玉米幼胚再生体系的建立
黑龙江省地方玉米自交系幼胚再生体系的建立
H i nj n a dae n rd ie e o gi gL n rc be n s l a I L
M i Xu Ch n x a g n Li o g in An Yi g u L e z o g W a g Ho g i S n M e nh i i W ih n n n xa u i
分子 植 物 育种 ,0 0年 , 8卷 , 2期 , 4 54 9页 21 第 第 第 0—0
M o e u a l n r e i g 2 1 , 1 , . , 0 — 0 l c lr a t e d n , 0 0 Vo . No2 4 5 4 9 d Te h l g g a e c no o y
tra s a d t ei eil n , h mma u ee r o f h m r s d t n u e e r o e i a l s W e i q i d i t e e e to t r mb y so e we eu e i d c mb y g n c c l . u r o t f c f t o u n e n h g n t p n u t r o d t n o mb y u t r i o o ie T er s l h we a e ewe esg i c n e oy ea d c l ec n i o n e r o c l ei v t f u i u n r ma z . h e u t s o d t t h r r i n f a t s h t i d v ai n i b l y o mb y g n c c l s e tb ih n f i e e t az e oy e , n i e e t e oy e f e it n a i t f o i e r o e i a l sa l me t f r n i e g n t p s a d d f r n n t p so u s o d m g maz e n e i e e t p i u c l r d u . t sa s o n a e f r ai n o l s ea i g t l t ied ma d d d f r n t m u t e me im I wa l f u d t t h o m t f a l lt p a o m u o h t o c u r n o n h r o e c m b n t n . e wh l , h o c n r t n o , 一 wa u d t et e m o ti o tn a t r a d o m n o i a i s On t o e t e c n e ta i f 4 D sf n b s o h o 2 o o h mp r t c o , n a f t es i b ec n e tai n o ,一 m a e f r e i d c i n o r o e i c l s h u t l o c n r t f 4 D d u t f mb y g n c a l . a o 2 o t n h o e u K e wo d M az y rs iei mma u ee r o , mb o e i al s R g n r t n s se , n t p t r mb s E y y r g n c c l , e e e a i y tm Ge o y e u o
部分玉米自交系幼胚再生体系的建立
21 0 0年 2月
东
北
农
业
大
学
学
报
4 () 1 - 4 12: 1 1
F b 01 e .2 0
J u lo rh a tAgiutr Unv ri o ma fNote s c l M iest u y
部 分 玉 米 自交 系 幼胚 再 生 体 系 的建 立
m g・ - BA 5 m g・ —wa LI +I 0. L s mor ut be f l s die enit n. e s i l orc l f r t i a a u a o
Ke o ds y w r :maz ; i i e mma u ee ro ;n r dl e r g n r t n t r mby s ib e n ;e e e a i i o
Ab t a t o a ie ib e s w r u e s t e x lns y u i h s lt d e e s d a h e pa t ,b sn t e ioa e c l r 2 g t
关键 词 : 玉 米 ; 幼胚 ; 自交 系 ;再 生
中图分类号 :s 1.3 . 5 30 53
文献标志码 :A
文章编号:10 — 39(0 0 0 — 0 10 0 5 9 6 2 1) 2 0 1 -4
S u y o m ma u e e b y s r g n r t n o td n i t r m r o e e e a i f maz n r d l e /IN o ie i b e i s L G n A
m e h d h fe t fdie e tpan o h r g lt s an en t p s on i m a u e em by e en r t n t o ,t e e cs o f r n l tgr wt e ua or d g o y e m t r ro r g e a i o wer t de Th es l h wed t a als id c i a e wa 0. e s u id. e r ut s o s h tc l n u t u on r t s 9 5% wh n t e c c t t f2. D e h on en r i o 4- a on was 3 m g ・ ~ L .Th e e it d g e tdie e e er xse r a f r nc s amon maie ge oy es g z n tp .Zh n 58 s o e g h wed t e hgh t h i es fe u c fc ls id c i ih was 9 3 .Th r q en y o al n u t u on w c h 6. % e m m u fe u n y o l s id cin waso s r- m r q e c fc l n u t a u o b e v e n t e ibr d l e Do g 6 whc eo ge o t e lc l e m pas . d i h n e i n 4 ih b ln d t h o r l m Gen tp s a m p ra tf co n a g oy e wa n i o t n a t r a ecig te c l s sa u h ih wo l u t e fe tte r g e a in o al s a d pa t t .B 1 0 f t h l tt s,w c ud f rh ra c h e en r t f c l n ln l s A . n a u o u e
玉米组织培养及再生体系的建立
玉米组织培养及再生体系的建立作者:于妍胡楠楠侯杰尤丽新唐敬仙来源:《乡村科技》2017年第32期[摘要] 本文以玉米种子成熟胚为外植体进行组织培养,通过对外植体不同切割方式、不同碳源、不同培养基及不同激素的对比分析,建立一套最优的再生遗传转化体系,最终成功诱导出二倍体愈伤组织,并长成为二倍体植株。
[关键词] 玉米;组织培养;再生体系;愈伤组织[中图分类号] S513 [文献标识码] A [文章编号] 1674-7909(2017)32-68-2玉米是主要的粮食和饲用作物,在食品和化工行业占有重要地位。
随着转基因技术的飞速发展,人们欲利用转基因技术获得高产量、高品质、抗虫害的玉米新品种。
用玉米成熟胚为外植体诱导的愈伤组织,不受季节影响,获得植株快速,取材方便,而且外植体大小合适,是适合于玉米遗传转化的再生体系[1]。
本文以玉米种子成熟胚为外植体进行组织培养,通过对外植体不同切割方式、不同碳源、不同培养基及不同激素的对比分析,预建立一套玉米最优的再生遗传转化体系,为玉米转基因及基因功能的研究奠定良好基础[2]。
1 材料与方法1.1 植物材料选取玉米种子成熟胚为外植体。
1.2 试验方法1.2.1 实验材料处理。
一是浸泡处理,即在无菌水中浸泡3 d;二是种子处理,即种子切分成芽鞘和根鞘为外植体;三是温度处理,即先将种子置于低温4 ℃下存放36 h,而后转入高温34 ℃下诱导3 d。
1.2.2 外植体培养。
将外植体置于诱导培养基上,无光、25 ℃培养20 d,随后取出进行继代培养,并记录。
然后将愈伤组织转入分化培养基,25 ℃、光照2 700~3 000 l x下培养20 d 后进行统计;最后将再生植株移至壮苗培养基上,生根后移植即可。
1.2.3 种子切割方式。
种子切割方式为横切和纵切。
1.2.4 碳源的选用。
碳源选用麦芽糖和蔗糖。
1.2.5 激素的选用。
试验中选用2,4-D和NAA 2种激素。
1.2.6 愈伤组织的继代、分化培养。
生物技术细胞工程实验报告
课程学习报告课程名称:细胞工程大实验实验一培养基母液和培养基的配置实验二胡萝卜再生体系的建立实验三水稻再生体系的建立实验四水稻悬浮细胞系的建立及胚状体的诱导与观察实验五水稻遗传转化实验六烟草的组织培养实验七百合组织培养实验八原生质体游离、融合与培养实验九玉米幼胚再生系统的建立实验十植物快速繁殖实验1 培养基母液和培养基的配制摘要:培养基是供植物离体培养组织或细胞赖以生存的营养基质,相当于人公配制的“土壤“,在植物组织培养过程中,外植体生长所必需的营养成分、生长因子、理化环境等主要由培养基提供。
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量,应该将培养基中的各种成分,按原量10倍、100倍或1000倍称量,配成浓缩液,这种浓缩液叫做母液。
这样,每次配制培养基时,取其总量的1/10、1/100、1/1000,加以稀释,即成培养液。
关键词:培养基母液、培养基、无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质、有机附加物培养基实际一是一个人工模拟的植物生长、发育环境。
在植物组织培养过程中,外植体生长所必需的营养万分生长因子、理化环境等主要同培养基提供。
在植物组织培养中,选用适当的培养基,是组织培养成功与否至关重要的因素。
不同植物材料对培养基的要求不尽相同,进行一系列的预培养和筛选是很必要的。
由于离体的培养材料不像完整植物体那样具有自我平衡的能力,所以在配制培养基时,离子失衡或某种物质过量都可能导致培养物生长不良或导致死亡。
另外,组织培养物的脱分化、分化等状态的调控,次生代谢物的产出等都要通过调节培养基成分来实现。
本实验的目的是要学习并掌握培养基母液和培养基配制的方法,掌握不同物质浓度按比例稀释和转化的计算方法。
1 材料与方法步骤1.1试剂培养基母液(以MS 为例):NH 4NO 3;KNO 3 ;CaCl 2.2H 2O ;MgSO 4.7H 2O ;KH 2PO 4;(NH4)2SO 4;H 3BO 3;KI ;MnSO 4.H 2O ;ZnSO 4.7H 2O ;NaMoO 4.2H 2O ;CuSO 4.5H 2O ;CoCl 2.6H 2O ;Na 2EDTA.2H 2O ;FeSO4. 7H2O ;甘氨酸;盐酸吡哆醇;盐酸硫氨素;烟酸;肌醇;2,4—D ;6—BA ;NAA培养基:1N HCl ;1N KOH ; 标准pH 溶液(25℃下,pH4.01和pH6.08的标准溶液各100ml );蔗糖;琼脂;水解蛋白酶;谷氨酰胺;脯氨酸。
玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究
玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究【摘要】玉米幼胚胚性愈伤组织是利用植物胚胎的幼胚作为培养材料,通过一系列细胞培养技术,诱导形成具有再生和分化潜能的组织。
本文探讨了玉米幼胚胚性愈伤组织诱导的方法,愈伤组织的继代与分化过程,以及影响这一过程的因素。
分析了愈伤组织在玉米育种中的应用和面临的挑战。
通过对研究背景和意义的论述,阐明了玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究的重要性和价值。
未来研究将着重解决现有培养系统的不足,提高再生效率和育种应用水平,推动玉米愈伤组织培养技术的进一步发展和应用。
【关键词】玉米、幼胚、愈伤组织、诱导、继代、分化、育种、挑战、意义、研究方向、结语。
1. 引言1.1 研究背景玉米是世界上最重要的农作物之一,广泛种植于全球各地。
随着人口的增长和农业生产的需求不断增加,玉米的育种工作变得尤为重要。
幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究作为玉米遗传改良的重要内容,已经引起了广泛的关注。
幼胚胚性愈伤组织是一种来源于幼胚的特殊组织,具有细胞分裂和再生功能,是进行遗传转化和育种工作的重要材料。
通过诱导幼胚胚性愈伤组织,并在适当的培养条件下继代和分化,可以获得大量的植株,并进行高效的遗传改良工作。
目前对于玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导和继代机制尚不十分清楚,存在许多未知的问题和挑战。
开展玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究,探讨影响因素和应用潜力,对于提高玉米育种的效率和质量具有重要的意义。
1.2 研究意义玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究具有重要的研究意义。
通过研究幼胚胚性愈伤组织的诱导和继代过程,可以探索植物组织再生和分化的分子机制,为植物生长发育过程提供重要的理论基础。
玉米作为世界上重要的粮食作物,通过研究其愈伤组织的诱导和继代,可以为提高玉米育种效率和品质提供参考。
研究玉米幼胚胚性愈伤组织还有助于拓展植物生物技术应用领域,例如基因转化和育种技术。
深入探究玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代的研究意义重大,对推动玉米生产和育种领域的发展具有积极作用。
玉米幼胚组织培养的研究与进展
玉米幼胚组织培养的研究与进展吕颖颖;史振声;李凤海;王宏伟【摘要】Based on research progress in immature embryo tissue culture of maize, the factors impacting on immature embryo tissue culture of maize were summarized, including maize genotypes, minimal medium, growth regulator, appendages, etc. in order to provide a reference on establishing a high induction rate, broad-spectrum callus tissue culture medium.%文中针对玉米幼胚组织培养研究进展情况,综述了影响玉米幼胚组织培养的因素,包括玉米基因型、基本培养基、生长调节物质、附加物等,旨在为建立高诱导率、广谱性的愈伤组织培养基提供参考.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2012(000)031【总页数】3页(P15144-15145,15173)【关键词】玉米;幼胚;组织培养【作者】吕颖颖;史振声;李凤海;王宏伟【作者单位】沈阳农业大学特种玉米研究所,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学特种玉米研究所,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学特种玉米研究所,辽宁沈阳110866;沈阳农业大学特种玉米研究所,辽宁沈阳110866【正文语种】中文【中图分类】S513玉米是我国乃至世界上重要的粮食和饲料作物之一。
现代生物技术的发展为玉米遗传转化的研究展现了更广阔的前景。
玉米组织培养备受关注,并不断实现新的突破。
Larue在1949年用甜玉米的胚乳作为外植体,首次诱导出愈伤组织但未获得再生植株。
1975年,Green和Phillips首次用A188的幼胚作外植体,诱导出二倍体愈伤组织,并再生得到第一株无性系玉米植株[1]。
4种玉米自交系幼胚遗传再生体系的建立
楚海娇、李闯2,关淑艳3(1.吉林农业科技学院生物工程学院,吉林吉林132101; 2.吉林农业科技学院,吉林长春136105 ;3.吉林农业大学生物技术学院,吉林长春130118)摘要:选取4种玉米自交系H99、A188、7922和1322的幼胚作为外植体,接种于10种不同诱导培养基上,诱导愈 伤组织并建立遗传再生体系,同时探讨了不同基因型、培养基种类、幼胚大小、蔗糖浓度、激素浓度和配比对愈伤组织 诱导率的影响。
结果表明:基因型对愈伤组织诱导率高低影响显著,4种基因型玉米幼胚在诱导培养基中均产生了愈 伤组织,但继代培养后只有H99能诱导出胚性愈伤组织,诱导率为46. 2%;对于不同基因型培养基诱导效果依次为 N6 >M B>M S;选择幼胚长度为1.5 ~2.0 m m、添加蔗糖浓度为30 g/L、2,4 -D浓度为2.0 mg/L及A g N03浓度为 10 mg/L时玉米愈伤组织诱导率最高且质量较好。
关键词:玉米;再生体系;自交系;愈伤组织诱导率中图分类号:S513.03 文献标志码:A文章编号=1002 -1302(2016) 10 -0066 -03我国是世界玉米大国,玉米作为重要的粮、饲作物对我国 经济发展和市场稳定具有举足轻重的作用[1]。
可以通过基 因工程手段改良玉米的品种和农艺性状,而建立高效的体细 胞再生体系是遗传转化的关键。
玉米优良基因型遗传再生体 系的建立一直是人们研究的热点m。
玉米首次诱导出愈伤 组织是L a m e在1949年用甜玉米的胚作为外植体,但未获得 再生植株。
直到1975年,Green等用A188的未成熟胚作外 植体,诱导出二倍体愈伤组织,并获得再生植株,从而得到了 第1株无性系植株[3]。
目前,已能从多种外植体中诱导出愈 伤组织,并再生植株。
而以玉米幼胚为外植体进行培养,诱导 愈伤组织的效率高、再生能力强,可大大提高育种效率。
玉米 组织培养的影响因素较为复杂,一些优良自交系的组织培养 还存在一定困难。
贵州10种玉米基因型组织培养再生体系的建立
不 定 根 形成 的 差异
Ta . Di e e c fa v n to sr o n u to b5 f r n e o d e t i u o ti d c n i i
f o fe e a z e t pe r m di r ntm i e g no y s
型 的不 定芽诱 导 不定 根 能 力 从 大 到小 依 次 为益 玉
6号母 本 、 9 3 3 黔 单 2 、 单 2 、 0 H 1、 1黔 3 黔单 2 、 玉 0益 6父 , 青 2 3 黔单 l 、 大 3、 9 遵玉 母 本 。在 自交 系 中可 见其 胚性 愈伤 组 织 诱 导 率 较 高 的基 因型 其 不 定 根 的诱 导率较 低 , 杂交 种 中并无 明显规 律 。不 同基 因 型产 生不定 根 的粗 细 、 短 和 多 少不 同 , 中杂 交 长 其 种 的根 明显 较 自交 系 的好 , 黔单 1 9和 黔单 2 0不定 根 较粗 、 长且 根 较 多 ; 单 2 较 黔 l和黔 单 2 3不 定 根 较粗 且根 较 多 , 比黔单 1 但 9和 黔单 2 0的短 ; 自交
栽苗。C黔单 1 . 9的成 活 植 株
图 3 根 系发 育及黔单 1 9移栽成活植株
F g 3 R o e eo me t n h u vv l i . o td v lp n d t e s r i a a
pa t a e t n patt n o Q a d n 9 l s f r r s l a o f i a l n t a n i n
伤组 织诱导率较 高的是遵玉母本和 大青 2 3 分别为 8 .7 3, 18 %和 7 .9 , 13 % 而绿 芽分化 率较 高的是黔 单 2 3和黔 单
玉米成熟胚愈伤诱导及再生体系建立
玉米成熟胚愈伤诱导及再生体系建立玉米成熟胚愈伤诱导及再生体系建立玉米(Zea mays)是世界上最重要的粮食作物之一,对人类的食品安全和经济发展起着重要作用。
然而,玉米遗传改良的过程中,传统的育种方法已经无法满足需求,因此,基因工程和转基因技术被广泛应用于玉米品种的改良。
而要进行玉米的基因工程研究,需要建立有效的再生体系,以利于对基因的转移和编辑。
成熟胚愈伤诱导是建立玉米再生体系的关键步骤之一。
成熟胚愈伤诱导是将成熟胚通过外源性因子的刺激,使其发生异常的细胞分裂和分化过程,从而形成胚性愈伤组织。
这个过程需要精确控制生理条件和培养基组分,以确保胚性愈伤组织的产生率和质量。
首先,选择适当的玉米品种非常重要。
不同品种对愈伤诱导的敏感性有所不同,所以需要进行初步的筛选和鉴定。
一般来说,耐盐碱、抗病虫害和高产量的玉米品种更适合作为愈伤诱导试验的材料。
其次,确定合适的愈伤诱导方法。
目前常用的愈伤诱导方法包括激素处理、遗传转化等。
激素处理是指利用植物生长调节剂,如激素6-BA和生长抑制素NAA,来刺激胚部组织的分裂和分化。
遗传转化是指通过转基因技术,将外源基因导入玉米细胞内,使其发生遗传改变。
这些方法都需要经过多次试验和优化,以确定最适合玉米品种和实验条件的愈伤诱导方法。
此外,培养基的配方和条件也对愈伤诱导的效果有着重要影响。
培养基中需要加入适量的营养物质和激素,以满足组织生长的需求。
同时,温度、光照和湿度等环境因素也需要进行精确控制,以提供最适宜的生长环境。
当成功建立了玉米的胚愈伤诱导体系后,就可以进行进一步的再生研究。
再生过程中,胚性愈伤组织可以分化为植株组织,培养基中的激素浓度和类型需要进行适当调整,以促进侧芽的分化和根系的生长。
再生后的植株可以用于基因表达分析、遗传转化、基因编辑等研究。
综上所述,玉米成熟胚愈伤诱导是建立玉米再生体系的重要步骤之一。
通过合理选择品种、优化愈伤诱导方法和调整培养条件,可以建立高效的成熟胚愈伤诱导和再生体系,为玉米的基因工程和遗传改良提供了重要的技术支持综合考虑激素处理和遗传转化方法以及培养基配方和条件对玉米的成熟胚愈伤诱导的影响,可以得出结论:对于建立高效的玉米成熟胚愈伤诱导和再生体系,需要选择适合的愈伤诱导方法和优化培养条件。
农杆菌介导的玉米遗传转化及再生体系的建立
农杆菌介导的⽟⽶遗传转化及再⽣体系的建⽴农杆菌介导的⽟⽶遗传转化及再⽣体系的建⽴摘要:为了建⽴⽟⽶⾼频再⽣及⾼效遗传转化体系,本研究选⽤⽟⽶⾃交系178,昌72,郑58,H736760A,MQ704,2193为材料,对影响⽟⽶成熟胚愈伤组织诱导、继代培养及分化的因素进⾏了研究。
结果表明:⾼浓度的2,4-⼆氯苯氧⼄酸(2,4-D)(4.0mg/L)是诱导愈伤组织必须的;在继代培养基中添加适量的2,4-D(2.0mg/L)、6-苄基嘌呤(6-BA)(0.2mg/L)和硝酸银(AgNO3)(10mg/L)能显著增加胚性愈伤组织的形成;在分化培养基中添加0.5mg/L 6-BA有利于提⾼愈伤组织的分化频率。
这个体系的建⽴,为以成熟胚为受体系统的遗传转化体系奠定了基础。
关键词:⽟⽶;成熟胚;愈伤组织;转化;植株再⽣Establishment of transformation system and regeneration system of maize mediated by Agrobacterium tumefaciens Abstract: In order to establish the system of high-frequency regeneration and high-efficiency genetic transformation in maize, the inbred line 178, Chang72, Zheng58, H736760A, MQ704, 2193 have been chosen to study on initiation, maintenance and differentiation of calli in this paper. The results showed that inclusion higher concentration of 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid(2,4-D, 4.0 mg/L) into induction medium was a critical factor for producing primary calli. Supplement with optimal level of 2,4-D(2.0 mg/L), 6-Benzylaminopurine(6-BA, 0.2 mg/L)and silver nitrate(10 mg/L)in the subculture medium significantly promoted the formation of embryogenic calli. And the addition 0.5 mg/L of 6-BA into regeneration medium has significantly increased the frequency of plant regeneration. This efficient regeneration system provides a solid basis for genetic transformation of maize.Key words: Maize; Mature embryo; Calli; Transformation; Plant regeneration摘要ABSTRACT⽬录1序⾔ (4)2⽟⽶再⽣及基因转化体系的研究 (4)2.1⽟⽶再⽣体系的发展历程 (4)2.2⽟⽶再⽣及基因转化体系的材料选择 (4)2.3⽟⽶再⽣体系的影响因素 (4)2.4⽟⽶遗传转化的发展过程 (5)2.5⽟⽶遗传转化⽅法 (6)2.5.1 电激法 (6)2.5.2 花粉管通道法 (7)2.5.3 PEG法 (7)2.5.4 基因枪法 (7)2.5.5农杆菌介导法 (8)2.6⽟⽶再⽣及遗传转化的常⽤受体 (9)2.6.1愈伤组织再⽣系统 (9)2.6.2原⽣质体再⽣系统 (9)2.6.3种质系统 (9)2.6.4直接分化再⽣系统 (9)2.7本实验研究内容 (10)3⽟⽶成熟胚再⽣体系的建⽴ (11)3.1材料与⽅法 (11)3.1.1 材料 (11)3.1.2实验⽅法 (11)3.1.2.1 外植体的选择与预培养 (11)3.1.2.2愈伤组织的诱导 (11)3.1.2.2 胚性愈伤组织的形成及愈伤组织的继代 (12)3.2结果与分析 (12)3.2.1⽟⽶种⼦的预培养 (12)3.2.2愈伤组织的诱导 (13)3.2.3 胚性愈伤组织的形成 (15)3.2.4 AgNO3对胚性愈伤组织形成的影响 (15)3.2.5愈伤组织的分化 (15)3.3 结论与讨论 (16)4 农杆菌介导的⽟⽶转化体系的建⽴ (18)4.1材料与⽅法 (18)4.1.1 材料 (18)4.1.2 培养基配制 (18)4.1.3转化⽅法 (19)4.1.3.1 侵染液的准备 (19)4.1.3.2 侵染 (19)4.1.3.3 抗性愈伤的筛选 (19)4.2 结果与分析 (19)5 参考⽂献 (22)6致谢 (24)附录 (25)1序⾔⽟⽶是早熟⽲科(Poaceae)⽟蜀⿉族(Maydeae)⼀年⽣⾕类植物,学名Zea mays,起源于北、中、南美洲。
玉米愈伤组织再生体系的研究
筛选出的愈伤组织转入分化培养基上,再生出 植株。 1.3.4 再生苗的移栽
当再生苗在三角瓶中长到 6~8 cm 时,将其移 到小的花盆中(下层为灭菌的壤土,上层为蛭石),每 天浇 1/10 M S 营养液,并套袋保湿,在大棚中培养 10 d 左右,移栽到土壤中。
玉米组织和细胞的培养主要采用 M S 和 N 6 培 养基,二者对于不同品种和品系玉米愈伤组织的植 株再生影响不同。对于诱导产生出胚性愈伤组织, M S 比 N 6 效果好;若由幼胚直接再生植株,则 N 6 培
6期
徐立华等:玉米愈伤组织再生体系的研究
97
养基效果更好,M S 与 N 6 的主要区别在于氮源的形 式不同。此外激素的选择也影响愈伤组织的生成, 2,4-D 是影响组织脱分化的关键因素,较高浓度的 2,4-D (1~2 m g/L)诱导外植体脱分化产生愈伤组织, 降低或不加 2,4-D 愈伤组织才能分化出完整的胚状 体并再生出小植株。
相同,一般为 0.5~1.0 m g/L。愈伤组织分化时不同基因型所需最适 6-B A 浓度不同,齐 319、515 的愈伤组织最适合分
化成苗的 6-B A 浓度为 1 m g/L,鲁原 341 愈伤组织最适 6-B A 浓度为 0.5 m g/L。
关键词:玉米;愈伤组织;诱导率;分化
中图分类号:S513.035.3
收稿日期:2006-02-21 基金项目:山东省科技发展计划项目(0310101111)、山东农科院青年
基金项目(2005Y Q 019) 作者简介:徐立华(1971-),男,山东高密人,硕士,助理研究员,主要
玉米愈伤组织再生体系
关键词: 香白糯玉米; 幼胚; 愈伤组织; 根癌农杆菌
中图分类号: S513.01
文献标识码: A
The Optimiza tion of Re ge ne ra tion S ys te m from Ma ize Embryo a nd the Re s e a rch of the Agroba cte rium Tra ns forma tion
一般对诱导 产生胚性愈 伤组织来说 , MS 比 N6 好, 但对幼胚直接诱导再生植株则相反。MS 与 N6 的 主 要 区 别 在 于 氮 源 的 形 式 不 同 , NO3- 与 NH4+ 的 比值在 MS 中为 1.9, N6 中为 4.0。在体细胞胚发生 和植株再生时, 氮源起重要的调节作用。但在诱导产 生胚性愈伤 组 织 中 , MS 的 特 别 优 势 在 本 实 验 却 不 明显, 因为在叶分化阶段, 在 MS 培养基中的愈伤组 织对于叶的分化比在 N6 中的愈伤组织好, 但 N6 培 养基对于根的分化比 MS 培养基好(图 3、图 4)。而 在成苗阶段中, MS 与 N6 的区别不明显(图 5)。
摘 要: 实验以香白糯玉米为供试材料, 通过不同的培养条件比较优化玉米胚植株再生体系, 考察不同胚龄、
不同的培养基对糯玉米幼胚的愈伤诱导、分化、成苗的影响。用根癌农杆菌 GV3850 介导转化了 CpTI 和 Bar 基因, 获
玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究
玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究【摘要】本研究旨在探讨玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导和继代培养过程。
首先介绍了玉米幼胚的提取与培养方法,然后详细阐述了胚性愈伤组织的诱导过程及继代培养技术。
研究发现影响因素对愈伤组织的形成与继代有重要影响,继代后愈伤组织呈现出特定的分化特点。
通过对实验结果的总结,展望未来可能的研究方向,为玉米幼胚胚性愈伤组织的应用提供了理论基础。
本研究为进一步探究玉米幼胚胚性愈伤组织的培养与利用提供了重要参考。
【关键词】玉米幼胚、胚性愈伤组织、诱导、继代培养、玉米胚性愈伤组织分化、影响因素、研究背景、研究目的、结论、进一步研究、细胞培养1. 引言1.1 研究背景玉米(Zea mays L.)是世界上重要的粮食作物之一,其种子中富含淀粉和蛋白质,被广泛用于食品、饲料和工业原料。
玉米的幼胚是植物发育的重要组织,具有较高的再生能力和生长潜力。
利用玉米幼胚作为材料进行胚胎愈伤组织的诱导和继代培养,可以为玉米遗传改良、基因转化等研究提供重要手段。
目前,玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代研究在植物生理学和分子生物学领域备受关注。
通过对玉米幼胚提取、培养及愈伤组织的诱导和继代培养等过程进行深入研究,可以揭示植物幼胚发育的分子机制、愈伤组织形成的生理过程以及影响继代的关键因素,为解决玉米育种中的重要问题提供理论依据和实验支持。
本研究旨在探究玉米幼胚胚性愈伤组织诱导和继代的关键技术和影响因素,揭示继代后愈伤组织的特殊分化特点,为进一步优化玉米再生体系、提高愈伤组织培养效率、推动玉米遗传改良和转基因研究提供理论指导和实践支持。
1.2 研究目的玉米作为重要的农作物之一,其幼胚胚性愈伤组织培养技术在植物育种和基因转化领域具有重要意义。
本研究旨在探究玉米幼胚胚性愈伤组织的诱导和继代培养方法,以及影响因素的探究和继代后愈伤组织的分化特点。
通过研究幼胚胚性愈伤组织的培养条件和调控方法,旨在提高玉米幼胚再生体系的效率和稳定性,为玉米的育种改良和转基因研究提供技术支撑。
玉米幼胚再生体系的建立
玉米幼胚再生体系的建立
近年来,玉米作为农业的主要种植作物之一,已经成倍的提高经济价值。
由于其繁荣的利润和高效率的作物生产,它正在受到越来越多的关注。
随着科学技术的不断发展,许多研究者着手进行了研究,以实现玉米幼胚再生体系的建立。
玉米幼胚再生体系的建立是将玉米转基因技术与玉米幼胚培养技术相结合,使其具有一定的适应能力和可控性。
玉米幼胚再生体系与玉米转基因体系有一定的差别,后者可以通过转移特定的基因来调控玉米的遗传特性,以获取目标性状。
它通过一系列的技术进行克隆,包括反应釜培养、激素诱导等,使用真核表达载体技术,将可控的遗传特征植入受体株,以获得高效率的转基因植物。
此外,玉米幼胚再生体系的建立还需要进行其他技术研究,包括在分化、增殖和个体中识别核酸降解酶的替代体作用;探索和验证CP蠕虫抗原蛋白等玉米标志物;开发玉米反应釜培养体系的初始培养液,建立相关的计算机模拟理论,提高玉米反应釜培养操作的可操作性,以及提高核酸识别和形态特征观察技术等。
最后,建立玉米幼胚再生体系和进行相关技术研究都需要优质的设备,合适的材料和良好的操作环境。
因此,对现有实验室设备进行升级,更新和完善实验室技术和方法,以及建立先进的合成生物学实验室,有助于更好地建立玉米幼胚再生体系并实现转基因研究的成功。
玉米组织培养及再生体系的建立
2 . 0 mg / L增加到 2 . 5 mg / L时 , 愈胚率 为 2 5 %。说明不 同浓 度的2 , 4 一 D影 响外植 体愈 伤组 织继代 培养 , 但 各浓 度 间 褐 化 率差 别不 大 。本 文选 择浓 度 在 2 . 0 mg / L的 2 , 4 一 D,
同培 养基及 不 同激素 的对 比分析 , 建 立一套最优 的再 生遗 传转化体 系, 最终成功诱 导 出二倍 体愈伤 组织 , 并
长成 为二倍 体植株
[ 关键 词 ] 玉米; 组 织培 养 ; 再生体 系; 愈伤组 织 [ 中图分类号 ] s 5 1 3 [ 文献标识码 ] A [ 文章编 号 ] 1 6 7 4 — 7 9 0 9 ( 2 0 1 7 ) 3 2 — 6 8 — 2
养基 出愈块 数 为 3 2 , 胚 性 愈伤 组 织 为 1 7 , 胚 愈 率 为
5 3 . 1 %; MS 培养 基 出愈块 数为 3 5 , 胚性愈 伤组织 为 1 9 , 胚
愈率为 5 4 . 2 %; N6 M 培养基 出愈块 数为 2 9 , 胚性愈伤组 织
为1 3 , 胚愈率 为 4 4 . 8 %; MS M培 养基 出愈 块数为 4 2 , 胚性 愈伤 组织为 2 4 , 胚 愈率 为 5 7 . 1 %。说 明 N 6 M 培养 基对诱
种 。用玉米 成熟 胚为外 植 体诱导 的愈伤组 织 , 不受 季节 影响 , 获 得植株快速 , 取 材方便 , 而且外 植体大小合适 , 是
适合于 玉米遗 传转化的再生体 系…。 本 文 以玉米 种子成 熟胚 为外植 体进 行组 织培养 , 通 过对外 植体不 同切割方式 、 不 同碳源 、 不 同培养基及不 同 激 素的对 比分析 , 预 建立一 套玉米 最优 的再 生遗传 转化 体系, 为玉米转基 因及基 因功 能的研 究奠定 良好基础 。
农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系的建立
农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系的建立作者:孙传波,郭嘉,袁英来源:《湖北农业科学》 2014年第12期孙传波,郭嘉,袁英(吉林省农业科学院生物技术研究所,长春130033)摘要:以玉米(ZeamaysL.)HiII的幼胚为外植体,β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)为报告基因,通过农杆菌介导转化法对影响遗传转化体系的外植体大小、农杆菌浓度、热预处理温度、侵染时间、共培养及恢复培养时间、抗生素、筛选剂等因素进行优化,以建立农杆菌介导玉米幼胚遗传转化体系。
结果表明,幼胚大小为1.0~1.5mm,农杆菌菌液的OD600nm为0.5,40℃热处理3min,侵染8min,共培养3d和恢复培养4d,100mg/L羧苄青霉素作为抑菌剂,双丙氨膦作为筛选剂时为最佳遗传转化条件。
通过该优化体系已获得多种转基因玉米材料,表明该体系具有较高的可重复性和可靠性。
关键词:农杆菌介导转化法;玉米(ZeamaysL.);幼胚;遗传转化中图分类号:S513;Q789文献标识码:A文章编号:0439-8114(2014)12-2743-04收稿日期:2014-02-19基金项目:吉林省财政厅育种专项[吉财农指(2012)1062]作者简介:孙传波(1980-),男,山东莒县人,助理研究员,硕士,主要从事玉米遗传转化研究,(电话)0431-87063256(电子信箱)451039106@qq.com;通讯作者,袁英,研究员,主要从事植物转基因育种研究,(电子信箱)chuanbosun@163.com。
玉米(ZeamaysL.)是重要的粮食作物和工业原料作物之一,在国民经济生产中具有重要战略地位。
利用基因工程技术手段创制性状优异的转基因玉米新种质具有重要的理论和现实意义,为玉米育种技术开辟了新途径。
自1988年Rhodes等[1]首次获得转基因玉米完整植株,1996年Ishida等[2]初步建立农杆菌遗传转化体系以来,玉米遗传转化研究得到了迅速发展,目前已有多种转基因玉米商业化生产。
玉米幼胚和源于幼苗的幼嫩叶段愈伤诱导及其植株再生的比较
doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.17.021
玉米幼胚和源于幼苗的幼嫩叶段愈伤诱导 及其植株再生的比较
陈 靖,董 浩,马海珍,孙全喜,刘 江,亓宝秀,李新征,董树亭
系,分别以它们的幼胚和幼嫩叶段为外植体诱导愈 伤,比较这 2 种外植体在愈伤诱导和植株再生之间 的区别及联系,从中筛选出诱导率较高、愈伤形态 优良的自交系。以期为建立以叶段为外植体的另一高 效稳定的玉米组培及转化体系提供参考和技术依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料 选用齐 319、Mo17、鲁原 92、昌 7-2、178、478
六种不同遗传背景的玉米自交系为材料,其中,Mo17、 鲁原 92、178 为山东农业大学生命科学学院作物基因 工程研究室保存种质,其余 3 个由山东农业大学农学 院王启柏老师提供。
6 个自交系材料于 2009 年黄淮海玉米科技园内种 植,并在授粉后取幼胚进行试验。室内试验在山东农 业大学作物生物学国家重点实验室内进行。 1.2 试验方法
Key words: maize (Zea mays L.); immature embryos; young leaf segments; embryogenesis callus induction; differentiation
收稿日期:2011-03-04;接受日期:2011-04-14 基金项目:国家重点基础研究发展计划(2011CB100100)、国家自然科学基金(30871476, 30970222)、山东省良种工程产业化项目(鲁农粮种字[2007]
7 号) 联系方式:陈 靖,Tel:13695385267;E-mail:chenjing851218@。通信作者董树亭,E-mail:stdong@。通信作者李新征,E-mail:
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
组织诱导率 , H 9 9×A 1 8 8的 诱 导 率 最 高 ( 4 5 . 2 8 %) ; N 6培 养基 适 合 用 于胚 性 愈伤 组 织 的诱 导 同 时 也 适 合 继 代 培 养 ; 激
素 组 合 为 MS+6 - B A 1 . 0 m g / L+K T 2 . 0 m g / L的 分 化 培 养 基 出 苗 率 和 转 化 率 最 高 , 易成 活 ; 1 / 2 MS培 养 基 附 加 I B A 1 . 0 m g / L和 1 . 0 g / L活 性 炭 适 合 于 生 根 培 养 。
Re g e ne r a t i o n Sy s t e m a nd I n lue f n c i ng Fa c t o r s o f M a i z e
WA N G Y i , F A N J u n . s h a n , S HA N G L i — x i a , Y U Z h i j i n g , C A I Q i n — a n , MA R u i , R E N X i a n
( 1 . T i an s t i t u t e, T i a n j i n 3 0 0 3 8 4, C h i n a; 2 . B i o t e c h n o l o g y C e n t e r , Ac a d e my o f
华 北 农 学报 ・ 2 01 5, 3 0( 5): 1 3 0- 1 3 4
玉 米 幼 胚 再 生体 系 的 建 立
王 奕 , 范俊 山 , 尚丽 霞 , 于志 晶 , 蔡 勤 安 , 马 瑞 , 任 贤
( 1 . 天津 市 农 作 物 研 究 所 , 天津 3 0 0 3 8 4; 2 . 吉 林 省农 业 科学 院 生 物 技 术 研 究 中 心 , 吉林 长春 7 5 0 0 2 1 ) 1 3 0 0 3 3 3 . 北 方 民族 大 学 生 物 科 学 与 工 程 学 院 , 宁夏 银川
摘要 : 为 建 立 高 效 稳 定 的玉 米 再 生 体 系 , 以玉米幼胚为受体材料 , 研 究 了 基 因 型 对 胚 性 愈 伤 组 织 诱 导 率 的 影 响 以
及 适 宜 玉 米 幼 胚 生 长 的诱 导 培 养 基 、 继代培养基 、 分 化 培 养 基 及 生 根 培 养 基 。结 果 表 明 , 基 因 型 可 显 著 影 响 胚 性 愈 伤
e mb r y o g e n i c c a l l u s i n du c t i o n a n d s u bc u l t u r e. Th e c o mb i n a t i o n o f MS wi t h 6- BA 1. 0 mg /L + KT 2. 0 mg /L wa s t h e
关键词 : 玉米 ; 组织培养 ; 胚性愈伤组织 ; 植 株 再 生 中图 分 类 号 : ¥ 5 1 3 . 0 3 文献标识码 : A 文章编号 : 1 0 0 0— 7 0 9 1 ( 2 0 1 5 ) 0 5— 0 1 3 0— 0 5
d o i: l 0 . 7 6 6 8 / h b n x b . 2 0 1 5 . 0 5 . 0 2 2
ma i z e r e g e n e r a t i o n s y s t e m. Th e r e s u l t s s h o we d t ha t g e n o t y p e c o u l d s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e mb r y o g e ni c c a l l u s i n du c t i o n
E n g i n e e r i n g , B e i f a n g U n i v e r s i t y o f N a t i o n a l i t i e s , Y i n c h u a n 7 5 0 0 2 1 , C h i n a )
Abs t r a c t: Th e e f f e c t s o f g e n o t y p e o n t he i n d uc t i o n o f e mb r y o g e n i c c a l l us a n d t h e i nd u c t i o n me d i u m, s u b c u l t ur e me d i um . d i f f e r e n t i a t i o n me d i u m a n d r o o t i n g me d i u m we r e s t u d i e d i n o r d e r t o e s t a bl i s h a h i g h e fi c i e n c y a n d s t a b l e
Ag r i c u h u r a l S c i e n c e s o f J i l i n P r o v i n c e , C h a n g c h u n 1 3 0 0 3 3, C h i n a ; 3 . B i o l o g i c a l S c i e n c e a n d
r a t e , a n d t h e i n d u c t i o n r a t e o f H9 9×A1 8 8 wa s t h e h i g h e s t( 4 5 . 2 8 % ); N 6 c u l t u r e me d i u m w a s s u i t a b l e f o r ma i z