微生物血球计数板直接计数法

五、思考题：
• 1、用血球计数板计数时，哪些步骤易造 成误差？ • 2、血球计数板测定原理是什么？它有哪 些优点？
• 样品中的菌数/ml= • 80
X 4000,000 X 稀释倍数
结果记录：
• 微生物名称 总菌数 个/ml
第一个 第二个 第三个 第四个 第五个 中格 第一次 测定 第二次 测定 平均 中格 中格 中格 中格
四、测定注意事项:
• 1、测定时，酵母菌液要摇匀，防止酵母 凝聚沉淀。 • 2、活酵母有芽殖现象，若芽体达到母细 胞大小的一半时，即可作为两个菌体计 数，若芽体小于母细胞一半时为1个酵母 细胞。 • 3、位于格线上的酵母菌一般只计此格的 上方线及左方线上的菌体。
• 血球计数板的分区与分格
* Biblioteka Baidu # #
# * • 例一 • 1大格=16中格 • =16 X 25小格 • =400小格 *
# 例二 1大格=25中格 =25 X 16小格 =400小格
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三、材料与仪器：
•1、待测样品：酵母菌 悬液 •2、显微镜，血球计数 板，接种环,盖玻片等。
四、方法与步骤:
• 1、取洁净的血球计数板，在计数室上面盖上 盖玻片。 • 2、取稀释到一定程度（5~10个酵母/小格） 酵母液，从盖片边缘滴一小滴，使菌液自行 渗入，计数室内不能有气泡。先在低倍镜下 找到小方格网后，再转换高倍镜观察并计数。 3、如用16 X 25计数板，只计四个角上中方 格的菌数。若是25 X 16的计数板，除计数四 个角上的中格菌数外，还要计算中央中格的 菌数。每个样品重复计数2~3次。计数时应不 时调节焦距，才能观察到不同深度的菌体。
• 4、位于格线上的酵母菌一般只计此格的上方 线及左方线上的菌体。 • 5、计数方法： • 样品中菌数/ml=每小格平均菌数 x 4000 ,000x 稀释倍数，本实验采用25 x 16规格，要求数 这些方格中的全部小格即80个小格。 • 设：每个中方格的菌数为A，则 • 每小格平均菌数=（A1+A2+A3+A4+A5)/80 • A1+A2+A3+A4+A5
微生物血球计数板直接计数法
一、目的要求 二、基本原因： 此法是利用血球计数板在显微镜下直接进行 测定。它观察在一定的容积中的微生物的个 体数目，然后推算出含菌数，包括死活细胞 均被计算在内，还有微小杂物也被计算在内。 这样得出结果往往偏高。这种方法常用于形 态个体较大的菌体或孢子。
• 计数板是一块特制的厚玻璃片，玻片上有四 个槽构成三个平台，中央平台又由一短槽隔 成两半，其上各刻有一小方格网，每个方格 网共分九个大格，中央的一大格作为计数用， 称为计数室。 • 计数室刻度有2种：一种是25中格X16小格， 而另一种为16中格X25小格，它们都是由400 16 X25 400 个小格组成。每个大方格边长为1mm，则每 个大方格面积为1X1=1mm2。盖上盖玻片后， 载玻片与盖玻片之间高度为0.1mm,所以每个 计数室的体积为0.1 X 1 X 1=0.1mm3,每个大 格有400个小格，所以每个小方格体积为 0.1/400=1/4000mm3=1/4000,000ml。