叶下珠提取物的抑菌活性研究

叶下珠提取物的抑菌活性研究摘要：采用生长速率法测定叶下珠（Phyllanthus urinaria Linn）的5种溶剂提取物对大肠杆菌[Escherichia coli （Migula）Casleillii & Chalmers]、伤寒沙门氏菌[Salmonella typhi （Schroeter）Warren & Scott]、痢疾志贺氏菌[Shigella dysenteriae （Shiga）Castellani & Chalmers]、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus Frankland）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）的抑制活性。

结果表明，10 mg/mL叶下珠甲醇提取物、乙醇提取物和丙酮提取物对痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌有较强的抑制活性，其抑菌率均不低于60%，对大肠杆菌和蜡状芽孢杆菌的抑制作用较弱，抑菌率均不高于60%；10 mg/mL水提取物和石油醚提取物对5种细菌的抑制作用弱，抑菌率均在51%以下。

比较各提取物对5种供试菌的毒力可见，甲醇提取物对痢疾志贺氏菌的抑菌活性最强，其抑制有效中浓度（EC50）为2.915 5 mg/mL，乙醇提取物、丙酮提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强，EC50分别为3.440 2、4.320 6 mg/mL。

关键词：叶下珠；提取物；抑菌活性Study on Antibacterial Activities of Extracts from Phyllanthus urinaria LinnAbstract：The antibacterial activities of 5 solvent extracts from Phyllanthus urinaria Linn against 5 species of bacterium were determined by growth rate method. The results showed that 3 solvent which were methanol，ethanol and acetone extracts had high antibacterial activities Shigella dysenteriae （Shiga）Castellani & Chalmers，Staphyloccocus aureus Rosenbach，Salmonella typhi （Schroeter）Warren & Scott with antibacterial rates more than 60%，and had low antibacterial activities against Escherichia coli （Migula）Casleillii and Chalmers，Bacillus cereus Frankland with antibacterial rates below 60%. The water extracts and petroleum ether extracts had low antibacterial activities against 5 species of bacterium with the antibacterial rates below 51%. The methanol extracts had the highest antibacterial activities against Shigella dysenteriae（Shiga）Castellani & Chalmers，whose EC50 was 2.915 5 mg/mL. The ethanol extracts had the highest antibacterial activities against Staphyloccocus aureus Rosenbach，which EC50 was 3.440 2 mg/mL. The acetone extracts had the highest antibacterial activities against Staphyloccocus aureus Rosenbach，whose EC50 was 4.320 6 mg/mL.Key words：Phyllanthus urinaria Linn；extracts；antibacterial activities植物源杀菌剂是指从植物中提取的具有杀菌、抑菌活性的物质，以及由其分离纯化的单体物质加工而成的药剂。

从植物中寻找杀菌、抑菌活性物质已成为当今开发、研制无公害新型杀菌剂的热点之一[1]。

叶下珠（Phyllanthus urinaria Linn）为大戟科（Euphorbiaceae）叶下珠属（Phyllanthus）草本植物，又名珍珠草、夜合草、阴阳草、油柑草等[2]，全草入药，具有清热利尿、解毒、止泻、抑菌、体内和体外抗HBV[3]、防治肝细胞损伤[4]、抗乙型肝炎病毒[5]等作用。

迄今，从叶下珠中已发现的化合物有40多种[6]，包括生物碱类、黄酮类、木脂素类、萜类、鞣质等多种成分。

试验研究了叶下珠5种溶剂提取物对大肠杆菌[Escherichia coli （Migula）Casleillii & Chalmers]、伤寒沙门氏菌[Salmonella typhi （Schroeter）Warren & Scott]、痢疾志贺氏菌[Shigella dysenteriae （Shiga）Castellani & Chalmers]、蜡状芽孢杆菌（Bacillus cereus Frankland）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）的抑制活性，以期发现新型抗菌物质，为叶下珠作为原料开发食品防腐剂提供理论依据，现将试验结果报道如下。

1 材料与方法1.1 材料1.1.1 供试病原菌5种病原菌大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均来自广西师范大学生命科学学院微生物学实验室。

1.1.2 供试植物材料叶下珠全株，采自广西壮族自治区贺州市郊区。

1.1.3 溶剂甲醇、乙醇、丙酮、石油醚，市售分析纯；纯净水，自制。

1.2 方法1.2.1 植物成分提取采用冷浸法。

取叶下珠全株，洗净风干，放入60 ℃的恒温鼓风干燥箱内烘干至发脆，用植物粉碎机将其粉碎，过425 μm筛。

称取一定量的植物干粉放入三角瓶中，加入5倍量的溶剂，在室温下浸提（其间每隔12 h振荡1次）48 h后抽滤。

再重复浸提2次，将3次滤液合并，用旋转蒸发仪减压浓缩，蒸干溶剂得膏状粗提物。

称重，置于4 ℃冰箱中保存备用。

1.2.2 提取物抑菌活性测定参照参考文献[7]，采用生长速率法进行测定。

2 结果与分析2.1 叶下珠提取物的抑菌活性叶下珠5种溶剂提取物在10 mg/mL的浓度下对大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、痢疾志贺氏菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌都有一定的抑制作用（表1）。

5种溶剂提取物对5种细菌的抑制作用有较大的差别。

总体上，甲醇提取物抑菌率较高，分别为87.85%（痢疾志贺氏菌）、85.00%（金黄色葡萄球菌）、75.50%（伤寒沙门氏菌）、60.00%（大肠杆菌），51.89%（蜡状芽孢杆菌）；其次是乙醇提取物，抑菌率分别为84.00%（金黄色葡萄球菌）、75.55%（痢疾志贺氏菌）、67.37%（伤寒沙门氏菌）、42.90% （大肠杆菌）、16.67%（蜡状芽孢杆菌）；再次是丙酮提取物，抑菌率分别为72.56%（金黄色葡萄球菌）、68.23%（痢疾志贺氏菌）、64.60%（伤寒沙门氏菌）、29.67%（蜡状芽孢杆菌）、19.90%（大肠杆菌）；水提取物和石油醚提取物对这5种细菌的抑菌率较低，都在51%以下。

同一溶剂提取物对不同细菌的抑制作用有较大的差别。

甲醇提取物对痢疾志贺氏菌的抑菌率最高，为87.85%；乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌率最高，为84.00%；丙酮提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌率最高，为72.56%。

由上可知，甲醇提取物抑制作用最为明显，乙醇提取物次之，丙酮提取物第三；甲醇提取物对痢疾志贺氏菌的抑菌率最高，乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌率最高，丙酮提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌率最高。

2.2 叶下珠3种溶剂提取物对3种细菌的毒力鉴于叶下珠甲醇提取物、乙醇提取物和丙酮提取物对痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌有较高的抑制活性，在实验室条件下进一步测试了这3种溶剂提取物对以上3种细菌的毒力，以y为死亡率机率值、x为剂量对数值建立毒力回归方程，计算有效中浓度（EC50），结果见表2。

叶下珠甲醇提取物对痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌的抑制作用较强，有效中浓度分别为2.915 5、3.233 9、3.796 4 mg/mL；叶下珠乙醇提取物对痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌的有效中浓度分别为3.980 5、3.440 2、5.324 1 mg/mL；叶下珠丙酮提取物对痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌的有效中浓度分别为5.411 1、4.320 6、5.595 7 mg/mL。

3 结论1）10 mg/mL叶下珠甲醇提取物、乙醇提取物和丙酮提取物对痢疾志贺氏菌、金黄色葡萄球菌和伤寒沙门氏菌有较强的抑制活性，其抑菌率都不低于60%，对大肠杆菌和蜡状芽孢杆菌的抑菌率较低，其抑菌率都不高于60%；而水提取物和石油醚提取物对这5种细菌的抑菌率都比较低，其抑菌率都在51%以下。

2）叶下珠甲醇提取物对痢疾志贺氏菌的抑菌效果好，其抑制有效中浓度为2.915 5 mg/mL；乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果好，其抑制有效中浓度为3.440 2 mg/mL；丙酮提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果好，其抑制有效中浓度为4.320 6 mg/mL。

参考文献：[1] 任芳，刘强.珍珠柴粗提物对13种植物病原菌的抑制活性[J].广西植物，2009，29（1）：132-135.[2] 罗文继，阮细发，杨义雄.叶下珠研究概述[J].海峡药学，1988，10（1）：70-72.[3] 张韬.叶下珠的化学成分和药理作用研究进展[J].中医药信息，2002，19（4）：22-23.[4] 周军，李茂.叶下珠醇提物对实验性肝损伤的保护作用[J]. 广西中医学院学报，2004，7（1）：5-7.[5] 马海伦.苦味叶下珠抗乙型肝炎病毒作用的研究进展[J]. 天津医药，1994，22（12）：760-763.[6] 袁宇熹，林毅，明艳林，等.叶下珠抗肿瘤抗病毒研究进展[J]. 亚热带植物科学，2008，37（2）：77-80.[7] 陈年春.农药生物测定[M].北京：北京农业大学出版社，1991.。