茯苓多糖提取方法研究进展

・５８・牡丹江医学院学报２００９年第３０卷第６期ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＵＤＡＮＪＩＡＮＧＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＶ０１．３０ＮＯ．６２００９２５顾奎兴．中医药治癌的思路与基因组学［Ｊ］．南京中医药大学学报，２００２，１８（１）：１０—１３２０８８．２６张玲，王芸，毛海婷，等．淫羊霍甙抑制肿瘤细胞端粒酶活性及其调节机制的研究［Ｊ］．中国免疫学杂志，２００２，１８（３）：１９１—１９６．２７李丽．中药ＫＡＬｌ号、Ⅱ号对Ｔ一（２００）荷瘤小鼠肿瘤抑制作用的研究［Ｊ］．牡丹江医学院学报，２００３，２４（３）：１５一１７．茯苓多糖提取方法研究进展才玉婷武蕾蕾王晶华王金英（牡丹江医学院药学系黑龙江牡丹江１５７０１１）收稿日期：２００９—０８—２５【摘要】目的：综述近年来茯苓多糖提取工艺的研究进展。

方法：主要对近十年来有关茯苓多糖提取工艺的文献进行综述。

结果：介绍了茯苓多糖５种提取分离方法。

结论：为茯苓多糖的提取分离提供参考，展望了茯苓多糖有效成分提取分离的应用前景。

【关键词】茯苓多糖；水提醇沉法；稀碱提取法；微波萃取技术；超声提取技术；ＣＯ：超临界流体提取技术茯苓为多孔菌科真菌茯苓ＰｏｒｉａＣｏｃｏｓ（Ｓｃｈｗ．）Ｗｏｌｆ的干燥菌核，性味甘、淡，平；归心、脾、肺、肾经，具有利水渗湿，健脾宁心之功效…。

茯苓中的主要成分为茯苓多糖（ｐａｃｈｙ－ｍａｎ），其具有抑制肿瘤生长，调节机体免疫等功能旧Ｊ，对急、慢性炎症也具有抵抗作用＂Ｊ。

为了提高茯苓多糖的治疗效果，降低毒副作用，选用合理的提取工艺是非常必要的。

茯苓多糖提取的传统方法存在着有效成分损失大，周期长，工序多，提取率低等问题。

近年来，一些新的提取技术受到青睐。

下面就近几年茯苓多糖提取的技术进行综述。

１水提醇沉法一般植物多糖提取多数采用热水浸提法，该法所得多糖提取液可直接或离心除去不溶物，或者利用多糖不溶于高浓度乙醇的性质，用高浓度乙醇沉淀提纯多，由于不同性质或不同相对分子质量的多糖沉淀所需乙醇浓度不同，故不同浓度的醇可以用于样品中不同多糖组分的分级分离，另外还可根据多糖不同性质在粗分阶段利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离Ｈ－。

李俊等”１采用传统的水提醇沉法进行茯苓多糖的提取，将茯苓切成碎片，加入４—６倍量的水，回流提取３次，时间分别是３ｈ，２ｈ和１ｈ。

合并３次提取液滤过，除去不溶性杂质，在搅拌下加入乙醇，静置１２ｈ，离心，收集沉淀，加水溶解煮沸，再加入乙醇，使含醇量达到７０％，放置，析出褐色沉淀，过滤，低温干燥，即得茯苓多糖粗品。

粗品加蒸馏水煮沸，在搅拌下加入１％鞣酸溶液，煮沸，取上清液加入鞣酸溶液不混浊为止。

加入２％的活性炭，过滤，加入乙醇，静置２４ｈ。

用７０％乙醇反复洗涤沉淀，检查不含鞣酸为止。

将湿品溶于２０％的热乙醇中，再加入６０℃的热蒸馏水连续洗脱，流出液减压浓缩，加入适量乙醇，使含醇量达到７０％，放置，滤取沉淀物，干燥，即得茯苓多糖纯品。

此方法复杂繁琐，操作周期长，提取率较低。

邱绿琴阳１等采用茯苓粗粉分别用乙醚、丙酮在索式提取器中回流脱脂４ｈ，残渣用０．９％ＮａＣＩ溶液浸泡，过夜。

离心，得上清液，浓缩３倍，用９５％乙醇沉淀，沉淀物加入１２０℃的热水中提取３０ｒａｉｎ，离心。

沉淀物再用０．５ＭＮａＯＨ在４℃提取，得胶状提取液，４℃冰箱过夜，离心，取上清液用１０％乙酸沉淀，再用蒸馏水洗涤，干燥，用Ｓｅｖａｇ法除去蛋白质和透析法纯化，精制，既得茯苓多糖。

此方法较李俊的方法简单，操作周期相对较短，但是提取率不高。

热水浸提法时间长且多糖提取率低。

陈莉一１等采用酶解＋热水浸提的方法：将茯苓粉碎后加水浸泡３０ｍｉｎ，植物精提复合酶（主要成分为纤维素酶、果胶酶、中性蛋白酶等）加水在４０℃活化１０ｒａｉｎ，然后把活化的复合酶加入浸泡的茯苓中，在４８。

Ｃ（ｐＨ５）浸提９０ｍｉｎ，中和酸后加水再升温至８０℃，继续浸提９０ｍｉｎ然后用乙醇醇沉，最后用无水乙醇、丙酮、乙醚分别洗涤，得茯苓多糖粗品，再去蛋白质，经大孔树脂吸附纯化，洗脱液浓缩后透析，得透析液浓缩后冷冻干燥，既得纯化茯苓多糖。

此方法能显著提高茯苓多糖的浸出率，是热水浸提法的２．３２倍，并且具有浸提时间缩短，提取条件温和，所得茯苓多糖立体结构不易被破坏、生物活性高等优点。

程金生旧１等人采用加卤代酸的水提醇沉法：将自制白茯苓（去皮茯苓菌核）进一步烘干（９５℃左右），粉碎，过１００目筛，称取２５ｇ茯苓粉，加入１００ｍＬ异丙醇、１％氢氧化钠溶液５０ｍＬ，搅拌溶解后，在快速搅拌条件下，通过真空滴液漏斗滴入二氯乙酸的异丙醇溶液（１：１．２，５０ｍＬ），控制温度在５０℃搅拌反应３．５ｈ。

反应结束后将上层异丙醇倾出并回收利用，下层加入５％盐酸溶液，快速搅拌下加入乙醇５０ｒａＬ，过滤，固体物部分溶解于水中，用乙醇沉淀，过滤，干燥，得白色粉末状固体，即羧甲基茯苓多糖。

选用自制茯苓粉在异丙醇溶剂中高效合成羧甲基茯苓多糖，并通过工艺优化试验，使其消耗水和有机溶剂尽可能少，反应操作简便，羧甲基取代度高，产品水溶性好，临床应用效果显著。

２稀碱提取法浓碱液浸提法浸提程序较繁琐，浸提条件较剧烈，极易破坏多糖的立体结构，使其生物活性受到限制。

高杰旧１等采用稀碱提取茯苓多糖，用二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）进行精制。

将茯苓用粉碎机粉碎至能通过６０目筛，取茯苓粉末１５９，溶于万方数据牡丹江医学院学报２００９年第３０卷第６期ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＭＵＤＡＮＪＩＡＮＧＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹＶ０１．３０ＮＯ．６２００９・５９・３℃的０．５ｔｏｏｌ・Ｌ‘１ＮａＯＨ溶液３０００ｍＬ中。

加入四氟乙烯转子在磁力搅拌器中搅拌，至粉末全部溶解，此时溶液呈粘稠状态。

置于冰箱中４。

Ｃ冷藏、过夜。

次日抽滤，弃去残渣保留液体。

滤液用１０％的醋酸溶液中和，直至用广泛ｐＨ试纸测其ｐＨ值在６—７之间。

再加入等量９５％乙醇，于３。

Ｃ放置过夜。

次日抽滤，获取沉淀。

接着用流水透析２ｄ后，依次用９００ｍＬ蒸馏水洗涤，３００ｒａＬ无水乙醇、３００ｍＬ丙酮、２００ｍＬ乙醚洗涤。

之后，放入干燥器中，减压抽干。

置干燥箱中５８℃干燥３０ｍｉｎ，即得茯苓多糖粗品。

呈淡黄色细颗粒状结晶，重１０．７９。

称取茯苓多糖粗品５９，溶于５００ｍＬ二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）中，在室温下用磁力搅拌器搅拌１５ｈ后，加入５００ｒａＬ蒸馏水，继续搅拌２０ｍｉｎ，之后，放置２ｈ，抽滤。

沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，置干燥箱中６０℃以下，干燥３０ｒａｉｎ，即可得茯苓精制品。

ＤＭＳＯ可使蛋白质裂解为小分子的易溶于水的肽类物质，因此可用它来除去杂蛋白，方便简单。

赵声兰¨驯等利用单因素实验优化茯苓皮中茯苓多糖的稀碱提取方法，在单因素实验的基础上利用响应表面实验设计考察碱法提取过程中碱浓度、提取时间、料液比对多糖提取量的影响，所得最佳提取工艺条件为：ＮａＯＨ浓度为０．８４ｍｏｌ・Ｌ～，提取时间为８．８９ｈ，料液比为１：１５０。

此条件下茯苓皮中多糖提取量达到５４．９９％。

黄才欢¨¨等人结合水回流提取法和稀碱提取法两者的优点，又通过实验进一步优化了茯苓多糖的工艺参数（水回流提取时间、ＮａＯＨ溶液浓度、ＮａＯＨ溶液浸提时间及温度），确定了茯苓多糖的最佳提取工艺。

但是李羿¨２１等人认为影响茯苓多糖提取率的因素很多，如浸提温度、时间、多糖浓度、ＮａＯＨ溶液浓度以及脱杂质的方法都会影响茯苓多糖的提取率。

３超声波提取法超声波提取法是近年来利用外场介入强化中草药有效成分提取分离的一种技术¨３‘。

超声波是一种弹性机械振动波，具有高速、强烈振动及空化效应等作用。

因此，能破坏植物药材的细胞．使溶媒渗透到药材细胞中，从而加速药材中的有效成分溶解，以提高有效成分的提取率【１“。

研究证明，超声提取不会改变有效成分的结构，并且缩短了提取时间，提高了提取效率。

超声技术已经广泛应用于陆地及海洋植物的药用成分的提取¨引。

霍文¨刮等采用正交试验法，筛选出茯苓多糖的最佳超声波提取工艺：茯苓粉碎，粒度是２０目，精密称取茯苓粉末０．１９，放置到５０ｍＬ量瓶中，加水４０ｍＬ，充分混合后放人超声波提取器中，进行超声提取，提取时间２０ｍｉｎ，过滤，取续滤液烘干，得茯苓多糖。

与传统水提取法相比，超声波提取技术的优点主要表现在提取率高、提取时间短，同时在能耗上也大大降低，可以作为实验室和大生产的模拟工艺Ⅲ。

８｜。

４微波提取法微波萃取技术作为一项新的药物制备提纯方法，其一系列优点被越来越多的实验研究所证实¨９１。

经过微波辐射后能较好地富集药材中的有效成分，与传统回流提取工艺比较，微波辅助萃取技术不仅萃取时间短、溶剂用量少、有效物质更易溶出，可显著地提高提取效率，更具有提取过程环境清洁、操作简便，更易于实现自动化生产控制，其推广应用可望为现代中药新药的研究开发提供新途径及新工艺它的原理在学术界有许多不同的描述ⅢＪ。

其最基本的理论还是以微波穿透性加热的原理为基础，即微波对物料实施的是立体加热，而常规传统方法大多为平面加热。

在微波场中，各种物料吸收微波能力的差异使得基体物质的某些区域或萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使得物质内部产生能量差或势能差，被萃取物质得到足够的动力即从基体或体系中分离出来。

杜玲玲旧１。

等人采用正交试验设计法，以茯苓多糖为指标考察微波提取工艺条件，提取茯苓多糖影响因素顺序为微波时间（Ａ）＞微波强度（Ｂ）＞溶剂倍数（Ｃ），因素Ａ与Ｂ具有显著性差异。

以水为提取溶剂，茯苓多糖最佳微波提取工艺为加２０倍量水，在１４７０ＭＨｚ下微波提取１５ｒａｉｎ．。

验证试验表明，茯苓多糖得率为３．７０４％。

聂金嫒盈１等采用均匀优化设计试验法，对水溶性茯苓多糖进行微波提取，并对试验条件进行考察和优化，得到一个四变量回归模型。

根据该模型可知，提取时间（Ｘ１）越大，提取率越高。

而随着微波占空比（ｘ２）的增加，提取率先增大后减小，其间应有一个最大值。

对方程进行函数最值分析，可以知道当微波占空比为４２％的时候，提取率有最大值固液比至一定大时，提取率不会提高。

得出最佳提取条件：时间为１８ｍｉｎ；固液比为ｌ：５０；微波占空比４２％，此时提取率为２．７９２％，优于传统提取方法。

陈瑞瑞旧’通过微波辐射提取茯苓多糖，并与传统的浸泡水煮提取工艺进行了对比研究。

根据两种提取方法所选定的最佳工艺条件（微波法：固液比５，５４０Ｗ，提取９０ｓ；传统法：固液比５，沸水１ｈ，提取２次），得白色胶状提取物．经Ｓｅｖａｇ去蛋白多次及Ｓｍｉｔｈ降解后，得到多糖，结果显示微波法能显著提高茯苓的多糖提取率，比传统浸泡水煮法高出约８５％，且微波加热具有速度快、操作便捷、能保持茯苓原有营养成分等诸多优点，是理想的茯苓多糖提取新工艺。