检验医学SOP文件5--生化室作业指导书

生化室作业指导书

文件编号：ABCD-3-SF-01~61

第A版

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生效日期：2015年4月8日ABCD人民医院检验科

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血清总胆红素(T-BIL)测定

1. 实验原理

血清中的胆红素分为直接（结合）胆红素和间接（未结合）胆红素。大多数方法是在1883年Ehrlich提出的重氮法胆红素测量法1，一些改良的方法已被用来增进反应。这些改良的方法是使直接胆红素直接和重氮化合物进行反应，生成一种有颜色的化合物，而间接胆红素需要一种溶剂，如表面活性剂后才能进行反应。

申能总胆红素试剂是改良的重氮法。使用一种稳定的重氮盐，2,4-二氯苯胺重氮盐（DCA），与胆红素反应，形成红色偶氮化合物，它在540nm吸光度最大。在540/600nm时的吸光度与标本中总胆红素的浓度成正比。

胆红素+DCA 红色偶氮化合物

表面活性剂

2. 标本：

2.1 病人准备：无特殊要求。最好用禁食的标本以减少乳糜血的干扰。

2.2 类型：血清、肝素或EDTA血浆，应避光保存。

3. 标本存放：15～25℃保存可稳定2天；2～8℃保存可稳定7天；-20℃保存可稳定3个月，如冰冻保存，不可反复冻融！。

4. 标本运输：常温条件下避光保存运输。

5. 标本拒收标准：标本溶血、细菌污染、脂血、非避光保存运输的标本。

6. 实验材料

6.1 试剂：申能总胆红素试剂盒（141 0817170 1 试剂1＋试剂2）

6.1.1 试剂组成

试剂1：6×64 ml

磷酸缓冲液40mmol/L

氯化钠9g/L

表面活性剂,稳定剂适量

试剂2：6×16 ml

2,4-二氯苯胺重氮盐1mmol/L

盐酸30mmol/L

表面活性剂适量

6.1.2 试剂准备：试剂为即用式。

6.1.3 试剂稳定性与贮存

试剂避光保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为18个月。试剂2必需避光保存。试剂不可冰冻。

6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。

6.1.5 注意事项：此试剂为体外诊断用，不要入口，毒性还末确定；警告！腐蚀剂！不要入口；避免和眼睛，皮肤或衣服接触，如果接触到，立即用大量的水冲洗受损害的部位15分钟，接触到眼睛或吞服，立即寻找医疗保护。

6.2 校准品：使用DiaSys公司提供的TruCal U校准品对自动分析仪进行校准，参见生化检验校准品和质控品.SOP文件

6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件

7. 仪器：奥林巴斯AU1000生化分析仪

8. 操作步骤

8.1 项目基本参数：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪项目测定参数.SOP文件。

8.2仪器操作步骤：参见生化检验奥林巴斯AU1000生化分析仪操作规程.SOP文件。

9. 检验结果的判断与分析

10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见生化室室内质控操作规程.SOP文件。

11. 计算方法：以TruCal U复合校准品校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果无需手工计算，以μmol/L报告。手工测定计算方法为：

△Au

总胆红素(μmol/L) = ×校准液浓度

△As

12. 参考值范围：

婴儿：出生24小时内＜150μmol/L

出生第2天22-193μmol/L

出生第3天12-217μmol/L

出生第4～6天 1.7-216μmol/L

儿童：＞一个月 3.4-17μmol/L

成年人： 1.7-21μmol/L

参考值因性别、年龄、饮食和地域的不同而有所差别。根据好的实验室经验，每个实

验室应建立自己的参考值。

13. 临床意义：胆红素是血红蛋白的降解产物。游离胆红素非极性很强，几乎不溶解于水。在血液中与白蛋白形成复合物由脾脏向肝脏运输。在肝脏中，胆红素与葡萄糖醛酸结合,生成可溶性胆红素葡萄糖醛酸酯由胆管排入肠道。

溶血（肝前黄疸）、实质的肝损伤（肝性黄疸）和胆管堵塞（肝后黄疸）都会导致血液胆红素增高，形成高胆红素血症。人群中常见先天性慢性高胆红素血症，称为Gilbert 综合症。由于胆红素降解酶的功能滞后以及出生后红细胞破碎增多，使60～70%的婴儿血液出现总胆红素增高。常用的胆红素检测方法能检测总胆红素和直接胆红素。直接胆红素的测定主要检测水溶性的结合胆红素，因此可以根据总胆红素和直接胆红素的差来估计游离胆红素的含量。

14. 操作性能

14.1 线性范围：1.2～513μmol/L

14.2 精密度：精密度的评估是根据NCCLS推荐的标准方法5，AU1000批内精密度小于3%或SD≤0.07，总精密度小于5%或SD≤0.10。用于分析的质控血清和数据处理符合以上的NCCLS的规则。

T-BIL检测，将检测结果作方法学比较，其统计结果如下：y=1.00x-0.00mol/L；r=1.000。

14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1.2μmol/L。

14.5 病人结果可报告范围：1.2～513μmol/L

15. 超出范围结果处理：本法线性上限为513μmol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

16. 病危报警值的处理当新生儿血清标本测定结果总胆红素〉340μmol/L时，在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。

17. 方法局限性

17.1 本法线性上限为513μmol/L。如样品测定值超过上限时，应将样品用0.9％氯化钠溶液作1:1稀释，重新测定，结果乘以2。

17.2 干扰物质：当样品中抗坏血酸浓度≤1704μmol/L，血红蛋白浓度≤5.00g/L，甘油