α-突触核蛋白影响BDNF表达机制的研究

著 改善 东莨 菪碱 导致 的 Ｌ ＴＰ诱 发 ，５ — ６ ｎＰ ５ Ｏｍｉ Ｓ增 强 幅度为 １ ７３ ４ １ （ｓ ９ ． ±１． ｖ．东莨 菪碱 组 ， ｐ ． １ 一８ 。 而 ｐ ｒ ｈｎＣ ２ ／ ｇ给 药 前 的 Ｐ ＜Ｏ ０ ，ｎ ） ａｉ ｉ Ｏｍｇ ｋ ｓ Ｓ幅 度 为 ９ ． ± ３５／，腹 腔 注 射 给 药 ４ ９ ． ６ ９
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陈 乃宏
北京 １ ０ ５ ０ ００
天然 药 物活性 物 质 与功能 国家重 点实 验室 中 国医学科 学 院药物 研究 所
目的 ：血 脑屏 障 （ Ｂ ） 的损 伤在 脑 缺血 病理 过程 中起 着重 要 的作用 。保 护 Ｂ Ｂ，阻止或 减 ＢＢ Ｂ
轻 脑水 肿 的进 一步 发展 是治 疗脑 缺血 的重 要 措 施 之 一 。而 化 合 物 Ｃ ３的 前期 研 究 表 明其具 有 Ｈ０ 抗 脑缺 血作 用 ，但 机制 仍不 十分 明确 。所 以本实 验拟 从 Ｂ Ｂ角 度探讨 其作 用机 制 。 Ｂ 方 法 ：本 实验 采用 大脑 中动 脉 内线栓 法 建立 大 鼠局灶性 脑 缺血模 型 （ ｄ ｌＣ ｒｂａ Ａｒｅ— Ｍｉｄｅ ｅｅｒｌ ｔｒ
４ ｍｉ ０ ｎ后 Ｐ Ｓ幅度 为 １ １ ６ １ ９ （ ＞０ ０ Ｓ ０ ． ± ． ｐ ． ５Ｖ ．给药前 ，ｎ ） 一９ ，说 明 ｐ ｒ ｈｎＣ对 基 础 的突 触 ａｉ ｉ ｓ
传 递 没有 显著 影 响 。上 述结果 表 明腹腔 注射 ｐｒｓｉ ０ｍｇｋ ａｉ ｎＣ１ ／ ｇ和 ２ ／ ｇ可 以显 著改 善东 莨 ｈ Ｏｍｇ ｋ 菪 碱 对大 鼠 Ｌ Ｐ诱 发 的抑制 ，具体 机制 有待 进一 步研究 。 Ｔ 结论 ：Ｐ ｒ ｈｎＣ可 以剂量依 赖 性地 改善 东 莨 菪碱 对 大 鼠 Ｌ ａｉ ｉ ｓ ＴＰ诱 发 的抑 制 ，具 有 潜 在 的促
（ ｕ ｌａ ａｔｒ ｆ ｃｉａｅ ｃ ｌ ） Ｃ Ｅ （ＡＭＰ Ｃ ２ｌ ｅｐ ｎ ｅｅ ｍｅ ｔ ｉｄｎ ｒｔｉ） 和 ｎ ｃｅ ｒ ｃｏ ｔ ｔｄＴ ｅｌ 、 Ｒ Ｂ ｃ ｆ ｏａ ｖ ｓ ／ ａ － ｒｓ ｏ ｓ ｌ ｎ ｎ ｉｇｐ ｏｅ － ｅ ｂ ｎ
Ｎｕｒ 参 与 Ｂ ｒｌ ＤＮＦ的表达 调控 ，结 果发 现 ｏ 突触核 蛋 白过表 达后 ，ＮＦ 【 一 Ｂ、ＮＦ ＡＴ和 Ｃ Ｅ Ｒ Ｂ的转
发 ，５ － ６ ｎＰ ５ ０ｍｉ Ｓ幅 度 只增 强 了 １ ２ ３ ． （ ＜Ｏ ０ Ｓ 正 常组 ，ｎ ） ５ ． ±４ ７ ｐ ． １Ｖ ． 一９ 。在 腹 腔注射 东莨
菪碱 前 ｌ ｎ Ｏｍｉ，腹腔 注射 给予 ｐ ｒ ｈｎＣ （ 、１ ａｉ ｉ ５ ０及 ２ ／ ｇ ，观察 ｐｒ ｈｎＣ对 东 莨 菪 碱 抑 ｓ Ｏｍｇ ｋ ） ａｉ ｉ ｓ 制 Ｌ ＴＰ诱发 的影 响 。结果 显示 ｐ ｒ ｈｎＣ５ｍｇ ｋ 东莨 菪碱 导致 的 Ｌ Ｐ诱 发 的抑制 没有 显 著 ａｉ ｉ ／ｇ对 ｓ Ｔ 影 响 ，５ —６ ｎＰ ５ ０ｍｉ Ｓ增强 幅 度 为 １５ ６ ． ０ ，与东 莨 菪 碱 组 比没 有 显 著 差 异 （ ＞ Ｏ０ ５． ±９０ ｐ ． ５ｖ
（ ＡＴ）活性 ，降低丙 二 醛 （ Ａ） 的含量 。 Ｃ ＭＤ
结 论 ：Ｃ ３ ＭＣ Ｈ０ 对 ＡＯ模 型 大 鼠 Ｂ Ｂ具 有 保 护作 用 ；ＣＨ０ 保 护 Ｂ Ｂ与增 加 Ｔ 相 关 蛋 白 Ｂ ３ Ｂ Ｊ 的表达 ，降低 ＡＱＰ ４表达 而减 轻脑 水 肿 ，降低 ＭＭＰ ９的表 达 而减 小对 细 胞外 基底 膜 的降解 ，增
结 果 ：大 鼠在体 Ｌ ＴＰ实验结 果表 明 ，在 记 录一 段 基 础 Ｐ Ｓ后 ，给予 强 直 刺激 （０ Ｈｚ ０ １０ ，１０ 串）后 Ｐ Ｓ幅度与 基础 值 比显著增 强 ，５ —６ ｎＰ ５ ０ｍｉ Ｓ幅 度达 到基础 Ｐ Ｓ幅度 的 １９ ４ ． ％ （ ８ ． ±７０ ｎ 一９ ；在 给予 强直刺 激前 ３ ｎ腹 腔 注射东 莨菪 碱 ｌｍｇ ｋ ，与正 常组 比可显 著抑 制 Ｌ Ｐ的诱 ） ０ｍｉ ／ｇ Ｔ
中国药理通讯 ２ １ ０ ２年第 二十九卷第三期
Ｐ ｒ ｈｎＣ对 东莨 菪 碱 导 致 的 大 鼠 长 时 程 增 强 诱 发 抑 制 的 改 善 作 用 ａｉ ｉ ｓ
刘智 慧 中国 医学科学 院 王伟平 王晓 良 北 京 １ ０ ５ ００ ０
北京 协 和医学 院药 物研究 所
目的 ：研究 ｐｒ ｈｎＣ对东莨菪碱所致长时程增强 （ ｎ ｒ ｐ ｔｎｉ ｉ ，Ｌ Ｐ ａｉ ｉ ｓ １ ｇ ｔ ｍ ｏｅ ｔ ｔ ｎ Ｔ ）抑制 的影响 。 ｏ ｅ ａｏ 方法 ：采 用麻 醉大 鼠在 体 Ｉ Ｐ记 录 的方法 ，刺 激大 鼠海 马穿 通 路 纤维 ，记 录 齿 状 回颗 粒 细 ． Ｔ 胞 （ Ｐ Ｇ 通路 ）诱 发群 峰 电位 （ ｏ ｕａｉｎｓ ｉｅ Ｓ 幅度 的方 法 ，观察 东 莨菪 碱 对 Ｌ Ｐ —Ｄ Ｐ ｐ ｌｔ ｐｋ ，Ｐ ） ｏ ＴＰ 的作 用 ，以及 ｐ ｒ ｈｎＣ对 东莨 菪碱 作用 的影 响 。 ａｉ ｉ ｓ
ＮＦ的表 达 ，其 作用 机制 可 能是通 过 与 Ｐ ＫＣ相 互 作用 影 响 其 下游 激 酶 的 活性 ，进 而抑 制 相 关 转
录 因子 的活 性 有关 。
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化 合 物 Ｃ ３对 ＭＣ Ｏ 大 鼠血 脑 屏 障 的保 护作 用 的研 究 Ｈ０ Ａ
胡金凤 牛非 孔 令 雷 宋修 云
韩宁
ＹＯ ｃ ｓ ｎ ｃｌ ｉ ，ＭＣ ｕｏ ＡＯ） ，通 过伊 文 氏蓝 （ Ｂ 渗漏 法 观 察 Ｂ Ｂ通 透性 ；利 用 电镜 观察 神 经 血 管 Ｅ ） Ｂ 单 元 的超微 结 构 ，从 形 态 学 和 结 构 上 考 察 了 Ｃ ３对 缺 血 后 Ｂ Ｂ损 伤 的保 护 作 用 ；采 用 ＷＢ、 Ｈ０ Ｂ ＲＴ—Ｐ Ｒ 和免疫 组化 对 Ｂ Ｂ组 成 中 内皮 细 胞 间的 紧密连 接 （ Ｊ 、星形胶 质细 胞 （ ） 和基 膜 Ｃ Ｂ Ｔ） Ａｓ
观 察 到 ＣＨ０ ３各剂 量组 均可 逆 转 脑 缺 血 再 灌 引 起 的基 质 金 属 蛋 白酶 一 ９ （ ＭＭＰ ） 的表 达增 加 。 ９
Ｅ ＩＡ检测炎性因子结果表明，Ｃ ０ 各剂量组可 明显降低 Ｔ Ｆ 、增加 Ｉ 一１ ＬＳ Ｈ３ Ｎ —ａ Ｌ ０的表达 ；增
加 组织 总谷 胱 甘 肽 过 氧 化 物 酶 （ Ｈ — Ｐ ） ＧＳ ｘ 、总 超 氧 化 物 歧 化 酶 （ Ｏ Ｓ Ｄ） 和 总 过 氧 化 物 酶
进 学 习和记 忆 的作用 。
一
突触 核 蛋 白影 响 Ｂ Ｆ表 达 机 制 的研 究 ＤＮ
苑玉和 陈乃宏
中 国医学科 学 院药物 研究 所
北京 协和 医学 院药 物研究 所
北京
１０ ５ ００ ２
目的 ：研 究 ａ 突触核 蛋 白对 Ｂ 一 ＤＮＦ （ ｒ ｉ－ ｄ ｒ ｅ ｅ ｒｔｏ ｈｃｆｃｏ ）表 达 的影 响 及作 ｂａ ｎ ｅｉ ｄｎ ｕ ｏｒ ｐ ｉ ａ ｔｒ ｖ
进 行 了检测 ；并 采用 Ｅ ＩＡ 试 剂盒对 脑 缺血 后炎 症级 联反 应及 继发 的 自由基 进行 了检 测 。 ＬＳ 结 果 ：Ｅ Ｂ渗 漏实 验结 果表 明 ，模 型组 Ｂ Ｂ通透 性显 著增 加 ，ＣＨ０ Ｂ ３各剂 量组 明显 逆转 这 一 现 象 （ ＜ ００ １ ；电镜 观 察皮 层神 经血 管 单 元 的超 微 结 构 表 明 ，Ｃ ３中 、高 剂 量组 能 显 著减 Ｐ ．０） Ｈ０
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中国药 理通讯 ２ １ 年第 二十九卷第三期 ０２
及 蛋 白磷 酸化 的改 变 ；双荧 光 素 酶报 告 系 统 检 测 转 录 因 子 的 活性 ；免 疫 共 沉 淀 技 术 检测 蛋 白之 间的相 互作 用 。结 果 ：ａ 一突触 核蛋 白过表 达后 细胞 存 活率 降低 ，过表 达 ａ 突触 核蛋 白的 Ｐ Ｉ ～ Ｃ２ 细胞 Ｂ ＤＮＦ蛋 白含 量 和 ｍＲ ＮＡ 水 平 均 明 显 降 低 ；转 录 因 子 ＮＦ （ ｃ ａ ａｔｒＢ） Ｂ Ｎｕｌ ｒｆｃｏ 、ＮＦ ｅ ＡＴ
录 活性 明显 受 到抑 制 ，而 Ｎｕｒ ｒｌ的转 录 活 性 没 有 改 变 ；同 时 发 现 ａ 突触 核 蛋 白能 够 与 Ｐ 一 ＫＣ （ｒｔｉ ｉａｅＣ ｐｏｅ ｋｎｓ ）相 互作 用并 抑 制其 活性 ，并 影 响 Ｐ ｎ ＫＣ下 游 激 酶 Ｅ Ｋ 及 ＧＳ Ｒ Ｋ３的 活性 ，上 述 激 酶对 ＮＦ Ｂ、ＮＦ ＡＴ、Ｃ Ｂ具有 调控 作用 。结论 ａ ＲＥ 一突触 核蛋 白具 有 细胞 毒 性 ，能 够抑 制 Ｂ Ｄ－
用 机 制 。方法 ：利用 分 子 克隆 技术 构 建 ａ 突触核 蛋 白真核 表 达载 体并 转 染 Ｐ １ ，建立 稳 定 高 一 Ｃ２
表 达细 胞株 ；ＭＴＴ法检 测细胞 存 活率 ；Ｗｅｔｒ ｌｔ 、Ｅ Ｉ Ａ法 和 Ｃ ｎｏ ａ 检 测 的蛋 白表 达 ｓｅｎｂｏ 法 ＬＳ ｏ ｆｃｌ
东 莨菪 碱组 ，ｎ ） ａｉ ｉ ０ｍｇ ｋ 一５ ；ｐ ｒ ｈｎＣ １ ／ ｇ可显 著改 善 东莨 菪 碱 导 致 的 Ｌ ｓ ＴＰ诱 发 ，５ —６ ｎ ５ Ｏｍｉ Ｐ Ｓ增 强 幅度 为 １ ０ ４ ２ ８ （ ＜ ０ ０ Ｓ 莨 菪碱 组 ，ｎ ５ ；ｐ ｒ ｈｎＣ ２ ／ ｇ也 可 显 ９ ． ±１ ． ｐ ． ５Ｖ．东 一 ） ａｉ ｉ Ｏ ｍｇ ｋ ｓ
轻 神经 元 固缩 ，胞 质 、胞核 电子 密 度显 著 降低 ，Ａｓ足突 的肿 胀 、内皮 细 胞 的反 应 性增 大 及 毛 细
血 管变 形减 轻 ；ＷＢ结 果显 示 ，ＣＨ０ ３中 、高 剂 量 组显 著 降 低水 通 道 蛋 白～４ （ ＡＱＰ ） ４ 、增 加 闭 锁 小带 蛋 白 （ ｏ一 １ Ｚ ）和 咬合 蛋 白 （ｃｌｄｎ ） 的表达 （ ＜０ ０ ） Ｔ—Ｐ Ｒ和 免 疫荧 光 技 术 ｏｃｕ ｉｇ Ｐ ． １ ；Ｒ Ｃ