仙人掌多糖提取过程中三种脱蛋白方法的比较研究

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多糖脱蛋白质方法的比较

少，沉淀正如此相反。分析原因，海蜇中蛋白质的等电
点在碱性范围内。在溶液中逐渐滴加ＩｌｍｏＬ的ＮＯ／ａＨ，待无沉淀生成后，加入Ｈｃ调整ｐ根据文献，海蜇ｌＨ，在多糖的提取中，加入ＴＡ未见沉淀，Ｃ但在用ＮＯａＨ调整，ｐＨ值时发现在碱性范围内溶液产生浑浊，再用盐酸调至中性，液又变澄清，滤ｐ溶过Ｈ至１时出现沉淀，２试验
大，法通过滤纸孔，常采取离心）无通。
１．１糖标准曲线的制备（张惟杰，９４１９）
称取干燥至恒重的无水葡萄糖２０，１０ｍ０ｍｇ置００ｌ
容量瓶中，加水溶解后稀释至刻度制成贮备液，分别吸
取贮备液０２０４０８１，．，．，．，．，．ｌ水稀．，．，．，．１１１１２ｍ加０２４６８０
同时观察溶液中是否有沉淀生成；若有，过滤沉淀。则
０
实际过程：采用了４ｍ％的鞣酸（０ｌ３浅黄色）样品由原，来的深褐色变为较深的棕红色，器底部有沉淀生成，容较少。
蛋白含量，现滤液中糖含量极高，发而且蛋白含量极
尤其是增强免疫力的功能被广泛认同，并被广泛应用
２材料与方法
２１材料与试剂．
经过粗提纯的樟芝多糖粉末、氯仿、正丁醇、ＣＴＡ
（％）ＮＯ（ｍｌ）盐酸、酸、３、ａＨ１ｏＬ、／硫苯酚、醇（５、乙９％）食油醚、氧水（０双１％）

裙带菜多糖3种脱蛋白质方法的比较研究

ｏｎｎｙｃｍｅｏｅｅｏｐｒｄｂｎｌｚｎｅｐｒｅｔｇｓｆｔｄｔｃｌｒａｅｃａｉ（Ｃ）ｔｄａｄｅｚｍｉｈｉｉｈｔｄｗｒｃｍａｅｙａａｉｇｔｅｃｎａｅｈｙｈｏ
ＧＥｎ — ａ，ＡＮＧＢｉｇｙｎＹＢｏ
（ｎｉｅｒｇｅｅｒｈＣｎｒｎａｕａＡｔａｃｒｕｓｆｎｓｙｏＥｕａｉ，ｅｅｒｈＣｎｅｉＥｇｎｅｉＲｓａｃｅｔｔｒｌｎｉｎｅＤｒｇＭｉｔｄｃｔｎＲｓａｃｅｔｏＬｅｎｅｏＮｃｏｉｒｆｏ＂ｒｎｆＳｉｃｓｎＥｖｏｍｎｌｃｎｅＨａｂｎｖｒｉｆＣｍｒｅＰｓｏｔｒｌｅｅｒｈｆｎｔｕｏＭａｅｉｃｅｅａｄｎｉｎｅｔＳｉｃｓｒｉＵｉｓｙｏｏｍｅｃ，ｏｔｃａＲｓａｃｏＩｓｔｔｆｔａｎｒａｅ，ｎｅｔ＂ｄｏｉｅｒ
摘要：目的筛选裙带菜多糖脱除蛋白质的最佳方法。方法采用Ｓｖｇｅａ法、三氯乙酸法和酶法对裙带菜多糖进行脱蛋白
质处理，比较不同方法处理后多糖的脱蛋白质率及多糖损失率，确定最佳的除蛋白质方法。结果酶法的多糖损失率最低，为１．０２２％，脱蛋白质率最高，为６．１０％；三氯乙酸法多糖损失率１．１２１３％，脱蛋白质率５．７％；Ｓｖｇ７３ｅａ法多糖损失率１．１４２％，脱蛋白质率５．４１２％。结论酶法是裙带菜多糖脱蛋白质的最佳方法。关键词：裙带菜多糖；脱蛋白质；酶法中图分类号：Ｑ９６３４．文献标识码：Ａ文章编号：１７．７Ｘ（００３０９．３６２９９２１）０．０６０

几种玉米秸秆发酵产物多糖脱蛋白方法的比较

几种玉米秸秆发酵产物多糖脱蛋白方法的比较冯炘;石灵燕;肖欢欢;解玉红【摘要】对玉米秸秆发酵中间产物多糖进行脱蛋白处理,以达到纯化秸秆发酵多糖产物的目的.实验选用脱蛋白的方法有三种,分别是Sevage法、HCl法、TCA法;实验结果的衡量指标分别为蛋白质去除率和多糖损失率.Sevage法蛋白质去除率在重复第6次时,蛋白质去除率为80.11％,多糖的损失率为17.9％;HCl法在pH=3时,蛋白质去除率为89.67％,多糖的损失率为34.43％;pH=6时,TCA法蛋白质去除率最大值为29.68％,多糖的损失率为14.45％.为了达到蛋白去除率高,多糖损失率低的目的,选用Sevage法对秸秆发酵产物多糖进行纯化.【期刊名称】《天津理工大学学报》【年(卷),期】2015(031)004【总页数】4页(P57-60)【关键词】秸秆发酵;多糖纯化;蛋白去除率;多糖损失率【作者】冯炘;石灵燕;肖欢欢;解玉红【作者单位】天津理工大学环境科学与安全工程学院,天津300384;天津理工大学环境科学与安全工程学院,天津300384;天津理工大学环境科学与安全工程学院,天津300384;天津理工大学环境科学与安全工程学院,天津300384【正文语种】中文【中图分类】X712我国是粮食生产大国，小麦、玉米、水稻等农作物的栽种遍及全国，粮食产量增加，同时也产生了大量的农作物秸秆固体废弃物，早前废弃物秸秆的处理方法比较单一，主要方法通常是焚烧，产生的热能部分用于生活所需，灰分用来还田以增加土壤的肥力.随着科技的发展，秸秆资源化技术呈现多元化发展，如秸秆粉碎还田、制有机肥料、秸秆发酵气化及压块燃料等[1-3]，但是人们对秸秆发酵中间产物多糖的研究却极少，由于多糖具有重要的实用价值，在医疗保健、畜牧业、污水处理、农业等方面都有重要作用[4-7]，因此对中间产物多糖的研究是很有必要的.本实验组研究微生物降解玉米秸秆产生的中间产物多糖，要想对多糖进行深入的了解，首先必须要去除中间产物多糖的“伴生物”蛋白质.蛋白质的去除方法[8-9]在国内外研究中都已经相当成熟.主要包括HCl法、NaOH 法、TCA法、Sevage法、酶法以及几种方法的结合，其中以Sevage法较为温和，对多糖的影响较小[8].但是这些方法在不同的多糖脱蛋白过程中效果各异，为了寻找一种适合于玉米秸秆发酵产物多糖的脱蛋白方法，本实验对几种方法进行了对比研究，以找出最佳的玉米秸秆发酵产物多糖脱蛋白方法.1.1 实验材料1.1.1 玉米秸秆1）秸秆的粉碎.选取天津市西青区玉米秸秆，用铡刀将玉米秸秆截成5 cm左右，放在烘箱内，60℃下烘干，将烘干的玉米秸杆放入碾磨机中研磨，过60目筛，得到粗处理的秸秆粉末.2）秸秆的预处理.将粗处理的秸秆粉末按1∶30的质量比加入蒸馏水中，首先在超声仪中超声0.5 h，再在80℃下水浴2 h，负压抽滤，取滤渣于60℃烘箱中烘干备用.1.1.2 菌种选用本实验室分离提取的7号菌群，其包括9号、72号、93号三株菌，实验中三株菌的含量按体积比1∶1∶1的比例接入发酵培养基中.1.1.3 培养基活化培养基：玉米秸秆粉末15.0 g，酵母膏1.0 g，NH4NO31.0 g，Fe2SO4·7H2O 0.5 g，KH2PO41.0 g，MgSO40.5 g，蒸馏水1 000 mL，pH7.2～7.4.发酵培养基：玉米秸秆粉末50.0 g，NaNO32.5 g，NaCl 0.1 g，CaCO32.0 g，K2HPO41.0 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，FeCl30.01 g，CaCl20.1 g，蒸馏水 1000 mL，pH7.2～7.4.1.1.4 实验试剂葡萄糖，牛血清蛋白，DNS试剂，考马斯亮蓝G-250，95%酒精，85%H3PO4，0.15 mol/L NaCl，无水乙醇，6 mol/L浓盐酸，10 mol/LNaOH，10%酚酞试剂.1.1.5 实验仪器铡刀，碾磨机，XMTD-204数显式电热恒温水浴锅，AS10200BT超声波清洗机，电热鼓风干燥箱，DELTA 320 pH计，EL-104电子天平，WE-1水浴恒温振荡器，洁净工作台，Biotech-5B发酵罐，立式压力蒸汽灭菌器，RE-52C旋转蒸发器，Anke TGL-16G离心机，91-8-B型电子调温电热套，T6新世纪紫外-可见分光光度计.1.2 实验方法1.2.1 标准曲线的制备1）蛋白质标准曲线的制备.取0.100 0 g牛血清蛋白溶于0.15 mol/L NaCl溶液中，定容至1 L，得到蛋白质标准溶液.分别取蛋白质标准溶液0.0 mL，0.2 mL，0.4 mL，0.6 mL，0.8 mL，1.0 mL于10 mL的比色管中，按以上顺序依次加入0.15 mol/L NaCl溶液1.0 mL，0.8 mL，0.6 mL，0.4 mL，0.2 mL，0.0 mL，上述比色管中各加入5.0mL考马斯亮蓝试剂，摇匀，静止3min，以0.15 mol/L NaCl溶液为空白对照，在波长595 nm处测定吸光度.2）葡萄糖标准曲线的制备.将葡萄糖置于105℃烘箱2 h，烘干后取出置于干燥器中降温，取1.000 0 g该葡萄糖，用蒸馏水溶解，定容至1L，制备出葡萄糖标准溶液.分别取葡萄糖标准溶液0.0 mL，0.2 mL，0.4 mL，0.6 mL，0.8 mL于10 mL的比色管中，加蒸馏水稀释至2.0 mL，向各管中加入1.0 mL的DNS试剂，混合均匀后，于沸水浴中加热5 min，以蒸馏水为空白对照，在波长510 nm处测定吸光度.1.2.2 多糖制备、提取及浓缩配制发酵培养基3L于发酵罐中，121℃灭菌25 min，调节温度至30℃，向该发酵培养基中接入活化种子液.设定在120 r/min、30℃、pH7.2～7.4条件下发酵48 h，取样，将样品在6 000 r/min下离心10 min，取部分上清液于250 mL的磨口锥形瓶中，进行旋转蒸发，得到多糖浓缩液.1.2.3 浓缩液脱色取一定体积的多糖浓缩液，调节pH=7，加入浓缩液体积1/10的10%H2O2，55℃下水浴搅拌、加热30 min.1.2.4 脱蛋白的方法1）Sevage法.取一定体积脱色的多糖浓缩液，加入该浓缩液体积1/5的氯仿，再加入氯仿体积1/5的正丁醇，室温下于摇床中120 r/min振摇30 min，使其充分接触，取出锥形瓶，静止10 min，离心去除沉淀，取上清液备用.同样的方法重复次数分别设定为1次、2次、3次、4次、5次、6次、7次，分别取上清液以备用.2）HCl法.向脱色的多糖浓缩液中加入1 mol/L的HCl，调节浓缩液的pH依次为2、3、4、5、6、7、8，120 r/min振摇30 min后取出，放于4℃冰箱，12 h后取出离心，取上清液备用.3）TCA法.向脱色的多糖浓缩液中加入10%三氯乙酸，调节浓缩液的pH依次为2、3、4、5、6、7、8，剧烈振摇30 min，放于4℃冰箱，12 h后取出离心，取上清液备用.1.2.5 总糖待测液的制备取脱色处理的多糖浓缩液1 mL，加入6 mol/LHCl溶液2 mL，沸水浴30 min，流水冷却，向浓缩液中滴加1滴10%酚酞试剂，摇匀后，滴加10 mol/LNaOH，直至溶液变为粉红色，得到总糖制备液.1.3 测定方法1.3.1 考马斯亮蓝法测蛋白质去除率Q为蛋白质去除率；P为粗提取液中蛋白质的百分含量；Pi为第i次脱蛋白处理后提取液蛋白质的百分含量；Ci为第i次脱蛋白处理后提取液中蛋白质的浓度（μg/mL）；Vi为第i次脱蛋白处理后蛋白质提取液体积（mL）；Mi为第i次脱蛋白处理后所取提取液的质量（g）.1.3.2 DNS法[10]测多糖损失率L为多糖损失率；S为粗提取液中多糖含量/总糖含量（S=D/T）；Si为第i次脱蛋白处理后提取液中多糖含量/总糖含量.T为提取液中总糖含量（mg/mL）；D为提取液中多糖含量（mg/mL）；G为提取液中单糖含量（mg/mL）；0.9 为实验的校正系数.2.1 蛋白质测定的标准曲线蛋白质标准曲线拟合方程为y=0.00757x+0.03433，R2=0.996 84，如图1所示，在0～100 μg/mL范围内，蛋白质标准样品呈现很好的线性关系.2.2 葡萄糖测定的标准曲线葡萄糖标准曲线拟合方程为y=0.00162x-0.0178， R2=0.999 6，如图2所示，在0～800 μg/mL范围内，葡萄糖标准样品呈现很好的线性关系.2.3 Sevage法测定蛋白质去除率与多糖损失率结果Sevage法纯化多糖结果如图3所示，蛋白质的去除率随着脱蛋白次数的增加而增加，在第6次重复操作后Sevage法蛋白质去除率为80.11%，多糖的损失率为17.9%，蛋白质去除率在重复第7次时达到最大值80.14%，此时多糖的损失率也达到最大值26.80%.2.4 HCl法测定蛋白质去除率与多糖损失率结果HCl法纯化多糖结果如图4所示，随着pH增加蛋白质的去除率逐渐降低，多糖的损失率呈现逐渐降低的趋势，但是在pH=3时，多糖的损失率出现一个较大的波动，比pH=2时的损失率低35.44%，比pH=4时的损失率低18.57%.pH=2时HCl法蛋白质去除率最大，可达到91.90%，同时多糖的损失率也达到最大值69.87%，pH=3时蛋白质去除率为89.67%，多糖的损失率为34.43%.2.5 TCA法测定蛋白质去除率与多糖损失率的结果TCA法纯化多糖效果如图5所示，pH在2到5之间，多糖的损失率远大于蛋白质的去除率，且pH=2时多糖的损失率达到最大值，为96.65%，显然不符合本次实验目的，只有在pH=6时TCA法蛋白质去除率最大值，但仅为29.68%，多糖的损失率为14.45%.2.6 几种脱蛋白方法效果比较为了达到蛋白去除率高，多糖损失率低的目的，综合Sevage法、HCL法、TCA法的测定结果，选用Sevage法重复6次，HCl法调节pH=3，TCA法调节pH=6，作图6进行对比分析.由图6对比分析可知：Sevage法、HCl法、TCA法三种方法中蛋白质去除效率由高到低依次是HCl法＞Sevage法＞TCA法，多糖损失率变化由小到大依次是TCA法＜Sevage法＜HCl法，显然HCl法蛋白质去除率最高，但是多糖损失率最大，而TCA法蛋白质去除率最低，只有Sevage法测定的蛋白质去除率仅比HCl法低9.56%，并且多糖损失率比HCl法多糖损失率降低了50%.本研究采用Sevage法、HCL法、TCA法对玉米秸秆发酵产物多糖脱蛋白效果进行对比，结果表明：TCA法多糖损失率大，蛋白质去除率不高，显然与本试验的目的不符，HCl法蛋白质的去除率比较高，但是相应的多糖损失率在三种方法中是最大的，同样不符合试验目的，而Sevage法多糖损失率相对较低，蛋白质的去除率略低于HCl法蛋白质的去除率，因此，Sevage法更适合用于秸秆发酵产物多糖纯化.【相关文献】［1］王艳棉，王博儒，张全国，等.秸秆资源化利用途径及建议［J］.河南农业科学，2009（7）：23-26.［2］王革华.实现秸秆资源化利用的主要途径［J］.上海环境科学，2002，21（11）：651-661. ［3］Zhang X，Tu M B，Paice M G，et al.Routes to potential bioproducts from lignocellulosic biomass lignin and hemicelluloses［J］.Bioenergy Research，2011（4）：246-257.［4］卢碧玉，蔡小莲.芦荟多糖抑制肿瘤新生血管作用的研究［J］.中医药导报，2013，19（1）：83-84.［5］王学兵.板蓝根多糖对PRRSV的体外抗病毒实验［J］.西北农业学报，2009，18（1）：198-200.［6］罗志敏，陈群伟.多糖及多糖衍生物水处理剂的研究进展［J］.广州化学，2008，33（1）：68-78.［7］卜美娥，厨庆丰.秸秆还田中多糖的效应［J］.土壤肥料，1992（4）：1-3.［8］马丽，谭小林，刘雄民，等.不同的脱蛋白方法用于螺旋藻多糖提取工艺的研究［J］.食品科学，2004，25（6）：116-119.［9］Ioelovich M.Correlation analysis of enzymatic digestibility of plant biomass ［J］.Biomass Conv Bioref，2014（4）：269-275.［10］张惟杰.糖复合物生化研究技术［M］.杭州：浙江大学出版社，1999.。

植物多糖提取液的几种脱蛋白方法的比较分析

2004年8月第27卷第8期重庆大学学报Journal of Chongqing UniversityAug.2004V ol.27　N o.8 文章编号:1000-582X(2004)08-0057-03植物多糖提取液的几种脱蛋白方法的比较分析Ξ李知敏,王伯初,周　菁,彭　亮(重庆大学生物工程学院生物力学与组织工程教育部重点实验室,重庆　400030)摘　要:多糖对肿瘤、病毒、心血管等方面具有独特的生物活性,且细胞毒性很低,因此多糖的分离及纯化一直是一个很有意义的研究课题。

实验以多糖损失率和脱蛋白率(r)为衡量指标,通过对几种脱蛋白方法的比较,优化出植物多糖提取液的脱蛋白方法,为多糖的纯化提供了一定的参考。

选用了3种较为常见的方法:三氯乙酸法、盐酸法及沙维积法(Sevag法)对植物多糖提取液进行脱蛋白处理。

三氯乙酸法、盐酸法及Sevag法的脱蛋白率分别为46.1%、72.5%和42.3%,多糖损失率分别为6.1%、15.1%和14.3%。

盐酸法脱蛋白率高,但它的多糖损失率较高;三氯乙酸法较温和,但除蛋白效率不高;Sevag法的脱蛋白效果不及前两种方法。

关键词:多糖;提取液;脱蛋白;比较中图分类号:Q-331文献标识码:A 糖类又称为碳水化合物,是植物光合作用的初生产物,是一类最丰富的天然产物,除了作为植物的贮藏养料和骨架之外,还通过它们进行合成了植物中的绝大部分成分[1]。

多糖在植物体内广泛存在,并且含量较高[2]。

20世纪50年代末对真菌多糖的抗癌效果的发现使人们开始了多糖系列的化学研究。

日本从20世纪60年代开始研究担子菌多糖的药物活性,并开发了一些有名的药物;中国对多糖的研究始于20世纪70年代,且发展很快。

到目前为止,人们发现多糖对肿瘤、病毒、心血管、抗衰老等方面有独特的生物活性[3-15],并且已有300多种多糖类化合物从天然产物中被提取出来,其中从中药中获得的水溶性多糖最为重要[3]。

多糖成分分析综述

多糖成分分析摘要：对多糖的提取、分离纯化、含量分析以及组分结构分析的研究进展进行了综述，并对其应用前景进行了展望。

多糖的组分分析是多糖质量控制和提供多糖基本信息的重要环节。

关键词：多糖；提取；分离纯化；表征鉴定多糖(polysaccharides,PS)又称多聚糖，由10个以上的单糖分子通过苷键聚合而成，其分子量较大，一般由几百甚至几万个单糖分子组成，是除了蛋白质和核酸以外的一类重要的生物大分子。

虽然糖类的研究并不比蛋白质和核酸晚，但其研究层次与水平还远远落后于蛋白质和核酸。

多糖在自然界高等植物、动物、藻类及细菌类内均有存在，分布极广。

有些多糖无生物活性，如淀粉、树胶和粘液质等，通常被当做杂质除去。

而具有药效作用的多糖大多是活性多糖。

1969年，日本学者千原率先证实了香菇热水提出物的抗肿瘤活性，羽田、佐木进一步研究证实有效成分是香菇多糖。

自此，全世界掀起了从真菌中提取抗肿瘤活性成分的热潮[1]。

尤其近年来，随着生物学、化学等相关学科的飞速发展，多糖化合物也得到了日益深入的研究。

国际科学界视多糖的研究为生命科学的前沿领域，甚至提出21世纪是多糖的世纪。

鉴于多糖研究所具有的学术价值和广阔的应用前景，使得多糖研究成为人们关注的研究热点之一；又目前研究比较多的是植物多糖和微生物多糖，因此本文将就植物多糖和微生物多糖的成分分析研究进行概括、总结，并就存在的问题加以展望。

1 多糖的提取多糖的提取通常要根据多糖的存在形式及提取部位不同决定其提取方法。

一般从植物中提取多糖，先用石油醚、乙醚、丙酮等有机溶剂进行预处理，除去脂溶性杂质[1]。

然后根据不同的溶解度选择一种溶剂进行萃取，常用的为水、稀盐、稀酸、稀碱等溶剂。

传统的提取方法有水提醇沉法、稀碱浸提法、稀酸浸提法和酶法等，随着对多糖研究的不断深入，又出现超滤法、微波辅助浸提法以及超声波法等等。

1.1 溶剂提取法溶剂提取法是提取多糖的常用方法，利用多糖不溶于乙醇的性质在提取液中加入乙醇使多糖沉淀出来。

仙人掌果多糖抗肿瘤药效和机制的研究的开题报告

仙人掌果多糖抗肿瘤药效和机制的研究的开题报告一、研究背景及意义仙人掌果多糖是一种天然产物，具有多种生物活性，如抗氧化、降血糖、降血脂等作用。

近年来，研究发现仙人掌果多糖还具有抗肿瘤作用，并且其毒副作用较小，具有较高的应用价值。

因此，进一步明确仙人掌果多糖抗肿瘤药效和机制具有重要的科学意义和应用前景。

二、研究目的及内容本研究旨在探讨仙人掌果多糖的抗肿瘤药效和机制，具体研究内容如下：1. 初步评估仙人掌果多糖的抗肿瘤作用，包括对不同类型的肿瘤细胞的抑制作用、体内抑制肿瘤生长的效果等。

2. 探讨仙人掌果多糖的抗肿瘤机制，包括对肿瘤细胞生长周期的影响、对肿瘤细胞凋亡的诱导作用、对肿瘤细胞的免疫调节作用等。

3. 评估仙人掌果多糖的毒副作用及其安全性。

三、研究方法及技术路线本研究将采用体外细胞实验和体内动物实验相结合的方法，具体技术路线如下：1. 体外实验：使用MTT法、流式细胞术等方法评估仙人掌果多糖对人肿瘤细胞的作用，并探讨其对细胞周期和凋亡的影响。

2. 体内实验：建立裸鼠移植瘤模型，观察仙人掌果多糖对瘤体大小及体内肿瘤分子表达的影响，评估其体内抗肿瘤作用及毒副作用。

3. 分子生物学：运用Western blot、RT-PCR等技术，深入研究仙人掌果多糖对多种肿瘤相关蛋白的调节作用，探讨其抗肿瘤机制。

四、预期成果及意义本研究旨在明确仙人掌果多糖的抗肿瘤药效和机制，为其临床应用提供科学依据，预期成果及意义如下：1. 确定仙人掌果多糖具有抗肿瘤作用的证据，为其开发成为新型肿瘤治疗药物提供科学基础。

2. 探索仙人掌果多糖的抗肿瘤机制，丰富肿瘤治疗领域的理论基础。

3. 提高人们对天然药物的认识和重视，推进人们对天然药物的研究和利用，为构建健康中国做出贡献。

仙人掌多糖提取过程中三种脱蛋白方法的比较研究

关键词：仙人掌；多糖；脱蛋白；酶
ＣｏｐａｉｏｆｔｅｅｈｏｆＲｅｏｉｏｅｎｆｏｌｓｃｈａｉｍｒｓｎｏｈｒｅＭｔｄｓｏｍｖｎｇＰｒｔｉｒｍＰ０ｙａｃｒｄｅＥｘｒｃｈｅＣａｔｔａｔｉｔｃｕｓｎ
仙人掌多糖提取过程中三种脱蛋白方法的比较研究
史德芳，杨洋，孙晓雪，任红，韩淑琴
（．西大学轻工与食品工程学院，２广西大学生命科学学院，广西南宁５００１广．０４）３
摘要：用水提取的仙人掌多糖常含有蛋白质，实验以多糖损失率和脱蛋白率为衡量指标，选用了３种方法：Ｓｖｇ、三氯乙酸ｅａ＇￣法和酶法对仙人掌多糖提取物进行脱蛋白处理。实验结果表明：酶法、三氯乙酸法和Ｓｖｇ法的脱蛋白率分别为８．５．ｅａ９％、６％和４．６２５％，５多糖损失率分别为７％、９５１．．２．％和３％。经比较认为：酶提取法是替代常规方法的一种有效方法。６
随着分子生物学的发展，人们逐渐认识到糖及其
仙人掌：广西农业高新技术展示园；胰蛋白酶，血清蛋白，考马斯亮蓝Ｇ２０．５，葡萄糖，浓ＨＳ４２０，苯酚，无水乙醇均为分析纯；振荡器，恒温水浴锅，２分光光度计，７３０Ｇ７１７５０１冷冻干燥机，ＥＳ５１Ｌ电泳仪。Ｐ３０Ｘ１实验方法．２
Ｓ．ａＹａｎｇ，ｈｉＤｅｆｎｇ，ｎｇＹａＳｕｎＸｉｏｘＲｅｏＨａａ．ｕｅ，ｎＨｎｇ，ｎＳｈｕｑｎ．ｉ

仙人掌多糖的提取及其对自由基的清除作用

ＥｘｒｃｉｎｏｌｓｃｈｒｄｒｍｃｕｎｈｆｃｆＳａｅｇｎｅｔａｔｏｆＰ０ｙａｃａｉｅｆｏＣａｔｓａｄｔｅＥｆｅｔｃｖｎｉｇＦｒｅｏ
Ｒａｉａｓｄｃｌ
ＳＤｅｆｎ ’ ＨＩ・ａｇ，ＹＡＮＧＹａｇ，Ｅｎ￣ＲＮＨｏｇ，Ｕｎ ’ＳＮＸｉ－ｕｌａｘｅ，ｏＨＡＮＳｕｑｎｈ－ｉ’
维普资讯
四，仓品与崖磅－１
Ｓｃｍｍｏｄ ■ －ＦｒｎａｉｎｉｈＦｏＩｄｅｍｅｔｔｏ
仙人掌多糖的提取及其对自由基的清除作用
史德芳，洋任红，晓雪，淑琴杨，孙韩
（．西大学轻工与食品工程学院；２广西大学生命科学学院，广西南宁５００）１广。３０４
摘要：对仙人掌多糖提取工艺条件厦其体外抗氧化性进行了研究。结果表明，仙人掌多糖最佳提取工艺为：提取
温度８５℃，取时间２ｈ提，固液比ｌ２，取次数４次，经过酶法脱蛋白，多糖得率可达５９％。白质脱除率达：Ｏ提．５蛋到９．％。蛋白质仙人掌多糖提取液的清除自由基的作用较明显。２５关键词：匀设计；人掌；均仙多糖；自由基中田分类号：Ｓ０．Ｔ２１２文献标识码：Ａ文章编号ｚ６１６９（０６００４００７－８２２０）２－０２－０５１
ＡｂｔａｔＴｅｏｔｌｏｄｔｎｒｘｒｃｉｎｏｌｓｃｈｒｅｆｍａｔｓｎｓｎｉｘｄｔｅａｔｉｒｓｒｃ：ｈｐｉｎｉｏｓｏｔａｔｆｏｙａｃａｉｏｃｃｄｉｔｉａｉｃｉｔｗｅｅｍａｃｉｆｅｏｐｄｒｕａｔａｏｖｖｙｓｕｉｄｉｉｐｐｒＴｅｒｓｌｓｏｄｔａｅｏｔｍｃｎｌｇｏｄｔｎｒｓｆｌｗｓｔｅｔｍｐｒｔｒｔｄｅｔｓａｅ．ｈｅｕｔｈｗｅｔｈｐｉｎｈｈｔｍｕｔｈｏｏｙｃｎｉｏｓｗｅｅａｌｅｉｏｏ：ｈｅｅａｕｅ

去除腐乳中蛋白质的方法研究

ｐｒｏｔｅｉｎｒａｔｅｃａｎｒｅａｃｈ６２．１．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓｌｆｅｒｍｅｎｔｅｄｂｅａｎｃｕｒｄ；ｒｅｍｏｖｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ；ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄｍｅｔｈｏｄ
ｌ概述
用大豆发酵制成豆豉、豆酱、腐乳、酱油等食品，创
的蛋白质，所以脱蛋白大多数应用于多糖溶液脱蛋白，
比如仙人掌多糖提取过程中脱蛋白、天麻多糖水提及脱蛋白、植物多糖提取液脱蛋白、螺旋藻多糖脱蛋白、白花蛇舌草多糖脱蛋白等［１ ¨ ］。上述国内外研究方法都可用于腐乳脱蛋白。考马斯亮蓝Ｇ－－２５０（Ｃｏｏｍａｓ－ｓｉｃｂｒｉｌｌｉａｎｔｂｌｕｅＧ－２５０）测定蛋白质含量属于染ａｎＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙａｎｄＢｕｓｉｎｅｓｓＣｏｌｌｅｇｅ，Ｄｕｊｉａｎｇｙａｎ６１１８００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｒｅｍｏｖｅｐｒｏｔｅｉｎｆｒｏｍｆｅｒｍｅｎｔｅｄｂｅａｎｃｕｒｄ，ｓｅｌｅｃｔｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄｍｅｔｈｏｄ，ｔｒｉ－
Ｔｈｅｂｅｓｔｒｅｍｏｖａｌｍｅｔｈｏｄｏｆｐｒｏｔｅｉｎｉｓｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃａｃｉｄｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｐＨｖａｌｕｅｉｓ３．５，ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎｔｉｍｅｉｓ０．５ｈ。ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍｄｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｉｓ３５ ℃ ，ａｎｄｔｈｅｒｅｍｏｖｉｎｇ

仙人掌润肤霜的试制

第30卷第6期2005年12月昆明理工大学学报(理工版)Journal of Kun m ing University of Science and Technol ogy (Science and Technol ogy )Vol .30　No 16　Dec .2005收稿日期:2004-11-22.作者简介:刘晓波(1969.2～),男,研究生,讲师1主要研究方向:轻化工程.E -ma il:liuxiaobo_k m@sina .com仙人掌润肤霜的试制刘晓波(昆明理工大学生物与化学工程学院,云南昆明650224)摘要:以仙人掌提取液为添加剂,选择硬脂酸、十六醇、15#白油、I .P .M 、单甘酯、TE A 、甘油、T ween -80、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、香精等化妆品原料,以不同配方制作润肤霜,检测其理化指标、感官指标,通过对比选择各成分的适宜含量.结果表明,可采用硬脂酸215%、十六醇210%、单甘酯610%、I 1P 1M 910%、尼泊金丙酯011%、15#白矿油910%、TEA 016%、甘油810%、T ween -80013%、尼泊金甲酯012%、仙人掌汁2510%、香精011%、蒸馏水(余量)的配比制备仙人掌润肤霜.关键词:仙人掌;HLB 值;润肤霜中图分类号:S682.33;T Q658.21文献标识码:A 文章编号:1007-855X (2005)06-0080-05Prepara ti on of Em olli en t Cream of CactusL I U Xi ao 2bo(Faculty of B i ol ogical and Che m ical Engineering,Kun m ing University of Science and Technol ogy,Kun m ing 650224,China )Abstract:W ith the cactus juice as p lant additive,the cos metics materials,such as stearic acid,cetyl alcohol,liquid paraffin 15#,is op r opyl myristate,glycer ol ester,triethanola m ine,glyeer ol,polyoxyethylene s orbitan mo 2nooleat,methyl benz oate,p r opyl benz oate,essence and s o on,are chosen t o p r oduce the e mollient crea m by dif 2ferent f or mulas s o as t o detect its physicoche m ical and sens ory index .Thr ough comparative analysis,the p r oper content of each ingredient is chosen .The results show that the for mula of 2.5%stearic acid,2.0%cetyl alco 2hol,9.0%liquid paraffin 15#,9.0%is op r opyl myristate,6.0%glycer ol ester,0.6%triethanola m ine,8.0%glyeer ol,0.3%polyoxyethylene s orbitan monooleat,0.2%methyl benz oate,0.1%p r opyl benz oate,25.0%cactus juice,0.1%essence,and distilled water (the rest p r oporti on )can be chosen t o p r oduce the e mollient crea m of cactus .Key words:cactus;HLB;e mollient crea m0引言化妆品是以涂擦、喷洒或者其他类似的方法,散布于人体表面部位,达到清洁、消除不良气味、护肤、美容和修饰目的的日用化学工业产品.上世纪七十年代以来的回归自然的潮流,使“天然化妆品热”已经形成,在化妆品原料中采用了越来越多的天然物质.据统计,含天然成分的化妆品欧美占60%以上,日本达40%以上,仅日本就已有200余种天然药物应用于化妆品中[1～3].仙人掌(cuctcs ),为仙人掌科仙人掌属植物(opuntis s pp ),主要分布于南美洲、非洲、东南亚、南亚、我国南方等热带和亚热带地区,云南省境内具有丰富的资源分布.云南仙人掌的成分大致为:水分9316%,碳水化合物2182%,蛋白质0187%,脂肪0107%,粗纤维1107%,灰分1147%,β-胡萝卜素、V A 、V C 含量分别为242μg/100g,4013μg/100g,2115mg/100g .对仙人掌中生物活性物质的检测发现,仙人掌中含有S OD 、多糖、生物碱、黄酮甙、强心甙、皂甙等成分.近年来,对仙人掌的活性成分、药理药效的研究取得了不少进展.研究表明,仙人掌含有的生物活性物质,具有抑菌、消炎、镇痛、增强免疫、降血糖、抗脂质过氧化等药理作用,并有多种临床用途[4～7].S OD 、多糖、生物碱、黄酮甙、强心甙、皂甙、维生素、果酸等植物活性成分,在化妆品中已有广泛应用,具有护肤、润肤、抗衰老的功效,深受消费者的青睐.以仙人掌成分作为洗面奶、面膜等洁肤用品的组成部分在化妆品中的应用已有一些报道[8～11],但在护肤用品中的使用仍缺乏探讨.在护肤膏霜中加入仙人掌成分后,由于护肤用品较洁肤用品与皮肤接触时间长,仙人掌中有效成分的润肤、护肤、抗衰老、消炎、祛除黄斑等作用更能得到发挥.本文对仙人掌护肤膏霜的基础配方与仙人掌提取物的含量对其体系稳定性的影响进行了探讨.1材料与方法1.1材料仙人掌采自昆明市西山区.硬脂酸、十六醇、15#白油、I .P .M 、甘油、单甘酯、TE A 、T ween -80、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、香精购于化妆品原料市场.1.2仪器设备电磁搅拌器、水浴锅、均质机、电冰箱、高速冷冻离心机、医用离心机、电热干燥箱、pH 仪.1.3润肤霜制作方法[1,11]1.3.1仙人掌汁制备将仙人掌刺小心去除,剃去表面角质层,称重后用不锈钢刀切碎,按1∶015加入蒸馏水,不断搅拌2m in,用3层洁净纱布过滤,稍用力挤干,将滤饼再加入同样重量的蒸馏水,重复以上操作,将两次滤液混匀,置于高速冷冻离心机中,3000r/m in 离心5m in,取上清液备用.1.3.2润肤霜试制配方1)单甘酯含量对润肤霜性状影响的试验配方油相:硬脂酸215%,十六醇210%,15#白油710%,I .P .M 910%,尼泊金丙酯011%;单甘酯含量:1#415%,2#610%,3#715%,4#1215%,5#2310%;水相:TEA 016%,甘油810%,T ween -80013%,尼泊金甲酯012%,仙人掌汁2010%,香精011%,蒸馏水(余量).2)白油含量对润肤霜性状影响的试验配方油相:硬脂酸215%,十六醇210%,单甘酯610%,I .P .M 910%,尼泊金丙酯011%;15#白油含量:1#510%,2#710%,3#910%,4#1110%,5#1310%;水相:TE A 016%,甘油810%,T ween -80013%,尼泊金甲酯012%,仙人掌汁2010%,香精011%,蒸馏水(余量).3)仙人掌汁含量对润肤霜性状影响的试验配方油相:硬脂酸215%,十六醇210%,单甘酯610%,I .P .M 910%;尼泊金丙酯011%,15#白油910%;水相:TE A 016%,15#白油810%,T ween -80013%,尼泊金甲酯012%;仙人掌汁含量:1#1010%,2#1510%,3#2010%,4#2510%,5#3010%,香精011%,蒸馏水(余量).1.3.3润肤霜制备方法按试验配方分别称取水相、油相成分置于容器中,升温至适宜温度,搅拌均匀,然后将水相缓慢加入,搅拌至充分乳化.乳化结束后,滴加香精,继续搅拌冷却至室温.1.4检测方法1)感官指标、理化指标检测按QB /T 1857-93进行.2)离心试验将样品装入玻璃离心管中,置电热恒温培养箱中,38℃条件下,保持1h 后移入医用离心机中,3500r/m in 离心30m in,观察有无油水分离现象.18第6期刘晓波:仙人掌润肤霜的试制3)涂抹分散性、肤感试验取适量试样,在掌背小心涂抹,比较其铺展难易性,观察涂抹后皮肤的油性.2结果与讨论2.1润肤霜基质原料选择表1　润肤霜基质成分的功能Tab .1　The functi on of co m positi on of the e m olli en t cream成　分功能硬脂酸滋润剂、增稠剂、部分与三乙醇胺反应形成乳化剂十六醇滋润剂,助乳化剂I .P .M 滋润剂、润滑剂、改善油腻感15#白油滋润剂、润滑剂甘油保湿剂单甘酯乳化剂T ween -80乳化剂TE A与硬脂酸反应形成乳化剂润肤霜是保护皮肤免受外界的刺激,防止皮肤过分失去水分,或经皮肤表面补充适宜的水分和脂质,以保持皮肤的滋润、柔软和富有弹性的护肤化妆品.为了便于今后对仙人掌中有效成分的护肤效果进行深入研究,以选择较简单的配方为原则,选择在润肤霜中应用较为广泛的硬脂酸、十六醇、I .P .M 、15#白油、甘油、单甘酯、T ween -80、TE A 等原料进行润肤霜的试制.所选原料的功能如表1所示.2.2乳化剂的选择和单甘酯含量对润肤霜性状影响润肤霜是乳化型护肤膏霜,乳化体系的稳定性是其基本要求.润肤霜乳化体系有O /W 型、W /O型、W /O /W 等几种,其中W /O 型化妆品对皮肤的的滋润作用较好,尤其适合干性皮肤.影响乳化体系稳定性的因素包括乳化剂的种类和配比、乳化工艺、油相与水相的比例、体系中各成分的配伍性等等.其中,乳化剂的种类和配比是其中主要的决定因素.HLB 法选择乳化剂是乳化剂选择方法中最常用的方法.经验表明,HLB 值在3～6的乳化剂适宜作W /O 型乳化剂,HLB 值在8～18的乳化剂适宜作O /W 型乳化剂.在乳化体系中使用混合乳化剂,能使体系形成强度较大的界面膜,提高乳化效率高和乳化体系的稳定性[1].以制备W /O 型润肤霜为目的,选择单甘酯、T ween -80,硬脂酸三乙醇胺(由硬脂酸与TEA 反应而得)组成不同HLB 值的混合乳化剂,以单甘酯含量分别为415%,610%,715%,1215%,2310%进行润肤霜试制.试验结果如表2所示.表2　不同单甘酯含量、不同HL B 值对润肤霜性状影响Tab .2　The effect of glycerolester and HL B w ith var i ous con ten ts on the e m olli en t cream property1#2#3#4#5#单甘酯/%41561071512152310T ween -80/%013013013013013硬脂酸三乙醇胺/%117117117117117HLB 值615610515510415耐寒试验不稳定稳定稳定稳定稳定耐热试验不稳定稳定稳定稳定不稳定离心试验稳定稳定稳定稳定不稳定涂抹分散性好好好较差差涂抹肤感油性弱油性适中油性适中油性适中油性强注:①硬脂酸三乙醇胺由硬脂酸与三乙醇胺反应而得[12].其反应式为:C 17H 35COOH +(C 2H 4OH )3N ϖC 17H 35COOH ・N (C 2H 4OH )3②HLB =∑(乳化剂HLB 值×乳化剂重量)/∑乳化剂重量[1].其中,单甘酯HLB 值318,T ween -80HLB 值1510,硬脂酸三乙醇胺HLB 值1210.表2试验结果表明,在所设计配方中,单甘酯含量较高和较低时,体系的稳定性都会出现下降,而且随着单甘酯含量上升,涂抹分散性变差,涂抹肤感油腻性增加.此外,在稳定乳化体系中,乳化剂用量增加,则乳化效率下降,成本增加.因此,选择HLB 值为610,单甘酯含量为610%的2#试验配方进行以后的试验.28昆明理工大学学报(理工版) 第30卷2.3白油含量对润肤霜性状的影响白油又称石蜡油、液体石蜡、矿油等,是一种无色、无臭、透明的液体,具有润滑性,在皮肤上可形成障碍性薄膜,对皮肤柔软效果较好,具有较高的化学稳定性和微生物稳定性,不易腐败,价格低廉,在化妆品中应用广泛.白油在润肤霜中使用,对体系稳定性、感官涂抹效果有一定影响.在以上确定了单甘酯用量的基础上,进一步以白油含量为5%,7%,9%,11%,13%的不同配比进行润肤霜试制.试验结果如表3所示.表3　不同白油含量对润肤霜性状影响Tab .3　The effect of li qu i d paraff i n w ith var i ous con ten ts on the e m olli en t cream property1#2#3#4#5#白油/%5791113耐寒试验不稳定稳定稳定稳定不稳定耐热试验不稳定稳定稳定稳定不稳定离心试验稳定稳定稳定稳定稳定涂抹分散性好好好好好涂抹肤感油性弱油性适中油性适中油性较强油性强以上试验结果表明,在所设计配方中,白油含量较高和较低都不利于体系稳定,白油含量对涂抹分散性无明显影响,但随着其含量上升,涂抹肤感油腻性增强.由于白油对皮肤有较好的柔软效果,综合考虑体系稳定和油性适中、涂抹分散性好,在白油含量为7%、9%的2#、3#两个配方中,选择白油含量为910%的3#配方进行下一步的试验.214仙人掌汁含量对润肤霜性状的影响化妆品中活性成分的含量决定其使用效果,仙人掌中含有S OD 、多糖、生物碱、黄酮甙、强心甙、皂甙、维生素等结构较复杂的有机分子、聚合物,具有护肤、润肤、抗衰老、消炎等功效,仙人掌提取液化妆品基质中含量越高,其使用价值越大.但会对其体系稳定性、感官涂抹效果有一定影响.另外为了尽量保留仙人掌的有效成分,对提取液未作脱色、纯化处理,提取液中的色素也会影响其色泽.在以上确定了适宜单甘酯、白油含量的基础上,为了确定适宜的仙人掌提取液添加量,以提取液含量为1510%,2010%,2510%,3010%,3510%的不同配比进行润肤霜试制.试验结果如表4所示.表4　仙人掌汁不同含量对润肤霜性状影响的试验Tab .4　The effect of cactus ju i ce w ith var i ous con ten ts on the e m olli en t cream property1#2#3#4#5#仙人掌汁/%15102010251030103510耐寒试验稳定稳定稳定稳定稳定耐热试验稳定稳定稳定稳定不稳定离心试验稳定稳定稳定稳定稳定涂抹分散性好好好稍差差色泽洁白白色白色白色、略暗白色、较暗表4表明,在所设计配方中,随着仙人掌汁含量的提高,润肤霜涂抹分散性和体系稳定性变差,这可能是仙人掌汁中含有多糖,多糖溶液较粘稠,同时高分子聚合物对乳化体系具有敏化作用所致.随着仙人掌汁含量的提高,润肤霜色泽变暗.由于色泽会大大影响消费者的喜好,因此,在体系稳定的基础上,在不同仙人掌汁含量的试验配方中,选择色泽呈白色,仙人掌汁含量为2510%的配方为试制润肤霜的目标配方.215仙人掌润肤霜放大试验在确定了适宜单甘酯、白油和仙人掌提取液适宜含量的试验基础上,以硬脂酸215%、十六醇210%、单甘酯610%、I .P .M 910%、尼泊金丙酯011%、15#白矿油910%、TEA 016%、甘油810%、T ween -80013%、尼泊金甲酯012%、仙人掌汁2510%、香精011%、蒸馏水(余量)为配比进行了一次制备115kg 仙38第6期刘晓波:仙人掌润肤霜的试制人掌润肤霜的放大试验,并对其进行了感官指标、理化指标检测,结果如表5所示.表5　润肤霜样品感官指标、理化指标Tab.5　The che m i ca l,physi ca l and sen suous i n dex of the e m olli en t cream理化指标pH耐热耐寒感官指标色泽香气膏体61540℃,24h膏体无油水分离-20℃,24h恢复至室温无油水分离现象白色香味纯正细腻所制备的试验样品在室温条件下,经3a多长期储存(2000年7月制备,储存至2003年12月),其使用性状仍无改变.样品经昆明理工大学生化学院生物工程系1997级10余名男女学生试用,除1人有轻微皮肤过敏反应外,试用者反映使用效果与市面销售的中档润肤霜无明显差异,其中2名试用者还反映有消炎效果.3结论试验表明,采用油相:硬脂酸215%、十六醇210%、单甘酯610%、I.P.M910%、尼泊金丙酯011%、15#白矿油910%;水相:TEA016%、甘油810%、T ween-80013%、尼泊金甲酯012%、仙人掌汁2510%、香精011%、蒸馏水(余量)的配方能制备出稳定性、涂抹分散性等感官指标较佳的仙人掌润肤霜.仙人掌润肤霜是在护肤膏霜中加入仙人掌成分,由于护肤用品较洁肤用品与皮肤接触时间长,更能发挥仙人掌中有效成分的润肤、护肤、抗衰老、消炎、祛除黄斑等作用,但确切的抗衰老、消炎、祛除黄斑等特殊功效尚需进行深入的研究.参考文献:[1]阎世翔.化妆品科学(上册)[M].北京:科学技术文献出版社,1995.1～3,110～122.[2]王建新.天然活性化妆品[M].北京:中国轻工业出版社,1997.66～237.[3]阎世翔.中草药在化妆品中的应用[J].中国化妆品,2004,(8):84～86.[4]王者悦.中国药膳大辞典[M].大连:大连出版社,1992.222.[5]陶美华,曾富华,卢向阳.仙人掌属植物的化学成分、药理作用及开发利用[J].亚热带植物科学,2004,33(1):64～68.[6]周立刚,杨成宗,吴建勇.仙人掌属药用植物的研究进展[J].中草药,2004,35(1):103～105.[7]陈朝银,赵声兰,曹建新.仙人掌茎有效成分分析[J].中国野生植物,2004,16(4):24～27.[8]梁立兴.银杏外种皮的研究现状及开发利用前景[J].中国资源综合利用.2003,(10):12～14.[9]万克英,李朝华,余广松.仙人掌汁外用对应变性接触性皮炎的影响[J].华中医学杂志,2003,27(2):73～74.[10]许伟,王桂秋,许艳霞,等.仙人掌抗衰老作用的实验研究[J].中国中医药科技,2003,10(2):101～102.[11]张友兰,王利军,潘智才.保湿粉刺露的研制[J].日用化学工业,2000,30(5):21～23.[12]冯兰宾,袁铁彪.化妆品生产工艺[M].北京:轻工业出版社,1986.37.48昆明理工大学学报(理工版) 第30卷。

仙人掌多糖的研究进展

仙人掌多糖的研究进展摘要】仙人掌多糖具有明显的增强免疫、抗肿瘤、降血糖、抗氧化、抗衰老等活性，是仙人掌具有多种功效的原因之一。

本文主要综述了仙人掌多糖的提取、分离纯化方法和生物活性的研究进展。

【关键词】仙人掌多糖提取分离纯化生物活性仙人掌（Opuntia dillenii Haw.）为仙人掌科植物的根及茎，具有行气活血、清热解毒等功效，用于心胃气痛、痞块、痢疾、痔血、咳嗽、喉痛、肺痈、乳痈、疔疮、火伤、蛇伤等症，在我国有广泛分布。

仙人掌多糖（Opuntia dillenii polysaccharides，ODP）是从仙人掌科植物仙人掌中提取的蛋白多糖，是仙人掌具有多种功效的原因之一。

近年来，许多学者对仙人掌多糖进行了研究，取得较大进展。

本文对近年来仙人掌多糖的提取方法、分离纯化方法和生物活性作一综述。

1 仙人掌多糖的提取提取工艺:原料粉碎→烘干→提取→提取液→醇沉→离心→沉淀物→有机溶剂洗涤→冷冻干燥→仙人掌粗多糖。

1.1 水提法水提法为仙人掌多糖的传统提取方法。

金鑫等[1]研究了仙人掌多糖水提法的最佳工艺条件，以多糖提取得率为指标得最佳工艺：提取温度为80℃，提取时间为1h，固液比为1:40。

而刘洋等[2]应用响应面分析法优化仙人掌多糖的浸提工艺，结果表明：水料比5.5:1，浸提温度75℃，浸提时间2.2h，浸提1次，仙人掌多糖的提取率为0.81％。

1.2 醇提法严赞开等[3]比较了用不同体积分数的乙醇溶液提取米邦塔仙人掌茎多糖的效率，结果表明以60%的乙醇为最佳。

提取优化工艺为：以体积分数60％的乙醇为浸提剂，按每克仙人掌加15ml提取液投料，在70℃下浸提5h。

1.3 超声波提取法兰琦杰等[4]据回归模型及其期望函数途径进行模拟选优，得到仙人掌多糖提取率的优化条件为超声破碎时间38min左右，料液比1:36（g/ml），pH值7.16左右。

其中，影响仙人掌多糖活性的主要因子是pH值，在酸性或碱性环境下提取到的仙人掌粗多糖活性较低。

仙人掌多糖提取及其对自由基清除作用

力。笔者主要对仙人掌多糖的提取工艺进行研究．针。井
１．提取工艺原料粉碎＿烘干一称重一用水提取数次．１３ ÷ 过滤合并滤液一醇沉一离心一沉淀复溶＿脱除蛋白一减＋压浓缩－冷冻干燥仙人掌多糖＋
硫酸ＩｒＬ．人冷水中冷却并摇匀。蒸馏水为卒白对照．Ｏｒ放Ｌ以在４０ｔ波长处测定吸光度，糖浓度和吸光度为坐标，９ｎｎ以得到同归方程为：：．０００２相关系数：０９５ｙ００６＋．７．ｒ９＝多糖测定时取样品适量．解４ｍ，入５溶Ｌ加％苯酚溶液２ｍ，播匀，用移藏管向每支试管中缓慢加人浓硫酸ｌＬＯ
渣０２０、、．、．、．、６１、０ｒ．加水稀释至４、４０８１１１１、．２１０２４．８．ＩＬｍ，Ｌ向各管中加入５％苯酚试剂２Ｌ．匀沿管壁加人浓ｍ混
１材料和方法
１材料与试剂．１
蛋白质仙人掌多提取液清除自由基的作用较明显。耱
。
蛄果表明．仙人掌多糖最佳提取条件为：提取
温度８５℃ ，取时间２ｔ液比ｌ２，提固ｈ：０４次提取，过酶法脱蛋白多糖得率可速５５．白质脱除率选９．％。经．％蛋９２５
，

仙人掌多糖及其提取纯化方法与应用[发明专利]

专利名称：仙人掌多糖及其提取纯化方法与应用专利类型：发明专利
发明人：杨宁,赵谋明,崔春,张桂和
申请号：CN200710029122.3
申请日：20070711
公开号：CN101095480A
公开日：
20080102
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了一种仙人掌多糖的提取纯化方法，包括：用水浸提经除杂、破碎的仙人掌鲜茎，离心取上清液；过滤后，采用超滤膜对上清液纯化和浓缩；将超滤浓缩后的溶液在不同乙醇浓度下分段沉降多糖；经Sevag法脱蛋白、活性炭脱色初步纯化；该方法条件温和、多糖类物质损失少、超滤速度快、工艺路径短、节约能源。

得到的仙人掌多糖对糖尿病并发症中的氧化应激的抑制作用，可用于制备糖尿病抗氧化剂药物，为开发和有效利用野生仙人掌植物资源提供了新的途径。

申请人：华南理工大学
地址：510640 广东省广州市天河区五山路381号
国籍：CN
代理机构：广州粤高专利代理有限公司
代理人：何淑珍
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一种野生仙人掌多糖PLGA微胶囊的制备方法[发明专利]

专利名称：一种野生仙人掌多糖PLGA微胶囊的制备方法专利类型：发明专利
发明人：曾富华,袁清霞,李恒,李莉梅,黄彩玲,陆婉龄
申请号：CN201310033524.6
申请日：20130129
公开号：CN103040790A
公开日：
20130417
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及一种野生仙人掌多糖PLGA微胶囊及其制备方法，该野生仙人掌多糖微胶囊以聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）为包覆材料；所述制备方法包括以下步骤：（1）将野生仙人掌多糖溶于水形成内水相；（2）PLGA溶于有机溶剂形成油相，（3）将内水相加入油相初乳化得到初乳液；（4）将（3）所述初乳液加入外水相中复乳化得到复乳液；（5）复乳液加入NaCl溶液中经搅拌挥发有机溶剂，固化微胶囊；（5）停止搅拌，离心收集微胶囊并洗涤，冻干得到野生仙人掌多糖PLGA微胶囊；本发明制备的野生仙人掌多糖PLGA微胶囊大小均一、表面光滑、包封率较高。

申请人：湛江师范学院
地址：524000 广东省湛江市赤坎区寸金路29号湛江师范学院
国籍：CN
代理机构：广州市南锋专利事务所有限公司
代理人：刘广生
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三氯乙酸法脱除龙葵果多糖中蛋白质的工艺优化

三氯乙酸法脱除龙葵果多糖中蛋白质的工艺
优化
本文旨在优化龙葵果多糖脱除蛋白质的工艺，采用了三氯乙酸法进行处理。

实验结果表明，三氯乙酸浓度、处理时间和温度对脱除蛋白质的效果有显著影响。

首先，在不同三氯乙酸浓度下进行实验，结果显示，三氯乙酸浓度为10%时，脱除蛋白质的效果最好，其余浓度的效果均不如10%。

其次，在不同处理时间下进行实验，结果显示，处理时间在2小时时，脱除蛋白质的效果最好，随着处理时间延长，脱除效果逐渐降低。

最后，在不同处理温度下进行实验，结果显示，在50℃下处理的效果最好，高于和低于该温度时效果均不如50℃。

综合上述结果，我们得出优化的工艺条件为：三氯乙酸浓度为10%，处理时间为2小时，处理温度为50℃。

在这种条件下处理后，多糖中的蛋白质得到有效去除，使得多糖的纯度得到了提高。

值得注意的是，在使用三氯乙酸法进行处理时，必须正确掌握浓度、时间和温度等因素，避免操作不当而导致多糖的损失和催化剂的污染。

阳离子交换树脂去除人参多糖中蛋白质的研究

阳离子交换树脂去除人参多糖中蛋白质的研究人参多糖是一种重要的生物活性成分，具有多种药理活性，被广泛应用于中药、保健品等领域。

然而，人参多糖中常常含有大量的蛋白质，这些蛋白质不仅会降低人参多糖的稳定性和活性，还可能在某些情况下引起过敏反应。

因此，去除人参多糖中的蛋白质对于提高其纯度和活性至关重要。

阳离子交换树脂是一种常用的分离纯化工具，以其对蛋白质具有高度选择性的特点，被广泛应用于蛋白质分离纯化过程中。

在本文中，我们将探讨阳离子交换树脂去除人参多糖中蛋白质的研究进展。

首先，我们需要选择适合的阳离子交换树脂。

一般来说，选择具有较高阳离子交换容量和较低静电吸附性能的树脂能更好地去除人参多糖中的蛋白质。

常用的阳离子交换树脂主要有强阴树脂和弱阴树脂，其中强阴树脂具有较高的阳离子交换容量，适合用于去除多肽和蛋白质，而弱阴树脂则适合去除带正电荷的小分子化合物。

其次，我们需要考虑阳离子交换树脂的运行条件。

在去除人参多糖中蛋白质的过程中，pH值是至关重要的因素。

一般来说，在酸性条件下，蛋白质具有较高的静电吸附性，因此pH值的选择应该偏向碱性。

此外，适当调节温度和洗脱浓度也能影响去除效果。

需要注意的是，过高或过低的温度和洗脱浓度可能会导致蛋白质和人参多糖一起被洗脱，从而降低去除效果。

然后，我们需要考虑阳离子交换树脂去除蛋白质的机理。

一般来说，蛋白质在阳离子交换树脂上的吸附主要通过离子交换和静电作用实现。

当人参多糖溶液通过阳离子交换树脂床层时，树脂载体上的阳离子有选择性地吸附人参多糖中的蛋白质，而人参多糖则在树脂上被快速洗脱，从而实现了蛋白质的去除。

需要注意的是，在这个过程中，洗脱剂的浓度、淋洗时间和洗脱速度等因素也会影响去除效果。

最后，我们需要评估阳离子交换树脂去除人参多糖中蛋白质的效果。

一般来说，可以通过测定样品前后的蛋白质含量、纯度和活性来评估去除效果。

同时，也可以通过X射线衍射、动态光散射、核磁共振等技术对去除前后人参多糖的纯度和颗粒度进行表征。

千斤拔多糖的提取纯化及其结构鉴定

千斤拔多糖的提取纯化及其结构鉴定乔雪;卓燊;杨子明;陆玉婷;秦海洸【摘要】利用正交试验考察千斤拔多糖的提取工艺,并比较脱蛋白方法中的Sevag 法和三氯乙酸法的纯化效果,总糖含量测定采用苯酚-硫酸法,蛋白质含量测定采用考马斯亮蓝法;采用DEAE-52纤维柱法来分离多糖,并运用HPLC色谱来分析千斤拔多糖中的单糖成分.结果表明:经正交试验得出千斤拔多糖的最佳提取条件为时间2.5 h,料液比为1:30,温度80℃,其多糖得率为8.558%.对比两种脱蛋白的方法,Sevage法萃取3次时蛋白的脱除效果最好.经DEAE-52纤维柱来分离多糖共分得7个组分.经HPLC色谱鉴定出有葡萄糖,甘露糖和阿拉伯糖,主要单糖成分为葡萄糖.%In order to investigate the extraction process of polysaccharide from the Moghania with the orthogonal design, we compared the deproteinization process conditions of polysaccharides by Sevage with TCA method, determined the total polysaccharide contents with the method of phenol-sulfuricacid and the protein content by the method of Coomassie bril-liant blue. And we also purified the Moghania polysaccharide by DEAE-52 and analyzed the monosaccharide composi-tionby of Moghania polysaccharide by the method of high performance liquid chromatography ( HPLC). The results showed that the best time, ratio of solid to liquid and extraction temperate of the extraction process were in 2. 5 h, 1: 30, 80℃, as the extraction condition, the yield of polysaccharide was 8. 558%. By comparison with the Sevage method and TCA method, the optimal conditions of deproteinization were proved to be extracted three times with Sevage method. Moghania polysaccharide wasisolated into seven fractionates by DEAE-52 cellulose column chromatography; three kinds of saccharide were investigated by the HPLC, which were glucose, mannose and arabinose. In the three kinds of saccharide, peak area of the glucose was biggest than others, so the major saccharides was glucose.【期刊名称】《广西植物》【年(卷),期】2017(037)002【总页数】7页(P265-271)【关键词】千斤拔;多糖;正交设计;提取分离;纯化;DEAE-52【作者】乔雪;卓燊;杨子明;陆玉婷;秦海洸【作者单位】广西中医药大学,南宁 530001;广西科技大学医学院,广西柳州545005;广西植物功能物质研究与利用重点实验室广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所,广西桂林 541006;广西科技大学医学院,广西柳州 545005;山东中医药高等专科学校,山东烟台 264199【正文语种】中文【中图分类】Q946千斤拔为豆科植物蔓性千斤拔(Moghania philippinensis)、大叶千斤拔(M.macrophylla)或绣毛千斤拔(M.ferruginea)的干燥根(中国药典，2010)。

关于多糖脱蛋白质方法的比较_199

关于多糖脱蛋白质方法的比较关于多糖脱蛋白质方法的比较李志军（青岛农业大学，山东青岛 266109）［摘要］目的：从樟芝中提取分离樟芝多糖，并尝试对其多糖脱蛋白的方法进行选择。

方法：采用Sevage法、NaOH法、TCA法、双氧水法等方法进行脱蛋白，并用苯酚—硫酸法和考马斯亮蓝法以脱蛋白率和总糖损失率为指标进行比较。

结论：通过对数据的计算比较得知酶法与Sevage法联合脱蛋白率最高和总糖损失率最低，分别为81.7%和14.7%，脱蛋白效果较为理想。

［关键词］樟芝多糖；分离；提取；蛋白含量；总糖含量1引言多糖（polysaccharides，PS）又称多聚糖。

其广泛存在于动物，高等植物，微生物及海藻等机体中，是由各种单糖组成的天然高分子化合物。

多糖具有复杂、多方面的生物活性和功能，可作为广谱免疫促进剂，具有免疫调节功能。

随着分子生物学的发展，20世纪60年代后，多糖所具有的各种生理功能逐渐为人们所重视，尤其是增强免疫力的功能被广泛认同，并被广泛应用于肿瘤化疗。

但天然植物中多糖与蛋白质两种高分子成分共存，且两种物质分子量相近，另外多糖常常与蛋白形成糖蛋白复合物，使蛋白质的脱除变得更加困难。

因此，如何尽量多的去除蛋白质而保留多糖的有效成分成为了一个突出的问题，本文以脱蛋白率和多糖损失率为指标，尝试对真菌多糖脱蛋白的方法进行选择。

1.1糖标准曲线的制备（张惟杰，1994）称取干燥至恒重的无水葡萄糖200mg，置1000ml容量瓶中，加水溶解后稀释至刻度制成贮备液，分别吸取贮备液0.2，0.4，0.8，1.0，1.2，1.4，1.6，1.8，2.0ml加水稀释至4ml，向各管中加入5%苯酚试剂2ml，混匀。

沿管壁加入浓硫酸10ml，静置5min，振摇，置沸水浴中加热15min立即转入冷水浴中冷却至室温。

以蒸馏水为空白，在490nm波长处测定吸光度（丰朝霞，2000），以糖浓度和吸光度为坐标，回归方程为：Y=0.006+0.072X，相关系数：t=0.995。

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１实验材料和方法
水溶解后稀释至刻度制成贮备液。分别吸取贮备液０２０３００５０６０８ｌ加水稀释至ｌ，．，．，．．，．，．ｍ，４，ｍｌ向各管
中加入５ｌ马斯亮兰Ｇ２０液，混合均匀后，ｍ考一５溶３ ℃水浴加热５ｉ，Ｏｍｎ以蒸馏水为空白，５５ｍ波长在９ｎ处测定吸光度，得吸光度一白含量方程为：蛋Ｙ＝
１．糖标准曲线的制备．１２
其复合物具有重要的生物活性，已发现多种中药中含有的多糖具有如抗肿瘤、免疫调节、降血糖、病抗
毒、血脂、凝血等生物活性，降抗这类多糖没有细胞毒性，已经成为当今新药的发展方向之一。仙人掌具有行气活血、热解毒功能，清在我国作为药用已有悠久历史。仙人掌粗多糖系从仙人掌（ｐｎｉｉｅｉＯｕｔｄｌｎｉａｌＨｗ）的新鲜植物茎中提取的多糖用水提取的多糖，ａ
振荡器，恒温水浴锅，２７１分光光度计，
取１０仙人掌干粉于７ ℃用水提取３过滤，０ｇ５次合并滤液，滤液中加入９％乙醇，置过夜得沉在５静
７５０１冷冻１Ｌ
称取干燥至恒重的无水葡萄糖２０ｇ置０ｍ，
１０ｍｌ量瓶中，水溶解后稀释至刻度制成贮备００容加液，分别吸取贮备液００４０８１，，１１，．．，．，，１．．２，０２，４，６
１，．ｌ加水稀释至４ｌ向各管中加入５．２ｍ，８０ｍ，％苯酚
试剂２ｌ混匀。管壁加入浓硫酸１ｍ，置５ｉ，ｍ，沿０ｌ静ｍｎ振摇，置沸水浴中加热１ｍｎ立即转入冷水浴中冷５ｉ，却至室温。以蒸馏水为空白，９ｎ在４０ｍ波长处测定吸
Ｙ＝常含有一定量的蛋白质，因此，如何尽量多的去除蛋光度，以糖浓度和吸光度为坐标，回归方程为：白质而保留多糖的有效成分成为了一个突出的问００６００２相关系数：０９５．＋．Ｘ，０７ｒ．。＝９
题，用传统的Ｓｖｇ法和三氯乙酸法除蛋白，ｅａ复杂、费
时，常需要重复数十次，品损失很大，存在废通样并
１２２蛋白质标准曲线的制备．．称取牛血清白蛋白２ｍ，置１ｍｌ量瓶中，５ｇ０容加
液处理等问题，本文以脱蛋白率和多糖损失率为指标。用酶法除蛋白纯化仙人掌多糖。尝试
率分别为８．５．９６６２％、％和４．多糖损失率分别为７２９５５％，５．％、．％和１．％。经比较认为：３６酶提取法是替代常规方法的一
种有效方法。关键词仙人掌多糖脱蛋白酶
随着分子生物学的发展，们逐渐认识到糖及人
山东食品发酵
１．浓缩液中总糖、．４２多糖和蛋白质含量的测定
２结果与讨论
１．．总糖及多糖含量的测定；硫酸一酚法．４１２用苯测得浓缩液中总糖含量为３４０／ｌ多糖含．０ｍｇｍ，量为３１１／ｌ．ｍｇｍ，多糖占总糖百分率为７．％。０９５
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山东食品发酵
２０・（第１１０６总４期）２
仙人掌多糖提取过程中三种脱蛋白方法的比较研究
史德芳杨洋任红孙晓雪韩淑琴
（．１广西大学轻工与食品工程学院广西５００）３０４
（广西大学生命科学学院２．
摘
广西
５００）３０４
要用水提取的仙人掌多糖常舍有蛋白质，实验以多糖损失率和脱蛋白率为衡量指标。选用了３方法：Ｓｖｇ种ｅａ
法、氯乙酸法和酶法对仙人掌多糖提取物进行脱蛋白处理。实验结果表明：法、氯乙酸法和ｓｖｇ法的脱蛋白三酶三ｅａ
０１７２３４相关系数：０９６．２＋．Ｘ，５ｒ．７。＝１＿多糖提取工艺．３２
１实验材料、．１试剂与仪器仙人掌（广西农业高新技术展示园）；
胰蛋白酶，清蛋白，马斯亮蓝Ｇ２０葡萄血考一５，糖，），浓Ｈ４苯酚，水乙醇均为分析纯。无
脱蛋白液中总糖、多糖和蛋白质含量的测定分别测定脱蛋白液的总糖、多糖和蛋白质含量
（／）方法同上，果如表１ｍｇｍ１，结。
裹ｌ捷取液脱蛋白结果
１实验方法．２
一
淀，将沉淀加适量的水使之溶解，减压浓缩后，为仙人掌多糖浓缩液。
４２一Ｓｈ１ｏｇ《）ｌ１ｅｔｌｎａｌｎＦＪＩ ’ １ｌｎａｉｄ《ｊ ’ ７ｆＩｏ
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２０・（０６２总第１１）４期