高效液相色谱说课稿
高效液相色谱法指导培训讲义
高效液相色谱法指导培训 讲义
离子抑制色谱（ion suppression chromatography）——调节流动相的pH值， 抑制组分的解离，增加组分在固定相中的溶解 度，改善峰形，以达到分离有机弱酸和弱碱的 目的。
离子对色谱（ion pair chromatography）— —将反离子加入流动相中，与呈解离状态的被 测物作用，生成脂溶性的中性离子对络合物， 从而增加了被测物在非极性固定相中的溶解度， 改善分离效果，达到分离目的。
高效液相色谱法指导培训 讲义
胶束色谱(micellar chromatography)
• 表面活性剂在水中超过某一浓度（临界浓度） 时，多余的表面活性剂不再溶解，聚集而成 胶束（胶粒）。
• 以胶束分散体系为流动相的色谱法称为胶束 色谱法。它的流动相为胶束多相分散体系， 不是真溶液；流动相中不含有机溶剂。
过滤——用滤膜 脱气——采用
过滤或垂熔漏斗 超声或过滤的方
过滤
法
冲洗
使用含酸、碱、缓冲液的流动相后， 必须用不含盐的有机溶剂-水冲洗！
高效液相色谱法指导培训 讲义
高效液相色谱法指导培训 讲义
高效液相色谱法指导培训 讲义
高效液相色谱法指导培训 讲义
▪进样阀
高效液相色谱法指导培训 讲义
定量圈 1
正相色谱（normal phase）
流动相极性小于固定相极性的分配色谱 法称为正相分配色谱。常用的分析柱有:
氨基柱、氰基柱、硅胶柱。 常用流动相为极性小的有机溶剂。
反相色谱（reversed phase）
流动相极性大于固定相极性的分配色谱法 称为反相分配色谱法。常用的分析柱有： ODS( C18)， C8， C2。
说课稿-高效液相色谱法测定饮料中苯甲酸钠的含量
说课稿尊敬的各位评委老师，你们好！今天我要进行说课的内容是：高效液相色谱法的应用——饮料中苯甲酸钠含量的测定一、教材分析高效液相色谱法的应用是选自高等教育出版社《仪器分析》教材第八章第一节。
在此之前，学生们已经学习了色谱法及其基本概念，这为过渡到本节内容的学习起到了铺垫的作用。
由于高效液相色谱法的分析速度快、效率高、灵敏度高以及操作自动化等特点，此方法已经广泛用于化工、农药、医药、环境监测、动植物检验检疫等行业和领域。
因此学好本节内容对于以后的工作有着至关重要的作用。
二、教学目标根据本教材的结构和内容分析，结合着高职学生的认知结构及其心理特征，我制定了以下的教学目标：1、激发学生对学习过程的兴趣及未来工作的期待；2、熟悉高效液相色谱仪的基本构造及工作过程；3、学会使用高效液相色谱仪测量简单有机物的含量；三、教学重点教学重点：高效液相色谱仪的基本构造重点的依据：只有掌握了高效液相色谱仪的基本构造，才能理解其工作原理、学会使用高效液相色谱法测量简单的化合物。
四、教学难点教学难点：1、对高效液相色谱仪工作过程的理解2、应用高效液相色谱法测定有机化合物的含量难点的依据：高效液相色谱仪工作过程较抽象，内部结构复杂、仪器昂贵，不能随意拆卸，很难想象其工作过程；另外实际的样品测量过程中影响因素较多，容易出错，很难独立完成。
为了讲清教材的重、难点，使学生能够达到本节内容设定的教学目标，我再从教法和学法上谈谈：五、教学方法1、直观演示法：利用图片、动画等手段进行直观演示，激发学生的学习兴趣，活跃课堂气氛，促进学生对知识的掌握。
2、观察法让学生独立观察实验仪器设备，将教材中的知识形象化、具体化，让学生切实的感受到高效液相色谱仪的每一个零部件。
3、集体讨论法针对课程的重点难点，组织学生进行集体和分组讨论，培养学生在学习中分析问题解决问题的能力。
使学生始终处于主动的学习状态中，充分体现了“教为主导，学为主体”的原则。
六、学法指导高职学生年龄段分布在18-21岁之间，此阶段学生自我意识逐步增强，抽象思维迅速发展，意志水平明显提高。
高效液相色谱教学设计模板
高效液相色谱教学设计模板引言：高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种常用的分析化学方法，广泛应用于各种领域，如药物分析、环境监测、食品安全等。
为了有效地教授和学习HPLC的原理和操作技能，设计一个合理的教学模板是非常重要的。
本文将介绍一个高效液相色谱教学设计模板，帮助教师在教学中提高学生的学习效果和实践能力。
一、教学目标：1. 理解高效液相色谱的原理和基本概念。
2. 掌握HPLC仪器的组成和操作方法。
3. 学会样品制备和进样技术。
4. 熟悉常见的HPLC柱和检测器。
5. 能够解决HPLC分析中的常见问题。
二、教学内容：1. 高效液相色谱的原理和基本概念a. 色谱分离原理的介绍b. HPLC的优点和应用领域c. HPLC的主要组成部分2. HPLC仪器的组成和操作方法a. HPLC仪器的主要组成部分及其功能b. HPLC仪器的基本操作步骤c. HPLC仪器的常见故障处理方法3. 样品制备和进样技术a. 样品制备的基本原则b. 样品制备的常用方法和技术c. 进样技术的基本原理和操作步骤4. 常见的HPLC柱和检测器a. 常见的HPLC柱类型及其特点b. 常见的HPLC检测器及其原理c. 选择合适的柱和检测器的考虑因素5. HPLC分析中的常见问题解决方法a. HPLC峰形异常的原因分析与解决方法b. HPLC baseline异常的原因分析与解决方法c. HPLC定量分析中的常见问题及其解决方法三、教学方法：1. 理论讲授：通过课堂讲授的形式，系统地介绍HPLC的原理、仪器、样品制备和分析技术等知识点。
2. 实践操作：组织学生进行HPLC仪器的操作实践，以提高他们的实验技能和操作水平。
3. 讨论研究：通过讨论和研究HPLC分析中的实际问题，培养学生的问题解决能力和创新思维。
四、教学评估：1. 课堂测验：通过课堂测验，检查学生对HPLC原理和操作的理解程度。
HPLC高效液相色谱法培训解析说课讲解
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超声波振荡脱气
将流动相置 于超声波清洗机 中，用超声波振 荡10~30min， 即可。
吹氦脱气
用在液体中比空 气中溶解度低的氦 气，以60mL／min 的流速缓缓地通过 流动相10~15min， 除去溶于流动相中 气体。
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高压输液泵
• 是HPLC系统中最重要的部件之一。 • 输液泵的性能好坏直接影响到整个系统
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梯度洗脱装置
• 用途：梯度洗脱。 等度(isocratic)
• 高效液相洗脱方式 梯度(gradient)
低压梯度（外梯度） • 梯度洗脱方式
高压梯度（内梯度）
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低压梯度
• 在常压下将两种或多种溶剂按一定比例输 入泵前的比例阀中混合后，再用高压泵将 流动相以一定的流量输出至色谱柱。
• 常见的是四元泵，如waters 2690/2695； Agilent 1100。
不能使用气相色谱尖头微量注射器，否则 会损坏六通阀。 • 进样方式：有部分装液法和完全装液法
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进样方式
• ①部分装液法：注入的样品体积应不大于 定量环体积的50%，并要求每次进样体积 准确、相同。
• ②完全装液法：注入的样品体积应最少是 定量环体积的3倍，以完全置换定量环内流 动相，消除管壁效应，确保进样准确度及 重现性。
一致。色谱柱的柱管外壁都以箭头显著地 标示了该柱的使用方向，安装和更换色谱 柱时要使流动相按箭头所指方向流动。
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色谱柱(尺寸)
分析型：Ø 4.6mm 制备型：Ø＞5mm以上 微径柱：Ø <2.1mm 柱长：10～25cm，30cm 少见 柱体：直型优质不锈钢柱管
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高效液相色谱法培训课件
8
第二节 高效液相色谱仪
高压输液系统由 溶剂贮存器、高压泵、梯度洗脱装置 和压力表 等组成。
1.溶剂贮存器 溶剂贮存器一般由玻璃、不锈钢或氟塑 料制成，容量为1到2 L，用来贮存足够数量、符合要求的流 动相。
2.高压输液泵 高压输液泵是高效液相色谱仪中关键部 件之一，其功能是 将溶剂贮存器中的流动相以高压形式连 续不断地送入液路系统，使样品在色谱柱中完成分离过程。 由于液相色谱仪所用色谱柱径较细，所填固定相粒度很小， 因此，对流动相的阻力较大，为了使流动相能较快地流过
送，所用的固定相柱效低，分析周期长。而现代液相色谱法 引用了气相色谱的理论，流动相改为高压输送（最高输送压 力可达4.9107Pa）;色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料 填充而成，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数 可达几万或几十万）；同时柱后连有高灵敏度的检测器，可 对流
1
第一节 概 述
11
第二节 高效液相色谱仪
合，再输至柱系统。 梯度洗脱的实质是通过不断地变化流动相的强度，来调
整混合样品中各组分的k值，使所有谱带都以最佳平均k值通 过色谱柱。它在液相色谱中所起的作用相当于气相色谱中的 程序升温，所不同的是，在梯度洗脱中溶质k值的变化是通 过溶质的极性、pH值和离子强度来实现的，而不是借改变温 度（温度程序）来达到。
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第二节 高效液相色谱仪
色谱柱，就需要高压泵注入流动相。 对泵的要求：输出压力高、流量范围大、流量恒定、无
脉动，流量精度和重复性为0.5%左右。此外，还应耐腐蚀， 密封性好。
高压输液泵，按其性质可分为恒压泵和恒流泵两大类。 恒流泵是能给出恒定流量的泵，其流量与流动相粘度和 柱渗透无关。 恒压泵是保持输出压力恒定，而流量随外界阻力变化而 变化，如果系统阻力不发生变化，恒压泵就能提供恒定的流 量。
高效液相色谱法教学【全】精选全文
例: 流动相极性变化对组分k’的影响
②更换色谱柱（改变N）
措施： a.选择长柱子(N=L/H) b.填料颗粒尽量小 c.低流速(溶质传质阻力小，峰扩展小) d.低的溶剂粘度(提高柱效)
高效液相色谱法
High Performance Liquid
Chromatography （HPLC）
前言:
HPLC是70年代以后发展最 快的一个分析化学分支，现 已成为生化、医学、药物、 化学化工、食品卫生、环保 检测等领域最常用的分离分 析手段。
我国：
开始仅为少数研究实验室拥有， 现很多的生产、研究、质检部门都拥有。 广泛应用于： 质量控制、分析化验、制备分离。 讲课目的：入门 教材：《实用色谱法》（詹益兴 编著） 学习要求：记好笔记，
ⅰ大分子，扩散系数小 ⅱ小分子，扩散系数大
5. 影响分离的因素与提高柱效的途径
• 液体的扩散系数仅为气体的万分之一，在高效液
相色谱中,速率方程中的分子扩散项B/u较小，可忽略 不计，即 H = A + C u
• 降低传质阻力是提高 柱效主要途径。 •气相和液相Ｈ－ｕ区别
§１－４ 分离度 (Rs)
于世林编著)
第一章 高效液相色谱法基本原理 §1－1 概述 一、色谱法
混合物最有效的分离、分析方法。 是一种分离技术。 混合物分离过程：试样中各组分在 固液两相间不断进行着的分配。 一相固定不动，称为固定相。 另一相是携带试样混合物流过固定 相的液体，称为流动相。
液相色谱仪
高效液相色谱仪流程图
(1) 存在着浓度差，产生纵向扩散;
(2) 扩散导致色谱峰变宽，H↑(Ｎ↓)，分离变差; (3) B/u与流速有关：流速↓→ 滞留时间↑→ 扩散↑
高效液相色谱讲座第一讲高效液相色谱概貌和设备
１ 现代高效液相色谱与经典液相色 ）
谱的比较
Ｔ Ｃ 部分地克服了Ｔ Ｃ固有的缺点，可以 Ｌ） Ｌ 和高效柱液相色谱互为补充。 ２ 高效液相色谱与气相色谱的比较 ） 气相色谱自五十年代出现以来，获得了 飞速发展，它的特点是高效、快速和灵敏， 其分离分析复杂混合物的能力是以前其他色 谱方法无法比拟的，应用相当广泛和普遍。 但是由于气相色谱使用气体流动相，被分析 样品必须要有一定的蒸汽压，汽化后才能在 柱上分析，这使分离对象的范围受到一定的 限制。对于那些挥发性差的物质 （ 高沸点化
１％）。
与此相反，液相色谱则不受样品挥发度 和热稳定性的限制，液相色谱一般在室温下 操作，最高不超过流动相溶剂的沸点，所以 只要被分析物质在流动相溶剂 （ 各式各样） 中有一定的溶解度，便可以分析。所以液相 色谱特别适合于那些沸点高、极性强、热稳 定性差的化合物，例如生化物质和药物，离 子型化合物，热不稳定的天然产物等等。事
定，但一般说来，柱效受些影响。 自 动进样 器适合于多样品重复操作，便于用微处理机 控制，实现自动化。 检测器 被分析组分在柱流出液中浓度 的变化可通过检测器转化为光学的或电学的 信号而被检出，是色谱仪的 “ 眼睛”。检测 器性能的好坏直接关系着定性定量分析结果 的可靠性和准确性。在高效液相色谱中最常 用的检测器是光学检测器，例如示差折光、
素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附
剂的玻璃管上端加入， 沿管滤下， 后用纯石油 醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管 内观察到它们相应的色带， 就象光谱一样。 茨
维特把这些色带称为“ 色谱图”Ｃ ｒｍ ｔｇ （ｈｏ ａｏ－ ｒｍ ，相应的方法叫做“ ａ） 色谱法”Ｃ ｒｍ － （ｈｏ ａ ｔｇａｈｃ ｔｏ） ｏｒｐｉ ｍ ｈｄ。这就是最初的液相色 ｅ
高效液相色谱法 讲课文档
resin-O-CH2-COOresin-O-(CH2)3-SO3-
Buffer: PBS + NaCl
Tris-HCl + NaCl
Gradient: Yes
现在十八页，ห้องสมุดไป่ตู้共六十页。
Ion Exchange Chrom
现在十九页，总共六十页。
Affinity Chromatography
基 质
配基
目标产物
填料：
基质--- 纤维素、凝集素、交联 琼脂糖或葡萄糖、聚丙烯酰胺 、多孔玻璃…
配基--- 抗体、凝集素、酶、抑 制剂、抗生素、配位体…
现在二十页，总共六十页。
Affinity Chromatography
柱的选择：根据被分离目标产物的特点选择合适的 色谱柱，重要是配基。 影响因素：配基容易被杂质污染，柱子的寿命短， 样品须前处理。主要用于纯化较为昂贵的蛋白，抗 体等。
Free ligand concentration
Buffer: 含有可以与基质上的 配基结合物的溶液 Gradient: Yes
现在二十一页，总共六十页。
UV absorbance
Hydrophobic interaction Chromatography
nonpolar
--
protein surface
+++
nonpolar
O
H3C-C-N-C-
O-
NH
填料：
基质：有机聚合物（交联琼脂 糖、乙烯聚合物、TSK-PW） 和大孔硅胶键合相
H3C-C-N-C-OO NH
配基： 苯基、戊基、丁基、羟 丙基、乙基、聚乙二醇、苄基 等
高效液相色谱法讲义(包含讲义和实验)
高效液相色谱仪在基础有机化学实验产物分析中的应用第一部分：基础理论部分一、色谱法简介1. 色谱法简史1906年俄国植物学家茨维特（Tswett）首次提出“色谱法”（Chromatography）的概念。
他在论文中写到：“（原文）植物色素的石油醚溶液从一根主要装有碳酸钙吸附剂的玻璃管上端加入，沿管滤下，后用纯石油醚淋洗，结果按照不同色素的吸附顺序在管内观察到它们相应的色带，就像光谱一样，称之为色谱图。
”2. 色谱法分类色谱过程的本质是待分离物质分子在固定相和流动相之间分配平衡的过程，不同的物质在两相之间的分配会不同，这使其随流动相运动速度各不相同，随着流动相的运动，混合物中的不同组分在固定相上相互分离。
根据物质的分离机制的不同，又可以分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱、亲和色谱等类别。
（1）吸附色谱吸附色谱利用固定相吸附中心对物质分子吸附能力的差异实现对混合物的分离，吸附色谱的色谱过程是流动相分子与物质分子竞争固定相吸附中心的过程。
（2）分配色谱分配色谱是利用固定相与流动相之间对待分离组分溶解度的差异来实现分离。
分配色谱的固定相一般为液相的溶剂，依靠图布、键合、吸附等手段分布于色谱柱或者担体表面。
分配色谱的色谱过程本质上是组分分子在固定想和流动相之间不断达到溶解平衡的过程。
（3）离子交换色谱离子交换色谱利用被分离组分与固定相之间发生离子交换的能力差异来实现分离。
离子交换色谱的固定相一般为离子交换树脂，树脂分子结构中存在许多可以电离的活性中心，待分离组分中的离子会与这些活性中心发生离子交换，形成离子交换平衡，从而在流动相与固定相之间形成分配。
固定相的固有离子与待分离组分中的离子之间相互争夺固定相中的离子交换中心，并随着流动相的运动而运动，最终实现分离。
（4）凝胶色谱凝胶色谱的原理比较特殊，类似于分子筛。
待分离组分在进入凝胶色谱后，会依据分子量的不同，进入或者不进入固定相凝胶的孔隙中，不能进入凝胶孔隙的分子会很快随流动相洗脱，而能够进入凝胶孔隙的分子则需要更长时间的冲洗才能够流出固定相，从而实现了根据分子量差异对各组分的分离。
HPLC高效液相色谱实验讲义
自动 进样器
储 液 瓶
溶剂输 送系统
手动 进样阀
色谱柱
数据采集 处理系统
检测器 废液瓶
定量分析
1.归一化法 (Normalized Percent) 2. 外标法 (External Standard) 3. 内标法 (Internal Standard)
定量分析
归一化法定量
将试样中所有组分的含量之和按100％计 算，以它们相应的色谱峰面积为定量参数。如 果试样中所有组分均能流出色谱柱，并在检测 器上都有响应信号，都能出现色谱峰，可用此 法计算各待测组分X的含量。其计算公式如下：
梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制 流动相的组成（如溶剂极性、离子强度和 pH 值等），适用于分析组分数多、性质相差较 大的复杂混合物样品，从而使所有组分都在 适宜条件下获得分离。
4 、检测器
检测器 特点 最低检测限 适用范围
紫外检测器（UV或UVD） 分为:①可变波长型②二 极管阵列检测器
①用于检测有外吸收的物质; ②灵 敏度较高,噪音低,线性范围宽,对流 速和温度波动不灵敏,可用于梯度洗 脱.
用于检测糖、高分子子化合 物、高级脂肪酸、磷脂、维 生素、氨基酸、甘油三酯及 甾体等几十类化合物
4 、检测器
电化学检测器 (ECD) 用于能氧化、还原的有机物质 的检测 1× 10-12g/ml 适用生物胺、酚、羰 基化合物、巯基化合 物等 尤其适合于糖类的检 测
示差折光检测器 (RID) ①属通用型检测器 ,利用组分 10-8g/ml 与流动相折射率之差进行检测 . ②稳定性好 ,操作方便 .③灵敏 度低 ,受环境温度、流动相组 成等波动的影响大 ,不适合梯 度洗脱 化学发光检测器 (CLD) ①高选择性、高灵敏度的新型 检测器 . ②设备简单,自身发 光 ,无需光源 ,价格便宜 Pg级 (10-12)
高效液相色谱法—认识高效液相色谱法(仪器分析课件)
二、高效液相色谱法的基本原理
基本原理：
混合组分的样品在色谱柱中，各组分由于在流动相 和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用力的 不同，随流动相在两相间进行反复多次分配过程，经过 一定长度的色谱柱，彼此分离开来，最后按一定顺序流 出。
三、高效液相色交换色谱
固定相为离子交换树脂，流动相为无机酸或无机碱的水溶液。各种 离子根据它们与树脂上的交换基团的交换能力的不同而得到分离。
4. 凝胶色谱（空间排阻色谱）
以凝胶为固定相。凝胶是一种经过交联的、具有立体网状结构和不同 孔径的多聚体的通称。如葡聚糖凝胶、琼脂糖等软质凝胶；多孔硅胶、 聚苯乙烯凝胶等硬质凝胶。
以固体吸附剂为固定相，如硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～ 10μm的硅胶吸附剂。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。
2.分配色谱（液-液分配色谱）
早期通过在担体上涂渍一薄层固定液制备固定相，现多为化学键合 固定相，即用化学反应的方法通过化学键将固定液结合在担体表面。
三、高效液相色谱法的主要分离类型
一、高效液相色谱法的基本概念
二、高效液相色谱法的基本原理
三、高效液相色谱法的主要分离类型 四、HPLC与GC的比较
一、高效液相色谱法的基本概念
基本概念：在技术上采用了高效固定相、高压输液系统和高灵 敏度的在线检测器，是一种新型分离分析技术。
特点：分离效率高、分析速度快、应用范围广、操作自动化。
四、HPLC与GC的比较
1）应用范围不同 液相色谱非常适合分子量较大、难气化等物质的分离分析。
2）液相色谱能完成难度较高的分离工作 ① 可选用不同比例的两种或两种以上的液体作流动相，增大分离 的选择性。 ② 液相色谱固定相类型多，作为分析时选择余地大。 ③ 液相色谱通常在室温下操作。
高效液相色谱仪器讲稿
液相色谱根据目前市场情况主要分进口和国产两大类，进口主要有美国产Waters（实验室存有Waters1525价格：35.6W）、安捷伦（实验室存有Aglient1200价格34.5W）、塞尔泰、戴安、日本岛津等系列；国产有大连依利特、大连江申、上海上分、上海伍丰、浙江温岭、北京温分等系列。
液相色谱仪结构主要由贮液器、高压输液泵、进样器、柱子、柱温箱、检测器、数据处理系统组成。
1．贮液器：使用四元泵时（Aglient1200），A、B、C、D四相中，若所用流动相中有含盐流动相，则A、D（进液口位于混合器下方）放置含盐流动相，B、C（进液口位于混合器上方）放置不含盐流动相；A、B、C、D四个储液器中其中一个为棕色瓶，用于存放水相流动相。
在最后通常还有一个废液瓶。
使用二元泵时（Waters1525），B相位于下方，通常放置盐溶液，A相位于上方，放置有机溶剂，可使用普通玻璃溶剂瓶贮存流动相。
附流动相使用注意事项：1）流动相的纯度要求：有机溶剂必须是色谱纯，水必须是超纯水且现从纯水机中取出不能过夜，缓冲溶液需现取超纯水配置，并经过0.45um滤膜（注意水相膜与油相膜不能混用）过滤除去其中的颗粒杂质和其它物质。
任何流动相使用前都要经超声脱气，脱气后恢复到室温才使用。
流动相使用不当引起的问题：流动相不纯会增加检测器噪声从而影响检测结果，长期积累会堵塞柱子；脱气不彻底有气泡会导致压力不稳，重现性差。
2）流动相与固定相不能相互作用，否则造成柱效降低甚至损坏色谱柱。
3）样品必须溶于流动相，否则会堵塞柱子。
4）使用紫外检测器时，流动相不应有紫外吸收。
2．高压输液泵流动相由高压泵输送和控制流量。
泵由入口单向阀、出口单向阀、柱塞杆、密封圈等组成，是液相色谱仪的重要组成部分，是导致HPLC的高压、高速、高效特点的主要部件。
1）使用前先进行排气purge。
Waters1525：先用针筒从上下两个泵口的排液阀分别各抽取约5 mL流动相，再打开参比阀（向右搬），点击purge图标，冲洗泵5 min（一般是默认5 min，之后仪器自己停泵），待停泵后，压力和流速都降至0后，才能关上参比阀（向左搬紧）。
高效液相色谱法培训课件
进样方法
整个定量圈体积进样——为获得好的精密度， 进样量应大于定量圈量的2-5倍以上。由于
层流影响，需要有过量的样品液来取代管
壁上的流动相（见下图）。
Sample
Mobile phase
部分定量圈体积进样——当样品量少时， 采用部分体积进样，进样量由微量注射器 手动控制，要求：
不得超过定量圈体积的1/2量
最高操作温度60 ℃，最佳温度 ﹤40℃。
分离碱性物质，所用流动相pH值应高于被 测物pKa一个单位。
ZORBAX RP-HPLC系列柱的使用条件
柱
pH范围
最高温度
SB C18
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
C8
C3 苯基
腈基
XDB
Extend-C18
90℃ 60℃ 60℃ 60℃ 60℃ 60℃ 60℃
喷雾 蒸发 检测
色谱柱流出物
N2
组分的 气溶胶
溶剂 光 源
泵
pH
酸若性注 。调的意
节，： 不流
可能动 用含相 氨缓必 水冲须 、盐是 醋，挥
发
质 谱 检 测 器
Flu
10%
Ms
1%
other 4%
Conduc 5%
Elec 7%
Refra 8%
DAD 22%
检
测
器
UV-VIS
使
43% 用
统
计
色谱柱
注意！
一旦柱压升高，应停止测定，用水 冲洗数小时或更长时间，待压力下降后 再测定，如果不清楚堵在哪一段，则应 逐级检查，换泵头上滤芯，保护柱等。
柱效低的原因 频繁更换流动相组成——加速柱效降低。
高效液相色谱仪介绍课件
谢谢
号
05
数据处理系统： 处理和分析色
谱数据
06
07
流动相储液瓶： 储存流动相
废液收集器： 收集废液
08
泵管路：连接 各部件，保证 流动相的流通
09
10
温度控制系统： 控制色谱柱和 检测器的温度
安全保护装置： 保护操作人员 和仪器的安全
高效液相色谱仪的工作原理
高效液相色谱仪是一种利用液体 作为流动相的色谱分析仪器。
安装
定期校准与保养
01
定期检查仪器的 各个部件，确保
其正常工作
02
定期更换易损部 件，如泵密封圈、 进样阀密封圈等
03
定期进行仪器校 准，确保分析结
果的准确性
04
定期清洁仪器， 保持仪器的清洁
和干燥
05
定期检查仪器的 电源和接地线，
确保安全使用
06
定期记录仪器的 使用情况和维护 保养情况，便于 日后查询和分析
农药分析
农药残留检测： 检测农产品中的 农药残留，保障
食品安全
农药质量控制： 监控农药生产过 程中的质量，确 保产品质量合格
农药环境污染监 测：监测环境中 的农药污染，评
估环境风险
农药研发：辅助 农药研发，提高 研发效率和质量
环境监测
01
水质监测：检测水中的污染物和化学物质
02
空气监测：检测空气中的污染物和化学物质
药物代谢：研 究药物在生物 体内的代谢过 程和机制
药物相互作用： 研究药物之间 的相互作用和 影响
3
高效液相色谱 仪的发展趋势
仪器自动化
仪器操作自动化：通过计算机控 制，实现仪器的自动化操作
数据处理自动化：自动采集、处 理和分析数据，提高分析效率
第十四章高效液相色谱法讲课文档
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流动相
由于高效液相色谱中流动相是液体，它对组分有亲和力，并 参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接影响组分的 分离度。对流动相溶剂的要求是：
1.化学惰性，不与固定相和被分离组分发生化学反应，保证 柱的稳定性和分离的重现性。
检测能力还可以提高一个数量级以上；
⑤分析时间快，HPLC-MS使用的液相色谱柱为窄径柱，缩短了分析 时间，提高了分离效果； ⑥自动化程度高，HPLC-MS具有高度的自动化。
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附属系统
• 脱气
• 梯度淋洗
• 预饱和柱和预柱 • 恒温 • 自动进样 • 馏分收集 • 数据处理
1.氟塑料池体,2.工作电极,3.氟塑料或聚酯 垫片,4.接参比电极，至废液，5.接色谱柱 。
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蒸发光散射检测器
(Evaporation Light Scattering Detector, ELSD)
1.色谱柱出口; 2.液压释放口; 3.氮气入口; 4.雾化器; 5.加热漂移管; 6.样品液滴; 7.激光光源; 8.排气口; 9.光电检测器; 10.放大器;
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高效液相色谱柱
1.色谱柱类型
按内径大小可大致分为常规分析柱、制备或半制备柱 、小内径或微径柱、毛细管柱四种类型。
2.保护柱
一般在分析柱前装上较短的保护柱，不仅可除去
溶剂中的颗粒杂质和污染物，而且可除去样品中含有 与固定相不可逆结合的组分，以保护较昂贵的分析柱 ，延长使用寿命。
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生化实验讲义高效液相色谱技术(HPLC)word精品文档11页
7 高效液相色谱技术（HPLC）高效液相色谱（HPLC：High Performance Liquid Chromatography ）是化学、生物化学与分子生物学、医药学、农业、环保、商检、药检、法检等学科领域与专业最为重要的分离分析技术，是分析化学家、生物化学家等用以解决他们面临的各种实际分离分析课题必不可缺少的工具。
国际市场调查表明，高效液相色谱仪在分析仪器销售市场中占有最大的份额，增长速度最快。
高效液相色谱的优点是：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量精度高，应用范围广。
适用于分析高沸点、大分子、强极性、热稳定性差的化合物。
其缺点是：价格昂贵，要用各种填料柱，容量小，分析生物大分子和无机离子困难，流动相消耗大且有毒性的居多。
目前的发展趋势是向生物化学和药物分析及制备型倾斜。
7.1 基本原理流动相固定相流动相A AB CB CBA固定相——柱内填料，流动相——洗脱剂。
HPLC是利用样品中的溶质在固定相和流动相之间分配系数的不同，进行连续的无数次的交换和分配而达到分离的过程。
通常，按溶质（样品）在两相分离过程的物理化学性质可以作如下的分类：分配色谱：——分配系数亲和色谱：——亲和力吸附色谱：——吸附力离子交换色谱：——离子交换能力凝胶色谱（体积排阻色谱）：——分子大小而引起的体积排阻分配色谱又可分为：正相色谱：固定相为极性，流动相为非极性。
反相色谱：固定相为非极性，流动相为极性。
用的最多，约占60～70％。
固定相（柱填料）：固定相又分为两类，一类是使用最多的微粒硅胶，另一类是使用较少的高分子微球。
后者的优点是强度大、化学惰性，使用pH范围大，pH=1～14，缺点是柱效较小，常用于第 140 页离子交换色谱和凝胶色谱。
最常使用的全孔微粒硅胶（3～10μm）是化学键合相硅胶，这种固定相要占所有柱填料的80％。
它是通过化学反应把某种适当的化学官能团（例如各种有机硅烷），键合到硅胶表面上，取代了羟基（－OH）而成。
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（约20'）
五、说教学过程
通过图片和动画展示色谱法的由来和色谱流出曲线
五、说教学过程 三、
（1）基线： （2）色谱峰： （3）峰高： （4）峰宽 （5）半峰宽： （6）峰面积： （7）死时间： （8）保留时间： （9）调整保留时间： （10）死体积： （11）保留体积：
五、说教学过程
高效液相色谱仪
五、说教学过程
1.视觉冲击
5'´ 10'´
2.思考讨论
3.传授新知 30'´
4.模拟实验
35'´
5.归纳总结
7'´
6.布置作业 3'´
视觉 1. 冲击
看到了什么？
五、说教学过程
3.传授新知(30'）
（1)色谱法、液 相色谱法的基本 概念与参数
（约10'）
（2) 高效液相 相色谱仪的结构
三、说教法
情景教学法
观察图片、 观看动画
启发诱导法
发现问题、 提出问题
小组讨论法
动脑思考、 动口表达
模拟实验法
观看动画、 学会操作
在好奇心满足的情况下学习知识、掌握技能、培养素质
引导学生运用观察、比较的方法来学习色谱 法和高效液相色谱法; 指导学生学会运用准确的专业术语阐述色谱 法、液相色谱法的现象、原理和相关概念； 培养学生观察、思考和自学的能力。
《高效液相色谱分析法》说课稿
说课内容
一、说教材 二、说学情
三、说教法 五、说教学过程
necessity
四、说学法
六、说板书设计
一、说教材
《药物分析》 第二章第五节 药学专业的一门重要 讲述药物分析中一种 专业课程，是一门综 常用的仪器分析方法， 合性的应用学科，是 学习本次课内容可以 在有机化学、分析化 使学生具备一项先进 学、药物化学等课程 技能，从而对药物进 的基本理论和基本方 法的基础上进 行教学 行分析、检测。 的。
2.注意事项
谢谢
五、说教学过程
6.布置作业(3'）
怎样运用高效液相色谱法进行定性分析？ 使用高效液相色谱仪时应该注意哪些事项？
第五节 高效液相色谱分析法
一、基本概念
1.色谱法的由来：茨维特实验
2.色谱流出曲线：主要参数
二、高效液相色谱仪的结构及工作流程
1.主要结构 2.工作流程
三、高效液相色谱仪的应用
1.操作方法
五、说教学过程
高效液相色谱仪的组成
五、说教学过程
观看视频
4.模拟实验(35'）10'´ 10'´ 15'´
讨论总结
点评讲解
五、说教学过程
4.模拟实验(35'）
五、说教学过程
5.归纳总结(7'）
• 色谱法的由来：茨维特实验
• 色谱图的主要参数及代表意义
• 高效液相色谱仪的主要结构及工作流程
• 仪器操作方法和操作过程的注意事项
一、说教材
熟悉高效液相色谱 仪的结构及其用途
知识目标
能力目标 掌握高效液相色谱
仪的操作方法
素质目标
药品质量就是生命
一、说教材
重点
高效液相色谱仪的结构、操作 方法、注意事项
难点
necessity
高效液相色谱仪的操作方法
教学对象：五年制高职生，生源为初中毕业生，
年龄18～20岁。 学生特点：起点较低，基础薄弱，理性思维 较弱 ，感性思维较强，有一定的好奇心。