广阔。
GA_3对不同年份烟草种子萌发和幼苗生长的影响
摘 要 利 用 不同浓 度 （０ ２ ０ｍｇＬ） Ｇ 溶 液处 理不 同年 份 采收 的烟 草 种子 Ｋ３ ６ 结 果表 明 ： ３ 有提 高烟 草 种子 活 力 ， ５－ ０ ／ 的 Ａ， ２， ＧＡ 具 打破 种 子 休 眠 ， 进 幼 苗 生 长 、 长 的作 用 。 一 定 浓 度 范 围 内 ， 加 Ｇ 的 浓 度 可 以提 高 种 子 的 活 力 和 促 进 幼 苗 的 生 长 ， 在 达 到 一 定 浓 度 后 ， 促 伸 在 增 Ａ３ 但 种子 活力和 幼苗的 生长却 受到抑 制 ， Ａ３ 试验 范 围内的 浓度 处理 对 幼苗生 长和种 子 的萌发 以 １０ １ ０ｍｒＬ较好 。 Ｇ 在 ０ —５ Ｃ 关键 词 Ｇ ； 草 ； 子活 力 ； 苟生长 ； Ａ３烟 种 幼 影响 中图分类号 ￥ ７ 文 献标识 码 Ａ ５２ 文章 编号 １０ — ７ ９ ２ １ ）５ ０ ５ — ２ ０ ７ ５ ３ （０ １ ０ — ０ ４ ０
方 差分析 结果与发 芽 率的变化趋 势一致 。 各个 年份采收 的种 子的发芽指数之间呈显著差异。 中 ２１ 其 ０ ０年 采收 的种 子 发 芽 指数 最高 ， ２ ．９ ２０ 为 ５５ ．０ ６年采 收 的种 子 的发 芽指 数 最 低 ， ｌ．４ 不同采收 年份 的种子活 力指数 表现 为 ２ １ 为 ９ 。 ４ ０ ０年＞ ２ ０ 年＞ ０ ６年 ， 同年份 采收 的种子 之 间的活 力指 数 呈显 ０８ ２０ 不
烟草种 子发 育与 萌发 的好坏 直 接影 响到 烟叶 生产 【 关 】 １ 。 于 烟草 种 子 的萌发 过 程 以及 种 子质 量 、 学 物 质 、 化 温度 、 光
７ ． ％ ，０ ０年 采 收 的 种 子 发 芽 势 最 高 ， ８ ． ％ ；０ ６年 ２６ ７ ２１ 为 ３０ ０ ２０
高效液相色谱法测定三七地上部分γ—氨基丁酸的含量
高效液相色谱法测定三七地上部分γ—氨基丁酸的含量采用高效液相色谱法测定不同产地的三七地上部分中γ-氨基丁酸的含量。
色谱条件采用C18柱色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈-4.1 g·L-1醋酸钠缓冲液为流动相，检测波长为254 nm。
γ-氨基丁酸在0.01～1.03 g·L-1线性范围内线性关系良好；三七茎叶和花中γ-氨基丁酸的平均加样回收率分别为101.7%（RSD 1.1%，n=3）和97.3%（RSD=0.38%，n=3）。
结果表明，不同产地的三七茎叶和花样品GABA含量差异较小，但三七花中GABA平均含量高于茎叶，分别为0.49%，0.53%。
该方法操作简便、结果稳定，适合于三七地上部分中γ-氨基丁酸含量测定，为三七地上部分资源综合开发提供依据。
标签：三七地上部分；γ-氨基丁酸（GABA）；异硫氰酸苯酯（PITC）；高效液相色谱；含量测定γ-氨基丁酸（GABA）作为神经递质，具有诸多生理功能，如调节血压与心率、治疗神经退行性疾病、保肝利肾、抗衰老、促进生长激素分泌、预防肥胖等功效[1-3]。
日本和台湾分别在2001年和2005年将GABA列为食品级，相继国家卫生部也于2009年将GABA列为新资源食品。
据文献报道，GABA检测方法有比色法[4]、高效液相色谱法（HPLC）[5-7]、GC-MS[8]等。
由于GC-MS检测仪器价格昂贵、操作复杂，在测定植物中有效成分含量时普遍采用HPLC，其优点为灵敏度高、检测快、操作简便等，应用于茶叶、苦荞、桑叶等[9-11]植物的GABA含量测定中。
相关研究表明三七主根中不含有GABA[12]，但对三七地上部分中GABA的研究尚无报道[13-14]。
三七地上部分（花和茎叶）资源丰富，富含多种成分如皂苷类、黄酮类、氨基酸类、挥发油类、微量元素等。
现阶段三七花用途单一，三七茎叶则被大量弃在田间，仅有5%的茎叶资源被利用，资源开发明显不足，对三七地上部分资源的综合开发具有潜在的市场空间。
高效液相色谱柱后衍生法测定谷物中3_种氨基甲酸酯类农药残留
Food Science And Technology And Economy粮食科技与经济2023 年4月第48卷 第2期Apr.2023Vol.48, No.2氨基甲酸酯类农药具有广谱、高效、低毒、选择性高、易分解和残毒少等特点，被广泛应用于粮食、蔬菜和水果等农产品种植中[1-2]。
涕灭威、灭多威、克百威是谷物中常用的氨基甲酸酯类农药。
灭多威和克百威具有内吸、触杀、胃毒作用，涕灭威有剧毒，主要用作农用杀虫剂。
它们中毒的症状表现为昏迷、恶心、呕吐、腹泻、流涎、流泪、视力模糊、震颤、惊厥、精神错乱。
国际癌症研究机构在2007年将氨基甲酸酯类列为2A 类致癌物。
含酒精的农作物，往往含有低浓度的氨基甲酸酯类农药。
联合国粮食及农业组织、世界卫生组织与联合食品添加剂专家委员会(专家委员会)曾在2005年进行有关氨基甲酸酯类农药评估，认为经食物(不包括酒精饮品)摄入的氨基甲酸酯类农药分量，对健康的影响并不大，但经食物和酒精饮品摄入的氨基甲酸酯类总量，则可能对健康构成潜在风险，专高效液相色谱柱后衍生法测定谷物中3种氨基甲酸酯类农药残留赵越超，石家源，杨会宁，张 月，徐振斌（吉林省粮油卫生检验监测站，吉林 长春 130033）摘要：采用高效液相色谱柱后衍生法，即将谷物样品粉碎后，经乙腈提取、氮吹、甲醇复溶、固相萃取柱净化、甲醇-二氯甲烷溶液洗脱、氮吹、甲醇定容后，经带有柱后衍生系统和荧光检测器的高效液相色谱仪检测，对谷物中灭多威、涕灭威、克百威3种氨基甲酸酯类农药的残留量进行测定外标法定量。
该方法的灭多威、涕灭威、克百威检出限均为0.008 mg/kg；相对标准偏差(RSD)均小于7.5%，加标回收率为80.6%～109.0%，3种农药混合标准曲线最佳线性范围0.01～2.0 μg/mL，线性相关系数（R ）均大于0.999 5。
结果表明，该方法具有良好的线性关系，准确性和精密度高，操作简单，适用于谷物中涕灭威、灭多威、克百威农药残留量的同时检测。
GA_(3)对不同磨光量甜菜种子萌发的影响
GA_(3)对不同磨光量甜菜种子萌发的影响王仁汉;屈旭;宋志美;刘少云;胡海洲;郑文哲【期刊名称】《中国糖料》【年(卷),期】2024(46)1【摘要】【目的】在甜菜种子加工过程中,通常需要磨光和浸种。
为探究磨光量、GA_(3)浓度、浸种时间对甜菜种子萌发的影响。
【方法】设置了5个磨光量、5个GA_(3)浓度、3个浸种时间,对甜菜种子进行引发试验。
【结果】结果表明,100 mg/L GA_(3)浸种8 h,大(B)、中(M)种子的发芽势较其0 mg/L GA_(3)处理分别提高6.59%、10.04%,发芽率分别提高6.19%、9.56%;GA_(3)浓度为100 mg/L和200 mg/L时,B、M种子平均发芽时间较低,GA_(3)可加速种子萌发;100 mg/LGA_(3)浸种8 h,种子的发芽势、发芽率、发芽指数分别比其0 h处理提高10.48%、5.51%、88.12%,其发芽率显著高于16 h处理(P<0.05)。
GA_(3)浓度和种子磨光、浸种时间和种子磨光量双因素方差分析表明,两因素交互显著影响种子主要萌发指标。
【结论】100 mg/L GA_(3)浸种8 h,对较大粒径的B、M甜菜种子的萌发效果最好。
【总页数】6页(P42-47)【作者】王仁汉;屈旭;宋志美;刘少云;胡海洲;郑文哲【作者单位】青岛中烟种子有限责任公司;内蒙古自治区农牧业科学院【正文语种】中文【中图分类】S566.3【相关文献】1.不同浓度盐胁迫对转基因饲用甜菜种子萌发及幼苗生长的影响2.盐胁迫对不同品种甜菜种子萌发特性的影响3.脱水胁迫对吸胀甜菜种子的萌发行为和线粒体小分子量热休克蛋白的影响(英文)4.不同浓度胺鲜酯对甜菜种子萌发的影响5.不同浓度GA_(3)与处理时间对蓝莓种子萌发的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
高效液相色谱法测定芹菜籽中3
高效液相色谱法测定芹菜籽中3 【关键词】芹菜籽；，，3-正丁基苯酞；，，高效液相色谱法摘要：目的高效液相色谱（HPLC）法测定芹菜籽中3-正丁基苯酞的含量。
方法采用YMC ODS C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈酯酸钠（45∶55），酯酸钠0.05 mol・L-1，冰酯酸调节pH4.6；检测波长为228 nm；流速为1.0 ml・min-1；柱温：40℃。
结果3-正丁基苯酞在0.044 1 ~0.161 7μg范围内线性关系良好，r= 0.999 7，方法的回收率为98.19%，RSD为1.38%（n=5）。
结论该方法能够准确可靠地测定3-正丁基苯酞的含量，可作为芹菜籽的质量控制指标之一。
关键词：芹菜籽； 3-正丁基苯酞；高效液相色谱法Determination of 3-n-Butylphthalide in Celery Seed by HPLCAbstract：ObjectiveTo establish a method for determining 3-n-butylphthalide in Celery Seed by HPLC.Metho dsYMC C18 column(250 mm×4.6 mm，5 μm) was used. The mobile phase consisted of acetonitrile-sodium acetate(45∶55) with flow rate 1.0 ml・min-1. The detection wavelength was set at 228 nm and the column temperature was 40℃. ResultsThe linear range of 3-n-butyl phthalide was at the range of 0.044 1 ~0.161 7 μg(r=0.999 7，n=5) ，the average recovery was 98.19%，and RSD was1.38%(n=5). ConclusionThe method is rapid， highly accurate and precise. It can be used to control the quality of Celery Seed.Key words：Celery Seed; 3-n-butylphthalide; HPLC芹菜籽是伞形科旱芹属植物芹菜Apium graveolens L.的种子。
GA_3和6_BA对降香黄檀种子发芽的影响
持 及 水 土 保 持 等 造 成 了 不 利 影 响 ，也 影 响 和 阻 碍
降 香 黄 檀（Dalbergia odorfiera Chen.）又 名 花 梨
了 天 然 橡 胶 产 业 的 可 持 续 发 展 。 为 了 发 挥 橡 胶 种 木 、黄 花 梨 ，属 于 蝶 形 花 科 黄 檀 属 ，是 慢 生 长 、喜 光
收稿日期：2014－02－19
基金项目：云南天然橡胶产业关键技术研究与集成示范（2011BAD30B01）
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热 带 农 业 科 技 2014,37(2）
Tropical Agricultural Science & Technology
提 高 降 香 黄 檀 种 子 发 芽 率 、壮 苗 指 数 和 根 冠 比 的 方法。
化 种 植 等 方 式 构 建 复 合 型 生 态 系 统 。 如 ，将 经 济 期 长 ，自 然 繁 殖 率 低 ，极 易 丧 失 发 芽 能 力 。 为 了 提
价 值 较 高 的 经 济 树 种 ，以 片 段 化 或 斑 块 化 方 式 种 高 人 工 种 植 前 期 的 种 子 发 芽 率 ，本 研 究 采 用 植 物
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收稿日期: 2011-03-18基金项目: 国家“十一五”科技支撑项目(2006BAD19B0203)资助。
作者简介: 梁晓静，女，硕士。
E-mail ：Xj-xj-xj@* 通讯作者: 高 健，女，研究员，博士生导师。
E-mail ：gaojian@安徽农业大学学报, 2011, 38(4): 496-499 Journal of Anhui Agricultural University[DOI]CNKI ：34-1162/S.20110624.1625.018 网络出版时间：2011-06-24 16:25:01 [URL]/kcms/detail/34.1162.S.20110624.1625.018.html高效液相色谱法测定毛竹种子萌发过程中GA 3含量的变化梁晓静1, 2，高 健1*，徐有明2(1. 国际竹藤网络中心，国家林业局竹藤科学与技术重点实验室，北京 100102；2. 华中农业大学园艺林学学院，武汉 430070)摘 要：通过优化预处理和检测方法，采用Waters C 18反相色谱柱，以磷酸缓冲盐和乙腈为流动相，外标法测定 GA 3的回收率为78.42%，变异系数±3.9，保留时间稳定，首次建立了毛竹种子中植物内源激素GA 3含量的测定方法。
运用此法测定毛竹种子萌发过程中GA 3含量的变化，结果表明，从浸种到出苗时GA 3的含量在2.56~14.75 µg·g -1，吸胀阶段含量变化不明显，而浸种36 h 后含量大幅升高，在72 h 和即将萌出胚根时达到峰值，随着毛竹种子的萌发进程，GA 3含量呈总体上升趋势。
关键词：高效液相色谱；毛竹种子；萌发；GA 3中图分类号：S795 文献标识码：A 文章编号：1672−352X (2011)04−0496−04Determination of GA 3 content in moso bamboo seed during germination by HPLCLIANG Xiao-jing 1, 2, GAO Jian 1, XU You-ming 2(1. Key Laboratory of Science and Technology, International Centre for Bamboo and Rattan, Beijing 100102; 2. College of Horticulture and Forestry Sciences, Huazhong Agricultural University , Wuhan 430070)Abstract: The measurement of endogenous GA 3 contents in moso bamboo seed was set up for the first time by optimizing pretreatment and determination method, which was carried out with external standard method on a reverse phase Waters C 18 column using phosphoric acid buffer and acetonitrile as mobile phase. The results showed that recovery rate was 78.42%, the RSD was ± 0.039, and retention time was stable. Changes within the germination of the moso bamboo seed in the content of gibberellins were studied during sprouting. GA 3 level in-creased from 2.56 µg·g -1 to 14.75 µg·g -1 during sprouting process. GA 3 levels were low at the beginning of the soaking, and then increased greatly after 36 h after soaking to the highest peak at 72 h until radicle appeared. The levels of GA 3 were higher in radicle than that in embryo.Key words: HPLC (high performance liquid chromatography); moso bamboo seed; germination; GA 3赤霉素最早从水稻恶苗病菌的发酵滤液中分离出来，发现这种物质能够促进水稻的徒长，被命名为赤霉素(gibberellin ，简称GA)[1]。
赤霉素大多存在于高等植物中，影响着高等植物生活史的各个阶段, 如种子的发芽、茎秆的伸长、叶片的延展、表皮毛状体的发育、开花时间及花与果实的成熟等[2]。
目前所知，赤霉素是一大类植物激素，其中GA 3最为普遍和重要。
植物内源赤霉素的测定方法主要有免疫分析法、气相色谱法（GC ）、高效液相色谱法（HPLC ）和色谱-质谱联用法等。
免疫分析法有放射免疫法（RIA ）和酶联免疫法（ELISA ），放射免疫法（RIA ）具有较高的灵敏度，可以检测出nmol 或pmol 的微量物质[3-4]，但需要放射性同位素，由于放射性同位素的不稳定性及对操作者身体的损伤，RIA 法现在已较少使用。
酶联免疫法（ELISA ）是用某些酶对免疫原进行标记，避免了使用放射性物质，但测定结果重复性差，这些局限导致其在植物激素的定性定量研究中未能得到广泛的应用。
GC 法较HPLC法灵敏度高，但在测定除乙烯以外的激素需要经过衍生化处理生成易挥发的衍生物才能进行分析，衍生化过程繁琐，而HPLC 法与之相比，大大简化了38卷4期梁晓静等: 高效液相色谱法测定毛竹种子萌发过程中GA3含量的变化497样品的前处理过程。
色谱-质谱联用法是测定植物内源激素最准确可靠的方法，但其样品净化过程复杂，设备昂贵，使用和维护成本相对较高。
高效液相色谱法（HPLC）已在很多植物激素的分析中得到应用，90年代末朱智甲等[5]利用高效液相色谱测定了小麦幼苗中GA3的含量，得到小麦幼苗中GA3的含量为8.14 µg·g-1和12.28 µg·g-1。
2002年，王若仲等[6]建立了PVPP柱、DEAE柱、Sep-pak柱联用的快速净化提取植物内源激素的方法，并测定了杂交稻的4种内源激素，其中GA3得到很好的分离。
郑郁善等[7]应用高效液相色谱仪对毛竹笋期的竹叶、竹秆、竹鞭和当年正常生长的竹笋中GA3的含量及其分布规律进行了研究，杨彤于等[8]对利用高效液相色谱法测定毛竹竹笋中GA3的可靠性进行了研究，但该提取流程用于毛竹种子GA3的提取分离效果不佳。
本研究在前人方法的基础上，对样品提取方法、吸收波长、流动相选择等环节进行改良，旨在更准确的测定出毛竹种子萌发过程中的GA3含量。
近来，已有竹类育种工作者开展利用外源GA3提高毛竹种子活力的研究，适当浓度外源GA3处理毛竹种子可以促进种子萌发，提高种子活力。
但还没有关于毛竹种子萌发过程中内源GA3含量变化及变化机理的报道。
本试验利用高效液相色谱法就毛竹种子萌发过程中GA3含量的动态变化进行研究，旨在为阐明GA3在毛竹种子萌发过程中的作用和毛竹实生苗培育过程中外源激素的应用提供理论依据，也为进一步开展毛竹种子萌发过程中GA3代谢与调控研究奠定基础。
1 材料与方法1.1 试验材料供试种子采自广西桂林，采后通风干燥，含水量约为11%，剥壳后于4℃冰箱中用塑料袋封存。
参照蔡春菊和李伟成等[9-10]的方法进行浸种处理。
取样：种子浸种12 h后开始取样，装入锡纸袋，放入液氮中速冻后于－80℃冰箱冷冻保存，以后每隔12 h取1次样，直至露白，待胚根、胚芽长度与种子等长取胚根、胚芽样品，以干种子作为对照。
1.2 仪器和试剂Waters2695高效液相色谱仪，Waters2996二极管阵列检测器，KQ5200E型超声波清洗器，赤霉素（GA3）标样为美国Sigma产品，纯度≥98.5%，乙腈（CH3CN）、甲醇（CH3OH）为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。
1.3 标准品的配制准确称取GA3标准品0.01 g，用乙腈定容到100 mL棕色容量瓶中，作为母液（100 mg·L-1），然后再分别稀释为20、10、5、2和1 mg·L-1浓度。
1.4 样品的制备参照张政等[11-13]的提取、分离和纯化方法，按如下方法制备样品：准确称冻干样品，用德国制造的Retsch混合球磨仪MM301将样品磨成粉末，加入预冷的乙腈，超声波震荡30 min，放置4℃冰箱过夜，浸提液以5 000 r·min-1离心15 min，分离上清液，残渣中分别再加入8 mL和4 mL的乙腈，超声波震荡0.5 h重复浸提2次，合并3次所得的上清液，全部滤液在35℃浓缩蒸干，分3次用pH8的磷酸缓冲液冲洗蒸馏瓶，然后加入等体积石油醚萃取脱色3次，弃去酯相后，滤液用2 mol·L-1的柠檬酸调pH至2.5~2.8，再用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯相，于35℃减压浓缩至干，然后加pH3的磷酸缓冲液复溶，过Sep-pak C18预处理小柱，小柱使用前先用5 mL甲醇活化，再用5 mL超纯水平衡柱子，样品过柱后用5 mL超纯水清洗，最后用2 mL乙腈洗脱，收集洗脱液，溶液经0.45 µm的微孔滤膜过滤后进行HPLC分析。
1.5 色谱条件Waters C18反相色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；柱温：35℃；流动相：乙腈(CH3CN) ∶水(4∶6 V/V)；流速：1.0 mL·min-1；进样量：20 µL；检测波长：210 nm；采用外标法定量。
2 结果与分析2.1 流动相的确定测定赤霉素的流动相因为色谱柱的不同而有很大的差别，常用的流动相有甲醇-水[14]，乙腈-水[15]，甲醇-乙腈-水[16]，水中常含有少量的酸，可以抑制样品的电离，改善拖尾现象。
经过多次实验比较，采用流动相为乙腈(CH3CN)∶水(4∶6 V/V)，其中水中含有0.1%的磷酸，出峰效果最好，可以分离GA3。