肉桂酰胺类似物的合成及其对内皮素_1生物效应的拮抗作用

收稿日期:1998-07-25 1)国家自然科学基金资助项目No.39660886 2)通讯联系人肉桂酰胺类似物的合成及其对内皮素-1生物效应的拮抗作用1)季小慎2) 王 峰 王京媛 金 涛 刘 敏 李 菲(空军总医院临床药理科,北京100036)摘 要 合成了肉桂酰胺类似物N 3-(5-甲基异唑)基-3,4-二羟基肉桂酰胺(1)和N 4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺(2).实验发现化合物(1),(2)对内皮素-1(ET-1)引起的缩血管和致血管平滑肌细胞有丝分裂效应具有显著的拮抗作用.关键词 肉桂酸类似物;内皮素-1;拮抗作用内皮素(endothelin,ET)是由21个氨基酸组成的体内活性多肽,具有强大的缩血管和致平滑肌细胞有丝分裂效应,参与多数心脑血管疾病的病理生理过程,为此寻找ET 拮抗剂对治疗ET 相关性疾病有很大的意义.内皮素与某些蛇毒如sarafotox in 的一级结构极为近似,经基因分析,认为二者源于同一祖基因.我国传统的抗蛇毒中草药对ET -1所致的生物活性作用有一定的拮抗效应,本实验室对抗蛇毒中草药拮抗ET -1作用进行了初步研究,并从植物红背丝绸[Cissus assamica (Laws.)Craib.]的乙酸乙酯成分中分离得到了反式-3,4c ,5-三羟基芪(CA -1201)并发现其具有拮抗ET -1生物活性的作用11~32,根据CA -1201的结构,推测并经实验证实了与CA -1201有着近似结构的咖啡酸和阿魏酸同样具有相似的作用.因此,分别合成了咖啡酸和阿魏酸的酰胺衍生物,并对其药理活性进行了初步研究.1 合成路线以咖啡酸和阿魏酸为原料,采用N ,N -二环己基碳二酰亚胺(DCC)为缩合剂,分别和3-氨基-5-甲基异唑及4-氨基安替比林进行酰胺化反应,所得产物经1H -NM R 和M S 证实为目标化合物N 3-(5-甲基异唑)基-3,4-二羟基肉桂酰胺(1)和N 4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺(2).两个化合物的结构及对ET -1的活性拮抗作用均未见报道.合成路线见图1.第 8 卷 第4期1998年12月 总30期中国药物化学杂志Chinese Journal of M edicinal Chemi stry Vol 18 No 14p.250Dec 11998 Sum 130Fig 11 S ynthetic rou te of target compounds2 合成实验熔点用WRS -1型数字熔点仪测定,温度未经校正.质谱用VG Zab Spec 型高分辨磁质谱仪测定,EI:电离电压70eV,FAB:反应基质为甘油.核磁共振谱用JNM -GX 400型核共振仪测定.各种硅胶为青岛海洋化工厂产品.试剂、溶剂均为市售分析级.211 N 3-(5-甲基异唑)基-3,4-二羟基肉桂酰胺(1)的合成取3,4-二羟基肉桂酸(咖啡酸)18012mg (1mmol),3-氨基-5-甲基异唑9811m g (1mmol),N ,N -二环己基碳二酰亚胺(DCC)226mg(111mmol),加6mL 无水THF 溶解,反应体系呈棕色透明液,搅拌过夜.滤除白色固体二环己基脲(DCU),滤液采用真空柱层析(VLC)分离,硅胶H(10~40L )为柱材料,乙酸乙酯-丙酮梯度洗脱,TLC 检测,展开剂为乙酸乙酯-丙酮(v B v =3B 015),碘蒸气显色.收集Rf=018的部分,除溶剂后得到白色粉状固体220mg,mp 21916~22113e ,产率:85%.1H -NM R(CD 3COCD 3)D B 2140(3H ,s,CH 3),6176(1H ,d,J =15144Hz,CHCO),6179(1H ,s,C )CH 3),6188(1H ,d,J =8106Hz,Ph -H 5),7102(1H,dd,J =8106Hz,2102H z,Ph -H 6),7115(1H ,d,J =2101H z,Ph -H 2),7160(1H ,d,J =15144Hz,Ph -CH ).MS m /e (%)B 26011(M +,37),16311(100),13410(24),8910(25).212 N 4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺(2)的合成取4-羟基-3-甲氧基肉桂酸(阿魏酸)19412mg (1mmol),4-氨基安替比林20313m g (1mmol),N ,N -二环己基碳二酰亚胺(DCC)226mg(111mmol),加8mL 无水THF 溶解,反应体系呈棕色透明液,搅拌过夜.滤除白色固体二环己基脲(DCU ),减压除THF,用60mL 乙酸乙酯溶解剩余物,分别用10%碳酸氢钠、水、15%盐酸和水洗涤,洗完后即出现黄色固体沉淀.滤出,丙酮-乙酸乙酯重结晶得黄色粉状固体345mg,m p 18012~18215e ,产率:91%.1H -NM R(DM SO -d 6)D B 2117(3H ,s,C )CH 3),3108(3H ,s,N )CH 3),3182(3H,s,CH 3O),6182~7154(10H,m ,Ph -8H,CH CH),9119(1H,s,NH ).MS m /e (%)B 40111(M -1+Na,43),38011(M+1,17),31712(14),27611(14),22511(100),18513(19).3 药理实验311 化合物(1)与化合物(2)对ET -1缩血管效应的拮抗作用2514期季小慎等:肉桂酰胺类似物的合成及其对内皮素-1生物效应的拮抗作用252中国药物化学杂志8卷雄性SD大鼠,体重(230?10)g,将大鼠击昏后快速摘取胸主动脉,经分离结缔组织后,剪成2~3mm宽的血管环,置于Krebs-H enseleit生理溶液1K-H液,pH7140?0105,95%O2+ 5%CO2,(3710?015)e2中,加2g基础张力,用10-7mol/L去甲肾上腺素预激二次,平衡、稳定后加入ET-110-9mol/L,待达到最大收缩效应后加入不同浓度的化合物(1)和化合物(2) (用2%DMSO为溶媒,实验用2%DM SO作对照),经张力换能器连台式平衡记录仪记录血管等张收缩与舒张情况.化合物(1)与化合物(2)均能明显地拮抗ET-1的缩血管效应,且该拮抗作用具有剂量依赖性.药物浓度-效应曲线经sigmiodal方法拟合后,得出效应动力学参数,表1列出了化合物(1)和(2)拮抗ET-1缩血管效应的动力学参数.Tab.1Pharmacodynamic parameters of compounds(1)and(2)againstvasoconstrile effects induced by ET-1(n=6, x?s)Compd.Pharmacodynamic parametersE max/%IC50/10-6mol#L-1110213?14131135?0198210112?711401013?01005312化合物(1)与化合物(2)对ET-1致血管平滑肌细胞增殖效应的拮抗作用取第5代已长成致密单层的兔主动脉平滑肌细胞(RAVSMC)以传代培养法调整细胞数为1@105个/mL,接种于96孔培养板(100L L/孔),在37e,5%二氧化碳孵育24h,吸去培养液,换以1%小牛血清的DMEM培养液,加入ET-1(10nmol/L)后继续孵育不同时间,得到ET-1作用与RAVSMC的时间-效应曲线.加入化合物(1)与化合物(2)后考察其对ET-1致平滑肌细胞的增殖作用.以结晶紫染色后用酶标检测仪在570nm处测定各孔光密度(OD)值.经结晶紫固定染色的培养板晾干后,直接在倒置显微镜下观察,未见明显的细胞形态改变.ET-1可刺激RAVSM C增殖,于第2d达峰值,第1,2d和第7d的数值与对照组相比,细胞增殖率的增加有显著性意义,该作用呈时间依赖性.根据ET-1引起RAVSM C增殖的时间-效应关系,选定10nmol/L ET-1与不同浓度的化合物(1)和化合物(2)共孵,第2d测定OD (570nm)值,结果见表2.Tab.2Inhibition effects of compounds(1)and(2)on RAVSMC proliferation induced by ET-1(n=3, x?s)OD value(@102)Group10-1110-1010-910-8 1118?016¹119?012¹116?017¹114?013¹2210?018¹118?017º117?013¹112?012¹vs control group P>0105;ºP<0105,¹P<0101vs ET-1groupOD values of control and ET-1group w ere116?015,214?012respectively由表2可见,N3-(5-甲基异唑)基-3,4-二羟基肉桂酰胺与N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺均可显著性地拮抗ET-1引起的RAVSM C增殖,且该作用具剂量依赖性.咖啡酸和阿魏酸的衍生物N3-(5-甲基异唑)基-3,4-二羟基肉桂酰胺与N4-安替比林基-4-羟基-3-甲氧基肉桂酰胺能有效地拮抗ET-1所产生的生物效应,可能是一类新的ET-1拮抗剂.参 考 文 献1 王峰,杨连春,刘敏,等.抗蛇毒中草药拮抗ET -1和S 6b 作用的初步研究.中国中药杂志1997,22(10):620~6222 王峰,杨连克,程言亮,等.红背丝绸拮抗内皮素-1生物效应的研究.中国药房,1997,8(4):160~1613 Yang LC,Wang F,Liu M.S tudy of an endotheli n antagonist from a Chi n ese ant-i snake venom medici nal herb.J Cardiovasc Pharmacol,1998,31(suppl.1):s249~250Synthesis of Cinnamoylamide Analogs and TheirAntagonistic Effects on Biological Actions of Endothelin -1Ji Xiaoshen,Wang Feng,Wang Jingyuan,Jin Tao,Liu M in,Li Fei(Dep ar tm ent of Clinical Pharmacology ,Gener al Hosp italof A ir Force,Beij ing 100036)Abstract Tw o cinnamoylamide analogs N 3-5-methylisox azoly-l 3,4-dihydrox y cinnamoylam ide(1)and N 4-antipyry-l 4-hydroxy -3-methoxycinnamoylamide (2)were synthesized.Both com -pounds revealed obvious antagonistic effects on biological actions of endothelin -1(ET -1),such as v asoconstriction of isolated aortic rings of SD rat and rabbit c s aortic smooth muscle cells prolifera -tion induced by ET -1.Key words cinnamic acid analogs;endothelins;antagonist effects(上接第249页)Synthesis,Characterization and Antitumor Activities ofAmino Acid Schiff Bases and Their Lanthanide Complexes ÑKong Deyuan,Zhang Xiongw en,Zhu Qin,Xie Yuli,Xie Yuyuan(Shanghai I nstitute of Materia Medica,Chinese A cademy o f Sciences,Shanghai 200031)Zhou Xigen(Dep ar tment of Chemistry ,Fudan University ,Shanghai 200433)Abstract Tw o new kinds of amino acid Schiff bases L 1K(L 1K=C 10H O 4NK #H 2O),L 2K(L 2K=C 13H 16NO 4SK)and their lanthanide complex es:Ln(L 1)3#n H 2O(Ln=La,n =0;Ln=Pr,Nd,n =1;Ln=Sm,Eu,Dy,n =2),Ln(L 2)3#n H 2O (Ln=La,n =1;Ln=Pr,Sm,Eu,Dy,n =2)have been sy nthesized and characterized by elemental analysis,IR,UV,1H -NMR and Mole Conduc -tance measurement.T he Schiff base ligands sugg ested that they coordinated w ith center lan -thanide ion as O )N )O tridendent.The prelim inary test of antitumor activity in vitro show ed that the nine lanthanide complexes had antitumor activity against H L -60tumor cells.Key words amino acid;rare earth;complex es;antitumor activity 2534期季小慎等:肉桂酰胺类似物的合成及其对内皮素-1生物效应的拮抗作用。