梨内根-贝壳杉烯合酶基因克隆及表达分析
植物生理学 植物生长物质
H (OH)
IAA + O2 （二）光氧化
CH2COOH
NO
羟吲哚乙酸和 二羟吲哚乙酸
H
光 IAA 核黄素 吲哚醛 一）促进细胞伸长生长 图
1 特点：
敏感部位 幼茎、胚芽鞘等；最适浓度 10－5－10－6 mol；不可逆
2 原理：酸性生长理论
主要观点：
IAA 到 达 靶 细 胞 后 ， 使 靶 细 胞 质 膜 上 的 H+-ATP 酶活化，该酶水解ATP同时将H+泵出质膜，使胞壁酸 化。胞壁pH下降可使氢键断裂、与壁松弛有关的酶活 化。 如β－半乳糖苷 酶在pH4-5时比pH7时活性高3 －10倍而β－（1，4）葡聚糖酶的活性可提高约100倍， 结果造成细胞壁松弛可塑性增大，细胞吸水，体积扩大。
迁移分析法证明： 赤霉素诱导淀粉酶基因表达的原因可能是：GA诱 导产生一种能结合到该酶基因5’上游调节序列上的一 种蛋白质。结合后启动基因表达。
图
六、赤霉素应用
（一）促进麦芽糖化。 （二）促进营养生长。对茎叶作用显著，对根伸长不 起作用。 （三）防止脱落：葡萄开花后10天，200mg/L喷花 序，增产无核。 （四）打破休眠：马铃薯切块，1ppm 泡5－10分钟， 凉干种。整薯，5ppm泡30分钟。
GGPP 环化
CDP
内根－贝壳杉烯
内根－贝壳杉烯合成酶A
内根－贝壳杉烯合成酶B
内质网
加氧酶
GA12或GA53
GA12-醛
内根－贝壳杉烯酸
图
细胞质
GA12或GA53
GAs
GA20-氧化酶 GA3-氧化酶 GA2-氧化酶
四、GA的生理作用
（一）GA1促进茎的伸长
图
GA1促进茎伸长的证明实验
内根-贝壳杉烯--GA
内根-贝壳杉烯转化为GA12和GA53 (许智宏，2012)内根-贝壳杉烯转化为GA12和GA53的所有步骤都是氧化反应。
（Hedden等，1997）。
首先，由定位在内质网膜上的细胞色素P450单氧化酶-内根-贝壳杉烯酸（KO）催化内根-贝壳杉烯变成内根-贝壳杉烯酸。
然后，由第2个P450-内根-贝壳杉烯酸氧化酶（KAO）催化内根-贝壳杉烯酸氧化成GA12。
整个过程经过6步反应，KO和KAO两种酶参与，其中KO催化内根-贝壳杉烯的C-19甲基基团连续氧化成乙醇、乙醛再到羧酸，而KAO催化内根-贝壳酸的C-7位氧化成内根-7α-羟基贝壳酸、GA12-乙醛和GA12。
脱落酸8’-羟化酶(许智宏，2012)Krochko等（1998）首次从悬浮培养的玉米细胞微粒体中提取出ABA8’-羟化酶，通过实验证明该酶是膜结合蛋白，催化反应需要分子氧和NADPH的参与，其活性可被一氧化碳抑制，且这种抑制作用可被蓝光解除，这些描述都符合P450酶的典型特征，从而证实ABA8’-羟化酶是一种细胞色素P450单加氧酶。
8’-羟化酶在快速降低ABA浓度和活性方面具有重要作用其催化（+）-ABA分解代谢反应迅速，但催化（-）-ABA的速率仅为（+）-ABA的10%，对甲酯化的（+）-ABA没有催化活性（Cutler等，1997）。
8’-羟化酶的活性可被其底物（+）-ABA诱导，且受色素依赖的信号途径以及多种环境胁迫调控（Cutler等，1999；Ren等，2007）。
参考文献：[1]Hedden P,Pillips A L.2000.Gibberellin biosynthesis:enzymes,genes and their regulation. Annu Rev Plant Physiol Plant Molbiol, 48:431-460[2]许智宏，薛红卫著. 植物激素作用的分子机理. 上海：上海科学技术出版社, 2012.09:68-102[3]Cutler A J ，Krochko J E.1999. Formation and breakdown of ABA. Trends Plant Sic ,4:472-478.[4]Cutler A J ，Squires T M, Loewen M K, et al. 1997.Induction of (+)- abcisic acid 8’-hydroxylase by (+)- abcisic acid in cultured maize cells. J Exp Bot, 315:1787-1795.[5]Krochko K J, Abrams G D, Loewen M K, et al.1998. (+)- Abcisic acid 8’-hydroxylase is a cytochrome P450 monooxygenase.Plant Physiol, 118:849-860.[6]Ren H, Gao Z, Chen L, et al. 2007. Dynamic analysis of ABA accumulation in relation to the rate of ABA catbolism in maize tissues under water deficit. J Exp Bot, 58:211-219.。
茌梨果实内切-β-1,4-葡聚糖酶基因的克隆及生物信息学分析
北 农 学 报 ・２ ０１ ３， ２ ８（ ３）： ５ ３ — ５ ７
茌 梨 果 实 内切 － ｉ ３ － １ ， ４ － 葡 聚 糖 酶 基 因 的 克 隆及 生 物信 息 学 分 析
Ｐｂ ＥＧ． Ｔｈ ｅ Ｐｂ ＥＧ ｗａ ｓ １ ９ ７ １ ｂｐ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｏ ｐ ｅ ｎ ｒ ｅ ａ ｄｉ ｎ ｇ ｆ ｒ ａ ｍｅ ｅ ｎ ｃ ｏ ｄ ｅ ｄ ４ ９ ３ ａ ｍｉ ｎ ｏ ａ ｃ ｉ ｄ ｓ ， ｗｈ ｉ ｌ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｓ ｔ ｉ ｍａ ｔ ｅ ｄ ｍｏ ｌ ｅ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｗｅ ｉ ｇ ｈｔ ａ ｎ ｄ ｉ ｓ ｏ ｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｉ ｃ ｐ ｏ ｉ ｎ ｔ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ ｐ ｕ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｗｅ ｒ ｅ ５ ４． ５ ９ ６ １ ｋ Ｄａ ａ ｎ ｄ ９． １ ４． Ｔｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｅ ｎｃ ｏ ｄ ｅ ｄ ｂ ｙ Ｐｂ ＥＧ ｂ ｅ — ｌ ｏ ｎｇ ｅ ｄ ｔ ｏ Ｇｌ ｙ ｃ ｏ ｓ ｙ ｌ — ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｌ ａ ｓ ｅ ｓ — ｆ ａ ｍｉ ｌ ｙ 一 ９． Ｔｈｅ ｒ ｅ ｗａ ｓ ｎ ｏ ｍｅ ｍｂ ｒ ａ ｎ ｅ － ｓ ｐａ ｎ ｎ ｉ ｎ ｇ ｄｏ ｍａ ｉ ｎ ｉ ｎ ｔ ｈ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｅ ｉ ｎ ｂ ｕ ｔ ａ ｓ ｉ ｇ ｎ ａ ｌ ｐ ｅ ｐ ｔ ｉ ｄ ｅ
豆和葡萄 。
关键词 ： 茌梨 ； 内切 － Ｂ － １ ， ４ 一 葡 聚糖 酶 基 因 ； 生 物 信 息 学
中 图分 类 号 ： Ｑ ７ ８ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ０— ７ ０ ９ １ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ３— ０ ０ ５ ３— ０ ５
苹果内根-贝壳杉烯合成酶基因的克隆及表达分析
摘要 ： 以柱 型苹 果 茎 尖 为 试 材 ， 采 用 同 源 克 隆 的 方 法 克 隆 得 到 赤 霉 素 合 成 代 谢 关 键 酶 内根 一 贝壳 杉烯合 成 酶 的
ｃ Ｄ Ｎ Ａ全 长 序 列 ， 命 名 为 Ｍｄ Ｋ Ｓ 。Ｍｄ Ｋ Ｓ的 开放 阅读 框 （ Ｏ Ｒ Ｆ ） 全长 ２ ２ １ ４ ｂ ｐ ， 编码 ７ ３ ７个 氨 基 酸 。
分析发现mdks同样具有ddald结构这个基序可能起到结合二价金属离子mg与焦磷酸基所形成的复合体相结合介导焦磷酸基的解离的作用1314此外还发现一个保守结构域ydtawvamvp该结构域在维持植物双萜环化酶的环化酶活性中起到必要作用1415推测其为牻牛儿焦磷酸ggpp到内根贝壳杉烯的合成途径中cpsks共同的保守底物结合位亚细胞定位预测发现mdks有153的可能定位于细胞核43的可能定位于质膜还可能定位于线粒体和内质网
ＤＥＮＧ Ｘｉ ａ ｏ — ｙ ｕ ｎ， ＤＡＩ Ｈｏ ｎ ｇ — ｙ ｉ ， ＬＩ ＡＮＧ Ｍｅ ｉ — ｘ ｉ ａ
（ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ｏ ｆ Ｌ ａ ｎ ｄ ｓ ｃ ａ ｐ ｅ ａ ｎ ｄ Ｈ ｏ ｒ ｔ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ｅ ， Ｑ ｉ ｎ ｇ ｄ ａ ｏ Ａｇ ｒ ｉ ｃ ｕ ｌ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ Ｕｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ， Ｑｉ ｎ ｇ ｄ ａ ｏ ２ ６ ６ １ ０ ９， Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ）
ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ ， ｅ ｎ ｔ — ｋ ａ ｕ ｒ ｅ ｎ ｅ ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ａ ｓ ｅ ｇ ｅ ｎ ｅ ｉ ｎ ｃ ｏ ｌ ｕ ｍｎ ａ ｒ ａ ｐ ｐ ｌ ｅ ， ｄ ｅ ｓ ｉ ｇ ｎ ａ ｔ ｅ ｄ ａ ｓ Ｍｄ Ｋ Ｓ， ｗ ａ ｓ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ ｆ ｒ ｏ ｍ ａ ｐ ｐ ｌ ｅ （ Ｍａ ｌ ｕ ｓ ｄ ｏ ｍｅ ｓ — ｔ ｉ ｃ ａ Ｂ ｏ ｒ ｋ ｈ ） ｓ ｔ ｅ ｍ ａ ｐ ｉ ｃ ａ ｌ ｔ ｉ ｓ ｓ ｕ ｅ ｂ ｙ ｈ ｏ ｍｏ ｌ ｏ ｇ ｏ ｕ ｓ ｃ ｌ ｏ ｎ ｉ ｎ ｇ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ． Ｔ ｈ ｅ ｆ ｕ ｌ ｌ － ｌ ｅ ｎ ｇ ｔ ｈ ｃ ＤＮＡ ｃ ｏ ｎ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｄ ｏ ｆ ２ ２ １ ４ ｎ ｕ ｃ ｌ ｅ ｏ —
高等植物赤霉素20-氧化酶基因的克隆、表达及其调控技术的研究进展
高等植物赤霉素20-氧化酶基因的克隆、表达及其调控技术的研究进展石海燕;张玉星【摘要】The molecular characteristics of GA 20-oxidase genes were revealed, gibberellin content in rnplant body was regulated by using transgenic technology to provide a new train of thought for breed rnimprovement. The cloning, expression and regulation of GA 20-oxidase genes and its application in plant rngenetic engineering were reviewed in this paper.%揭示赤霉素20-氧化酶基因的分子特征,通过转基因技术调控植物体内活性赤霉素的含量,可为改良品种提供新的思路.从赤霉素20-氧化酶基因的克隆、表达调控及其在植物基因工程中的应用等方面进行了综述.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2011(039)004【总页数】4页(P19-22)【关键词】赤霉素20-氧化酶;基因克隆;表达调控;高等植物【作者】石海燕;张玉星【作者单位】河北农业大学,园艺学院,河北,保定,071001;河北农业大学,园艺学院,河北,保定,071001【正文语种】中文【中图分类】S184赤霉素(gibberellins，GAs)是一种重要的植物激素，共有136种，但只有部分具有生物活性[1]，这些有生物活性的赤霉素对高等植物整个生命周期的生长发育起关键作用[2]。
赤霉素的生物合成过程可分为3步：第1步在质体中进行。
由牻牛儿牻牛儿焦磷酸(geranylgeranyl pyrophosphate，GGPP)在古巴焦磷酸合成酶(copal pyrophosphate synthase，CPS)和内根-贝壳杉烯合成酶(ent-kaurene synthase，KS)催化下环化为赤霉素的前身内根-贝壳杉烯(ent-kaurene)。
刺梨APX基因的克隆及其在AsA积累过程中的表达的开题报告
刺梨APX基因的克隆及其在AsA积累过程中的表达的开题报告摘要：刺梨是一种重要的经济作物，在其果实的生长发育过程中，抗氧化剂维生素C （AsA）的积累对于提高其品质和营养价值具有重要作用。
该研究旨在克隆刺梨AsA合成途径关键基因APX的cDNA序列，并分析其在AsA积累过程中的表达变化。
通过PCR扩增的方法，得到了刺梨APX基因的cDNA序列，并进行了同源性比对和系统进化分析。
实时荧光定量PCR表明，刺梨APX基因的表达量在果实成熟期明显上调，并与AsA合成相关基因的表达变化存在一定的相关性。
这些研究结果有望为进一步探究刺梨果实AsA代谢途径提供重要的参考。
关键词：刺梨；AsA；APX基因；cDNA序列；表达分析1. 研究背景刺梨是一种十分重要的果树之一，其果实丰富的营养成分和药用价值备受人们关注。
其中，抗氧化剂维生素C（AsA）在刺梨果实中占有重要地位。
近年来，越来越多的研究表明，AsA的含量与果实品质和保鲜性息息相关。
由于刺梨的果实很容易受到环境因素的影响，因此深入研究其AsA代谢途径对于提高其品质和保鲜性具有重要意义。
AsA的合成途径是一个复杂的生物化学过程，其中涉及到多个关键基因的参与。
其中，APX基因是AsA合成途径中的一个重要基因。
过去的研究表明，在水果的成熟和后期保鲜过程中，APX基因的表达水平显著上调，与AsA的积累密切相关。
然而，目前对于刺梨APX基因的研究还比较有限，因此有必要对其进行深入探究。
2. 研究目的本研究旨在克隆刺梨APX基因的cDNA序列，并通过实时荧光定量PCR技术分析其在刺梨果实AsA积累过程中的表达变化，为进一步探究刺梨果实AsA代谢途径提供重要的参考。
3. 研究方法（1）材料准备本研究使用刺梨品种“醉美人”为研究材料，选择不同成熟度的果实作为实验样本。
同时，还选取了其他棉麻科植物的APX基因序列进行同源性比对和系统进化分析。
（2）基因克隆利用PCR扩增技术，在赖氨酸给药的条件下，通过逆转录PCR的方法克隆了刺梨APX基因的cDNA序列。
鸭梨中α-法尼烯合成酶基因分离与表达分析的开题报告
鸭梨中α-法尼烯合成酶基因分离与表达分析的开题报告一、题目简介本研究的题目为“鸭梨中α-法尼烯合成酶基因分离与表达分析”。
鸭梨果实的芳香味主要来源于其中含有的α-法尼烯，而α-法尼烯的合成则由α-法尼烯合成酶（FAS）催化完成。
因此，本研究旨在分离鸭梨中的FAS基因，并分析其转录水平在果实不同发育阶段和逆境条件下的变化情况，为研究鸭梨香味形成机制提供基础数据支持。
二、研究内容1. FAS基因分离：通过对已有鸭梨转录组序列数据的筛选和对已知FAS基因多序列比对，设计引物进行PCR扩增，将目标基因从鸭梨组织中分离出来。
2. 基因克隆和鉴定：将PCR扩增产物进行电泳分离并提取目标条带，然后将其进行克隆和序列鉴定，确定其为FAS基因。
3. 基因表达分析：采用qRT-PCR技术，研究FAS基因在鸭梨果实发育各个阶段以及逆境处理下的转录水平变化。
四、研究意义本研究的主要意义在于：（1）深入探究鸭梨香味形成的分子机制，为鸭梨品质改良提供理论依据；（2）对FAS基因的分离和鉴定，有益于拓展该基因在其他植物中的功能研究；（3）本研究的结果还可作为果蔬类植物逆境适应性和生物合成的研究案例，为相关领域的研究提供借鉴参考。
五、研究方法1. 实验材料：鸭梨果实样品、RNase去除剂、Trizol总 RNA提取试剂盒、PCR扩增试剂盒、重组酶rTth DNA聚合酶等。
2. 实验步骤：（1）鸭梨组织的总RNA提取；（2）FAS基因的PCR 扩增和克隆；（3）PCR扩增产物的电泳分离和提取；（4）PCR产物的序列鉴定；（5）qRT-PCR分析FAS基因转录水平在果实不同发育阶段和逆境条件下的变化情况。
六、预期结果通过本研究，我们预计可以成功分离出鸭梨中的FAS基因，并进一步研究其在鸭梨果实发育不同阶段和逆境条件下的转录水平变化。
同时，探究了鸭梨芳香味的分子基础，为鸭梨品质提升和果实香味的调控提供了理论依据。
《2024年‘西伯利亚’百合LiCMK基因克隆及功能分析》范文
《‘西伯利亚’百合LiCMK基因克隆及功能分析》篇一范文：西伯利亚百合LiCMK基因克隆及功能分析一、引言西伯利亚百合（Lilium sichotense）是一种极具观赏价值的植物，因其美丽的花朵和独特的基因特性，已成为园艺学和生物学研究的重要对象。
近年来，随着分子生物学技术的发展，西伯利亚百合的基因克隆和功能分析逐渐成为研究的热点。
本文以西伯利亚百合的LiCMK基因为研究对象，对其基因克隆及功能进行深入分析。
二、材料与方法1. 材料本实验所使用的西伯利亚百合材料采自我国北方某地，经过鉴定为纯种西伯利亚百合。
实验所需试剂和仪器均符合分子生物学实验要求。
2. 方法（1）基因克隆首先，通过PCR技术扩增出LiCMK基因的cDNA序列。
然后，将PCR产物进行纯化、连接至载体、转化至感受态细胞等步骤，最终获得含有LiCMK基因的重组质粒。
（2）功能分析通过生物信息学方法对LiCMK基因进行序列分析，预测其编码的蛋白质的功能。
同时，利用转基因技术将LiCMK基因导入模式植物中，观察其对植物生长、发育及抗逆性等方面的影响。
三、实验结果1. 基因克隆结果通过PCR扩增，成功获得了LiCMK基因的cDNA序列。
经过纯化、连接、转化等步骤，成功构建了含有LiCMK基因的重组质粒。
经测序验证，LiCMK基因序列正确无误。
2. 功能分析结果（1）生物信息学分析通过生物信息学分析，发现LiCMK基因编码的蛋白质属于蛋白激酶家族成员。
通过预测其结构域和功能域，推测其可能参与细胞信号传导、植物生长和发育等过程。
（2）转基因实验结果将LiCMK基因导入模式植物中，观察其对植物生长、发育及抗逆性等方面的影响。
实验结果表明，过表达LiCMK基因的植物在生长速度、株高、花色等方面表现出明显优势。
此外，过表达LiCMK基因的植物在抗逆性方面也有所提高，表现出更强的抗病、抗虫和抗旱能力。
四、讨论本实验成功克隆了西伯利亚百合的LiCMK基因，并通过生物信息学分析和转基因实验对其功能进行了初步探讨。
SSR分析简单序列重复SSR又称...
摘要梨属于蔷薇科的梨亚科，品种很多，长期以来在分类上存在很多的问题。
本论文的目的是研究主要梨品种细胞质遗传多态性。
采用PCR-RFLP方法，对提取出的总DNA用10对叶绿体通用引物进行扩增，对PCR产物用限制性内切酶AluI，HaeIII，HinfI，Hin6I，RsaI，MvaI 和TaqI进行酶切，对19种梨（包括新疆梨系统、白梨系统、西洋梨系统、秋子梨系统、杜梨、沙梨系统）的叶绿体基因组trnS-trnfM非编码区进行克隆、测序。
应用DPS v7.05和DNAMAN、DNAStar、ClustalX-1.83、PHYLIP -3.68软件进行分析。
通过序列比对，再进行聚类分析，最后依据所得结果确定所测分子序列的亲缘关系，构建系统进化树。
结果显示：10对引物中只有7对（cp01，cp 02，cp 03，cp 04，cp 06，cp 09，cp 10）能在梨属植物上扩增出一条特异性谱带，这说明梨属植物叶绿体基因组序列十分保守，3个引物对（cp05，cp07，cp08）不能在梨属植物上扩增出谱带。
931份引物对/酶切组合中，cp09/MvaI，cp03/Hin6I 的酶切位点有显著差异。
对梨属植物的cpDNA trnS-trnfM区域进行克隆、测序，所得的序列长度为:库尔勒香梨和鸭梨的序列最长（1642bp），苹果梨、早酥梨、慈梨、象牙、翠伏的序列最短（1272bp）。
用DNAMAN软件对序列进行比对分析：库尔勒香梨与白梨系统的同源性为：85.01%，与新疆梨系统的同源性为：78.60%，与西洋梨系统的同源性为：78.28%，与沙梨系统的同源性为：77.47%，与秋子梨系统的同源性为：77.91%。
根据ClustalX软件完全比对的结果，用PHYLIP -3.68软件的邻接法对cpDNA trnS-trnfM区域序列变异位点构建系统进化树。
黑酸梨和京白聚为一类，伏茄和身不知聚为一类，冬巴和新世纪聚为一类。
赤霉素的生物合成、作用机理及应用
⾚霉素的⽣物合成、作⽤机理及应⽤⽣命科学实验78篇原创内容公众号⾚霉素是最先从恶苗病菌的发酵滤液中分离获得有效成分的⾮结晶体，发现该成分能促进⽔稻的徒长，并于1938年正式命名为⾚霉素(Gibberellin，简称GA)。
⽬前，已经从植物、真菌和细菌中发现⾚霉素类物质136种，其中⼤多数种类存在于⾼等植物中，⼀部分存在于真菌或细菌中，另⼀部分属真菌和植物共有。
按其发现的顺序，分别命名为：GA1，GA2，GA3，…GA136。
在植物激素中，仅只有⾚霉素类物质是根据化学结构来分类的。
⾚霉素类基本结构是20碳的⾚霉烷，它是⼀种双萜，由4个异戊⼆烯单位组成，含有4个碳环(A、B、C、D)，在⾚霉烷上，由于双键、羟基的数⽬和位置不同，以及内酯环的有⽆，形成了不同的⾚霉素。
此外，⾚霉素还分为游离态和结合态，其中结合态⾚霉素是⾚霉素和其他物质(如葡萄糖)结合形成的⾚霉素葡萄糖酯和⾚霉素葡萄糖苷，⽆⽣理活性，是⾚霉素的储藏和运输形式。
在植物不同发育时期，结合态⾚霉素和游离态⾚霉素可以相互转化。
如在种⼦成熟时，游离态⾚霉素不断地转化为结合态⾚霉素⽽储藏起来；⽽在种⼦萌发时，结合态⾚霉素通过酶促⽔解的⽅式释放出具有⽣物活性的游离态⾚霉素，从⽽发挥其⽣理作⽤。
⼀、⾚霉素的⽣物合成途径和关键酶类经过多年的研究，⾚霉素的⽣物合成途径已⽐较清楚，尤其是⾚霉菌中基本合成途径已经相当清楚。
在植物中，GA的⽣物合成途径根据合成酶的特征被分为3个步骤：①GAS合成的前体——牻⽜⼉牻⽜⼉焦磷酸的形成途径；② GA12-7-醛的合成；③由GA12-7-醛合成其他GAS。
其中第1、2步的中间媒介物在植物和真菌中都存在，第3步由GA12-7-醛合成其他GAS的过程，由于起作⽤的酶及酶作⽤底物不同，相应产物具有明显的不同，所以此过程在植物和真菌中有明显的差异。
⾚霉素合成途径⽰意图研究表明，GA⽣物合成中需要多种酶的参与，如古巴焦磷酸合成酶(CPS)、内根-贝壳杉烯合成酶(KS)、内根-贝壳杉烯19-氧化酶(EKO)、内根-贝壳杉烯酸7β羟化酶、GA12-醛合成酶、GA-7-氧化酶(GA7ox)、GA-13-羟化酶(GA13ox)、GA20-氧化酶(GA20ox)、GA3β羟化(GA3βox)和GA2-氧化酶(GA2ox)等。
微生物发酵产赤霉素的研究进展
2016年第35卷第11期 CHEMICAL INDUSTRY AND ENGINEERING PROGRESS ·3611·化工进展微生物发酵产赤霉素的研究进展彭辉1，施天穹1，聂志奎2，郭东升1，黄和1，纪晓俊1（1南京工业大学生物与制药工程学院，材料化学工程国家重点实验室，江苏南京 211816；2江西新瑞丰生化有限公司，江西新干 331300）摘要：赤霉素为植物五大激素之一，对植物生长具有多种生理作用，如调控植物的茎干延长、种子发芽、打破种子休眠、诱导开花等。
目前赤霉素已经广泛应用于农业、林业、酿造业等，具有很大经济效益和市场前景。
赤霉素的工业化生产主要通过藤仓赤霉液体发酵。
尽管赤霉素具有多样性的应用及巨大的经济效益，但高生产成本严重制约其广泛的应用。
本文首先介绍了赤霉素的生物合成途径以及赤霉素合成基因表达的调控机制，随后重点总结了赤霉素发酵过程的菌种、营养因素、发酵参数、发酵工艺以及下游分离提纯工艺等研究进展。
同时指出未来的研究重点在于利用新型的诱变方法与分子生物学方法选育高产菌株以及发酵工艺的革新，以提高赤霉素的产量，降低发酵成本，促进赤霉素的大规模应用。
关键词：赤霉素；萜类；发酵；藤仓赤霉中图分类号：Q 939.97 文献标志码：A 文章编号：1000–6613（2016）11–3611–08DOI：10.16085/j.issn.1000-6613.2016.11.034Fermentative production of gibberellins：a reviewPENG Hui1，SHI Tianqiong1，NIE Zhikui2，GUO Dongsheng1，HUANG He1，JI Xiaojun1（1State Key Laboratory of Materials-Oriented Chemical Engineering，College of Biotechogy and Pharmaceutical Engineering，Nanjing Tech University，Nanjing 211816，Jiangsu，China；2Jiangxi New Reyphon Biochemical Co.，Ltd.，Xingan 331300，Jiangxi，China）Abstract：Gibberellins（GAs）are one of the five plant hormones which play an important role in plant growth and development. They affect stem elongation，seed germination，elimination of dormancy，flowering and so on. Gibberellins have been widely used in the agriculture，forestry and brewing industries，and have brought great economic benefits. The industrial production of gibberellins is based on submerged fermentation by Fusarium fujikuroi. Although gibberellins have a diversity of applications and huge economic benefits，high production costs severely restrict their widespread application. This review summarizes the metabolic pathway and the regulatory mechanism for gibberellins biosynthesis. Also，the strains，nutritional factors，fermentation conditions，fermentation techniques and separation and purification process are discussed in detail. Meanwhile，it is pointed out that the focus of future research should be placed on screening high-yield strains as well as improving fermentation technology，in order to reduce the production cost and achieve large-scale application of gibberellins.Key words：gibberellins；terpene；fermentation；Fusarium fujikuroi赤霉素（gibberellins，简称GAs），是一种天然的植物生长调节剂，属于生物体内的一类四环二萜类化合物，至今已发现136种，总称赤霉素类（GAs）。
梨贝壳杉烯氧化酶基因PpKO的克隆及生物信息学分析
园艺学报 2010，37（10）：1575–1582Acta Horticulturae Sinica梨贝壳杉烯氧化酶基因PpKO的克隆及生物信息学分析李节法，田义轲*，王彩虹，田伟，宋伟，殷豪（青岛农业大学园林园艺学院，山东青岛 266109）摘 要：以黄金梨（Pyrus pyrifolia Nakai）茎尖为试材，应用同源克隆和RACE方法从梨茎尖中克隆到赤霉素合成代谢的关键酶：内根-贝壳杉烯氧化酶（KO）基因cDNA的全长序列，命名为PpKO，GenBank登录号为：HM003112，其长度为1 752 bp。
PpKO的开放阅读框（ORF）编码515个氨基酸，相对分子量为59.007 kD，等电点为7.19。
氨基酸同源性分析表明，PpKO与已报道的其它植物的KO氨基酸序列具有59.4% ~ 95.9%相似性；氨基酸聚类分析表明，梨和苹果首先聚类，其次是草莓；生物信息学分析表明：PpKO含有细胞色素P450核心功能域FXXGXRXCXG和氨基端的跨膜结构域。
关键词：梨；贝壳杉烯氧化酶基因（PpKO）；生物信息学分析中图分类号：S 661.2 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2010）10-1575-08Cloning and Bioinformatics Analysis of ent-Kaurene Oxidase Gene PpKO in Pear（Pyrus pyrifolia Nakai）LI Jie-fa，TIAN Yi-ke*，WANG Cai-hong，TIAN Wei，SONG Wei，and YIN Hao（College of Landscape and Horticulture，Qingdao Agricultural University，Qingdao，Shandong 266109，China）Abstract：Ent-kaurene oxidase（KO）is a critical enzyme in the pathway of gibberellins biosynthesis. In this research，ent-kaurene oxidase gene in pear，designated as PpKO（GenBank accession number：HM003112），was isolated from‘Whangkeumbae’（Pyrus pyrifolia Nakai）stem apical tissue by homologous cloning and RACE technology. The full cDNA was 1 752 bp in length with an open reading frame（ORF）of 1 548 bp encoding a protein of 515 amino acids. Molecular weight and isoelectric point of the protein was 59.007 kD and 7.19，respectively. Amino acids homology analysis indicated that the sequence had 59.4%–95.9% similarity with those of other reported plants. Amino acids cluster analysis showed that KO from apple was clustered together with PpKO firstly，and followed by that from strawberry. Bioinformatics analysis exhibited that PpKO contained a core functional domain of cytochrome P450（FXXGXRXCXG）and transmembrane region near the N-terminus.Key words：pear；ent-kaurene oxidase gene（PpKO）；bioinformatics analysis果树的矮化性状是一个非常重要的农艺性状，在提高产量、改进品质和变革果树种植模式上发收稿日期：2010–06–02；修回日期：2010–09–03基金项目：山东省自然科学基金项目（Y2008D51）；青岛农业大学高层次人才科研基金项目* 通信作者Author for correspondence（E-mail：yktian123@）1576 园艺学报37卷挥着巨大作用。
梨萜类合成酶基因家族生物信息学与表达模式分析
梨祜类合成酶基因家族生物信息学与表达模式分析
赵荣荣刘斌郭超刘恒张元湖
【摘要】话类合成酶(Terpene synthases , TPS )是话类化合物合成过程中的关键酶。
基于梨(Pyrus bretschneideri)全基因组数据库，采用生物信息学和分子生物学方法，对梨TPS基因家族进行鉴定和亚家族分类，研究梨TPS 基因的结构及编码蛋白质性质和表达模式。
共鉴定获得33个砧类合成酶基因家族成员，聚类为5个亚家族，其中，TPS-a亚家族成员数量最多，包含4-7 个外显子；主要定位于细胞质，少数分布在线粒体、叶绿体和内质网等；梨TPS蛋白均为亲水性蛋白，*螺旋和无规卷曲是其二级结构主要组成元件，卩- 折尋和延伸链散布其中；TPS-a中保守基序个数相对较多，TPS-e/f相对较少；各亚族内蛋白质在三级结构上高度相似。
除PbrTPS24外，其余9个TPS基因在根、茎、幼叶和幼芽中均有表达,并且不同的基因在不同部位高表达, PbrTPS存在组织特异性表达。
【期刊名称】生物技术通报
【年(卷)，期】2018(034)005
【总页数】口
【关键词】梨；祜类合成酶；TPS基因家族；生物信息学;表达分析
菇类化合物(Terpenoids )是指由异戊二烯(Isoprene , C5 )为基本结构单元组成的一类天然化合物。
菇类作为植物体内一类重要的次生代谢产物,由初生代谢途径衍生而来,具有聚异戊二烯的碳骨架，根据异戊二烯的数目可以分为单砧(Monoterpene , CIO )、倍半菇(Sesquiterpene , C15 )、二话(Diterpene ,
C20 )、三菇(Triterpene , C30 )和多祜。
话类化合物普遍存。
鸭梨α-法尼烯合成酶基因的克隆及其植物表达载体构建的开题报告
鸭梨α-法尼烯合成酶基因的克隆及其植物表达载体构建的开题报告研究背景：鸭梨（Pyrus pyrifolia Nakai）是一种广泛栽培的落叶果树，人们常常食用其果实。
鸭梨α-法尼烯合成酶（Ppα-farn）是鸭梨中一种非常重要的酶，它参与了鸭梨中α-法尼烯类化合物的合成。
然而，迄今为止，对于鸭梨α-法尼烯合成酶基因的研究还非常有限。
因此，开展对鸭梨Ppα-farn基因的克隆及其植物表达载体构建研究，对于探究鸭梨α-法尼烯合成机理具有重要的科学意义。
研究目的：1. 克隆鸭梨α-法尼烯合成酶基因，分析其基本结构和特征。
2. 构建含有鸭梨α-法尼烯合成酶基因的植物表达载体，并进行表达分析。
研究方法：1. 获取鸭梨α-法尼烯合成酶基因的序列信息，并基于已有的序列信息进行引物设计，利用PCR技术进行酶基因的克隆。
2. 对成功克隆的鸭梨α-法尼烯合成酶基因进行测序和序列数据分析，包括基本结构、氨基酸序列等。
3. 根据已有的植物表达载体，设计含有鸭梨α-法尼烯合成酶基因的表达载体，并进行载体构建。
4. 利用大肠杆菌的化学转化技术，将构建好的表达载体进行转化和筛选，获得含有鸭梨α-法尼烯合成酶基因的转化菌株。
5. 采用广义感受态农杆菌介导的植物遗传转化技术，将含有鸭梨α-法尼烯合成酶基因的表达载体引入拟南芥(Arabidopsis thaliana)中，并进行转化植株的鉴定，在转化植株中检测酶基因的表达状况。
预期结果：1. 成功克隆鸭梨α-法尼烯合成酶基因，并分析其基本结构和特征。
2. 构建了含有鸭梨α-法尼烯合成酶基因的表达载体，成功进行了植物遗传转化。
3. 在转化拟南芥中检测并鉴定酶基因的表达情况。
意义和价值：1. 揭示鸭梨α-法尼烯合成机理，为鸭梨产业的健康发展提供有力的科学支撑。
2. 构建了带有鸭梨α-法尼烯合成酶基因的表达载体，为鸭梨的基因改良提供了新的思路和手段。
3. 提高对于α-法尼烯类化合物的生物合成的了解，对生物启发式合成新药物的设计提供有用的信息。
石榴赤霉素合成相关基因PgKO的克隆及表达分析
石榴赤霉素合成相关基因PgKO的克隆及表达分析黄蓉;刘娜;王琦;熊枫;张水明【期刊名称】《西北植物学报》【年(卷),期】2018(038)004【摘要】该研究以‘红玉石籽’(Punica granatum cv.Hongyushizi)石榴为试验材料,采用RT-PCR和RACE技术,从石榴花中克隆得到赤霉素合成关键酶——内根贝壳杉烯氧化酶(KO)基因,命名为PgKO(GenBank登录号为MG208017).PgKO全长cDNA为1 729 bp,包含1 542 bp开放阅读框(ORF),编码513个氨基酸,相对分子量为141.16 kD,理论等电点为4.9.多重序列对比显示,PgKO与苹果MdKO、白梨PcKO、葡萄VvKO的相似性分别为61.28％、64.56％和73％,并且具有CYP450结构域(脯氨酸富含域、氧还原位点和血红素结合域).系统进化树分析表明,PgKO与其他物种的起源相同,并与桉树EgKO的亲缘关系最近.荧光定量PCR发现,在石榴蕾期和盛花期,PgKO基因的表达量均为筒状花高于钟状花,且PgKO基因在两种花型的子房、花药、花萼中均有表达,但筒状花中子房的表达量最高,花萼的表达量最低;钟状花中花药的表达量最高,子房的表达量最低.%In thisstudy,PgKO,the gibberellin biosynthesis-related gene,was cloned from flowers of pomegranate using RT-PCR and RACE technology methods,with ‘Punica granatum cv.Hongyushizi’ as the experimental material.Its accession of GenBank is MG208017.The cDNA full-length sequence of Pg KO was 1 729 bp,with 1 542 bp open reading flame encoding 513 amino acids.The protein molecular weight and isoelectric point were 141.16 kD and 4.9 respectively.Multiple alignment showed that PgKO had61.28％,64.56％ and 73％similarity with Malus × domesticaMdKO,Pyruscommunis PcKO and Vitis vinifera VvKO respectively,also included CYP450 domain embracing proline-rich domain,redio sites and heme-binding domain.Phylogenetic tree analysis indicated that PgKO shared the same origin with other species,and had the closest relationship with Eucalyptus grandis EgKO.Real time quantitative PCR showed that no matter the bud stage or flowering stage,PgKO expression in cylindric shaped flowers were higher than that in trumpet-shapedflowers.Sometimes PgKOexpression was detected in ovary,anther and calyx.In cylindric-shaped flowers,the expression in ovary is the highest,while lowest in calyx;In trumpet-shaped flowers,the expression in anther is the highest,while lowest in ovary.【总页数】6页(P631-636)【作者】黄蓉;刘娜;王琦;熊枫;张水明【作者单位】安徽农业大学园艺学院,合肥230036;安徽农业大学园艺学院,合肥230036;安徽农业大学园艺学院,合肥230036;安徽农业大学园艺学院,合肥230036;安徽农业大学园艺学院,合肥230036【正文语种】中文【中图分类】Q785;Q786;S665.4【相关文献】1.葡萄赤霉素合成相关基因克隆、亚细胞定位和表达分析 [J], 王西成;任国慧;房经贵;李阿英;刘洪;吴伟民;赵密珍2.2个石榴品种果皮花色苷合成相关基因表达分析 [J], 招雪晴;苑兆和3.石榴木质素合成相关基因PgMYB308的克隆和表达分析 [J], 黄蓉;熊枫;陈磊;张水明;董丽丽4.葡萄赤霉素合成关键基因VvGA20ox2的克隆、亚细胞定位和表达分析 [J], 高世敏;董阳;王武;陶建敏5.芝麻赤霉素合成相关基因鉴定与表达分析 [J], 盛晨;张艳欣;于景印;高媛;黎冬华;周瑢;张秀荣;王林海因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
葡萄赤霉素合成相关基因克隆、亚细胞定位和表达分析
葡萄赤霉素合成相关基因克隆、亚细胞定位和表达分析王西成;任国慧;房经贵;李阿英;刘洪;吴伟民;赵密珍【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2012(045)011【摘要】[目的]分离和克隆‘藤稔’葡萄内根-贝壳杉烯氧化酶基因(VvKO)、GA2-氧化酶基因(VvGA2ox2和VvGA2ox4)、GA3β-羟化酶基因(VvGA3ox4)和GA20-氧化酶基因(VvGA20ox1)等5个重要赤霉素合成相关基因的ORF序列,并对其进行亚细胞定位与表达分析.[方法]采用电子克隆方法克隆相关基因,构建亚细胞定位表达载体,基因枪转化洋葱表皮细胞后激光共聚焦显微镜下观察.并用半定量和荧光定量RT-PCR方法研究各基因的时空表达.[结果]成功克隆了5个基因的完整ORF序列,对上述基因在葡萄不同组织器官中的表达水平进行分析发现,它们在组织器官间的表达有强弱差异.其中,VvGA2ox2主要在果实中表达,VvGA2ox4主要在叶片和果实中表达,而VvKO、VvGA3ox4和VvGA20ox1则在花、叶片和果实中均有一定的表达.VvKO、VvGA2ox2、VvGA2ox4和VvGA3ox4与GFP融合蛋白仅在核内产生绿色荧光；而VvGA20oxl与GFP融合蛋白在细胞核和细胞质膜上均产生绿色荧光信号.[结论]克隆的5个基因与葡萄的花、果实以及营养器官的发育存在不同程度的联系,其中4个基因仅呈现出细胞核内作用的特点,而VvGA20ox1则表现出细胞核和细胞质膜定位的现象.【总页数】8页(P2224-2231)【作者】王西成;任国慧;房经贵;李阿英;刘洪;吴伟民;赵密珍【作者单位】江苏省农业科学院园艺研究所,南京 210014;南京农业大学园艺学院,南京 210095;南京农业大学园艺学院,南京 210095;南京农业大学园艺学院,南京210095;南京农业大学园艺学院,南京 210095;南京农业大学园艺学院,南京210095;江苏省农业科学院园艺研究所,南京 210014;江苏省农业科学院园艺研究所,南京 210014【正文语种】中文【相关文献】1.葡萄赤霉素合成关键基因VvGA20ox2的克隆、亚细胞定位和表达分析 [J], 高世敏;董阳;王武;陶建敏2.高羊茅FaGST1基因克隆、亚细胞定位及表达分析 [J], 陈锡;赵德刚;陈莹;吴佳海;袁暘暘;王小利3.高羊茅FaGST1基因克隆、亚细胞定位及表达分析 [J], 陈锡;赵德刚;陈莹;吴佳海;袁暘暘;王小利4.小麦TaZFP33基因克隆、生物信息学分析、亚细胞定位与表达分析 [J], 巫群;李永亮;邹肖肖;孙傲龙;林晓霞;周苹;郭新红5.葡萄VvGA2ox1基因克隆、亚细胞定位及时空表达分析 [J], 王西成;王晨;房经贵;孙欣;冷翔鹏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
雷公藤贝壳杉烯酸氧化酶基因的全长cDNA克隆与表达分析
雷公藤贝壳杉烯酸氧化酶基因的全长cDNA克隆与表达分析贝壳杉烯酸氧化酶（kaurenoic acid oxidase）是二萜赤霉素生物合成途径上的关键酶，参与植物生长发育等重要生物学过程。
该文根据雷公藤转录组数据设计特异性引物，采用PCR技术克隆得到贝壳杉烯酸氧化酶全长cDNA序列，并进行生物信息学分析；使用实时定量PCR（qRTPCR）研究基因的诱导表达水平。
克隆得到TwKAO长度为1 874 bp，编码487个氨基酸，蛋白相对分子质量5602 kDa，理论等电点889；经茉莉酸甲酯（MeJA）诱导后，TwKAO基因相对表达量在12 h达到峰值；经植株组织表达分析证实，TwKAO基因在雷公藤的叶中表达量最高，根中最低。
该研究首次克隆得到雷公藤KAO基因，并分析其mRNA 表达特征，为深入研究雷公藤生长发育以及萜类活性成分次生代谢研究奠定基础。
标签：雷公藤；贝壳杉烯酸氧化酶（KAO）；克隆；生物信息学分析；表达分析药用植物雷公藤Tripterygium wilfordii Hook f系卫矛科木质藤本植物，临床中多使用其根或根的木质部入药，具有抗炎、神经保护、免疫调节、抗肿瘤等活性，可用于治疗类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等免疫疾病。
近年来发现，雷公藤中重要的二萜类成分雷公藤甲素在抗肿瘤尤其是治疗胰腺癌[12]方面具有显著疗效。
由于其广泛的药理活性，对雷公藤有效成分药理作用、生物合成等方面的研究得到越来越多的关注[35]。
赤霉素是植物生长发育中必不可少的激素，参与植物生长包括种子萌发，茎伸长以及开花等过程。
而赤霉素的生物合成过程中，从ent贝壳杉烯、ent贝壳杉醇、ent贝壳杉醛到ent贝壳杉酸，再到ent7过羟基贝壳杉烯酸等连续反应都是由CYP450催化而成[6]。
贝壳杉烯酸氧化酶（kaurenoic acid oxidase，KAO）参与从贝壳杉烯酸到GA12的反应过程[7]，其属于细胞色素P450中CYP88A亚家族，参与赤霉素生物合成途径中3步连续的催化反应[8]。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
梨 优 良矮 化 砧 木 品种 ， 已在生 产 中应 用推 广 ， 本身 树体 矮 化 ， 中 间砧 可促 进嫁 接 品种 树体 矮化 、 其 作 早结 果 、 早 丰产 ， 但其 矮化 机理 尚不清楚 。陈长兰Ｉ 究 认 为 中矮 ｌ 的矮化与其 赤霉 素含量低 有关 。 海涛 等 为赤 霉素 】 研 号 朱 是 控制 树体 大 小 的最重 要 的激 素 ，ＡＵ Ｔ１ 究认 为果 树树 型 的改 变是 以赤 霉素 为 中心 的激 素代 谢 不平 衡造 成 Ｆ Ｓｔ ３ 研 的， 可见 赤霉 素对其植 株高矮 起着 重要 的作用 。 内根～ 贝壳 杉烯合 酶 （ Ｓ 是 赤霉 素合成过 程 中的关键酶 之一 过 Ｋ） ，
ｇ ｎ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｈ ｄ ｎ ｇ ｔ ｅ ｃ ｒｅ ａｉｎ ｔ ｎ ｅ ｃ ｉ ｈ ｌｎ ｉｏ ｒ ｅ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ａ ｅ ａｉ ｏ ｒ ｌｔ ｅ ｄ ｎ ｙ ｗ ｔ ｔ ｅ ｐ ａ ｔ ｖｇ ｕ ． ｖ ｏ ｈ
Ｋ ｅ ｗ ｏ ｄｓ： ｐｅ ｒ ｎ －ｋ ｕｒ ｎ ｙ ｈａ ｅ ｉ ｂｅ ｅｌｎ；ｄ ｒ；ｇ ｎｅ ｅ ｒ ｓ ｉｎ ｙ ｒ ａ ；ｅ ｔ ａ ｅ ｅ ｓ ｎｔ ｓ ；ｇ ｂ ｒ ｌｉ ｗａｆ ｅ ｘｐ ｅ ｓｏ
Ａ ６ ｕ ｕａ ｃ ｎ ｅ， ｎｃ ｅｇＬａｎｎ ２ １０ ｈｎ） ｇ ｃｈ ｒｌＳｉ ｃｓ Ｘｉｇｈｎ ｉｏｉｇ １５ ０ ，Ｃ ｉａ ｅ
Ａ ｂ ｔ ａ ｔ： Ｚｈ ｎｇ ｉ １ ｉ ａ ｅ ｃ ｌ ｎｔ ｄｗａ ｆｎｇ ｉ ｔ ｒ—ｓｏ ｋ ｂｒ ｄ ｂ Ｒｅｓ ａ ｃ Ｉ ｓｉｕｔ ｏ Ｐｏ ｏｏ ｙ Ｃｈｉ ｓ Ａｃ ｄ ｓｒ ｃ ｏ ａ ｓ ｎ ｘ ｅｌ ｅ ｒ ｉ ｎｅ ｔｃ ｅ ｙ ｅ ｒ ｈ ｎ ｔｔ ｅ ｆ ｍ ｌｇ ， ｎｅ ｅ ａ ｅｍｙ ｏ ｆ
ｃ ｍｍｏ ｗ ｔ ｏｈ ｒ ｌｎ ｓ ｓ ｔｅ ｓ ｌ ｔｄ ｅ ｅ ａ ｎ ｍｅ Ｐ ＫＳ Ｔ ｅ ＤＮＡ ｅ ｕ ｎ ｅ ｈ ｄ ｎｙ ｆｗ ｎ ｃ ｅ ｔ ｅ ａ ｅ ｏ ｎ ｉ ｈ ｔ ｅ ｐ ａ ｔ ， ｏ ｈ ｉｏａｅ ｇ ｎ ｗ ｓ ａ ｄ ｃ ． ｈ ｅ ｓ ｑ ｅ ｃ ｓ ａ ｏ ｌ ａ ｅ ｕ ｌ ｏｉ ｂ ｓ ｓ ｄ
Ａ ｒ ｕ ｕａ Ｓ ｉｎｅ． ｏ ｈ ｔｄ ｆｄ ａｆ ｇｍｅｈｎｓ ，ｅｔｋｕｅｅ ｓｎｈ ｓ （Ｓ ｅｅ ｒｉａ ｅｚｍｅ ｉ ｔｅｐ ｔｗ ｙ ｏ ｇ ｃｌ ｒ ｃｅｃｓ Ｆ ｒｔｅｓ ｙ ｏ ｗ ｒｎ ｃａ ｉ ｉ ｔ ｌ ｕ ｉ ｍ ｎ— ａ ｒｎ ｙｔａｅ Ｋ ）ｇ ｎ，ａ ｃ ｔ ｌ ｎｙ ｎ ｈ ａ ａ ｆ ｉ ｃ ｈ
沈 阳农 业 大学 学报 ，０ １ １ ，２６ ：７ － ８ ２ １ — ２ ４ （）６ ７ ６ ２
Ｉｕ ｎ ｌｏ ｈ ｎ ａ ￣ Ａ￣ ｉｕｔｒ ｌＵｎｖ ｒｉ ， ０ １ ２， ２６ ： ７ — ８ ｏ ｒ ａ ｆＳ ｅ ｖ ｎ ｒ ｌ ａ ｉｅｓｔ ２ １ —１ ４ （）６ ７ ６ ２ ｃ ｕ ｙ
Ｃ ｓａｅ ｏｌｓ ａ （ Ｅ ３ ０ ３１ ｈ ｒ ｅｎ ａ ｏ ｃｎａ ｅ ｈ ｏ ｓｒｅ ｏ ａ Ｄ Ａ ｏｔｎａ ｍ ｌｓｉ ｉ ｍ Ａ Ｆ ２ ８ ． ．Ｔ ｅ ｐｏ ｉ ｌ ｏｔｉ ｄ ｔｅ ｃｎｅｖｄ ｄ ｍ ｉ Ｙ Ｔ ＷＶ ＷＶ ｎ Ｄ Ｘ Ｄ ｏ Ｋ ｎ ） ｔ ｓ ｎ ｎ Ａ Ｐ ａｄ Ｄ Ｘ ｆ Ｓ ｉ
中 图 分 类 号 ：６ １２ ￥ ６ ． 文 献 标 识 码 ：Ａ 文章 编 号 ：１ ０ — ７ ０ ２ ｌ ） ６ ０ ７ — ６ ０ ０ １０ （ ０ １０ — ６７ ０
Ｃｌ ｎ ｎ ｎ ｐ ｅ ｓｏ ａ ｙ ｉ ｆ Ｅｎ － ａ ｒ ｎ ｙ ｔ ａ ｅ Ｇｅ ｅ ｉ ａ ｏ ｉ ｇ ａ ｄ Ｅｘ ｒ ｓ ｉｎ Ａｎ ｌ ｓｓ ｏ ｔ ｋ ｕ ｅ ｅ Ｓ ｎ ｈ ｓ ｎ ｎ Ｐｅ ｒ
所 共 有 的 Ｙ Ｔ ＷＶ ＷＶ Ｄ Ａ Ａ Ｐ和 Ｄ Ｘ Ｄ保 守 结 构 域 ， 此 ， 分 离 到 的 基 因命 名 为 Ｐ Ｋ 。 早 酥 、 香 和 中矮 １号 等 不 同 梨 品 种 的 Ｄ Ｘ 因 将 ｃＳ 锦 Ｐ Ｋ 基 因 的 ｅ Ｎ 序 列 仅 有 个 别 碱 基 差 异 ， 编 码 的氨 基 酸 序 列 完 全 一 致 ， ｃＳ Ｄ Ａ 但 品种 间 不 存 在 结 构 差 异 。 Ｒ — Ｃ Ｔ Ｐ Ｒ表 达 分 析 结 果 表 明 ， ｃ Ｓ基 因 在 早 酥 中 的 表 达 量 低 于 同 时 期 的 锦 香 和 中 矮 １ ， 植 株 高 度 相 反 ， 步 表 明 该 基 因 的 表 达 有 与梨 植 株 生 长 势 呈 ＰＫ 号 与 初 负 相 关 的趋 势 。 关键词 ： ； 梨 内根 一 贝壳 杉 烯 合 酶 ； 霉 素 ； 化 ； 因表 达 赤 矮 基
Ｃ ＨＥＮ Ｆ ｉｆＰ ， ｕ － ｉｇｂ Ｉ Ｇ ｅ－ ｅ ｂ ＯＵ Ｃｈ ｎ ｑｎ ￣ ，ＪＡＮＧ Ｓ ｕ ｌ ｇ 术 Ｗ ＡＮＧ Ｆ Ｐ，ＭＡ ｉ Ｌ ｉｎ ｗｅ ｈ －ｉ ￣ ， ｎ ｅｂ Ｌ ａ ＩＬ ａ － ｎ ，
ａＲｅ ｅ ｒ ｈ Ｉ ｓ ｉ ｔ ｆ Ｐ ｍｏｏ ｙ ． ｙ Ｌ ｂ ｒ ｔ ｒ ｆ Ｆ ｕ ｔ Ｇｅ ｍｐ ａ ｍ ｓ ｕ ｓ ｓ Ｕｔｌ ａ ｉ ｎ ． ｓ ａ ｃ ｎ ｔｔ ｅ ｏ ｏ ｌ ｇ ，ｂ Ｋｅ ａ ｏ ａ ｏ ｙ ｏ ｒ ｉ ｕ ｒ ｌ ｓ Ｒｅ ｏ ｒ ｅ ｉ ｚ ｔ ，Ｍ ｉ ｉｔ ｆ Ａ ｃ ｌｕ ｅ ｉ ｏ ｎ ｓｒ ｏ ｙ ｕ ｔ ｒ ，Ｃｈ ｎ ｓ ａ ｅ ｆ ｉ ｅ ｅ Ａｃ ｄ ｍｙ ｏ
ｄｆ ｒｎ ｅ ｎ ｈ ｎ ａ １ ａ ｓ ａ ｄ Ｊｎ ｉｎ ，ｂ ｔｔｅｒ ｅ ｃ ｄｎ ａ ｎ ｃｄ ｓｑ ｅ ｃ ｓ ｗｅｅ ｏ ｌｔｌ ｏ ｓｓ ｎ ｎ ｈ ｄ ｏ ｉｅｅ ｃ ｉ Ｚ ｏ ｇ ｉ ，Ｚ ｏｕ ｎ ｉｘａ ｇ ｕ ｈ ｉ ｎ ｏ ｉｇ ｍｉｏ ａ ｉｓ ｅ ｕ ｎ ｅ ｒ ｃ ｍｐｅｅｙ ｃ ｎ ｉｔ ｔａ ｄ ａ ｎ ｆ ｅ
法 从 中矮 １ 叶 片 总 Ｒ Ａ 中克 隆赤 霉 素 合 成 过 程 中的 关 键 酶 — — 内根 一 号 Ｎ 贝壳 杉 烯 合 酶 （ Ｓ 基 因 的 ｅ Ｎ 全 长 序 列 ， 对 该 基 因 Ｋ ） Ｄ Ａ 并 在 不 同梨 品种 中 的 表 达 进 行 分 析 。 果 表 明 ： 于苹 果 基 因组 序 列 设 计 的 特 异 引 物 从 中矮 １号 的 总 Ｒ Ａ 中扩 增 出 了 １ 编 码 框 结 基 Ｎ 个 全 长 为 ２ １ ｐ的 ｅ Ｎ 序 列 ， 编 码 ７ ７个 氨 基 酸 残 基 ， 断 分 子 量 为 ８ ． Ｄ， 电 点 为 ５３ 。其 氨 基 酸 序 列 与 报 道 的 其 他 ２４ ｂ Ｄ Ａ 其 ３ 推 ３ ３ｋ 等 ６ ． ７ 植物 Ｋ Ｓ氨 基 酸 序 列 的相 似 性 为 ５ ．１ ７ ．３ ， 中 ， 板 栗 （ Ｅ ３ ０ ３１ 的 相 似 性 最 高 ， 氨 基 酸 序 列 中包 含 植 物 Ｋ 基 因 ３６ ％～ ２６ ％ 其 与 Ａ Ｆ ２ ８ ．） 其 Ｓ
ｔａ ｔａ ｉ ｈ ｎ ａ １ ｎ Ｊｎ ｉｎ ｉ ａｌ ｈ ｔｓｅ ｇｏ ｉｇ ｅ ｏ ｓ ｈ ｃ ｓ ｅ ｅｓ ｗｉ ｐａ ｔｈ ｉｈ，ｓ ｏ ｉｇ ｈ ｔ ｈ ｈ ｎ ｈ ｔ ｎ Ｚ ｏ ｇ ｉ ａ ｄ ｉｘａ ｇ ｎ ｌ ｅ ｅｔｄ ｒｗ ｎ ｐ ｒ ｄ ，ｗ ｉｈ ｗａ ｒｖ ｒｅ ｔ ｌｎ ｅｇ ｔ ｈ ｗ ｎ ｔａ ｔｅ ｔ ｉ ｈ
随着 劳动 密集 型产 业 劳动成 本 的不 断增 加 ， 树 矮化 省力 化 在各 国普 遍推 广 开来 ． 用 矮化砧 木 是实 现矮 果 应
化 密 植栽 培 的重要 措施 之 一 。 中矮 １ 是 中 国农 业 科学 院果 树研 究所 培 育 的我 国第 １个具 有 自主知 识产 权 的 号
ｇ ｂ ｅ ｅｌ ｓ ｉ ｓ ｎ ｈ ｓ ，ｗａ ｓ ｌｔ ｄ ｆ ｍ ｔｅ ｙ ｕ ｇ ｌａ ｅ ｆ Ｚ ｏ ｇ ｉ ｅ ｒ ｂ ｏ ｌｇ ｕ ｌｎ ａ ．Ｉｓ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｉｔ ｎ ｉ ｉｂ ｒ ｌ ｎ ｂｏ ｙ ｔ ｅ ｉ ｉ ｓ ｓ ｉｏａ ｅ ｒ ｏ ｈ ｏ ｎ ｅ ｖ ｓ ｏ ｈ ｎ ａ １ ｐ ａ ｙ ｈ ｍｏ ｏ ｏ ｓ ｃ ｏ ｅ ｗ ｙ ｔ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｎ ｅ ｓｔ ｙ ｉ ｄ ｆ ｒ ｎ ｐ ａ ｓ ｎ ｉ ｅ ｅ ｔ ｅ ｒ ｗａ ａ ｓ ａ ａ ｙ ｅ ．Ｔ ｅ ｅ ｕ ｔ ｆ ｓ ｌｏ ｎ ｌ ｚ ｄ ｈ ｒ ｓ ｌ ｗ ｒ ａ ｆ ｌ ｗｅ ： ｂ ｔ ｅ ｐ ｃｆ ｐ ｍｅ ｓ ｅ ｉｎ ｄ ｒ ｍ ｔ ｅ ｐ ｌ ｇ ｎ ｍｅ ｓ ｅ ｅ ｓ ｏｌ ｄ ｏ ｙ ｈ ｓ ｅ ｉ ｃ ｒ ｒ ｄ ｓ ｅ ｆ ｉ ｉ ｇ ｏ ｈ ａ ｐ ｅ ｅ ｏ ｓ ｑ ｅ ｃ ，ａ ｆ ｌ ｌｎ ｔ ｃ Ａ ｅ ｕ ｎ ｅ ｏ ２ ４ ｕ ｌ ｏ ｉｅ ｗ ｓ ｍｐ ｉ ｅ ｗｈ ｃ ｅ ｃ ｄ ｓ ａ ｐ ｔｔ ｅ ｐ ｏ ｅｎ ｏ ３ ａ ｎ ｃｄ ｅ ｕ ｎ ｅ ｕ ｌ ｅ ｇｈ ＤＮ ｓ ｑ ｅ ａ ｉ ｒ ｔ ｉ ｆ ７ ７ ｍｉ ｏ ａ ｉ ｓ — ｄ ｆ ｖ ｒ ｓｄ ｅ ； ｔ ｅ ｅ ｉｕ ｓ ｈ ｍｏｅ ｕ ａ ｗｅｇ ｔ ｎ ｉｏ ｌｃｒｃ ｏｎ ｏ ｔ ｉ ｌｃ ｌｒ ｉｈ ａ ｄ ｓ ｅｅ ｔ ｐ ｉ ｔ ｆ ｈｓ ｒ ｔｉ ｗｅ ｅ ３６ ｋ ａ ｄ ． ７ ｅ ｐ ｃ ｉｅｙ ｔ ｅ ｍｉ ｏ ｃｄ ｉ ｐ ｏｅｎ ｒ ８ ． ３ Ｄ ｎ ５ ３ ｒ ｓ ｅ ｔ ｌ ； ｈ ａ ｎ ａ ｉ ｓ ｖ ｓ ｑ ｅ ｃ ｓ ｈ ｄ ｓｍｉ ｒ ｙ ｂ ｔ ｅ ３ ６ ％ ａ ｄ ２ ６ ％ ｗｉ ｈ ｓ ｏ ｔ ｅ ｅ ｏ ｅ ｐ ａ ｔ ｎ ａ ｔ ｅ ｉｈ ｓ ｉ ｌ ｒ ｙ ｗｉ ｅ ｕ ｎ ｅ ａ ａ ｉ ｌ ｉ ｅｗｅ ｎ ５ ． １ ａｔ ｎ ７ ． ３ ｔ ｔ ｏ ｅ ｆ ｏｈ ｒ ｒ ｐ ｆ ｄ ｌ ｎ ｓ ａ ｄ ｈ ｄ ｈ ｈｇ ｅ ｔ ｍｉ ｉ ｔ ｈ ｌ ｓ ａｔ ｈ
梨 内根一 贝壳杉烯合酶基 因克 隆及表达分析