超声波辅助对农杆菌介导“美人指”葡萄遗传转化中GUS瞬时表达的影响
一种超声辅助农杆菌介导的植物in planta遗传转化方法
“一种超声辅助农杆菌介导的植物in planta遗传转化方法”是一种新型的植物遗传转化技术，其基本流程如下：
构建农杆菌载体：首先，将目标基因或DNA序列克隆到适当的载体中，使其能够被农杆菌有效介导进入植物体内。
超声处理：将植物体外表面进行超声处理，通过破坏细胞壁增强农杆菌与植物的接触，从而提高遗传物质的转化效率。
农杆菌介导转化：在超声处理后，将携带目标基因的农杆菌菌液滴施于植物叶片表面，利用农杆菌的寄生特性，在植物体内转导目标基因。
筛选转化植株：通过对转化后的植物进行筛选，筛选出表达目标基因的转化植株。
该方法相比传统的植物遗传转化技术，具有转化效率高、时间短、实验操作简单等优点，且无需使用任何化学试剂，因此受到广泛关注和应用。
农杆菌介导的马铃薯块茎GUS基因瞬时表达研究
农杆菌介导的马铃薯块茎GUS基因瞬时表达研究作者：舒锐等来源：《天津农业科学》2013年第11期摘要：采用根癌农杆菌介导的瞬时表达方法，以马铃薯块茎为主要的研究材料，分别采用浸染法和注射法将外源基因导入马铃薯块茎细胞中，然后进行GUS组织化学染色。
试验结果表明，导入马铃薯块茎细胞里的外源基因获得了表达；浸染法的表达区域更加均匀，优于注射法。
关键词：马铃薯；块茎；根癌农杆菌；瞬时表达；GUS中图分类号：S532 文献标识码：A DOI编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2013.11.001马铃薯（Solanum tuberosum L.）俗称“土豆”，是茄科茄属多年生草本块茎植物，原产于安第斯山区和智利沿海山地，是仅次于水稻、玉米、小麦的世界第四大重要粮食作物，具有分布广泛、高产稳定、适应性强、营养丰富等特点，是一种兼具粮食、蔬菜、饲料以及工业原料等具有多种用途的经济作物[1]。
目前，农杆菌介导的瞬时表达方法已经在烟草、拟南芥、莴苣、番茄、草莓、梨等多种植物中得到应用。
利用此方法在叶片和果实中进行的研究比较常见，但是没有发现利用农杆菌介导法对马铃薯块茎进行瞬时表达的研究报道。
传统的稳定转化方法是目前研究马铃薯块茎最常用的方法，但是其具有试验周期长、耗资大、表达效率低下等缺点，因此，农杆菌介导的瞬时表达方法在马铃薯块茎上可以得到应用，将使得对马铃薯块茎特异启动子的研究变得更加方便快捷。
刘敏等[2]和孟楠等[3]采用注射法对草莓果实进行瞬时表达均获得成功，但是相对于草莓果实而言，马铃薯块茎结构更加致密，给试验带来了困难。
本研究分别采用浸染法和注射法侵染马铃薯块茎，以马铃薯叶片及烟草叶片为对照，通过GUS组织化学染色分析证明本研究的可行性。
1 材料和方法1.1 试验材料本研究采用鄂马铃薯（Solanum tuberosum L.）3号品种（E3）的叶片、块茎和烟草的叶片，作为转化受体材料。
荔枝基因枪转化及其GUS瞬时表达研究
荔枝基因枪转化及其GUS瞬时表达研究作者：桑庆亮等来源：《热带作物学报》2014年第11期摘要以幼胚来源的荔枝EC作为受体材料，采用基因枪轰击的方法将外源gus基因转入荔枝，并对不同条件下的GUS瞬时表达进行了详细研究。
结果表明：在其它参数不变的条件下，轰击距离、真空度、可裂膜片压力、金粉用量、质粒DNA用量等理化参数显著影响GUS 瞬时表达；渗透处理可显著促进GUS瞬时表达。
因此，荔枝EC基因枪转化的适宜条件为在轰击距离6 cm、真空度84.66 kPa、可裂膜片压力7 584.23 kPa、轰击1次的情况下，每次轰击用1 μg质粒DNA包裹600 μg金粉对事先用0.25 mol/L前处理4 h的荔枝EC轰击，并在轰击后渗透处理20 h。
另外，经50 mg/L潮霉素筛选得到荔枝抗性愈伤组织，并通过体胚发生途径获再生植株，且GUS染色显示获得了稳定表达GUS蛋白的细胞系和植株。
关键词荔枝；胚性愈伤组织；基因枪；遗传转化；瞬时表达中图分类号 S667.1 文献标识码 AAbstract In the paper， plasmid pCAMBIA1301 DNA harboring the gus gene encoding β-glucuronidase， coated on gold particles， was delivered into cultured EC via particle bombardment and transformation was monitored by analyzing GUS transient expression in Litchi chinensis Sonn. The results showed that GUS transient expression level was significantly influenced by physical and chemical factors， such as distance to targets， vocuum pressure， helium pressure， gold particle dosage， plasmid DNA dosage， and vitality of litchi EC cells， which affected by growth stages and osmatic treatment. A suitable particle bombardment procedure was proposed. Litchi EC which was pre-cultured on MS medium with 0.25 mol/L mannitol for 4 hours and post-cultured for 20 hours after bombardment was bombarded once using 600 μg gold particles coated with 1 μg plasmid DNA with a vacuum degree of 84.66 kPa， a bombarded distance of 6 cm， and a rupture disk value of 7 584.23 kPa. Hygromycin-resistant embryonic calli（HREC）and plantlets regenerated from HREC were also obtained and GUS stable expression in HREC and leaves were also examined to confirm transformation.Key words Litchi chinensis Sonn.； Embryonic calli； Particle bombardment； Genetic transformation； Transient expressiondoi 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.11.021荔枝（Litchi chinensis Sonn.）是重要的热带亚热带木本果树，主要分布于中国福建、广东、广西、云南、四川等省以及世界上许多热带亚热带地区，经济价值较高。
农杆菌介导的烟草瞬时表达影响因素研究
农杆菌介导的烟草瞬时表达影响因素研究孙蔓莉;孟玉玲;张强;黄桂艳;单卫星【期刊名称】《西北农业学报》【年(卷),期】2015(024)001【摘要】通过探究根癌农杆菌(Agrobacterium tume aciens)介导的烟草瞬时表达体系的影响因素,确定烟草瞬时表达的最佳条件,为目的基因的功能研究提供技术支持.利用马铃薯晚疫病抗性基因RB和致病疫霉菌效应基因Avrblb1作为报告基因,采用农杆菌介导的注射渗透法,摸索农杆菌菌悬液OD600值和菌系(遗传背景)、烟草品种及其生长时期等因素,确定烟草高效的基因瞬时表达条件.研究结果表明:介导烟草基因瞬时表达的根癌农杆菌菌悬液适宜OD600值为0.3～0.8;在菌悬液OD600值为0.1及以上时,AGL1、GV3101和C58C1介导的报告基因瞬时表达效率相似,均引发较强的叶片坏死反应;在农杆菌菌悬液0D600值小于0.1时,AGL1介导的瞬时表达效率最高.测试的烟草品种都具备较高的瞬时表达效率,苗龄6～8周的烟草适合分析.通过测试农杆菌菌悬液OD600值和菌系(遗传背景)、烟草品种及其生长时期等因素,确定本氏烟和普通烟均可实现基因高效瞬时表达的条件.【总页数】5页(P161-165)【作者】孙蔓莉;孟玉玲;张强;黄桂艳;单卫星【作者单位】西北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学生命科学学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学植物保护学院,陕西杨凌712100;旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S432.2【相关文献】1.农杆菌介导的烟草瞬时表达试验条件优化 [J], 吴英杰;姜波;张岩;李彦邦;贺琳;王玉成2.超声波辅助对农杆菌介导"美人指"葡萄遗传转化中GUS瞬时表达的影响 [J], 周蓓蓓;陈月红;章镇;陶建敏3.农杆菌介导的烟草瞬时表达影响因素研究 [J], 孙蔓莉;孟玉玲;张强;黄桂艳;单卫星4.瞬时表达葡萄病毒A外壳蛋白基因对烟草中病毒转录的影响 [J], 王建辉;刘建军;陈克玲;李洪雯;何建;关斌;何礼;王东5.农杆菌介导的INH基因瞬时表达系统的建立及表达分析 [J], 张月丽;杨艳丽;姜晶因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
超声波辅助对农杆菌介导新红星苹果遗传转化中gus基因瞬间表达的影响
１ 材料与方法
１ １ 材 料 ．
是一种将农 杆菌介导 法和超 声波直 接转 导法相 结合 的遗 传
１ １ １ 植物材料 ． ．
供试 材料 为新 红星 试管 苗。ＭＳ培 养基
转化方法。１９ ９７年 Ｔ ｃ ｉ ｒ ｋ等 首 次采 用此 方 法将 外 源基 因
转入 大豆和豇豆 中。随后 ， 方 法被广 泛应用 于黄 瓜… 、 该 番 木瓜 ＿ 等作物 的遗 传转 化 中 ， ３ 其转 化效 率 显著 高 于单 纯 的
刘莉莉 ， 刘 丹 ， 丛 郁， 章 镇
（ 京农 业大学园艺学 院 ， 南 江苏 南京 ２ ０９ ） １０ ５
关键词 ： 苹果 ；超 声波辅助农杆 菌介 导 ；遗传转化
中 图 分 类 号 ： ￥ ６ ． ６ １１ 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： １０ ＡＡ （ ０ ８ ０ － １－３ ０ ０ Ａ９ ２ ０ ） ２０ ３０ ２
收稿 日期 ：０ ７）－４ ２０ ４８１
Ｌ Ａ ４ ４接种于 Ｙ Ｂ 含 有 Ｒｆ ０ ｍ ／ Ｂ ４０ Ｅ（ ｉ５ ｇ Ｌ和 Ｃ ０ｍ ／ ） ｍ １ ｇ Ｌ 固 体培养基上 ，５℃暗培养 ３ｄ后挑取单菌落接种 于液体 Ｙ Ｂ ２ Ｅ
（ 含有 Ｒｆ ０ｍ ／ ｉ５ ｇ Ｌ和 Ｃ ０ｍ ／ ） ｍ １ ｇ Ｌ 培养 基 中 ， ２ Ｃ、６ 于 ７ｏ １０ ｒｍｉ振荡培养过夜 至光 密度 值为 ０ ６ ／ ｎ ． 。将 菌液 ５０ ０ｒｍｎ ０ ／ ｉ
双元 载体质粒 Ｙ ９ ７ （ Ｓ Ｃ Ｉ Ｆ ０ ８ Ａ Ａ Ｃ ２和 ｇ ｓ 因 ） 由上海 农业 ｕ基 ，
科 学院生物技术 中心研究 三室惠赠 。
１２ 方 法 ．
星苹果转化效率 的影 响因素 ， 以期 为建 立新红星苹果 的 培 养 将 含 有 Ｙ ９ ７ ．． Ｆ ０ ８的 农 杆 菌
超声波与表面活性剂协同处理显著提高农杆菌介导大豆遗传转化的抗
■专题论坛中图分类号：S565.1文献标识码：B文章编号：1674-3547(2019)06-0033-02大豆是世界上种植最广泛的转基因作物。
然而经器官发生途径再生植株难和基因型依赖严重等限制性因素导致大豆遗传转化困难、转化效率低。
抗性不定芽率和瞬时表达效率是体现再生效率和转化效率的重要指标。
以中黄10号和Jack为受体，比较了超声波与表面活性剂协同处理及单声波与表面活性剂协同处理显著提高农杆菌介导大豆遗传转化的抗性丛生芽率和瞬时表达效率*郭兵福郭王湖北荆州收稿日期：2019-09-15第一作者：郭兵福，副研究员，研究方向为大豆遗传育种，E-mail:gbfhq@*基金项目：抗除草剂转基因大豆新品种培育（2016ZX08004001）**通讯作者：邱丽娟，女，研究员，研究方向为大豆基因资源挖掘与利用，E-mail:qiulijuan@■专题论坛（原文刊自：Journal of Integrative Agriculture 2015,14(7):1242-1250）附图超声波2s 与表面活性剂Silwet L-770.02%协同处理显著提高外源基因在子叶节靶细胞处的瞬时表达水平（A ）和瞬时表达效率（B ）Jack 中黄10瞬时表达效率(%)Silwet L-77Silwet L-77CK 2s SAAT 0.02%Co-treatment CK2s SAAT 0.02%Co-treatment B 80.0060.0040.0020.000中黄10JackA因素处理对抗性不定芽形成和瞬时表达效率的影响。
结果表明，超声波2s 与表面活性剂SilwetL-770.02%同时处理时，抗性不定芽得率和瞬时表达率最高（见附图）。
利用该方法建立了一种稳定的超声波与表面活性剂协同辅助农杆菌介导大豆子叶节遗传转化体系，转化效率为2.5%~5.7%，显著高于传统子叶节对照。
超声波与表面活性剂协同处理能促进抗性不定芽的形成，提高瞬时表达效率和稳定转化效率，进而为大豆遗传转化体系的改良提供参考。
一种利用超声波提高农杆菌介导的苹果属植物转化效率的方法[发明专利]
![一种利用超声波提高农杆菌介导的苹果属植物转化效率的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/3e2a6b2b0c22590103029d16.png)
专利名称：一种利用超声波提高农杆菌介导的苹果属植物转化效率的方法
专利类型：发明专利
发明人：渠慎春,章镇,蔡斌华,丛郁,高志红,杨梦悦
申请号：CN200610085396.X
申请日：20060613
公开号：CN1952161A
公开日：
20070425
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明“一种利用超声波提高农杆菌介导的苹果属植物转化效率的方法”属于生物工程育种领域。
将苹果属八棱海棠叶片切成小块在OD为0.6且含有s的农杆菌悬浮液中浸泡2分钟后，用功率为100w的超声波处理后，转移到再生培养基上进行抗性筛选，转化八棱海棠叶片，得到抗性愈伤组织和抗性苗，转化率为2.2％。
本发明首次将超声波技术应用在苹果属植物的遗传转化上，大大提高了苹果属植物转基因的效率。
应用超声波辅助农杆菌介导法转导rolC基因转化苹果砧木八棱海棠，分别获得了2.2％的转化效率，均大大高于普通农杆菌介导法0.1～0.8％的转化效率。
申请人：南京农业大学
地址：210095 江苏省南京市卫岗1号南京农业大学科技处钱宝英
国籍：CN
代理机构：南京经纬专利商标代理有限公司
代理人：楼高潮
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超声波辅助对农杆菌介导美人指葡萄遗传转化中GUS瞬时表达的影响
超声波辅助对农杆菌介导美人指葡萄遗传转化中GUS瞬时表达
的影响
超声波辅助对农杆菌介导美人指葡萄遗传转化中GUS瞬时表达的影响
通过超声波辅助农杆菌介导法,优化"美人指"葡萄遗传转化体系.利用GUS瞬时表达的方法研究了不同功率、时间条件下的超声波处理,外植体类型以及AS浓度对"美人指"葡萄遗传转化效率的影响.结果表明:外植体茎段在含75 mg/L AS农杆菌悬浮液中侵染4 min,并在此期间,用功率为90 W的超声波处理14 s,获得最佳GUS瞬时表达率42.8%.
作者：周蓓蓓陈月红章镇陶建敏作者单位：周蓓蓓(南京农业大学,园艺学院,江苏,南京,210095;江苏省农业科学院,园艺研究所,江苏,南京,210014)
陈月红,章镇,陶建敏(南京农业大学,园艺学院,江苏,南京,210095) 刊名：江西农业学报ISTIC英文刊名：ACTA AGRICULTURAE JIANGXI 年，卷(期)：2010 22(4) 分类号：S663.1 关键词：葡萄超声波辅助农杆菌介导遗传转化。
超声波法从葡萄籽中提取多酚的研究
超声波法从葡萄籽中提取多酚的研究随着人们对健康和美容的重视，抗氧化剂的研究和开发成为了当前热门的话题。
葡萄籽中的多酚作为一种强效的抗氧化剂，在保健品和化妆品行业中备受关注。
然而，传统的多酚提取方法存在效率低、产物纯度不高等问题，迫切需要寻找一种新的、高效的提取方法。
超声波法因其高效、非污染、操作简便等优点，在多酚提取领域具有广阔的应用前景。
本文旨在探讨超声波法从葡萄籽中提取多酚的研究现状和发展趋势。
一、超声波法原理超声波是一种高频波，其频率超过了人类听觉的上限，通常在20千赫到1千兆赫之间。
超声波通过在液体中产生的高频振动，可以在短时间内破碎细胞壁，使细胞内的细胞器等有机分子迅速释放到溶液中。
超声波法能够在短时间内高效地将生物样品中的活性成分提取出来。
二、超声波法在多酚提取中的应用1.优点超声波法在多酚提取中具有多个优点。
超声波能够在短时间内将细胞内的多酚迅速释放到溶液中，提取效率高。
超声波提取过程中无需使用有害化学溶剂，对环境无污染，符合绿色环保要求。
超声波法操作简便，不需要复杂的设备和技术，适用于大规模生产。
2.局限性然而，超声波法在多酚提取中仍存在一些局限性。
由于超声波的高能量震动会引起温升，容易导致多酚的热敏性降解，降低提取产率。
超声波提取过程中也容易产生气泡和喷射物，影响操作安全性。
三、超声波法提取多酚的工艺优化为了克服超声波提取多酚过程中存在的局限性，需要进行工艺优化。
一是优化超声波参数，如功率、频率和时间等，以降低对多酚的热应激。
二是选择适当的溶剂和辅助剂，如乙醇、丙酮等，提高多酚的溶解度和稳定性。
三是采用催化剂和复合酶等生物技术手段，提高多酚的提取效率和产物纯度。
四、超声波法提取多酚的未来发展趋势在未来，超声波法在多酚提取中将继续得到广泛应用。
一是超声波技术的不断创新和突破，如超声波脉冲技术、超声波微波复合技术等，将进一步提高多酚的提取效率和产物纯度。
二是与其他提取方法的结合，如超声波-微波联合提取、超声波-酶联合提取等，将实现多酚提取过程的协同效应，提高提取效率和产品品质。
超声微波双辅助提取葡萄籽低聚原花青素的研究
超声微波双辅助提取葡萄籽低聚原花青素的研究
陈茵茹;康健;赵芙蓉
【期刊名称】《中国酿造》
【年(卷),期】2012(031)008
【摘要】以新疆吐鲁番的赤霞珠葡萄籽为研究对象,利用超声微波双辅助法提取其中的低聚原花青素.以低聚原花青素提取率为考察指标,研究固液比、微波功率、微波辐照时间、作用次数、乙醇体积分数5个单因素对葡萄籽低聚原花青素提取率的影响.并采用响应面分析法对提取结果进行优化.结果表明,采用超声微波双辅助萃取技术得到的低聚原花青素提取率较单独采用超声或微波辅助得到的原花青素提取率高.在以70.3％vol的乙醇为提取溶剂、固液比为1∶14.6 (g∶mL)、超声处理30min、微波功率400W、微波时间30s的条件下,得到的低聚原花青素提取率最大为7.62mg/g.
【总页数】6页(P23-28)
【作者】陈茵茹;康健;赵芙蓉
【作者单位】新疆大学生命科学与技术学院,新疆乌鲁木齐830046;新疆大学生命科学与技术学院,新疆乌鲁木齐830046;新疆大学生命科学与技术学院,新疆乌鲁木齐830046
【正文语种】中文
【中图分类】O658
【相关文献】
1.微波辅助提取葡萄籽原花青素的工艺研究 [J], 李瑞丽;马润宇
2.微波对葡萄籽中低聚原花青素(OPC's)提取的影响 [J], 吕丽爽;潘道东
3.响应面优化超声波-微波协同提取葡萄籽原花青素工艺研究 [J], 程海涛;申献双
4.葡萄籽提取物低聚原花青素对老年大鼠听力的影响 [J], 邓悦;任重;姜学钧
5.微波辅助有机溶剂法提取葡萄籽中原花青素的工艺研究 [J], 任俊;曹飞;卢金珍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
超声波辅助农杆菌转化OT百合‘罗宾娜’的研究
超声波辅助农杆菌转化OT百合‘罗宾娜’的研究王岚;刘雅莉;娄倩;田菲菲【期刊名称】《西北农林科技大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2013(041)006【摘要】[目的]通过超声波处理辅助农杆菌转化OT百合小鳞片,提高农杆菌介导法转化百合的效率.[方法]以OT百合‘罗宾娜’(Lilium tenui oliumoriental×tumpet‘ Robina’)的再生小鳞片为外植体,分别以80 W功率的超声波处理1,2,3,4,5 min,通过超声波处理辅助根癌农杆菌进行外源基因的转化,同时以未进行超声波处理为对照；利用GUS组织化学法,分别检测转化脱菌后筛选培养7d的外植体和筛选培养60 d后形成的潮霉素抗性再生植株叶片、小鳞片、根系的GUS瞬时表达和稳定表达,提取潮霉素抗性植株基因组DNA进行GUS和HPT 基因的PCR扩增分析.[结果]超声波处理的农杆菌介导转化的百合外植体经GUS组织化学染色,多数可见蓝色斑点,且以3min超声波处理的蓝色最深；3 min超声波处理的外植体对潮霉素的抗性率最高达48.85％,未经超声波处理的仅为15.56％,二者差异达显著水平.从53个潮霉素抗性再生植株的DNA样品中扩增得到了GUS基因和HPT基因的扩增片段,其中超声波处理3 min的PCR阳性植株转化率最高,为28.30％,而未进行超声波处理的PCR阳性植株转化率仅为5.66％,初步证明外源基因可能整合到百合基因组中.[结论]20℃条件下80 W功率超声波处理3 min,可以有效提高农杆菌介导法转化OT百合的效率.【总页数】6页(P161-166)【作者】王岚;刘雅莉;娄倩;田菲菲【作者单位】西北农林科技大学林学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学林学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学园艺学院,陕西杨凌712100;西北农林科技大学林学院,陕西杨凌712100【正文语种】中文【中图分类】S682.2+65.032;Q785【相关文献】1.超声波辅助热水浸提法提取兰州百合多糖的工艺研究 [J], 邓演;赵得志;冉金红;马海龙2.“罗宾娜”百合组培快繁体系的建立 [J], 蔡宣梅;郭文杰;张洁;方少忠;陈诗林3.低温胁迫后增温对"罗宾娜"百合形态指标的影响 [J], 葛蓓蕾; 张萍; 雅蓉; 张瑞军; 靳磊4.低温胁迫后增温对‘罗宾娜’百合生理特性的影响 [J], 葛蓓蕾; 张萍; 雅蓉; 张瑞军; 靳磊5.兰州百合鳞茎多糖超声波辅助提取工艺优化及稳定性研究 [J], 李刚刚; 孙静; 伏衡一; 效碧亮因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
超声波辅助农杆菌介导CP基因转化番小瓜(Carioca papaya L.)的有效方法
超声波辅助农杆菌介导CP基因转化番小瓜(Carioca papayaL.)的有效方法姜玲;MAOKA Tetsuo;KOMORI Sadao;FUKAMACHI Hiroshi;KATO Hidenori;OGAWA Kazunori【期刊名称】《实验生物学报》【年(卷),期】2004(37)3【摘要】本研究探索了通过农杆菌介导,超声波辅助处理,转化番木瓜胚性愈伤组织,获得转基因植株的有效方法。
分别将含有日本PLDMV 外壳蛋白基因(PTi-Epj-TL-PLDMV)和含有台湾PRSV 菌株、美国夏威夷PRSV 菌株、泰国PRSV 菌株及日本PLDMV 菌株的多元外壳蛋白基因编码序列(PTi-NP-YKT)插入双元载体质粒pGA482G,借助于农杆菌系LBA4404将双元载体上的外壳蛋白基因和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)转移到番木瓜品种Sunset 的胚性愈伤组织中,从而获得抗卡那霉素的转化再生植株。
试验着重在转化方法上进行探索。
结果表明,农杆菌过夜培养后,用高渗透压培养液(1/2 MS+6%蔗糖+1%葡萄糖,pH 5.7)调整至光密度OD_(600(?)m)=0.15-0.20,然后用该菌液感染材料30min,其间辅以超声波处理,可以大大提高转化效率。
用15ml 无菌离心管装载胚性愈伤材料进行15s 的超声波处理,在80块被转化的胚性愈伤中获得21个CP 基因G 转化系(26.3%),而在对照处理64块胚性愈伤中仅获得1个转化系(1.6%);在经过15s 的超声波处理48块被转化的胚性愈伤中获得8个CP 基因B 转化系(16.7%),而在对照处理25块胚性愈伤中未出现转化系。
上述操作方法用在两种CP 基因转化上均表现出相似的效果。
试验还表明:120mg/L 是卡那霉素抗性筛选的最佳浓度。
抗性筛选9个月后,在421块胚性愈伤组织中产生了42个抗卡那霉素的转化系。
所获得的转基因植株分别用PCR 和Southern 印迹杂交进行了鉴定。
抗氧化剂对农杆菌介导的大豆下胚轴GUS基因瞬时表达的影响
抗氧化剂对农杆菌介导的大豆下胚轴GUS基因瞬时表达的影响
抗氧化剂对农杆菌介导的大豆下胚轴GUS基因瞬时表达的影响
大豆(Glycine max)下胚轴作为大豆遗传转化的外植体材料,能快速高频再生不定芽.然而,在遗传转化过程中褐化影响基因转化效率.在该研究中,我们用含有GUS染色基因和hpt Ⅱ(Hygromycin phosphotransferase Ⅱ)筛选基因的农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404侵染大豆下胚轴,并用组织化学定位法测定了GUS基因的瞬时表达,以确定大豆的优化基因转化条件.结果显示,在共培养基中加入硫代硫酸钠、L-半胱氨酸以及二硫苏糖醇等抗氧化剂,可以有效地抑制大豆下胚轴在组培过程中褐化的.发生,并大幅度提高农杆菌在下胚轴的瞬时表达率.这些结果说明抗氧化剂可以降低这种影响并有效提高基因转化效率.
作者：汲逢源王戈亮许亦农JI Feng-Yuan WANG Ge-Liang XU Yi-Nong 作者单位：中国科学院植物研究所光合作用与环境分子生理学重点实验室,北京,100093 刊名：植物生态学报 ISTIC PKU 英文刊名：JOURNAL OF PLANT ECOLOGY 年，卷(期)：2006 30(2) 分类号： Q94 关键词：大豆下胚轴农杆菌 GUS基因瞬时表达。
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Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｉ ｒ ｅ ｐ ｉ ｚ ｈ ｏ ｉ ａｉｎ—ａ ｓ ｔｄ Ａ ｒ ｂ ｃｅｉ ｍ —ｍｅ ｉｔｄ ｇ ｎ ｔ ｒ ｎ ｆ ｒ ｔ ｎ ｓ ｓｅ ｏ ｒｐ ａ ｉｔ ｓｒ ｃ ：ｎ ｏ ｄ ｒｔ ｏ ｔ ｏ ｍｉｅ ｔ ｅ ｓ ｎ ｃ ｔ ｏ ｓ ｉ ｅ ｇ ｏ ａ ｔｒ ｓ ｕ ｄ ａｅ ｅ ｅｉ ｔ ｓｏｍａｉ ｙ ｔｍ ｇ ａ ｅ ｖ ｒ ｙ ｃ ａ ｏ ｆ ｅ
农杆菌介导法是 目前应用最广泛的一种植物遗传转
２０ ， ００ｌ 光周期 ｔ 光）８ｈ（ 条件下继代培养。 ｘ ６ｈ（ ／ 暗） １１２ 供试菌株和质粒 ．．
惠赠 。 １２ 方法 ．
化方法。该方法遗传稳定性好 ， 但转化效率不高， 增加了
植物转基因育 种 的难度。超 声波辅 助农 杆菌 介导法
“ ｉ ｎ ｈ ”，ｔ ｅ ｅ ｅ ｔ ｏ ｏ ｉａｉｎ ｔ ａｍｅ ｔｗ ｔ ｉ ｅｅ ｔｐ ｗ ｒ ｌ ａ ｏ ｉ ｏ ｉ ｅ ｎ ｉ ，ｄ ｆ ｒ ｎ ｘ ｌｎ ｙ ｅ ｎ Ｍｅｒ ｚ ｉ ｅ ｈ ｆ ｃｓ ｆｓ ｎｃ ｔ ｅ ｔ ｎ ｉ ｄｆ ｒ ｎ ｏ ｅ ｓ ｏ ｕ ｔ ｎｃ ｆ ｒｄｆ ｒ ｔｔ ｏ ｒ ｈ ｆ ｒ ｓ ｅ ｍｅ ｉ ｅｅ ｅ ｐ ａ ｔｔｐ ｓ ａ ｄ ＡＳ ｔ
关键词 ： 葡萄 ； 超声波辅助农杆菌介 导； 遗传转化
中图分类号：６ ３ １ 文献标识码 ： 文章编号 ： ０ — ５ １ ２ Ｌ ）４— Ｏ６— ３ ￥６ ． Ａ １ １ ８ ８ （ＯＯ Ｏ ０Ｏ ０ ０ Ｅｆｅ ｔｏ ｏ ｉａ ｉ ｎ —ａ ｓｓｅ ｒ ｂ ｃｅ ｉ ｍ － ｍｅ ａ ｅ Ｇｅ ｅ ｉ ａ ｓｏ ｍａ ｉ ｎ ｏ ｆ ｃ ｆＳ ｎ ｃ ｔｏ － ｓ ｉｔ ｄ Ａｇ ｏ ａ ｔｒｕ － ｄｉ ｔｄ ｎ ｔｃ Ｔｒ ｎ ｆ ｒ ｔｏ ｎ Ｉ ｓａ ｔ ｎ ｏ ｓ Ｅｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｏ ｎ ｔ ｎ ａ ｅ ｕ ｐ ｅ ｓｏ ＧＵＳ ｉ ａ ｅ Ｖａ ｉ ｔ ” ｅｒ ｎｚ ｉ ｆ ｎ Ｇｒ ｐ ｒ ｅｙ Ｍ ｉｅ ｈ ”
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（ ．Ｃ ｌｇ ｆ ｏｔｕｔ ｅ Ｎ ｎｉ ｇ ｃ ｔ ａ Ｕ ｉ ｒｉ ， ａｊ ｇ２０９ ， ｈｎ ； １ ｏ ｅｅｏ ｒｃｌ ｒ ， ａｊ ｇＡ ｒ ｕ ｕ ｌ ｎｖ ｓｙ Ｎ ｎｉ １０５ Ｃ ｉａ ｌ Ｈ ｉ ｕ ｎ ｉ ｒ ｅ ｔ ｌ ｎ ２ ｎｔｕ ｏｔ ｕｕｅ Ｊ ｎｓ ｃｄｍ ｇｉ ｔ ａ Ｓｉ ｃｓ Ｎ ｎｉｇ １０ ４ Ｃ ｉａ ．Ｉｓｔｔ ｏ Ｈ ｒｃ ｔ ， ｉ ｇｕＡ ａｅ ｙ Ａ ｒ ｕ ｕ ｌ ｃ ｎｅ， ａｊ ０ １ ， ｈ ） ｉ ｅｆ ｉ ｒ ｌ ａ ｆ ｏ ｃ ｒ ｅ ｌ ｎ２ ｎ
江西农业学报
２ １ ，２ ４ ： ８ ０ ０ ２ （ ） ６—
ＡｃａＡｇｉｕ ｕ ｉｎ ｘ ｔ ｒ ｈ ｍｅＪａ ｇｉ ｅ
超 声 波辅助对农 杆菌 介导“ 美人指 ＂ 葡萄遗传 转化 中 ＧＵ Ｓ瞬 时表 达 的影响
周蓓蓓 ， 陈月红 ， 镇 陶建敏 章 ，
（ ．南京农业大学 园艺学院， １ 江苏 南京 ２０９ ；．江苏省农业科学院 园艺研究所 ， １０５ ２ 江苏 南京 ２ 导法 ， 优化“ 美人指 ” 葡萄遗传转化体 系。利用 Ｇ Ｓ瞬时表 达的方法研 究 了不同功率、 Ｕ
时间条件 下的超声波处理 ， 外植体类型 以及 Ａ Ｓ浓度对“ 关人 指” 萄遗传转化 效率的影响。结果表 明： 葡 外植体 茎段在含 ７ ５
ｍ ／ Ｓ农杆 菌悬浮液 中侵 染４ｍ ｎ并在此期 间， ｇＬＡ ｉ， 用功率为 ９ ｏＷ 的超声波处理 １ ， ４ｓ获得最佳 Ｇ Ｓ瞬时表达率 ４ ．％。 Ｕ ２８