1食品中细菌总数的测定实训标准
实验三--食品中微生物菌落总数的测定
5、及时将已冷却到46℃的培养基倾入到平皿中，并转动
平皿使其混合均匀
6、37℃倒置培养2天
7、按照计数Biblioteka 则计数五、菌落计数方法 选取菌落数在30~300cfu之间，无蔓延生长的平板 计数 低于30的记录具体菌落数，大于300的可记录为多 不可计，每个稀释度采用2个平行的均数 有较大片状菌落生长者不宜采用， 若片状小于平板一半时且余部均 匀分布，则以半个平板菌落数2 倍报告 无明显界限链状菌落每条单链视 为一个菌落
1、计数结果的表述
若只有一个稀释度平板在30~300CFU，则计算两平行平 板的均数，再乘以稀释倍数报告之 若有连续两个稀释度符合计数要求则按下公式：
所有符合计数要求 的平板菌落数之和
菌落总数
例：10-2=232，244 10-3=33，35 N= (232+244+33+35) (2+2×0.1)×10-2 = 24727
灭菌生理盐水当中，充分振荡，混合均匀，制成
10-1稀释度样品
2、梯度稀释法依次稀释样品到10-4
菌落总数操作流程图
3、选择10-2、10-3、10-4三个稀释度的样品均液，用无菌 移液管分别吸取1mL到无菌平皿中，每个稀释度做2个 平皿；同时，吸取1mL无菌生理盐水到1个平皿中作为
空白对照
4、熔化培养基
标准平皿活菌计数法（SPC法）是最常用的活菌计
数法
将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分
散的细胞通过混菌法或涂布法使其均匀分布在平皿
培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落
都由原液中单个细胞发育而来。
反映食品被细菌污染的程度
由于倾注平板法的局限，会有一部分细菌在该实验
食品中菌落总数的测定
分即五分 平升自 二 用三自 一 混在摄别 皿，来 ） 灭分来 ） 匀桌氏倒 。注水 细 菌钟水 水 。面度入 入 菌 锥灭 样 形菌 上左约 空 总 的 用 先 瓶， 作右一 的 数 采 以 将 旋的毫 灭灭 的 接再自 取 摇营升 菌菌 测 取放来 水开 定 已 养 培 ， 的 水 样 养吸 使水 使琼溶 以水 化 脂 皿 水 量 待 龙 中管 流 样培并 分 头 ，取 与养已 析五用 共水 培基冷 。分火 钟焰 做样 养，却 后烧 两一 基并四 充立十 ，灼 个毫 (
检样 做成几个适当倍数的稀释液 选择2-3个适当稀释度的稀释液各以1ml分别加入灭菌平皿内 每皿内加入适量营养琼脂 菌落总数 报告
培待 培 ， 养 然 基 后 凝 取 固 出养后 进 ， 行 倒 菌 置 落 于 计 数 。 +2h
一另 毫取 升一 ，灭 作菌 空培 白养 对皿 照， 。倒 入 营 养 培 温 养 箱 基 中 约
(
操 作 步 骤
36+1℃ 4
, 8
消毒前的包装
实验前的准备
棉塞的制作
棉塞刚好卡于瓶口不 松动即为合格
校正PH值及溶液加热煮沸溶解
水样的制取
放水一分钟
酒精棉消毒
第一步 先放水一分钟 第二步 用镊子夹酒精棉消毒出水口 第三步 将酒精棉点燃，用镊子夹起酒精棉灼烧出水口 第四步 再放水一分钟 第五步 采样
食品中菌落总数的测定
实验仪器
电热恒温培养箱，托
盘天平，电炉，吸量
管，锥形瓶，酒精灯， 剪刀，棉花，麻布，
LOREM IPSUM DOLOR
实验试剂 乙醇 ， Hcl ，氢氧化
பைடு நூலகம்
钠溶液，营养琼脂培
养基（琼脂 5g，蛋白
食品中菌落总数的测定
【说明】蛋糕具有松软香甜，携带方便、食用简单等特点，因此成为人们居家生活特别是旅途中不可或缺的一种美食，深受人们的喜爱。
测定蛋糕中的菌落总数可以用来判定其被微生物污染的程度及卫生质量，它反映蛋糕在生产过程中是否符合卫生要求，以便对被检样品做出适当的卫生学评价，菌落总数的多少在一定程度上标志着蛋糕产品质量的优劣，因此，测定蛋糕中的菌落总数具有重要意义。
目前应用于测定食品中菌落总数的方法有: 纸片法、电阻抗法等。
本实验采用国标法(GB\T 对独立包装小蛋糕中菌落总数进行测定。
并与GB 7099-2003糕点、面包卫生标准中规定的冷加工糕点中菌落总数≤10000（cfu/g）的数据对比初步判断样品是否符合卫生要求。
一、实验目的1、学习并掌握测定蛋糕中菌落总数的方法及原理。
2、通过对比实验验证冷藏对蛋糕的保鲜及抑菌作用。
3、了解菌落总数测定在食品卫生学评价中的意义。
二、实验原理菌落总数即为食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
每种细菌都有它一定的生理特性，培养时应用不同的营养条件及其他生理条件（如温度、培养时间、pH、需氧性质等）去满足其要求才能将各种细菌都培养出来。
但在实际工作中，一般都只用一种常用的方法。
细菌菌落总数的测定，所得结果，只包括一群能在营养琼脂上发育的嗜中温性需氧菌的菌落总数。
菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
三、实验设备与材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：恒温培养箱：36 ℃±1℃，30℃±1 ℃。
冰箱：2 ℃～5 ℃。
恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
天平：感量为 g。
实验报告细菌总数检查(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握细菌总数检查的基本原理和方法。
2. 了解细菌总数在食品、水质等领域的应用。
3. 培养实验操作技能，提高对微生物检测工作的认识。
二、实验原理细菌总数是指在一定条件下，每克（或每毫升）样品中所含有的细菌总数。
细菌总数是衡量样品微生物污染程度的重要指标。
本实验采用平板计数法测定细菌总数。
三、实验材料与仪器1. 材料：牛奶、自来水、土壤等样品。
2. 仪器：恒温培养箱、天平、无菌试管、无菌棉签、无菌操作台、无菌水、营养琼脂平板、计数器等。
四、实验方法1. 样品处理：将样品按照一定比例加入无菌水中，充分振荡，制成均匀的样品悬液。
2. 制备菌悬液：取适量样品悬液，用无菌吸管加入无菌试管中，依次稀释10倍、100倍、1000倍，备用。
3. 制备平板：将营养琼脂平板在恒温培养箱中培养至凝固。
4. 接种：用无菌棉签蘸取适量菌悬液，均匀涂布于平板表面。
5. 培养与计数：将接种好的平板放入恒温培养箱中，培养24小时后，观察菌落生长情况。
按照菌落数在30～300之间的平板进行计数。
6. 计算细菌总数：根据菌悬液稀释倍数，计算每克（或每毫升）样品中的细菌总数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：样品A（牛奶）细菌总数：3.2×10^7 CFU/g样品B（自来水）细菌总数：2.1×10^5 CFU/mL样品C（土壤）细菌总数：5.8×10^7 CFU/g2. 结果分析：样品A（牛奶）的细菌总数较高，可能是因为牛奶在储存、运输过程中受到污染。
样品B（自来水）的细菌总数较低，符合我国饮用水标准。
样品C（土壤）的细菌总数较高，可能与土壤环境有关。
六、实验结论1. 本实验成功掌握了细菌总数检查的基本原理和方法。
2. 通过对样品的细菌总数检测，可以了解样品的微生物污染程度，为食品、水质等领域的质量控制提供依据。
3. 在实验过程中，需要注意无菌操作，避免污染样品。
七、实验反思1. 实验过程中，操作要规范，避免人为因素对实验结果的影响。
食品中菌落总数的测定实验
食品中菌落总数的测定实验一、实验目的：了解稀释平板计数的原理，掌握涂抹平板培养法和混合平板培养法，认识细菌、放射菌、霉菌、的菌落特征。
二、原理平板菌落计数法是将等测样品经适当稀释后，其中的微生物充分分散为单个细胞，取一定量的稀释液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成的肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。
统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。
但是，由于待测样品往往不易完全分散成单个细胞，所以，长成的一个单菌落也可能来自样品中的多个细胞。
因此平板菌落计数的结果往往偏低。
为了清楚地阐述平板菌落计数的结果，现在已倾向使用菌落形成单位(colony-forming units，cfu)而不以绝对菌落数来表示样品的活菌含量。
该计数法的缺点是操作较繁，结果需要培养一段时间才能取得，而且测定结果易受多种因素的影响，但是这种计数方法最大的优点是可以获得活菌的信息，所以被广泛用于生物制品检验，以及食品、饮料和水等含菌指数或污染度的检测三、试剂和材料1.仪器恒温培养箱：（36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
）均质器或振荡器无菌吸管：1 ml（0.01 ml 刻度）、10 ml（0.1 ml 刻度）或微量移液器及吸头无菌锥形瓶：容量250 ml、500 ml、无菌培养皿：直径90 mm菌落计数器2.样品1）平板计数琼脂（plate count agar，PCA）培养基：蛋白胨5.0 g 、酵母浸膏2.5 g 、葡萄糖1.0 g 、琼脂15.0 g、蒸馏水1000 ml、pH 7.0±0.2。
将所有成分加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。
分装试管或锥形瓶，121 ℃高压灭菌15 min。
注：用平板计数琼脂，称取23.5 g于1 000 ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，121 ℃高压灭菌20min，冷却至45~47℃左右备用。
2）无菌生理盐水：氯化钠（NaCl）5.875g 蒸馏水(纯净水) 500ml 称取5.875ｇNaCl溶于500ml蒸馏水中，121 ℃高压灭菌20min。
食品中菌落总数的测定和不确定度分析
食品中菌落总数的测定和不确定度分析食品中细菌总数的测定和不确定度分析是食品科学与技术领域中的重要研究内容之一。
细菌总数的测定可以帮助我们了解食品的卫生状况，评估食品质量，保障公众的食品安全。
不确定度分析则是用来评估测定结果的可靠性和准确性，帮助我们判断测定结果的可信度。
食品中的细菌是以菌落的形式存在的，所以细菌总数的测定方法一般采用菌落计数的方法。
具体的步骤如下：1. 取样：从食品样品中取出适量的物质，一般是取适量食品，加入适量的生理盐水，通过均匀悬浮。
2. 稀释：将取样得到的悬浮液进行适当的稀释，以保证每个培养皿上的菌落数在可计数的范围内。
一般采用十倍的稀释系列进行稀释。
3. 接种：将稀释好的样品取适量，在无菌条件下倒入培养皿中，均匀涂布在培养基上。
4. 培养：将培养皿放入恒温箱温育，通常为30°C，培养时间一般为24-48小时。
5. 计数：培养完成后，通过裸眼或显微镜观察，根据菌落的形态、大小、颜色等特征进行计数，并将计数结果记录下来。
细菌总数的测定结果一般以CFU/g（菌落形成单位/克）为单位表示。
不确定度分析是对测定结果的评估，主要从随机误差和系统误差两方面进行分析。
随机误差是由于测定过程中的种种因素引起的结果的波动性。
在细菌总数的测定中，随机误差可能包括取样不均匀、稀释误差、接种误差等。
通过重复测定可以减小随机误差，并通过统计方法计算出标准偏差来表示测量结果的稳定性。
系统误差是由于测定方法的固有缺陷引起的结果的偏差。
在细菌总数的测定中，系统误差可能包括培养基的选择和准备、温度和湿度的控制、观察的主观判断等。
通过合理选择和优化测定条件，可以减小系统误差。
食品中细菌数目的测定
微生物课程实习方案一、样品的采集处理方法1.遵循的原则：第一，采集的样品要均匀一致、有代表性，能够反映被分析食品的整体组成、质量和卫生状况；第二，在采样过程中，要设法保持原有的理化指标，防止成分逸散或带入杂质。
2.采样的方法因为本组所进行实验的材料是腐竹，属于无包装的散装样品，对于无包装的散堆样品，其取样方法如下：一般按三层五点法进行代表性取样。
首先根据一个检验单位的物料面积大小先划分若干个方块，每块为一区，每区面积不超过50cm2 。
每区按上、中、下分三层，每层设中心、四角共五个点。
按区按点，先上后下用取样器各取少量样品；再按四分法处理取得平均样品。
二、预计时间安排1.2011/12/16——12/18:查阅资料，写好实验方案2.2011/12/19：给老师检查实验方案，并进行修改。
领取实验器材，并清洗实验器材，做好准备工作。
3.2011/12/20——12/25：进行腐竹中酵母菌和霉菌的数目检测实验。
4.2011/12/26——12/30：进行腐竹中细菌的检测实验和大肠杆菌的定性实验5：预计酵母菌和霉菌大概培养5天，预计细菌大概培养3天，在这期间每天上、下午定时进行观察，并记录菌落的生长状况。
三、注意事项1.细菌的培养在三栋1052.酵母菌的培养在三栋1083.每次使用完高压灭菌锅和超净工作台后写明时间，组别（写组长的名字）。
4.称量样品时必须在108，即无菌室那边。
5.每个实验前应该把移液管，试管，三角瓶，以及培养皿洗好并灭菌。
腐竹中酵母菌数目检测一.实验目的采取分离培养方法检测腐竹中细菌数目。
二.实验器材研钵一个，500mL量筒1个，滴定管1根，1 mL吸管4根，试管4根，玻璃棒2根，培养皿12个，500mL烧杯一个，涂抹棒1根，洗耳球1个，牛角匙2个，瓷杯1个，漏斗，橡皮管，铁夹1套，铁架台1个，电磁炉1个，天平1台，pH试纸，250mL三角烧瓶3个，标签纸2张，纱布，棉花，棉线若干，高压蒸汽灭菌锅一台，恒温培养一台，超净工作台。
食品中菌落总数的测定方法
食品中菌落总数的测定一、实验目的（1）学习和掌握测定食品中菌落总数的基本方法（2）学会菌落总数的报告方式二、实验材料1、仪器与设备：恒温培养箱、托盘天平、电炉、吸管、三角瓶、平皿、试管、试管架、酒精灯、灭菌刀或剪刀、75%酒精棉球、玻璃蜡笔。
2、培养基和试剂：75%乙醇、0.85%生理盐水、琼脂培养基：胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH 7.0±0.23、检样：利乐包装鲜牛奶250ml三、实验方法与步骤1、检验程序菌落总数检验程序：检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入46℃15-20ml营养琼脂→置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出→菌落数→报告2、检样稀释及培养（1）以无菌操作，将检样包装打开，用吸管取25ml鲜牛奶，放于含有225ml灭菌生理盐水的500ml灭菌玻璃三角瓶内（瓶内预先置适当数量的玻璃珠），经充分振摇做成1：10的均匀稀释液。
（2）用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同），振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。
（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
（4）根据食品卫生检验标准要求和检样的菌落数量，选择3个连续适宜稀释度即10、10－1、10－2，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
（5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿15ml~20mL，并转动平皿使与稀释检样混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃恒温箱内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数，即得1mL样品所含菌落总数。
实验二-食品中细菌总数的测定
实验二-食品中细菌总数的测定实验目的：1. 学习测定食品中细菌总数的方法及原理。
2. 掌握样品制备、培养基配置、培养条件和结果判定等技术操作步骤。
3. 了解食品中细菌数量的重要性及危害。
4. 提高操作技能和实验室安全意识。
实验原理：细菌总数包括空气中的细菌、物体表面的细菌、食品中的细菌等。
细菌总数的高低能够判断食品是否受到污染，同时也能为保健品、药品的质量控制提供参考依据。
在实验中，利用营养琼脂培养基对食品中的细菌进行恰当的培养，根据菌落数测定样品中细菌的数量。
细菌总数检测的实验步骤如下：实验材料：1. 细菌培养基（营养琼脂）2. 生物安全柜3. 试管、移液管、枪头4. 稀释液5. 干燥消毒容器6. 计时器7. 烧杯、锅钳、电热板8. 抽气泵、乙醇灯9. 干净的接种环、透明胶带实验步骤：1. 样品的制备样品的种类很多，可以是食品、环境污染物、医疗器械、淤泥、药品等。
为保证实验精度，样品采集要在清洁、无菌的生物安全柜下进行。
2. 取样在样品制备前，首先要准备好玻璃管、移液管、枪头等实验用具。
从样品中取1g，用称量仪器称取固态样品或用移液管取液态样品。
根据要求的稀释倍数，将稀释液(通常使用生理盐水或蒸馏水)与样品混合，摇匀制备样品稀释液。
取少量的稀释液进行翻倒，覆盖在盖子里面，盖上后轻轻摇晃，将悬浮液均匀混合。
5. 涂布培养基将制备好的样品稀释液倒入无菌洗涤的烧杯中,加入相应的营养琼脂，用稀释液逐步稀释，按要求的量逐层涂覆在培养基板上。
培养后，将培养基盘盖上胶带，放置在恰当的温度和湿度下进行培养。
通常在符合条件下，一般需要36-48小时的培养时间。
7. 结果判定观察培养出来的菌落，根据菌落形态，确定细菌的种类，可通过颜色、形状、大小、质地、表面等参数对细菌进行分类。
8. 分析对于食品来说，每克细菌总数尽量控制在1000CFU以下，大于此数量就有可能造成人身体健康的危害。
实验注意事项：1. 实验中禁止口舌操作，禁止带手套和大腰围操作。
食(饮)具菌落总数检测细则
1适用范围及标准1.1适用于食（饮）具菌落总数的测定1.2技术标准GB/T 4789.2-2010《食品卫生微生物学检验菌落总数测定》DB 31/410-2008 《餐饮业即食食品环节表面卫生要求》2检测原理2.1菌落总数：指被检物品经过采样处理，在一定条件下培养后，一定表面积上所含菌落的总数。
3仪器和设备3.1高压蒸汽灭菌器3.2冰箱：2 ℃—8 ℃3.3恒温培养箱：36 ℃±1 ℃3.4天平3.5pH试纸3.6灭菌滤纸片（2.0 cm×2.5 cm）3.7无菌吸管3.8无菌培养皿3.9锥形烧瓶4培养基和试剂4.10.85 %生理盐水：称取8.50 g氯化钠（分析纯）溶解1000 mL蒸馏水中，分装到试管内，每管50 mL，塞上硅胶塞，经121 ℃高压灭菌20 min。
4.2营养琼脂培养基：称取营养琼脂，加热溶解，校正PH至7.4，过滤分装于锥形瓶，每瓶分装量不宜超过瓶容量的三分之二。
将瓶口密封，经121 ℃高压灭菌20 min，冷却至55 ℃倾注平皿。
5采样方法5.1.1食（饮）具抽检碗、盘5.1.2接触采样法：灭菌滤纸片紧贴内面各10张（总面积50 cm2）；碟、匙、酒杯以每5件为1份，每件内面紧贴灭菌滤纸片各2张（总面积50 cm2/份）；经1min，按序取置入50 mL灭菌盐水试管中，充分振荡后，制成原液。
5.1.3 涂抹采样法：取无菌的经生理盐水湿润的棉签5支，每支棉签按照至上而下与环节表面呈30°角度充分均匀涂抹互不重叠的环节表面50 cm 2，重复3次，剪去与手接触的棉棒部分，将5支棉签头置于50mL 灭菌生理盐水中，充分振荡后制成原液。
5.2 筷子：取每双的下段12 cm 处约50 cm 2（12 cm ×2 cm ×2），放入50 ml 灭菌生理盐水试管中，充分振荡，制成原液。
6操作步骤6.1 以无菌操作，吸取1mL 检样，注入到灭菌平皿内，另取1 mL 注入另一灭菌平皿内作平行。
食品中细菌总数的测定
食品中细菌总数的测定方法
一、目的：
1.学习并掌握细菌的分离和活菌技术的原理和基本方法
2.了解菌落总数测定在对备件样品进行卫生学评价中的意义
二、原理：
菌落总数是指食品经过处理并在一定条件下培养后，所得1g或1mL检验中所含细菌菌落的总数。
菌落总数主要作为判别食品污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态过程，以便在对杯件样品进行卫生学评价是提供依据。
三、仪器：
超净工作台、电炉、培养箱、试管、10ml移液管、1ml移液管、洗耳球、试管架、锥形瓶、平皿
四、试剂：样品：酱油，无菌水，营养琼脂
五、实操过程：
1、溶解培养基：将固体培养基放在电炉上煮沸，然后冷却至41~43℃待用
2、取10ml移液管分别吸取9ml水放入3支试管中
3、取1ml移液管吸取1ml酱油加入第一支试管内，另取第二支1ml移液管插入第一支试管内，吸取溶液后放出溶液，重复3次，使酱油混合均匀后，再分别吸取1ml加入到第二支试管和第一个平皿内；取第三支1ml移液管插入第二支试管内吸取溶液，然后放出溶液，重复三次，使溶液混合均匀，然后分别吸取1ml溶液分别加到第三支试管和第二个平皿内；取第四支1ml移液管插入第三支试管内吸取溶液，然后放出溶液，重复三次，使溶液混合均匀，再吸取1ml放入第三个平皿内，贴好标签
4、倒培养基：在平皿内倒入其2/3体制的培养基，用手轻轻摇匀
5、待琼脂培养基凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目
六、实操结果及分析讨论
1.平板菌落数量和生长描述：
培养时间：24小时。
食品中细菌菌落总数的测定
4、每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌 吸管。
5、倾注用培养基应在46℃水浴内保温， 温度过高会影响细菌生长，过低琼脂易 于凝固而不能与菌液充分混匀。如无水 浴，应以皮肤感受较热而不烫为宜。
6、倾注培养基的量规定不一，从12～ 20ml不等，一般以15ml较为适宜，平板 过厚可影响观察，太薄又易于干裂。倾 注时，培基底部如有沉淀物，应将底部 弃去，以免与菌落混淆而影响计数观察。
2、用1 mL灭菌吸管吸取1:10稀释 液1 mL，沿管壁徐徐注入含有9 mL灭 菌生理盐水或磷酸盐缓冲液的试管内， 振摇试管或反复吹打混合均匀，制成 1:100的稀释液。
3 、另取1 mL灭菌吸管，按上项操 作顺序，制10倍递增稀释液，如此每 递增稀释一次即换用1支1 mL吸管。
4、根据标准要求或对污染情况的估 计，选择2～3个适宜稀释度，分别在制 作10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释 度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中， 每个稀释度做两个平皿。
四、 流程
1、检样 2、做几个适当倍数的稀释液 3、选择2~3个适宜稀释度各1 mL,分别加入
灭菌平皿内 4、平皿内倾注15～20 mL琼脂培养基，混匀 5、36 ±1℃培养48±2小时或（24±2）小
时 6、记录稀释倍数和相应的各平板菌落数量 7、 计算菌落总数 → 报告
五、 步骤0-2
10-3
1
380
52
平
2 均 526
205
菌
3 落 271
60
数
4
284
152
菌量
10-4 选定计数稀释度 /(个/g 或mL)
18
10-3
5.2x104
32
10-3，10-4
2.6x105
食品中细菌总数的测定
②稀释度的选择 应选择平均菌落数在30～300之间的稀释度，乘以稀
释倍数报告之。若有两上稀释度，其生长的菌落数均在 30～300之间，则视两者之比如何来决定。若其比值小于 或等于2，应报告其平均数；若大于2则报告其中较小的数 字。
若所有稀释度平均菌落数均大于300，则应按稀释度 最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
实验四 食品中细菌总数的测定
一、实验目的 1、学习或均技术的技术方法； 2、掌握食品细菌总数的测定报告方式。
二、实验材料 1、电热恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、托盘天平、电炉、 吸管、广口瓶、三角瓶、玻璃珠、平皿、试管、试管架、 酒精灯、均质器或乳钵、灭菌刀或剪刀、灭菌镊子、75% 酒精棉球、玻璃蜡笔、登记薄 2、培养基和试剂：75%乙醇、生理盐水、15%氢氧化钠溶 液、营养琼脂培养基、检验方法
若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度 最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。
若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀 释倍数报告之。
若所有稀释度的平均菌落数均不在30～300之间，其 中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平 均菌落数乘以稀释倍数报告之。 ③菌落数的报告
三、实验方法 1、检验程序 菌落总数检验程序：
检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度 各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入460C适）以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎以后，放 于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内 （瓶内预先置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充 分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以
8000r/min~100000r/min 的 速 度 处 理 1min ， 做 成 1 ： 10 的 均匀稀释液。
食品中菌落总数的测定实验报告
食品中菌落总数的测定实验报告一、实验目的1、学习并掌握食品中菌落总数测定的基本原理和方法。
2、熟练使用无菌操作技术和相关仪器设备。
3、了解食品卫生质量的重要性，以及菌落总数在评价食品卫生状况中的意义。
二、实验原理菌落总数是指食品检样经过处理，在一定条件下培养后（如培养基成分、培养温度和时间、pH 值、需氧性质等），所得 1g 或 1ml 检样中所含细菌菌落的总数。
菌落总数主要作为判定食品被细菌污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
三、实验材料和设备1、实验材料各种待检食品样品（如牛奶、面包、水果等）营养琼脂培养基无菌生理盐水2、实验设备恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅超净工作台无菌吸管（1ml、10ml）无菌培养皿电子天平均质器四、实验步骤1、样品的采集和处理以无菌操作采集具有代表性的食品样品，放入无菌容器中。
对于固体食品，使用均质器将其均质成匀浆；液体食品则直接吸取进行稀释。
2、稀释样品用 1ml 无菌吸管吸取 1ml 样品匀浆或液体样品，注入盛有 9ml 无菌生理盐水的试管中，制成 1:10 的样品稀释液。
用 1ml 无菌吸管吸取 1:10 稀释液 1ml，沿管壁缓慢注入盛有 9ml 无菌生理盐水的试管中，振摇试管混合均匀，制成 1:100 的稀释液。
以此类推，进行适当的梯度稀释。
3、接种选择 2-3 个适宜稀释度的样品稀释液，每个稀释度分别吸取 1ml 注入无菌培养皿中。
及时将 15-20ml 冷却至 46℃左右的营养琼脂培养基倾注于培养皿中，并转动培养皿使其混合均匀。
4、培养待琼脂凝固后，将培养皿翻转，放入 36±1℃的恒温培养箱中培养48±2h。
5、菌落计数培养结束后，取出培养皿，计数每个平板上的菌落数。
菌落计数时，应选取菌落数在 30-300 之间的平板进行计数。
若有两个稀释度的平板菌落数在 30-300 之间，应按两者菌落总数之比值来决定。
食品微生物检测实验
实验一食品中细菌总数的检验一、实验目的要求1、了解细菌总数检验的意义。
2、掌握样品稀释处理的方法和菌落总数计数的方法3、掌握国标法测定菌落总数的方法和技能4、熟练无菌操作技术。
二、原理菌落总数是指食品经过处理,在一定条件下培养后，所得1g或1ml检样中所含细菌菌落总数。
菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志,也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
三、试剂和仪器（一）最先准备的器材（清洗、烘干、包扎、灭菌）规格名称数量用途1、500ml广口瓶1个稀释样品2、500ml三角瓶1个配制生理盐水3、250ml三角瓶2个配制营养琼脂4、18×180mm试管3支稀释样品5、1ml移液管 5 支6、直径为90mm平皿 10套倒营养平板7、250ml量筒1支8、玻璃珠：直径约5mm(二）应灭菌、消毒的器材剪刀1把不锈钢药匙1把称量纸：适量酒精消毒的器材：吸耳球1个，滴管胶头4只，开瓶器（三）应制备的培养基培养基总量所用容器1、0。
85%NaCl生理盐水 1瓶 300ml/瓶 500ml三角瓶2、平板计数琼脂（PCA）培养基： 2瓶 100ml/瓶 250ml三角瓶四、实验内容（一)、基本操作过程:样品称量→→样品稀释→→倾注平皿→→培养48小时→→计数报告。
(二）、样品的稀释（样品的处理）样品:袋装乳粉外包装消毒→→无菌称样品25g→→加无菌生理盐水→→加盖振荡摇均匀1、用75％酒精棉球擦拭消毒袋口,用无菌剪刀开封取样.称取检样25g，放入装有适量玻璃珠的灭菌广口瓶子中，然后用225mL温热的灭菌生理盐水徐徐加入（先加入少量生理盐水将乳粉调成糊状,再全部加入，以免奶粉结团），采用振摇法(用力快速振摇50次,振幅不小于40cm）振摇均匀,即为1:10的稀释液。
【优】食品中细菌总数的测定PPT资料
（6）等琼脂凝固后，翻转平板，置（36±1）0C恒温箱 内培养（48±2）h取出，计算平板内菌落数目乘以倍数， 即得1g（1mL）样品所含菌落总数。
食品中细菌总数的测定
三、实验方法 1、检验程序 菌落总数检验程序：
检样→做成几个适当倍数的稀释液→选择2-3个适宜稀释度 各以1ml之量分别入灭菌平皿内→每皿内加入460C适量营养 琼脂→菌落数→报告
2、检样稀释及培养
（1）以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎以后，放
若有两上稀释度，于其生含长的有菌落2数2均5在m30l～灭300菌之间生，则理视两盐者之水比如或何来决其定。他稀释液的灭菌玻璃瓶内 （ 瓶 内 预 先 置 适 当 数 量 的 玻 璃 珠 ） 或 灭 菌 乳 钵 内 ， 经 充 （5）稀释液移入平皿后，应及时将凉至460C营养琼脂培养基[可放置在（（46±1）0C）水浴锅内保温]注入平皿15ml~20mL，并转动
选取菌落数在30～300之间的平板作为菌落总数测定 吸管移1ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
（3）另取1ml的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1ml灭菌吸管。
标准。一个稀释度使用两个平板，应采用两个平板平均数， 固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000r/min~100000r/min的速度处理1min，做成1：10的均匀稀释液。
（4）根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的
细菌总数实习报告
一、实习背景随着社会的发展和科技的进步，食品安全问题日益受到人们的关注。
细菌总数是衡量食品卫生质量的重要指标之一。
为了提高自己的专业素养，更好地了解食品卫生检测的相关知识，我参加了细菌总数实习。
二、实习目的1. 掌握细菌总数检测的基本原理和操作方法；2. 提高实际操作技能，为今后的工作打下坚实基础；3. 培养严谨的工作态度和团队合作精神。
三、实习内容1. 学习细菌总数检测的基本原理细菌总数检测是利用平板计数法对食品中的细菌进行计数。
通过培养一定量的食品样本，观察菌落生长情况，计算出细菌总数。
2. 学习细菌总数检测的操作步骤（1）样品制备：将食品样品进行称量、稀释，制成一定浓度的样品液。
（2）接种：取一定量的样品液，涂布于琼脂平板上。
（3）培养：将涂布好的平板放入培养箱中，在一定温度下培养一定时间。
（4）计数：观察菌落生长情况，计数菌落数。
3. 实际操作在实习过程中，我跟随指导老师进行了多次细菌总数检测操作。
以下为一次实习操作的详细记录：（1）样品制备：称取10g熟食，加入90ml生理盐水，振荡均匀，制成10^-1稀释液。
（2）接种：取1ml 10^-1稀释液，涂布于琼脂平板上。
（3）培养：将涂布好的平板放入37℃培养箱中，培养48小时。
（4）计数：观察菌落生长情况，计数菌落数。
4. 结果分析通过本次实习操作，我学会了细菌总数检测的基本原理和操作步骤。
在实际操作过程中，我掌握了以下要点：（1）样品制备要均匀，避免出现局部浓度过高或过低的情况。
（2）接种要均匀，避免出现菌落聚集现象。
（3）培养过程中要严格控制温度和时间，以保证检测结果的准确性。
四、实习体会通过本次实习，我深刻认识到细菌总数检测在食品安全中的重要性。
以下是我对实习的几点体会：1. 严谨的工作态度：在进行细菌总数检测时，必须严格按照操作步骤进行，确保检测结果的准确性。
2. 团队合作精神：在实习过程中，我与同学们互相帮助，共同完成实验任务，培养了良好的团队合作精神。
食品安全国家标准 菌落总数测定
食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定1 范围本标准本标准规定了食品中菌落总数（Aerobic plate count）的测定方法。
本标准适用于食品中菌落总数的测定。
2 术语和定义2.1 菌落总数 aerobic plate count食品检样经过处理，在一定条件下（如培养基、培养温度和培养时间等）培养后，所得每g（mL）检样中形成的微生物菌落总数。
3 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：3.1 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃，30 ℃±1 ℃。
3.2 冰箱：2 ℃～5 ℃。
3.3 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。
3.4 天平：感量为0.1 g。
3.5 均质器。
3.6 振荡器。
3.7 无菌吸管：1 mL（具0.01 mL 刻度）、10 mL（具0.1 mL 刻度）或微量移液器及吸头。
3.8 无菌锥形瓶：容量250 mL、500 mL。
3.9 无菌培养皿：直径90 mm。
3.10 pH 计或pH 比色管或精密pH 试纸。
3.11 放大镜或/和菌落计数器。
4 培养基和试剂4.1 平板计数琼脂培养基：见附录A 中A.1。
4.2 磷酸盐缓冲液：见附录A 中A.2。
4.3 无菌生理盐水：见附录A 中A.3。
5 检验程序菌落总数的检验程序见图1。
图1 菌落总数检验程序6 操作步骤6.1 样品的稀释6.1.1 固体和半固体样品：称取25 g 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质1 min～2 min，或放入盛有225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min，制成1:10 的样品匀液。
6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL 样品置盛有225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10 的样品匀液。
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1食品中细菌总数的测定实训标准
1.1任务工单
1.1.1实训目的
（1）学习并拿握食品中菌落总数测定方法和原理。
（2）了解菌落总数测定在对被样品进行卫生学评价中的意义。
1.1.2实训材料
食品样品
1.1.3实训仪器
（1）培养基：平板计数培养基、无菌生理盐水或磷酸盐缓冲液
（2）无菌培养皿
（3）无菌吸管
（4）电炉
（5）恒温培养箱
1.2项目指导书
1.2.1实训原理
菌落总数是指食品经过处理，在一定条件下培养后，所得1 g或1 ml检样中所含细菌菌落总数。
菌落总数主要作为判别食品被污染程度的标志，也可以应用这一方法观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据。
菌落总数并不表示样品中实际存在的所有细菌总数，菌落总数并不能区分其中细菌的种类，所以有时被称为杂菌数，需氧菌数等。
1.2.2实训步骤
（1）检样稀释及培养
1以无菌操作，将检样25 g(或25 mL)剪碎以后，放于含有225 mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内预先置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。
固体检样在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8 000 r／min—1 0000 r／mln的速度处理1 min做成1：10的均匀稀释液。
2. 用1 mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1 mL，沿管劈徐徐注入台有9 mL
灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液，下同)，振摇试管混合均匀，做成1：100的稀释液。
3. 另取1 mL的灭菌吸管，按上项操作顺序作10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次，即换用1支1 mL灭菌吸管。
4. 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2—3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。
5. 稀释液移入平皿后，应及时将凉至46℃营养琼脂培养基[可放置在(45土1) ℃水浴锅内保温注入平皿15 mI一20 mL，并转动平皿位混合均匀，同时将营养琼脂培养基倾入加有1 mL稀释液(不含样品)的灭菌平皿内作空白对照。
6. 待琼脂凝固后，翻转平板，置(36土1) ℃恒温箱内培养(48土2) h取出板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得I g(1 mL)样品所含菌落总数。
（2）菌落计算方法
1. 平板菌落数的选择
选取菌落数在30一300之间的平板作为菌落总数测定标准。
一个稀释度使
用两个平板，选取两个平扳平均数．其中一个平板有较大片状菌落生长时．则不宜采用，而应以无片菌落生长的平板计数作为该稀释度的菌落数。
若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布2 fB均匀，可计算半个平板后乘2 U代表整个平皿菌落数。
2. 稀释度的选择
（1）应选择平均菌落数在30一300之间的稀释度，乘以稀释倍效，报告之(见表5-2例1)。
（2）若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30一300之间，则视二者之比如何来决定。
若其比值小应报告其平均数：若比值大于2，则报告其中较小的数字(见表5-2例2、例3)。
（3）若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表5-2例4)。
（4）若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌范数乘以稀释倍数报告之(见表5-2例5)。
（5）若所有稀释度均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数报告之…见表5-2例6‟。
（6）若所有稀释度的平均菌落数均不在30一300之间，其中一部分大于300或小于30时，近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之(见表5-2例7)。
3. 菌落数的报告
菌落数在100以刚t1按其实有数报告；大于100时，用二位有效数字，在二位有效数字后面的数字，以四舍五入方法计算。
为了缩短数字后面的0的个数，可用10的指数来表示，见表5-2“报告方式”一栏。
1.2.3课后作业
（1）完成实训报告
（2）本次实训所用到的试剂有哪些？分别如何配制？
（3）列出此次实训的注意事项。
（4）将实验结果拍照上传到班级群。
1.3项目考核方案
实训考核内容及评价方法。