稳定表达肌肉型乙酰胆碱受体的细胞株建立和鉴定
稳定表达猪δ_冠状病毒S1_蛋白CHO_细胞系的构建与鉴定
河南农业科学，2023，52（6）：131‐138Journal of Henan Agricultural Sciencesdoi ：10.15933/ki.1004‐3268.2023.06.014稳定表达猪δ冠状病毒S1蛋白CHO 细胞系的构建与鉴定孙雪珂1，2，丁培阳3，王思桥1，2，刘思源2，李明慧2，常泽杰2，陈艺兰2，李瑞琪2，张改平1，2，4（1.河南农业大学生命科学学院，河南郑州450002；2.河南省农业科学院动物免疫学重点实验室，河南郑州450002；3.郑州大学生命科学学院，河南郑州450001；4.江苏高校动物重要疾病与人兽共患病防控协同创新中心，江苏扬州225009）摘要：为构建稳定表达猪δ冠状病毒（PDCoV ）S1蛋白的CHO 细胞系，利用电转染技术将重组质粒pCGS3-S 1转染至CHO 细胞，通过有限稀释法筛选稳定表达重组S1蛋白的单克隆细胞系。
利用阴离子交换层析和凝胶过滤层析方法对重组S1蛋白进行纯化，采用间接ELISA 方法检测重组S1蛋白活性。
将纯化的重组S1蛋白免疫BALB/c 小鼠，通过间接ELISA 、间接免疫荧光试验（IFA ）及病毒中和试验对重组S1蛋白免疫原性进行检测。
结果显示，稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO 细胞系成功建立，并获得了纯度高于90%、产量为28.5mg/L 的重组S1蛋白；且重组S1蛋白与PDCoV 阳性血清反应性良好，具有良好的免疫原性，中和效价为1∶128。
综上，成功建立了稳定表达PDCoV S1蛋白的CHO 细胞系，且纯化获得的重组S1蛋白具有良好的生物学活性。
关键词：猪δ冠状病毒；S1蛋白；CHO 细胞；稳定表达；蛋白质纯化中图分类号：S855.3文献标志码：A文章编号：1004-3268（2023）06-0131-08收稿日期：2023-01-14基金项目：河南省重大科技专项（221100110600）作者简介：孙雪珂（1997-），女，河南新乡人，在读硕士研究生，研究方向：动物免疫学。
香草素能瞬变受体亚型-1表达细胞系的构建与鉴定
Ａｂ ｔａ ｔ ０ｂ ｅｔｖ Ｔ ｏ ｓ ｕ ｔｔｅｓａｌ ｘ ｒｓｉｎｃ ｌ ｌ ｅ ｏ ａ ｓｅ ｔｒｃｐｏ ｏｅ ｔ ｌｖ ｎｌ ｉ ｓｒ ｃ Байду номын сангаасｊｃｉｅ ｏｃｎ ｔ ｃ ｈ ｔｂｅｅ ｐｅｓｏ ｅｌ ｉ ｓｆｒｔ ｎ ｉｎ ｅ ｅ ｔｒｐ ｔｎｉ ａ ｉ ｏｄ一１（ ＲＰ ） ｎｏｄ ｒ ｒ ｎ ｒ ａ ｌ Ｔ Ｖ１ ，ｉ ｒ ｅ
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2024山东省枣庄一模(试卷+答案)
高三模拟考试生物试题注意事项：1.答卷前，考生务必将自己的姓名、考生号等填写在答题卡和试卷指定位置上。
2.回答选择题时，选出每小题答案后，用2B铅笔把答题卡对应题目的答案标号涂黑。
如需改动，用橡皮擦干净后，再选涂其它答案标号。
回答非选择题时，将答案写在答题卡上。
写在本试卷上无效。
3.考试结束后，将本试卷和答题卡一并交回。
一、选择题：本题共15小题，每小题2分，共30分。
每小题只有一个选项符合题目要求。
1.差速离心主要是采取逐渐提高离心速率分离不同大小颗粒的方法。
下列叙述正确的是A．在分离动物细胞的细胞器时，需要先用胰蛋白酶和胶原蛋白酶破坏细胞膜B．离心速率较低时，能够让较小的颗粒沉降，改变离心速率可分离不同细胞器C．将酵母菌破碎后离心得到的沉淀物，向其中加入葡萄糖一定会得到H2O和CO2D．将菠菜研磨液在一定转速下离心得到上清液，向其中加入冷酒精可以粗提取DNA2.我国科研人员发现蛋白质二硫键异构酶（PDI）参与蛋白质中二硫键的形成，其在老年小鼠组织中表达量增加。
研究发现，PDI缺失会显著抑制内质网中的H₂O₂向细胞核释放，进而引起受到H2O2调控的SERPINE1 基因的表达量减少，从而延缓细胞衰老。
下列叙述正确的是A．蛋白质经PDI 作用后其相对分子质量不变B．造血干细胞中PDI的表达量显著高于衰老细胞C．激活SERPINE1 基因的表达可以加速细胞衰老D．PDI通过直接作用于SERPINE1 基因延缓细胞衰老3.某同学将浸过肝脏研磨液的相同大小的3个滤纸片贴在反应小室的一侧内壁上，再加入10mL3%的H2O2溶液，将小室塞紧（图甲）。
实验时，将反应小室置于水槽中并旋转180°，使H2O2溶液接触滤纸片，同时用量筒收集产生的气体（图乙）。
下列叙述正确的是A．该实验可以说明酶具有高效性B．该装置可以用于探究温度对酶促反应速率的影响C．可增加肝脏研磨液的浓度和体积使收集的气体量增多D、滤纸片数量改为6片可以探究酶浓度对H2O2分解速率的影响4. DNA 的双链中，转录时作为模板功能的链叫作反义链，另一条叫作有义链。
稳定表达EGFRvIII的U87MG细胞株的建立与鉴定
库 。 ｐＤ ｃ ＮＡ４Ｔ Ｅ Ｆ ｖＩ ／ Ｏ－ Ｇ Ｒ Ｉ Ｉ质 粒 由 Ｕ ｉｅｓ ｙ ｆ Ｔｅａ ｎｖｒｉ ｏ ｘｓ ｔ Ｓ ｕｈ ｓ ｒ ｄｃｌ ｅ ｔ ｏ ｔｗｅｔ ｎＭｅ ｉ ｎｅ ｅ ａＣ ｒ的 Ａｍｙ Ｈａｉ 授 惠 赠 。 ｎＡ． ｂ ｂ教
Ｄ Ｍ 培养基及 Ｚ ｏｉ 自 Ｉｖｔ ｇ ｎ公司 ， ＭＥ ｅｃ ｎ购 ｎｉｏｅ ｒ 胎牛血清 购 自
培养并鉴定 。
表达 Ｅ Ｆ ｖＩ的 Ｕ８ ＭＧ细胞株 ， ＧＲＩ Ｉ ７ 为进一步 的抗肿瘤 治疗及
其 机 制研 究 提 供 基 础 。
１ 材 料 和 方 法
１ １ 材 料 ．
人恶性胶质瘤细胞 系 Ｕ８ ＭＧ由南方医科大学神 经生物 ７ 学教研 室保 存 ， ４ １细胞购 自中山大 学实 验动 物 中心细 胞 Ａ３
ＮＡ４ Ｔ ＥＧ ＲｖＩ质粒导入 Ｕ８ ＭＧ细胞 ， ／ Ｏ￣ Ｆ ｌＩ ７ 加入 ｚｏｉ ｅｃｎ筛选 ， 进一步将细胞有限稀释并克隆化培养 以建立稳定 的转染细胞株 。应用 Ｒ － Ｃ Ｗｅｔｒ ｌｔ 细胞免疫荧光染色方法鉴定稳定表达 Ｅ Ｒ Ｉ！ 因的细胞株 。结果 ： Ｒ Ｐ Ｒ鉴定发现 Ｖ６号和 Ｖ２ Ｔ Ｐ Ｒ、 ｓｅｎｂｏ 及 ＧＦ ｖＩ基 经 Ｔ－Ｃ ４ 号单克隆细胞株 Ｅ ＲｖＩ 基因 ｍＲＮ ＧＦ ｌＩ Ａ水平高表达 ， 进一步 Ｗｅｔｒ ｌｔ ｓｅｎｂｏ 及细胞免疫荧光染色方法鉴定发现 Ｖ６号细胞株 Ｅ ＲｖＩ ＧＦ Ｉ Ｉ 蛋 白水平高表达 。结论 ： 成功建立了稳定表达 Ｅ Ｒ ＩＩ Ｕ８ ＭＧ细胞株 ， ＧＦ ｖＩ 的 ７ 为进一步的抗肿瘤治疗及其机制研究提供基础。 关键词： Ｅ Ｒ Ｉ ； Ｕ８ ＭＧ细胞 ； 基因表达 ＧＦ ｖＩ Ｉ ７
胆汁酸膜受体TGR5在胆道疾病中的研究进展
.胆汁酸膜受体ＴＧＲ５在胆道疾病中的研究进展陈思平１，２，韩 丽１，２，舒 鹏２，代 鑫２，程 龙２１西南交通大学医学院，成都６１００３１；２西部战区总医院全军普外中心，成都６１００８３摘要：ＴＧＲ５是一种胆汁酸激活的Ｇ蛋白偶联受体，在胆道系统生理及病理过程中发挥着重要作用。
本文简述了在正常生理情况下，ＴＧＲ５在肝脏及胆管中的正常表达情况，及发挥调节胆汁酸分泌、代谢，细胞保护作用等功能。
归纳了在病理生理情况下，ＴＧＲ５表达及功能的变化通过炎症反应、细胞增殖、凋亡等途径来影响疾病的发生与发展的机制。
ＴＧＲ５可能是未来治疗胆道疾病的潜在靶点。
关键词：胆道疾病；胆酸类；受体，Ｇ－蛋白偶联基金项目：四川省青年科技基金（２０１６ＪＱ００２３）ＲｅｓｅａｒｃｈａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅｂｉｌｅａｃｉｄｍｅｍｂｒａｎｅｒｅｃｅｐｔｏｒＴＧＲ５ｉｎｂｉｌｉａｒｙｔｒａｃｔｄｉｓｅａｓｅｓＣＨＥＮＳｉｐｉｎｇ１，２，ＨＡＮＬｉ１，２，ＳＨＵＰｅｎｇ２，ＤＡＩＸｉｎ２，ＣＨＥＮＧＬｏｎｇ２．（１．ＳｏｕｔｈｗｅｓｔＪｉａｏｔｏｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＣｏｌｌｅｇｅｏｆＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００３１，Ｃｈｉｎａ；２．ＧｅｎｅｒａｌＳｕｒｇｅｒｙＣｅｎｔｅｒｏｆＰＬＡ，ＴｈｅＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＷｅｓｔｅｒｎＴｈｅａｔｅｒＣｏｍｍａｎｄ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００８３，Ｃｈｉｎａ）Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＣＨＥＮＧＬｏｎｇ，ｔｍｍｕｌｏｎｇ＠１６３．ｃｏｍ（ＯＲＣＩＤ：００００－０００２－０３８２－８２１２）Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴＧＲ５ｉｓａｂｉｌｅａｃｉｄ－ａｃｔｉｖａｔｅｄＧｐｒｏｔｅｉｎ－ｃｏｕｐｌｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒａｎｄｐｌａｙｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｅｓｏｆｔｈｅｂｉｌｉａｒｙｓｙｓｔｅｍ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｄｅｓｃｒｉｂｅｓｔｈｅｎｏｒｍａｌｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＴＧＲ５ｉｎｔｈｅｌｉｖｅｒａｎｄｂｉｌｅｄｕｃｔｕｎｄｅｒｎｏｒｍａｌｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｉｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｂｉｌｅａｃｉｄｓｅｃｒｅｔｉｏｎａｎｄｍｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ．ＴｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｌｓｏｓｕｍｍａｒｉｚｅｓｔｈｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆＴＧＲ５ｕｎｄｅｒｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓａｎｄｔｈｅｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＴＧＲ５ｉｎａｆｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｎｄｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｏｆｂｉｌｉａｒｙｔｒａｃｔｄｉｓｅａｓｅｓｔｈｒｏｕｇｈｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｒｅｓｐｏｎｓｅａｎｄｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄａｐｏｐｔｏｓｉｓ．ＴＧＲ５ｍａｙｂｅａｐｏｔｅｎｔｉａｌｔａｒｇｅｔｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｂｉｌｉａｒｙｔｒａｃｔｄｉｓｅａｓｅｓｉｎｔｈｅｆｕｔｕｒｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＢｉｌｉａｒｙＴｒａｃｔＤｉｓｅａｓｅｓ；ＣｈｏｌｉｃＡｃｉｄｓ；Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｇ－Ｐｒｏｔｅｉｎ－ＣｏｕｐｌｅｄＲｅｓｅａｒｃｈｆｕｎｄｉｎｇ：ＴｈｅＹｏｕｔｈＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＳｉｃｈｕａｎＰｒｏｖｉｎｃｅ（２０１６ＪＱ００２３）ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－５２５６．２０２２．０３．０４７收稿日期：２０２１－０７－２１；录用日期：２０２１－０９－１７通信作者：程龙，ｔｍｍｕｌｏｎｇ＠１６３．ｃｏｍ 胆汁酸不仅作为清洁分子参与脂肪消化和疏水性化合物（如脂溶性维生素）吸收，也作为重要信号分子参与分泌、代谢、细胞增殖及分化、再生、纤维化和炎症等生理及病理生理过程［１］。
2021年山东省潍坊市高考生物一模试卷
2021年山东省潍坊市高考生物一模试卷1.糖基化是在糖基转移酶的作用下，使蛋白质或脂质附加上糖类的过程，是对蛋白质、脂质的重要修饰。
糖基化除了在细胞生物中普遍存在外，也存在于病毒中，且与病毒的感染能力息息相关。
下列叙述错误的是（）A. 糖基化不改变蛋白质结构，但可调节蛋白质功能B. 流感病毒蛋白糖基化可能与宿主细胞内质网、高尔基体等有关C. 细胞膜上的糖蛋白对细胞间信息交流起重要作用D. 抑制糖基转移酶活性可作为一种抗病毒方法2.超氧化物歧化酶（SOD）分子含二条或四条肽链，其活性中心都含有金属离子。
SOD是一类广泛存在于生物体内各个组织中的重要金属酶，是唯一能够特异性清除自由基O2-的抗氧化酶，可作为药用酶使用。
下列叙述错误的是（）A. 金属离子的存在与否直接影响 SOD 活性B. 从小鼠体内提取的 SOD可能会被人体免疫排斥C. SOD 易透过细胞膜，能减缓细胞衰老速率D. SOD 口服后会被消化道中的蛋白酶水解3.光呼吸是O2偏高时与光合作用同时发生的生理过程，是经长期进化形成的适应机制。
光呼吸和暗反应关系密切，CO2机理如图所示。
下列叙述错误的是（）A. 光呼吸可保证CO2不足时，暗反应仍能正常进行B. 光合作用的光反应强于暗反应容易导致光呼吸发生C. 光呼吸过程虽消耗有机物，但不产生ATPD. 抑制光呼吸能大幅度提高光合作用强度4.细胞焦亡是近年来发现并证实的一种新的细胞程序性死亡方式，其特征是依赖炎性半胱天冬酶，使细胞不断胀大直至细胞膜破裂，导致细胞内容物释放进而激活强烈的炎症反应，并伴有大量促炎症因子（可介导多种免疫反应）释放。
细胞焦亡的形态学特征、发生及调控机制等均不同于凋亡、坏死等其他细胞死亡方式。
下列叙述正确的是（）A. 细胞焦亡与细胞内基因及其表达调控无关B. 细胞焦亡在抗击病原体感染中发挥重要作用C. 焦亡时细胞膜破裂使组织液渗透压降低D. 促炎症因子通过为免疫系统提供能量提高免疫力5.某多年生高等植物为XY型性别决定，其花色受两对等位基因控制、两对基因独立遗传，且均与Y染色体无关。
河南省洛阳市二中2022-2023学年高三上学期期末理综生物试题(含答案解析)
（3）重复上述实验发现，F2 中基因型为 AA、Aa、aa 的个体数量比总是接近于 1：5： 4。研究人员发现 F1 产生的雌配子均正常成活，推测可能是带有__________基因的花粉 成活率很低。请设计杂交实验检验上述推测，并写出支持上述推测的子代性状及比例 _______。 （4）为获取能稳定遗传的抗稻飞虱优良栽培稻，科研人员选取上述实验中 F1 栽培稻作 为亲本进行自交，每一代水稻自交后淘汰不抗飞虱的个体，则子五代中基因型 BB 个体 所占的比例为_______。 11．谷氨酸棒状杆菌可用于微生物发酵工程生产谷氨酸，从而制取谷氨酸钠（味精）。 下图为谷氨酸棒状杆菌合成谷氨酸的途径，通过发酵工程可以大量生产谷氨酸。回答下 列问题：
河南省洛阳市二中 2022-2023 学年高三上学期期末理综生物 试题
学校:___________姓名：___________班级：___________考号：___________
一、单选题 1．下列有关组成生物体的化合物的叙述，正确的是（ ） A．结构不同的蛋白质也可能具有相似的功能 B．DNA 分子的空间结构及千变万化的碱基排列顺序构成了 DNA 分子的多样性 C．用含 32p 的培养基培养细胞，可以在细胞膜中的胆固醇成分中检测到放射性 D．哺乳动物血液中钙离子含量过高，会导致肌肉抽搐 2．果蝇体细胞含有 8 条染色体。下列关于果蝇体细胞有丝分裂的叙述，正确的是（ ） A．多肽链合成过程中，tRNA 读取 mRNA 上全部碱基序列信息 B．中心体复制和染色体组数的加倍可以发生在有丝分裂的同一时期 C．间期，能调控基因表达的蛋白质在细胞核内合成，经核孔进人细胞质 D．中期，8 条染色体的着丝点排列在赤道板上，易于显微镜观察染色体 3．原核生物和真核生物都有质基因（位于细胞质中的基因）和核基因（位于细胞核或 拟核内的基因）。下列关于基因表达的叙述，正确的是（ ） A．原核生物基因和真核生物基因转录的模板均为 DNA，翻译的模板均为 RNA B．原核基因的转录和翻译过程不能同步进行，而真核基因可以 C．翻译时，一条 mRNA 上只能结合一个核糖体，合成一条多肽链 D．转录过程需要 RNA 聚合酶催化，而翻译过程不需要酶的催化 4．2022 年 4 月 16 日，神舟十三号乘组顺利返回地球。和航天员一起回家的还有 1.2 万 颗种子，包括天麻、铁皮石斛等中药鲜种子。下列说法错误的是（ ） A．航天育种所利用的遗传学原理是基因突变和染色体变异 B．与干种子相比，携带的鲜种子有丝分裂旺盛，突变频率更高 C．经太空辐射处理后大多数的种子都会获得优良的突变性状 D．种植该铁皮石斛，自交后子代出现新的花色，说明该种子发生了隐性突变 5．如图是由甲、乙、丙三个神经元(部分)构成的突触结构。神经元兴奋时，Ca2＋通道开 放，使 Ca2＋内流，由此触发突触小泡前移并释放神经递质。据图分析，下列叙述不正 确的是（ ）
酸敏感钾通道-3真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达
酸敏感钾通道-3真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达魏林郁;李新娟;梅懿文;王国红;王琪;李东亮;李超堃【摘要】目的:构建酸敏感钾通道-3(TASK3)的真核表达载体,通过转染SH-SY5Y 细胞建立稳定表达的细胞株.方法:将TASK3亚克隆至pEGFP-N1质粒上,构建重组质粒pEGFP-TASK3,利用X-fect试剂盒将其转染至SH-SY5Y细胞中,通过G418辅助荧光筛选建立稳定表达TASK3-eGFP的细胞株;Western blot和激光共聚焦检测TASK3-eGFP的表达及细胞内定位;不同pH值(7.0、6.7、6.4、6.1)作用稳定表达细胞株24h后,CCK-8检查细胞活力.结果:重组真核表达载体构建正确,获得了TASK3-eGFP稳定表达细胞株.不同pH值作用野生型和稳定表达细胞株24h后,两组细胞的存活率随着pH值降低而显著降低(P＜0.05).相同pH值下(除pH 7.0),稳定表达细胞存活率较野生型细胞显著升高(P＜0.05).结论:成功构建pEGFP-TASK3真核表达载体,建立了稳定表达TASK3-eGFP的SH-SY5Y细胞株,该细胞可为研究TASK3的功能奠定基础.【期刊名称】《中国应用生理学杂志》【年(卷),期】2015(031)003【总页数】5页(P211-215)【关键词】真核表达载体;TASK3基因;SH-SY5Y细胞;克隆;基因表达【作者】魏林郁;李新娟;梅懿文;王国红;王琪;李东亮;李超堃【作者单位】新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室,河南新乡453003;新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室,河南新乡453003;郑州大学第一附属医院消化实验室,河南郑州450052;新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室,河南新乡453003;新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室,河南新乡453003;新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室,河南新乡453003;新乡医学院基础医学院生理学与神经生物学研究室,河南新乡453003【正文语种】中文【中图分类】Q78双孔道钾通道(tandem pore domain K channel，K2P)编码细胞的背景钾电流，是静息电位形成的主要通道［1］。
高级植物生理学植物的光形态建成
高级植物生理学植物的光形态建成在低等至高等的各种植物的生命活动中，光是最重要的环境因子之一。
光对植物生长发育的影响：植物通过光合作用把光能转化成为化学能贮存起来。
光还能以环境信息的形式作用于植物: 调节植物的分化、生长和发育，使其更好地适应外界环境。
作为环境信号调节许多生命活动，如种子萌发、黄化苗转绿、茎叶发育、向光性生长、气孔运动、花芽分化以及器官衰老等。
这种调节通过信号转导，改变生理代谢或诱发基因表达，控制细胞分裂分化，引起细胞结构和功能的改变，最终汇集成组织和器官建成,这就是光形态建成(photomorphogenesis，) 亦即光控发育的过程。
早在20世纪初，德国的植物生理学家Sachs就观察并描述了暗中生长幼苗的黄花现象，并用实验证明这是区别于光合作用的形态建成。
1920年美国的Garner 和Allard 发现了日照长度控制植物开花，从此他们开始研究光对植物生长发育的各种影响，用大型光谱仪将白光分成单色光，对多种植物进行试验。
Borthwick(1952)年报到了萬苣种子需光萌发的试验结果，红光促进种子萌发，而远红光可以逆转红光的作用。
光在此起信号作用。
信号的性质与光的波长有关。
分离出了这种光受体，称之为光敏素光对植物形态建成影响:光照强度：强光植物细胞、器官、个体形态矮小，弱光相对高大；强光色素种类、含量较多，弱光色素含量少则黄化。
光质：红光促进形态建成、种子萌发；远红光相反。
蓝光、紫外光抑制生长更强。
光照时间：长日照、短日照对植物发育、开花影响。
光照方向：植物的运动，向性运动的光适应性，向日葵向光性，大豆、花生叶镶嵌现象（趋光性）。
光（光质）形态建成的主要方面：（1）光（实质是红光）通过光敏色素影响植物生长发育的诸多过程。
如：需光种子的萌发；叶的分化和扩大；小叶运动；光周期与花诱导；花色素形成；质体（包括叶绿体）的形成；叶绿素的合成；休眠芽的萌发；叶脱落等。
（2）蓝紫光对植物的生长特别是对茎的伸长生长有强烈的抑制作用。
基于同源建模和分子对接技术研究不同物种乙酰胆碱酯酶和有机磷农药的相互作用
度是否合理来评价蛋白模型的合理性ꎬ 结果以 Ｒａｍ￣
氨基酸划分为 ４ 个区域ꎬ 包括核心区ꎬ 又叫最佳合理
区 ( Ｔｈｅ ｍｏｓｔ ｆａｖｏｒｅｄ ｒｅｇｉｏｎｓ) 、 允许区 ( Ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｏｎａｌ
ａｌｌｏｗｅｄ ｒｅｇｉｏｎｓ) 、 大 致 允 许 区 ( Ｔｈｅ ｇｅｎｅｒｏｕｓ ａｌｌｏｗｅｄ
本研究从 ＮＣＢＩ 和 Ｕｎｉｐｏｒｔ 网站检索得到 ３０ 个物种的
ＡＣｈＥ 氨基酸序列ꎬ 并将 ＦＡＳＴＡ 格式的氨基酸序列提
交到 ＳＷＩＳＳ － ＭＯＤＥＬ 服务器ꎬ 通过序列比对找到同源
性大于 ３０％ 的 ７ 个已知三维结构的蛋白 晶 体ꎮ 并 在
ＰｒｏｔｅｉｎＤａｔａＢａｎｋ 数据库下载下列蛋白晶体: 黑腹果蝇
服务器的 ＥＲＲＡＴ、 Ｖｅｒｉｆｔ － ３Ｄ 和 ＰＲＯＣＨＥＣＫ 程序对不
所示ꎬ 拉氏图结果显示落在最佳合理区 的 氨 基 酸 占
８８ ２％ꎬ 落在允许区氨基酸占 １１ １％ꎬ 大致允许区占
构的匹配度等方面的合理性评估ꎮ 其中 ＥＲＲＡＴ 程序
以 ８５％、 Ｖｅｒｉｆｔ － ３Ｄ 以 ８０％、 ＰＲＯＣＨＥＣＫ 以 ９０％ 为质
、 Ｖｅｒｉｆｔ － ３Ｄ
从生物信息学角度看氨基酸序列同源性越高ꎬ 则
蛋白质三维结构的空间结构越具有相似性ꎮ 因此ꎬ 将
过序列比对的方式找到一致性大于 ３０％ꎬ 并且序列覆
盖度足够大的蛋白晶体作为模板蛋白ꎬ 对于后续分子
对接研究具有可靠性ꎮ 而在实际操作中ꎬ 模板蛋白与目
和
标蛋白一致性最高达到 ９８ ９７％ꎬ 最低也有 ５４ １９％ꎬ 利
农业与技术 ※农业科学
列举 ａ、 ｂ、 ｃ 和 ｄ 为序列一致性从高到低的 ４ 个模建蛋
农药杀虫剂分类
杀虫剂分类及其作用原理一、乙酰胆碱酯酶抑制剂（1）作用机理：乙酰胆碱酯酶（AChE）是昆虫中枢神经中的关键酶，参与细胞的发育和成熟，能促进神经元发育和神经再生，在昆虫神经冲动传递过程中执行重要的生理功能。
它的主要作用是催化昆虫中枢神经系统胆碱能突触中的神经递质乙酰胆碱的水解。
乙酰胆碱酯酶抑制剂通过抑制昆虫神经系统传导中乙酰胆碱酯酶的活性，从而使神经递质乙酰胆碱无法分解成胆碱和乙酸，阻断神经传导而使昆虫致死。
乙酰胆碱酯酶对杀虫剂敏感性下降是昆虫对杀虫剂产生抗药性的主要生化表现，AChE由乙酰胆碱酯酶基因ace编码，ace基因突变导致乙酰胆碱酯酶发生变构，导致对底物的亲和能力下降或是酶量的增加。
这是引起这类杀虫剂产生抗性的重要机制。
（2）化学结构类型：有机磷酸酯类杀虫剂（包括磷酸酯、一硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酰胺、硫代磷酰胺）、氨基甲酸酯类杀虫剂。
（3）通性：在酸性环境下稳定，遇碱性环境分解；有机磷酸酯类为正温度系数杀虫剂，氨基甲酸酯类药效对温度不敏感；在自然条件中，如日晒、风吹雨淋的作用下易水解、氧化；有机磷杀虫剂不同种类间毒性相差较大，氨基甲酸酯类对哺乳动物毒性低。
（4）有效成分：敌百虫、敌敌畏、马拉硫磷、辛硫磷、毒死蜱、甲基毒死蜱、杀螟硫磷、丙溴磷、乐果、三唑磷、喹硫磷、稻丰散、哒嗪硫磷、二嗪磷、甲拌磷、乙酰甲胺磷、水胺硫磷、甲基异柳磷、噻唑膦、克百威、灭多威、异丙威、甲萘威、残杀威、混灭威、抗蚜威、速灭威、仲丁威、硫双威、丙硫克百威、丁硫百威。
二、钠离子通道调控剂（1）作用机理：钠离子通道是选择性允许钠离子跨膜通过的离子通道，在维持细胞兴奋性及正常生理功能上十分重要。
钠离子通道主要是由一个大型糖基化α亚单位和多个β亚单位组成的，在钠离子通道的不同区域存在着不同的毒素受体点。
神经毒素在钠离子通道上作用，DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂的作用靶标是昆虫神经轴突细胞膜上的电压门控钠离子通道，该通道由α亚基和β亚基组成，其电压依赖性激活、失活、选择性通透等生理学过程都与其结构有密切关系。
烟碱对小鼠中枢神经炎症的改善作用及其机制
烟碱对小鼠中枢神经炎症的改善作用及其机制刘薇，陈璟莉，严虹，任凌云，彭仕玉华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院麻醉科，武汉430014摘要：目的 探讨α7亚基N 型乙酰胆碱受体（α7nAchRs ）激动剂烟碱对小鼠中枢神经炎症和认知行为的改善作用及其机制。
方法 取雌性C57BL /6J 小鼠60只，采用随机数字表法分为正常组、模型组、烟碱组、甲基牛扁亭柠檬酸盐（MLA ）组，每组各15只。
模型组、烟碱组和MLA 组腹腔注射多聚肌苷酸—多聚胞苷酸［Poly （I ∶C ）］12 mg /kg 制备中枢神经炎症模型，正常组腹腔注射等量生理盐水。
烟碱组于造模前30 min 腹腔注射烟碱1 mg /kg ；MLA 组于造模前1 h 腹腔注射α7nAchR 拮抗剂MLA 5 mg /kg ，造模前30 min 腹腔注射烟碱1 mg /kg ；模型组和正常对照组在同一时间点注射等量生理盐水。
造模后3 h ，采用水迷宫实验观察小鼠空间学习记忆能力，记录小鼠穿越原平台次数和逃避潜伏期；采用旷场实验观察小鼠自主运动能力，记录小鼠平均运动速度和运动距离；小鼠处死，取脑组织，采用免疫组化法观察海马及前额叶小胶质细胞激活度，评价中枢神经炎症改变程度；采用qPCR 法检测脑组织炎症因子IL -6、TNF -α、INF -β、INF -α、IL -1β mRNA ，Western blotting 法检测脑组织NF -κB p65蛋白磷酸化水平。
结果 与正常组比较，模型组水迷宫实验潜伏期延长、穿越平台次数减少，旷场实验平均运动速度和运动距离减少，海马及前额叶小胶质细胞激活度增加，脑组织IL -6、TNF -α、INF -β、INF -α、IL -1β表达增加，脑组织NF -κB p65磷酸化水平增加（P 均<0.05）；与模型组比较，烟碱组水迷宫检测示潜伏期延长并穿越平台次数增加，旷场实验示平均运动速度以及运动距离均增加，海马及前额叶小胶质细胞激活度降低，脑组织IL -6、TNF -α、INF -β、INF -α、IL -1β表达降低，脑组织NF -κB p65磷酸化水平降低（P 均<0.05）；与烟碱组比较，MLA 组水迷宫检测示潜伏期延长并穿越平台次数减少，旷场实验示平均运动速度以及运动距离均减少，海马及前额叶小胶质细胞激活度增加，脑组织IL -6、TNF -α、INF -β、INF -α、IL -1β表达增加，脑组织NF -κB p65磷酸化水平增加（P 均<0.05）。
(2023年高考真题)2023年普通高中学业水平选择性考试生物试卷 广东卷(含解析)
2023年普通高中学业水平选择性考试生物试卷广东卷学校：___________姓名：___________班级：___________考号：___________养成良好的答题习惯，是决定成败的决定性因素之一。
做题前，要认真阅读题目要求、题干和选项，并对答案内容作出合理预测;答题时，切忌跟着感觉走，最好按照题目序号来做，不会的或存在疑问的，要做好标记，要善于发现，找到题目的题眼所在，规范答题，书写工整;答题完毕时，要认真检查，查漏补缺，纠正错误。
总之，在最后的复习阶段，学生们不要加大练习量。
在这个时候，学生要尽快找到适合自己的答题方式，最重要的是以平常心去面对考试。
一、单选题1．中国制茶工艺源远流长。
红茶制作包括萎凋、揉捻、发酵、高温干燥等工序，其间多酚氧化酶催化茶多酚生成适量茶黄素是红茶风味形成的关键。
下列叙述错误的是( )A.揉捻能破坏细胞结构使多酚氧化酶与茶多酚接触B.发酵时保持适宜的温度以维持多酚氧化酶的活性C.发酵时有机酸含量增加不会影响多酚氧化酶活性D.高温灭活多酚氧化酶以防止过度氧化影响茶品质2．中外科学家经多年合作研究，发现circDNMT1（一种RNA分子）通过与抑癌基因p53表达的蛋白结合诱发乳腺癌，为解决乳腺癌这一威胁全球女性健康的重大问题提供了新思路。
下列叙述错误的是( )A.p53基因突变可能引起细胞癌变B.p53蛋白能够调控细胞的生长和增殖C.circDNMT1高表达会使乳腺癌细胞增殖变慢D.circDNMT1的基因编辑可用于乳腺癌的基础研究3．科学家采用体外受精技术获得紫羚羊胚胎，并将其移植到长角羚羊体内，使后者成功妊娠并产仔，该工作有助于恢复濒危紫羚羊的种群数量。
此过程不涉及的操作是( )A.超数排卵B.精子获能处理C.细胞核移植D.胚胎培养4．下列叙述中，能支持将线粒体用于生物进化研究的是( )A.线粒体基因遗传时遵循孟德尔定律B.线粒体DNA复制时可能发生突变C.线粒体存在于各地质年代生物细胞中D.线粒体通过有丝分裂的方式进行增殖5．科学理论随人类认知的深入会不断被修正和补充，下列叙述错误的是( )A.新细胞产生方式的发现是对细胞学说的修正B.自然选择学说的提出是对共同由来学说的修正C.RNA逆转录现象的发现是对中心法则的补充D.具催化功能RNA的发现是对酶化学本质认识的补充6．某地区蝗虫在秋季产卵后死亡，以卵越冬。
稳定过表达细胞株的鉴定
稳定过表达细胞株的鉴定
鉴定稳定过表达细胞株是确保实验结果准确可靠的重要步骤。
通常，稳定过表达细胞株被构建来表达外源基因，这些基因可以编码蛋白质、RNA或其他生物分子。
在构建过程中，细胞株被转染并在筛选过程中选出表达外源基因的细胞株。
然而，仅仅检测外源基因的表达并不足以证明细胞株是稳定的。
为了鉴定稳定过表达细胞株，需要进行以下步骤：
1. 稳定性测试：通过连续培养稳定过表达细胞株多代，观察外源基因表达是否稳定。
通常，细胞株需要在稳定条件下培养至少20代，以确保表达稳定。
2. 比较分析：与野生型细胞株进行比较分析，例如测量细胞增殖速率、形态学、细胞周期等。
如果稳定过表达细胞株与野生型细胞株存在显著差异，则该细胞株可能存在异常。
3. 稳定性标记：将可观察的标记或标签引入到外源基因表达系统中，以确定细胞株是否稳定。
例如，可以将荧光蛋白或其他荧光标记引入到外源基因中，观察标记的表达是否稳定。
通过以上步骤鉴定稳定过表达细胞株，可以确保实验结果的准确性和可靠性。
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稳定细胞株的构建流程
稳定细胞株的构建流程以稳定细胞株的构建流程为标题，写一篇文章。
一、引言稳定细胞株的构建是生物学研究中常用的实验技术之一。
通过构建稳定细胞株，可以使目标基因在细胞中稳定表达，从而对其功能进行深入研究。
本文将介绍稳定细胞株的构建流程。
二、选择适当的宿主细胞稳定细胞株的构建首先需要选择适当的宿主细胞，常用的细胞包括人类胚胎肾细胞293细胞、小鼠骨髓细胞NIH3T3细胞等。
选择宿主细胞时需要考虑其易于转染、高细胞增殖率和细胞稳定性等因素。
三、构建载体1.选择适当的表达载体：常用的表达载体有质粒和病毒载体，根据实验需要选择合适的载体。
质粒载体便于操作和大规模扩增，而病毒载体能够高效地转染细胞。
2.插入目标基因：将目标基因插入表达载体中，可以通过PCR扩增得到目标基因片段，并使用限制酶切将其与表达载体连接。
连接后进行酶切鉴定和测序验证。
3.构建转染载体：将表达载体转化至适当的细菌宿主中，利用细菌的复制机制进行扩增。
扩增后提取纯化质粒。
四、转染宿主细胞1.选择合适的转染方法：常见的转染方法有化学法、电穿孔法和病毒转染法等。
根据宿主细胞的特性和实验要求选择最适合的转染方法。
2.优化转染条件：转染条件的优化对于获得高转染效率和稳定性的细胞株至关重要。
可以调整转染剂的浓度、时间和转染温度等因素。
3.筛选转染细胞：在转染后，使用适当的筛选压力，如抗生素选择、荧光标记等，筛选出转染成功的细胞。
五、稳定细胞株的筛选和鉴定1.单克隆细胞的筛选：通过稀释法将转染细胞稀释至单个细胞，然后培养形成单克隆细胞株。
2.目标基因表达的鉴定：通过Western blot、RT-qPCR等方法对目标基因的表达进行检测，确认稳定细胞株中目标基因的稳定表达。
3.稳定性的验证：长期培养稳定细胞株，观察目标基因的表达是否稳定，并进行细胞传代实验，验证细胞株的稳定性。
六、应用稳定细胞株稳定细胞株的构建完成后，可以用于进一步的实验研究，如基因功能研究、药物筛选和蛋白质表达等。
小鼠全身骨骼肌乙酰胆碱受体含量的测定
小鼠全身骨骼肌乙酰胆碱受体含量的测定王荣;李红花;魏成淑;李芳芳;孙昌元;金权鑫;李英信;孟繁平【期刊名称】《延边大学医学学报》【年(卷),期】2004(27)4【摘要】[目的 ]建立测定小鼠全身肌肉乙酰胆碱受体含量的方法 ,应用于实验性自身免疫性重症肌无力病情的判定 .[方法 ]从实验性自身免疫性重症肌无力小鼠全身肌肉中提取乙酰胆碱受体 ,应用放射免疫测定法测定小鼠全身肌肉乙酰胆碱受体的含量 .[结果 ]经计算得出 ,实验性自身免疫性重症肌无力小鼠全身肌肉中的乙酰胆碱受体含量为 19 8fmol,每克肌肉的乙酰胆碱受体含量为 4 4fmol.[结论 ]此方法具有简单、省时、耗材少的特点 ,适用于重症肌无力及实验性自身免疫性重症肌无力的研究 .【总页数】3页(P235-237)【关键词】重症肌无力;受体,胆碱能;小鼠【作者】王荣;李红花;魏成淑;李芳芳;孙昌元;金权鑫;李英信;孟繁平【作者单位】延边脑科医院精神科;延边大学医学院微生物学与免疫学教研室【正文语种】中文【中图分类】R392.11;R746.1【相关文献】1.深度测序筛选调控小鼠骨骼肌细胞乙酰胆碱受体聚集簇形成的差异基因 [J], 刘凤姣;杨海红;吴燕;吴海涛;吕英涛2.大鼠老化过程中骨骼肌乙酰胆碱受体含量及功能的改变 [J], 李传翔;姚尚龙;聂辉;张玉芹;吕斌3.不同时间失神经支配对小鼠骨骼肌乙酰胆碱受体活性的影响 [J], 王宏;梁启胜;陈兰仁;代文涛;符伟;庄心良;李士通4.琥珀胆碱对小鼠重组骨骼肌细胞成人型和胚胎型乙酰胆碱受体的作用 [J], 杨保仲;庄心良;赵雪莲;李士通;王莹恬5.小鼠脑内乙酰胆碱,胆碱乙酰化酶,乙酰胆碱酯和M胆碱受体的昼夜化 [J], 潘思源因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
新药研发相关知识介绍
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新药发现
新药开发
发现
临床前 研究
定其主要药效成分的结构。在此基础上研究：制备工 艺、制剂处方、药物理化常数、纯度检查、含量测定、 质量稳定性研究。
3.1.2 药效学研究：评价化学物质的生物活性和确定药物作用机理。
评价方法：
体外细胞培养和酶系统 离体动物组织试验 整体动物试验（啮齿动物和非啮齿动物）
意义：
A. 发现研制新药及对药物进行再评价； B. 为新药的临床研究奠定基础； C. 补充临床研究的不足； D. 揭示药效的物质基础，开展作用机制及配伍规律研究。
2. 新药发现
? 从天然产物中发现—药物的提取分离—天然药物化学 ? 从现有药物改进—药物合成—药物化学 ? 药物筛选—药理学 ? 根据生理病理机制设计—药理学 ? 有些新药的发现是几个途径综合的结果
2.1 天然产物
天然产物来源
植物 动物 微生物 海洋生物 矿物
天然生物活性物质的特点
新颖的结构类型（分子多样性） 独特的药理活性 资源有限及地域性差异 有效成分含量很低 大多数结构复杂，作用强度不同
? 中药讲究炮制，讲究药物四性五味和归经。 ? 中药多用复方，讲究君臣佐使。
中药现代化
定义：在中医药理论的指导下,以现代科学技术为手段,研究中药疗效的
物质基础,发现中药的有效成分,阐明中药的作用机制,并在中药有效成 分研究的基础上,制定出国际上认可的中药质量标准;同时,要加强中药 新剂型的研究,健全现代化的中药研发和生产管理体制,使之符合国际上 认可的GAP、GLP、GMP 、GCP、GSP 等管理规范。
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关键词 ： 乙酰胆碱受体 ； Ｈ Ｋ ９ Ｅ ２ ３细胞 ； 基因转染 ； 免疫荧光
中 图分 类 号 ： Ｒ ２ ．４ ３ ９ ２ 文 献标 识 码 ： Ａ 文章 编 号 ： １０ —１９ ２０ ）９０ ０ －４ ０ ８８ ９ （０ ８ ０ －９ ７０
Ｅ ｔｂｉ ｍｅｔ ｆＨ Ｋ２３ｃｌｌ ｅ ｂｙｅｐｅｓ ｇｍ－Ａ ｈ ｓ ｌｈ ｎ Ｅ ９ ｅ ｎｓｓ ｌ ｘｒｓｉ ｎ Ｃ Ｒ ａ ｓ ｏ ｌｉ ｔ ａ ｎ
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第２ 卷 １
第 ９期
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染技术将重组质粒导人 Ｈ Ｋ ９ Ｅ ２３细胞 ， 其细胞膜上分别表达胚胎型 乙酰胆碱 受体 （ ｎ Ｃ Ｒ） 使 —Ａ ｈ 和成年型 乙酰胆碱
受体 （ 一Ａ ｈ ） ￡ｎ Ｃ Ｒ 。用 Ｇ １ 免 疫荧 光 技 术 筛 选 出稳 定 表 达 两种 受 体 亚型 的细 胞 株 。 结 果 ： Ｇ １ 复 筛 选 后 ４ ８和 在 ４ ８反
论
著 ・
稳 定表 达 肌 肉型 乙酰胆 碱 受 体 的细 胞株 建立 和鉴 定 海 交通 大学 附属第 一人 民医 院麻 醉科 ， 上海 ２ ０ ８ ） ０００
摘 要 ： 目的 ： 立 稳 定 表 达骨 骼 肌 细 胞 乙 酰 胆 碱 受 体 （ Ｃ Ｒ） 人胚 肾 （ Ｅ ２ ３ 细 胞 系 ， 行 各 种 药理 学 研 究 。 建 Ａｈ 的 Ｈ Ｋ９） 进 方法 ： 编码 小 鼠 ｍ—Ａ ｈ 的 Ｏ １ ８和 ￡ 基 的 ｃ Ｎ 将 ｎ ＣＲ ｔ３ 、、 亚 Ｄ Ａ分 别 重 组 于 真 核 细 胞 表 达 质 粒 ｐＤ Ａ ． ， 脂 质 体 转 ｃ Ｎ ３ １用 ．
Ｋ ｅ ｒ ｓ： Ａｃ ｔｌｈｏｉ ｅ ｒ ｃ ｐ ｏ ； ＨＥＫ２ ｅｌ Ｇｅ ｅ ｔａ ｓｅ ｔｏ Ｉ ｍｕ ｏ ｉｔｃ ｅ ｓｒ ｙ ｗｏ ｄ ｅｙ ｃ ｌｎ ｅ ｅ ｔｒ ９３ ｃ ｌ； ｎ ｒ ｎ ｆｃ ｉｎ； ｍ ｎ ｈ ｓｏ ｈ ｍｉｔｙ
０ 引
言
细胞 上 ， Ｏ、 ８ ￡５个 亚 基 组 成 一相 通 孑 道 。 由 ｔｐ、 、 Ｌ